強(qiáng)直性脊柱炎患者腸道菌群特征與疾病活動(dòng)度及外周血淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

強(qiáng)直性脊柱炎患者腸道菌群特征與疾病活動(dòng)度及外周血淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性強(qiáng)直性脊柱炎（AS）是一種以中軸關(guān)節(jié)慢性炎癥為主要特征的風(fēng)濕免疫性疾病，病變主要累及骶髂關(guān)節(jié)與脊柱[1]。AS病因復(fù)雜，涉及遺傳、感染、環(huán)境、免疫等多個(gè)方面[2]，其中腸道微生物與AS發(fā)病密切相關(guān)[3]。人類白細(xì)胞抗原（HLA)-B27是位于細(xì)胞表面的糖蛋白，參與免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)，絕大多數(shù)AS患者呈HLA-B27陽性，其可通過與腸道菌群相互作用進(jìn)而誘發(fā)AS[4]。Costello等[5]對腸道菌群16SrRNA基因測序后發(fā)現(xiàn)，AS患者回腸中毛螺菌科、韋榮球菌科、普雷沃氏菌科、紫單胞菌科、擬桿菌科的相對豐度升高，瘤胃球菌科、理研菌科的相對豐度降低。Zhou等[3]通過宏基因組學(xué)技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，AS患者腸道富集的菌屬主要為擬桿菌、副桿菌、雙歧桿菌、發(fā)酵氨基酸球菌和普雷沃氏菌。Dominguez-Lopez等[6]則發(fā)現(xiàn)，HLA-B27陽性AS患者腸道耶爾森氏菌、克雷伯氏菌和沙門氏菌水平增高。上述研究提示，AS患者腸道菌群處于失調(diào)狀態(tài)，直接或間接促進(jìn)AS發(fā)生發(fā)展，但作為免疫性疾病，AS患者中差異表達(dá)的菌群與具有免疫調(diào)節(jié)作用的淋巴細(xì)胞亞群水平的關(guān)系尚未明確，腸道菌群通過重塑免疫系統(tǒng)影響疾病活動(dòng)度的機(jī)制相關(guān)研究尚無報(bào)道。本研究對AS患者與健康人群的16SrRNA基因進(jìn)行高通量測序，分析AS患者腸道菌群變化，旨在揭示腸道菌群與AS發(fā)病的內(nèi)在聯(lián)系；同時(shí)探究腸道菌群與疾病活動(dòng)度和外周血淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性，以期為臨床診療提供參考。本研究為回顧性分析。研究對象為2019年12月至2020年6月山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院住院治療的AS患者及性別、年齡與之相匹配的健康人群。收集兩組腸道菌群生物信息學(xué)分析結(jié)果以及AS患者外周血淋巴細(xì)胞亞群和疾病活動(dòng)度指標(biāo)。比較兩組腸道菌群差異，并采用Spearman相關(guān)法分析AS患者腸道菌群與疾病活動(dòng)度、外周血淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性。共入選符合納入和排除標(biāo)準(zhǔn)的AS患者62例（低、高、極高疾病活動(dòng)度分別為11例、26例、25例），健康人群62名。α多樣性分析顯示，AS患者腸道菌群Chao1指數(shù)和ACE指數(shù)均低于健康人群（P均＜0.05）；β多樣性分析顯示，兩組菌群結(jié)構(gòu)存在差異（P＜0.01)。圖1

AS患者與健康人群腸道菌群α多樣性稀釋曲線圖AS：強(qiáng)直性脊柱炎圖2

AS患者與健康人群腸道菌群多樣性比較A.α多樣性；B.β多樣性AS：同圖1在腸道微生態(tài)構(gòu)成分析中，發(fā)現(xiàn)兩組樣本腸道菌群優(yōu)勢菌門均以厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門為主，但二者在門和屬水平上多種菌群的相對豐度存在差異。在Stamp差異菌群分析中，AS患者在門、屬水平亦顯示出不同于健康人群的特征：在門水平上，AS患者變形菌門、髕骨細(xì)菌門等菌群的相對豐度升高(P均＜0.05），厚壁菌門、梭桿菌門等菌群的相對豐度降低(P均＜0.05)；在屬水平上，AS患者大腸桿菌志賀菌屬、克雷伯氏菌屬、腸球菌屬等菌群的相對豐度升高(P均＜0.05)，普雷沃氏菌屬、糞桿菌屬等菌群的相對豐度降低(P均＜0.05)。圖3

基于Stamp分析和t檢驗(yàn)的AS患者與健康人群腸道菌群差異圖A.門水平；B.屬水平AS：同圖1Spearman相關(guān)性分析表明，AS患者糞桿菌屬、瘤胃球菌屬及克雷伯氏菌屬等菌屬的相對豐度與疾病活動(dòng)度或其相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)（P均＜0.05)；阿加桿菌屬的相對豐度與T細(xì)胞（r=0.302，P=0.017）、CD4+T細(xì)胞（r=0.310，P=0.014）、B細(xì)胞（r=0.292，P=0.021）、Th2細(xì)胞（r=0.429，P＜0.001）、Th17細(xì)胞（r=0.288，P=0.023）水平，鏈球菌屬的相對豐度與B細(xì)胞水平（r=0.270，P=0.034），普雷沃氏菌屬的相對豐度與Th1細(xì)胞（r=0.279，P=0.028）、Th17細(xì)胞（r=0.262，P=0.040）水平，CAG-352菌屬的相對豐度與Th1細(xì)胞水平（r=0.283，P=0.030）均呈正相關(guān)；大腸桿菌志賀菌屬的相對豐度與Th2細(xì)胞水平（r=-0.261，P=0.040），其他腸桿菌科細(xì)菌屬的相對豐度與CD4+T細(xì)胞水平（r=-0.255，P=0.046）均呈負(fù)相關(guān)。圖4

差異菌群相對豐度與疾病活動(dòng)度、外周血淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性ESR:紅細(xì)胞沉降率；CRP:C反應(yīng)蛋白；ASDAS:強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動(dòng)度評分；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001AS患者腸道菌群多樣性降低，致病菌表達(dá)增多，且與外周血淋巴細(xì)胞亞群和疾病活動(dòng)度具有相關(guān)性，可能參與了AS的發(fā)生與發(fā)展。本研究進(jìn)一步