化學(xué)藥物結(jié)構(gòu)確證的技術(shù)要求與案例王玉成

化學(xué)藥物結(jié)構(gòu)確證研究的技術(shù)要求與案例分析

王玉成

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院

醫(yī)藥生物技術(shù)研究所目錄(一)結(jié)構(gòu)確證研究的一般原則和要求(二)對(duì)不同類(lèi)別藥品結(jié)構(gòu)確證的要求(三)對(duì)特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)藥品結(jié)構(gòu)確證的要求(四)各項(xiàng)波譜和測(cè)試的技術(shù)要求(案例)

1.結(jié)構(gòu)確證研究的主要對(duì)象

2.結(jié)構(gòu)確證研究的基本方法

3.結(jié)構(gòu)確證研究的主要內(nèi)容

4.結(jié)構(gòu)確證研究的一般要求(一)結(jié)構(gòu)確證研究的一般原則

和要求1.結(jié)構(gòu)確證研究的主要對(duì)象

經(jīng)化學(xué)全合成或半合成、微生物發(fā)酵以及從動(dòng)、植物中提取的原料藥,包括新藥、進(jìn)口藥和已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的藥品.按來(lái)源：

化學(xué)合成、半合成、天然產(chǎn)物中提取、發(fā)酵等;按組分：

單一組分、多組分混合物;按分子量：

小分子化合物、大分子化合物;按結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：

成鹽化合物和非成鹽化合物、手性化合物和非手性化合物、含結(jié)晶水/溶劑和不含結(jié)晶水/溶劑等;2.結(jié)構(gòu)確證研究的基本方法

①化學(xué)方法：理化分析、元素分析、化學(xué)關(guān)聯(lián)等②物理方法：波譜方法、衍射技術(shù)

a.射頻波、微波與物質(zhì)的相互作用：核磁共振、電子順磁共振等(ESP根據(jù)譜圖中吸收峰的位置、譜線(xiàn)的積分強(qiáng)度、譜線(xiàn)的寬度及超精細(xì)結(jié)構(gòu)等信息可以鑒定自由基和過(guò)濾金屬離子等順磁粒子的結(jié)構(gòu)狀態(tài)，檢測(cè)它們的濃度（可檢測(cè)到10-14摩/升）。)b.紅外、可見(jiàn)、紫外光與物質(zhì)的相互作用：紅外光譜、紫外光譜、拉曼光譜等

c.X－射線(xiàn)與物質(zhì)的相互作用：X－射線(xiàn)衍射等

d.電子與物質(zhì)的相互作用：質(zhì)譜、電鏡等

e.其他：熱分析、原子吸收、原子發(fā)射等3.結(jié)構(gòu)確證研究的主要內(nèi)容

①骨架（平面）結(jié)構(gòu)：

分子中各原子之間的連接順序和方式;②構(gòu)型：

分子中各原子之間的空間相對(duì)位置;③結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑：

與水、有機(jī)溶劑通過(guò)氫鍵等結(jié)合;④晶型：

分子（或原子）在晶體中的排列方式;

骨架（平面）結(jié)構(gòu)

例：氟嗎西尼骨架（平面）結(jié)構(gòu)的研究方法:a.單晶X－射線(xiàn)衍射;b.常規(guī)方法，如元素分析（或高分辨質(zhì)譜）、UV、IR、NMR（包括二維譜）、MS等組合;

應(yīng)根據(jù)化合物骨架結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)及其復(fù)雜程度、有無(wú)對(duì)照品及參考文獻(xiàn)，合理選用測(cè)試項(xiàng)目。

構(gòu)型：

幾何構(gòu)型:雙鍵、環(huán)狀化合物，常用順－反（cis－trans）或Z－E表示

例：西尼地平（±）-3-（2-甲氧基乙基）-5-[3-苯基-2（E）-丙烯基]-2,6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸酯例：：拉拉米米夫夫定定(2R-順式式)-4-氨基基-1-(2-羥甲甲基基-1，3-氧硫硫雜雜環(huán)環(huán)戊戊-5-基)-1H-嘧啶啶-2-酮幾何何構(gòu)構(gòu)型型的的研研究究：理化化性性質(zhì)質(zhì)差差別別明明顯顯a.理化化常常數(shù)數(shù)，，例例如如熔熔點(diǎn)點(diǎn)等等;b.氫譜譜、、碳碳譜譜;c.紅外外光光譜譜、、紫紫外外光光譜譜等等;光學(xué)學(xué)異異構(gòu)構(gòu)：：由由于于分分子子的的不不對(duì)對(duì)稱(chēng)稱(chēng)性性引引起起，，常用用D-L或R-S表示示。。例：：那格格列列奈奈（－－））－－N-（反反-4-異丙丙基基環(huán)環(huán)基基甲甲酰?；?D-苯丙丙氨氨酸酸例：：前前列列腺腺素素E1（1R，2R，3R）-3-羥基基-2-[（E）-（3S）-3-羥基基-1-辛烯烯基基]-5-氧代代環(huán)環(huán)戊戊烷烷庚庚酸酸光學(xué)學(xué)異異構(gòu)構(gòu)的的研研究究：：a.比旋旋度度測(cè)測(cè)定定b.手性性柱柱色色譜譜（（HPLC、GC）c.核磁磁共共振振（（NMR）d.單晶晶X—射線(xiàn)線(xiàn)衍衍射射（（SXRD）e.旋光光光光譜譜（（ORD）(1.決定定化化合合物物之之絕絕對(duì)對(duì)立立體體構(gòu)構(gòu)造造。。2.決定定蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)2級(jí)與與3級(jí)構(gòu)構(gòu)造造。。)f.圓二色譜譜（CD）g.其他方法法對(duì)照品法法——根據(jù)對(duì)照照品的構(gòu)構(gòu)型推定定化學(xué)關(guān)聯(lián)聯(lián)法——利用合成成工藝分分析例如，左左旋西西替利嗪嗪的構(gòu)型型確證：：手性柱色色譜定位位（與對(duì)對(duì)照品對(duì)對(duì)比)、比旋旋度數(shù)據(jù)據(jù)、光學(xué)學(xué)純度分分析晶型的研研究:晶型是化合物物一個(gè)重重要特性性;對(duì)于多晶晶型藥物物,因晶格結(jié)結(jié)構(gòu)不同同,某些理化化性質(zhì)(如熔點(diǎn)、、溶解度度、穩(wěn)定定性)可能不同同;而且在不不同條件件下,同一化合合物的各各晶型之之間可能能會(huì)發(fā)生生相互轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化。對(duì)對(duì)于難溶溶性固體體口服制制劑,其原料藥藥晶型可可能影響響藥物的的溶解度度、穩(wěn)定定性、藥藥代動(dòng)力力學(xué)性質(zhì)質(zhì)進(jìn)而可可能影響響藥效。。所以對(duì)對(duì)于已有有文獻(xiàn)報(bào)報(bào)道的多多晶型化化合物應(yīng)應(yīng)明確其其晶型,晶型的一一致性;對(duì)于創(chuàng)新新藥也應(yīng)應(yīng)注意積積累相關(guān)關(guān)研究資資料觀察察有無(wú)多多晶型現(xiàn)現(xiàn)象。晶型的研研究:a.粉末X-射線(xiàn)衍射射法b.紅外光譜譜法、拉拉曼光譜譜法c.熔點(diǎn)法d.熱分析e.光學(xué)顯微微鏡法無(wú)對(duì)照品品和文獻(xiàn)獻(xiàn)報(bào)道：：考察不同同結(jié)晶條條件下（（溶劑、、溫度、、結(jié)晶速速率等））制備樣樣品的熔熔點(diǎn)、紅紅外光譜譜、粉末末X－射線(xiàn)衍衍射等;有對(duì)照品品:對(duì)比自制制藥物與與已上市市藥物的的熔點(diǎn)、、紅外光光譜圖、、粉末X－射線(xiàn)衍衍射圖譜譜等;有文獻(xiàn)報(bào)報(bào)道:對(duì)文獻(xiàn)資資料進(jìn)行行分析，，選取能能夠準(zhǔn)確確反映產(chǎn)產(chǎn)品晶型型的測(cè)試試項(xiàng)目;結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑劑的研究究:藥物分子子通過(guò)氫氫鍵等和和水、有有機(jī)溶劑劑結(jié)合形形成水合合物/溶劑化物物,含有不同同數(shù)量結(jié)結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑劑的化合合物可能能具有不不同的物物理性質(zhì)質(zhì),進(jìn)而可能能影響藥藥物的生生物利用用度,因此對(duì)于于原料藥藥應(yīng)明確確其所含含的結(jié)晶晶水/溶劑的情情況。結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑劑的研究究:a.元素分析析b.熱分析c.干燥失重重、水分分檢查d.單晶X-射線(xiàn)衍射射創(chuàng)新藥：：在干燥失失重、水水分測(cè)定定研究的的基礎(chǔ)上上，通過(guò)過(guò)熱分析析、元素素分析等等確證樣樣品分子子中結(jié)晶晶水/結(jié)晶溶劑劑的數(shù)量量;已上市的的藥品：：采取合適適的分析析方法對(duì)對(duì)樣品進(jìn)進(jìn)行分析析，以確確證其結(jié)結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑劑的情況況與已上上市產(chǎn)品品一致;小結(jié)：在審評(píng)過(guò)過(guò)程中專(zhuān)專(zhuān)家評(píng)價(jià)價(jià)的關(guān)注注點(diǎn)一般般包括:結(jié)構(gòu)確證證方案設(shè)設(shè)計(jì)的合合理性,是否對(duì)化化合物所所有要素素進(jìn)行了了考慮;研究?jī)?nèi)容容設(shè)置的的全面性性,所有的結(jié)結(jié)構(gòu)特征征是否已已被確證證;分析方法法選擇的的正確性性,所用方法法能否針針對(duì)性地地解決結(jié)結(jié)構(gòu)問(wèn)題題。研發(fā)者在在進(jìn)行結(jié)結(jié)構(gòu)確證證研究時(shí)時(shí),測(cè)試項(xiàng)目目的選擇擇要依據(jù)據(jù)化合物物結(jié)構(gòu)特特點(diǎn)、需需要解決決的結(jié)構(gòu)構(gòu)問(wèn)題、、各種方方法所能能解決的的結(jié)構(gòu)問(wèn)問(wèn)題等綜綜合考慮慮。①對(duì)測(cè)試樣樣品和對(duì)對(duì)照樣品品的要求求：測(cè)試樣品品:a.精制方法法測(cè)試樣品品要采用用和原料料藥制備備工藝中中相同的的精制方方法、工工藝條件件進(jìn)行精精制；對(duì)對(duì)于進(jìn)行行晶型分分析、結(jié)結(jié)晶水/結(jié)晶溶劑劑分析時(shí)時(shí)尤其需需要注意意，因?yàn)闉椴煌牡木品椒椒ê凸すに嚄l件件可能產(chǎn)產(chǎn)生不同同的晶型型、結(jié)晶晶水/溶劑。b.純度要求求大于99.0%，雜質(zhì)含含量應(yīng)小小于0.5%；對(duì)于于手性藥藥物，應(yīng)應(yīng)增加對(duì)對(duì)對(duì)映體體、非對(duì)對(duì)映體純純度要求求，一般般不低低于99.5%。注意點(diǎn)：：仿制藥物物：相關(guān)關(guān)物質(zhì)大大于或等等于0.1%，要進(jìn)行行結(jié)構(gòu)確確證（注注意響應(yīng)應(yīng)因子））創(chuàng)新藥物物：除了了與仿制制藥物一一樣之外外，盡可可能多的的羅列所所有可能能雜質(zhì)，，要與中中間體關(guān)關(guān)聯(lián)，特特別注意意手性問(wèn)問(wèn)題！對(duì)照品:a.合法來(lái)源源證明購(gòu)得的標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品(已有國(guó)家家標(biāo)準(zhǔn)的的藥品)市售原料料藥市售制劑劑中提取取得到的的原料藥藥從正規(guī)試試劑公司司購(gòu)得的的試劑等等（有的申報(bào)報(bào)資料中中，未選選擇上市市原料藥藥或其他他合法對(duì)對(duì)照品，，而是采采用自己己?jiǎn)挝痪频漠a(chǎn)產(chǎn)品，這這種“自自身”對(duì)對(duì)照的數(shù)數(shù)據(jù)和圖圖譜對(duì)于于結(jié)構(gòu)確確證沒(méi)有有任何幫幫助。）b.精制方法法：對(duì)于用于于晶型、、結(jié)晶水水等信息息確證的的對(duì)照品品，不應(yīng)應(yīng)采用處處理后原原料藥或或制劑中中提取物物作為對(duì)對(duì)照品，，因?yàn)樵纤幒秃椭苿┰谠诓煌苋苊教幚砝砗?，?huì)會(huì)對(duì)樣品品真實(shí)的的晶型和和結(jié)晶水水產(chǎn)生影影響，造造成誤判判。c.純度檢查查：對(duì)照品的的純度檢檢查：申申報(bào)資料料中應(yīng)提提供對(duì)照照品的純純度檢查查結(jié)果。。一般來(lái)來(lái)說(shuō)，對(duì)對(duì)照品純純度應(yīng)不不低于精精制品純純度，以以保證對(duì)對(duì)照品對(duì)對(duì)藥物結(jié)結(jié)構(gòu)確證證的支持持力度。。4.結(jié)構(gòu)確證證研究的的一般要要求②對(duì)圖譜、、數(shù)據(jù)的的要求附圖應(yīng)為為原圖的的復(fù)印件件或照片片;圖譜及圖圖譜上的的標(biāo)記、、數(shù)據(jù)應(yīng)應(yīng)清晰，，并有完完整的檢檢測(cè)日期期、各項(xiàng)項(xiàng)參數(shù)、、測(cè)試條條件、儀儀器型號(hào)號(hào)及樣品品編號(hào)等等記錄。。各項(xiàng)檢測(cè)測(cè)數(shù)據(jù)應(yīng)應(yīng)按規(guī)定定列表說(shuō)說(shuō)明，注注明其順順序。有有對(duì)照品品的應(yīng)將將測(cè)試品品和對(duì)照照品同一一波譜的的數(shù)據(jù)在在一個(gè)表表中對(duì)比比列出。。如有可可作參照照的文獻(xiàn)獻(xiàn)數(shù)據(jù)，，也可列列在同一一表中。。質(zhì)譜應(yīng)應(yīng)附離子子裂解圖圖。(二)對(duì)不同類(lèi)類(lèi)別藥品品結(jié)構(gòu)確確證的要要求未知結(jié)構(gòu)構(gòu)的化合合物：推推論結(jié)構(gòu)構(gòu)已知結(jié)構(gòu)構(gòu)的化合合物：驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)構(gòu)構(gòu)①未在國(guó)內(nèi)內(nèi)外上市市銷(xiāo)售的的原料藥藥按全新化化學(xué)單體體要求：：推論結(jié)結(jié)構(gòu)a.完成必要要的各項(xiàng)項(xiàng)測(cè)試;b.應(yīng)提供充充分的試試驗(yàn)圖譜譜和數(shù)據(jù)據(jù);c.按新化合合物要求求進(jìn)行圖圖譜解析析和綜合合解析;如有參考考文獻(xiàn)資資料，可可提供作作參考。。②已在國(guó)外外上市銷(xiāo)銷(xiāo)售但尚尚未在國(guó)國(guó)內(nèi)銷(xiāo)售售的原料料藥或已已有國(guó)家家標(biāo)準(zhǔn)的的原料藥藥按已知化化學(xué)結(jié)構(gòu)構(gòu)的藥物物：驗(yàn)證證結(jié)構(gòu)可以使用用對(duì)照品品可以參考考文獻(xiàn)a.有合格對(duì)照照品的化合合物：提供測(cè)試樣樣品和對(duì)照照品在完全全相同條件件和同一儀儀器上測(cè)得得的各項(xiàng)圖圖譜和數(shù)據(jù)據(jù)，完成所所需的各項(xiàng)項(xiàng)目測(cè)試，，若二者完完全相同，，并對(duì)重要要的波譜訊訊號(hào)和測(cè)試試數(shù)據(jù)進(jìn)行行了正確解解析，即可可得出二者者化學(xué)結(jié)構(gòu)構(gòu)一致的結(jié)結(jié)論。b.有詳細(xì)文獻(xiàn)獻(xiàn)數(shù)據(jù)的化化合物：可對(duì)結(jié)構(gòu)確確證研究的的內(nèi)容、方方法提供線(xiàn)線(xiàn)索，并為為解析提供供參考，但但是不能作作為結(jié)構(gòu)確確證研究的的充分證據(jù)據(jù)，仍需要要進(jìn)行較為為詳盡的圖圖譜解析和和綜合解析析。c.無(wú)對(duì)照品和和文獻(xiàn)數(shù)據(jù)據(jù)的化合物物：除了目標(biāo)化化合物的結(jié)結(jié)構(gòu)外，缺缺乏其他支支持性資料料，因此原原則上應(yīng)按按全新化學(xué)學(xué)單體要求求進(jìn)行全面面的研究，，提供充分分的試驗(yàn)圖圖譜和數(shù)據(jù)據(jù)，可結(jié)合合其它研究究工作（例例如合成工工藝路線(xiàn)的的確定）以以進(jìn)一步推推論化合物物的結(jié)構(gòu)。。(三)對(duì)特殊化學(xué)學(xué)結(jié)構(gòu)藥品品結(jié)構(gòu)確證證的要求1.立體異構(gòu)體體藥物立體異構(gòu)體體：①光學(xué)異異構(gòu)體a.對(duì)映異構(gòu)體體b.非對(duì)映異構(gòu)構(gòu)體②幾何異異構(gòu)體（順順、反異構(gòu)構(gòu)體）手性藥物----絕對(duì)構(gòu)型和和相對(duì)構(gòu)型型a.單一對(duì)映體體----絕對(duì)構(gòu)型比旋度測(cè)定定手性柱色譜譜(手性HPLC和GC)核磁共振單晶X-衍射圓二色譜旋光光譜b.消旋體----有多個(gè)手性性中心時(shí)要要求確定相相對(duì)構(gòu)型;c.立體異構(gòu)混混合物----確定異構(gòu)體體的組成和和比例;“手性藥物申申報(bào)資料及及審評(píng)要點(diǎn)點(diǎn)”(藥審中心)①應(yīng)注意確證證產(chǎn)品的立立體構(gòu)型。?？筛鶕?jù)手手性中心的的多少、文文獻(xiàn)數(shù)據(jù)是是否充足、、對(duì)照品的的有無(wú)來(lái)選選擇合適的的確證的方方法，必要要時(shí)可采用用單晶X－射線(xiàn)衍射射進(jìn)行確證證。②比旋度度是必須的的檢測(cè)項(xiàng)目目之一，已已知的起始始原料的構(gòu)構(gòu)型和化學(xué)學(xué)合成方法法的立體選選擇性也可可作為依據(jù)據(jù)之一。2.具有多晶型型的藥物晶型:是指結(jié)晶物物質(zhì)晶格內(nèi)內(nèi)分子的排排列形式。。多晶型物質(zhì)質(zhì)晶格內(nèi)部部分子間力力的差異可可能引起藥藥物各種理理化性質(zhì)的的變化，主主要對(duì)熔熔點(diǎn)、溶解解度及溶出出速率、穩(wěn)穩(wěn)定性、有有效性的影影響。重點(diǎn)：以適宜的方方法獲得藥藥物晶型的的數(shù)據(jù)。常用方法：：粉末X-衍射法紅外吸收光光譜法熔點(diǎn)熱分析光學(xué)顯微鏡鏡①創(chuàng)新藥物a.不同結(jié)晶條條件下（溶溶劑、溫度度、結(jié)晶速速率等）晶晶型的一致致性；b.不同晶型是是否影響藥藥物活性和和毒性等;②結(jié)構(gòu)已知的的仿制藥品品a.力求與被仿仿制品保持持一致；特別是被仿仿制藥為晶晶型選擇性性藥物，且且各晶型的的理化性質(zhì)質(zhì)及生物藥藥劑學(xué)性質(zhì)質(zhì)有明顯差差異的仿制制藥品，要要重點(diǎn)確定定與被仿制制品種晶型型的完全一一致性（熔熔點(diǎn)、紅外外吸收光譜譜、粉末X—射線(xiàn)衍射圖圖等)。b.重點(diǎn)關(guān)注難難溶性固體體口服制劑劑晶型的研研究；3.合成多肽類(lèi)類(lèi)藥物氨基酸分析析（證明多肽肽的組成是是否正確））；質(zhì)譜測(cè)定（（提供相對(duì)分分子質(zhì)量及及序列的信信息）；序列分析以以及肽圖測(cè)測(cè)繪等；紫外：對(duì)具有生色色團(tuán)結(jié)構(gòu)的的小肽有一一定的測(cè)試試意義；紅外：適用于小肽肽（含三個(gè)個(gè)氨基酸的的肽）、擬擬肽等；核磁共振：：可對(duì)小肽的的結(jié)構(gòu)提供供部分信息息；其他方法：：HPLC、比旋度測(cè)測(cè)定等。藥物結(jié)構(gòu)中中有半胱氨氨酸，應(yīng)明明確其狀態(tài)態(tài)（氧化態(tài)態(tài)或還原態(tài)態(tài)）；藥物結(jié)構(gòu)構(gòu)中存在在二硫鍵鍵，應(yīng)明明確二硫硫鍵的正正確連接接點(diǎn)；結(jié)合合成成工藝對(duì)對(duì)中間體體的研究究，對(duì)終終產(chǎn)品的的結(jié)構(gòu)進(jìn)進(jìn)行確證證。4.多糖類(lèi)藥藥物多糖結(jié)構(gòu)構(gòu)的描述述包括:①多糖的分分子量范范圍；②多糖的的單糖組組分；③單糖的的連接點(diǎn)點(diǎn)類(lèi)型；；④單糖和和糖苷鍵鍵的構(gòu)型型；⑤重復(fù)單單位;確證方法法：?jiǎn)翁堑姆址蛛x、鑒鑒定：紙色譜法法、TLC、HPLC、氣-質(zhì)聯(lián)用技技術(shù)等；；多糖的相相對(duì)分子子量及分分子量分分布測(cè)定定：凝膠色譜譜法；糖苷鍵的的連接方方式及糖糖苷鍵的的位置：：紅外、核核磁共振振、化學(xué)學(xué)反應(yīng)后后產(chǎn)物的的分析等等；5.多組分藥藥物明確各組組分的組組成比例例，對(duì)影影響藥效效和毒性性的主要成分分進(jìn)行結(jié)構(gòu)構(gòu)確證。?？墒褂媒?jīng)經(jīng)典的提提取方法法或其它它分離技技術(shù)，如如制備色色譜（TLC，HPLC），分離離得到主主要藥效效成分單單體，按按單體項(xiàng)項(xiàng)目要求求進(jìn)行化化學(xué)結(jié)構(gòu)構(gòu)確證。。在組分多多，含量量少，難難于得到到單體時(shí)時(shí)，可使使用聯(lián)機(jī)機(jī)分析技技術(shù)，如如氣一質(zhì)質(zhì)聯(lián)用（（GC—MS），液—質(zhì)聯(lián)用（（LC—MS），氣—付利葉紅紅外聯(lián)用用（GC—FTIR），質(zhì)—質(zhì)聯(lián)用（（MS—MS），輔助助組分結(jié)結(jié)構(gòu)的驗(yàn)驗(yàn)證及定定量分析析。6.不含金屬屬元素的的有機(jī)鹽鹽類(lèi)或復(fù)復(fù)合物物應(yīng)同時(shí)提提供成鹽前后后的兩套波波譜和試試驗(yàn)數(shù)據(jù)據(jù)。對(duì)于某些些波譜測(cè)測(cè)定有困困難或不不易說(shuō)明明其結(jié)構(gòu)構(gòu)的鹽或或復(fù)合物物，可測(cè)測(cè)定藥物物酸根或或堿基的的波譜，，并結(jié)合合其他試試驗(yàn)項(xiàng)目目進(jìn)行確確證。7.金屬鹽類(lèi)類(lèi)和絡(luò)合合物除通常要要求的各各項(xiàng)測(cè)試試外，還還應(yīng)提供供確證分分子中金金屬元素素的種類(lèi)類(lèi)、存在在形式和和含量的的有關(guān)圖圖譜和分分析數(shù)據(jù)據(jù)。不適于或或不能測(cè)測(cè)試金屬屬鹽本身身的項(xiàng)目目，可以以用成鹽鹽前的酸酸分子或或配位體體的相應(yīng)應(yīng)測(cè)試結(jié)結(jié)果進(jìn)行行佐證。。8.半合成化化合物分子母核核的結(jié)構(gòu)構(gòu)為已知知并可以以確證其其原分子子母核結(jié)結(jié)構(gòu)在合合成過(guò)程程中未發(fā)發(fā)生改變變的，可可適當(dāng)簡(jiǎn)簡(jiǎn)化對(duì)母母核部分分結(jié)構(gòu)的的確證工工作。重重點(diǎn)對(duì)新引入基基團(tuán)進(jìn)行結(jié)構(gòu)構(gòu)確證，，可以結(jié)結(jié)合原料料結(jié)構(gòu)和和合成路路線(xiàn)進(jìn)行行論證和和說(shuō)明。。如涉及構(gòu)構(gòu)型確證證，若母母核手性性中心構(gòu)構(gòu)型沒(méi)有有改變時(shí)時(shí)，重點(diǎn)點(diǎn)在于側(cè)側(cè)鏈和取取代基中中新引入入手性中中心的構(gòu)構(gòu)型確定定。綜合解析析舉例FABMS22muM+HM+Na1236457891011121314151236457891011121314CHCH2OCH3123645789101112131412a2b34591011131478612a2b34591011131478612a386452b971110141312364578910111213141512a2b345910111314786申報(bào)資料料的格式式和內(nèi)容容一.新藥的化化學(xué)結(jié)構(gòu)構(gòu)式、分分子式及及分子量量二.供確認(rèn)化化學(xué)結(jié)構(gòu)構(gòu)用供試試品的純純度及檢檢查純度度的方法法三.確證化學(xué)學(xué)結(jié)構(gòu)的的方法理化常數(shù)數(shù)元素分析析四.各項(xiàng)波譜譜和測(cè)試試的技術(shù)術(shù)要求紫外吸收收光譜紅外吸收收光譜核磁共振振氫譜核磁共振振碳譜質(zhì)譜差熱分析析X-射線(xiàn)衍射射譜綜合解析析五.參考文獻(xiàn)獻(xiàn)一.新藥的化化學(xué)結(jié)構(gòu)構(gòu)式、分分子式及及分子量量二.供確認(rèn)化化學(xué)結(jié)構(gòu)構(gòu)用供試試品的純純度及檢檢查純度度的方法法三.確證化學(xué)學(xué)結(jié)構(gòu)的的方法2元素分析析①主要應(yīng)用用：確定元素素組成、、分子式式;除氧元素素外，其其余各種種元素一一般均能能準(zhǔn)確測(cè)測(cè)定其含含量?？梢苑从秤辰Y(jié)晶水水/結(jié)晶溶劑劑、成鹽鹽化合物物的酸根根和堿基基等。C、H、N元素可采采用自動(dòng)動(dòng)元素分分析儀測(cè)測(cè)定，其其他元素素可采用用適宜的的物理或或化學(xué)方方法測(cè)定定。②技術(shù)要求求：a.應(yīng)詳細(xì)說(shuō)說(shuō)明使用用儀器、、測(cè)定方方法及條條件。特特別是對(duì)對(duì)測(cè)試樣樣品的預(yù)預(yù)處理方方法、條條件。b.同一樣品品測(cè)定兩兩次，兩兩次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)數(shù)據(jù)同同時(shí)列出出，不取取平均值值。c.應(yīng)給出計(jì)計(jì)算理論論值所依依據(jù)的分分子式，，包括結(jié)結(jié)晶水（（或結(jié)晶晶溶劑)。列表比較實(shí)測(cè)測(cè)值與理理論值（（一般要要求誤差差不超過(guò)過(guò)0.3％），初初步判定定供試品品與目標(biāo)標(biāo)化合物物的分子子組成是是否一致致。d.附測(cè)試報(bào)報(bào)告單的的復(fù)印件件。儀器型號(hào)號(hào)與測(cè)定定條件儀器：Carlo-Erba1106元素分析析儀(意大利)測(cè)定條件件：1050℃催化燃燒燒載載氣：N2氧瓶法測(cè)測(cè)定測(cè)定結(jié)果果與解析析測(cè)定結(jié)果果：樣品品測(cè)定結(jié)結(jié)果與對(duì)對(duì)照品測(cè)測(cè)定結(jié)果果見(jiàn)附表表1。結(jié)果解析析：樣品品與對(duì)照照品的實(shí)實(shí)測(cè)值同同理論計(jì)計(jì)算值基基本相符符，C、H、N、的誤差差均在千千分之五五以?xún)?nèi)，，同含5個(gè)結(jié)晶水水的鹽酸酸大觀霉霉素分子子式C14H24ClN2O7?2HCl?5H2O符合。。表1樣品（（020708）與對(duì)對(duì)照品品（DJS）的元元素分分析數(shù)數(shù)據(jù)CHN樣品（020708）(%)33.667.285.6433.767.375.67對(duì)照品（DJS）(%)33.657.305.6733.627.295.68理論計(jì)算值(%)33.957.335.66(四)各項(xiàng)波波譜和和測(cè)試試的技技術(shù)要要求1.紅外吸吸收光光譜(IR)①基本原原理：：分子中中化學(xué)學(xué)鍵振振動(dòng)能能級(jí)的的躍遷遷。②主要要應(yīng)用用：a.鑒定化化合物物的結(jié)結(jié)構(gòu)——有對(duì)照照品、、標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)圖譜譜b.推測(cè)化化合物物的結(jié)結(jié)構(gòu)——確定特特征官官能團(tuán)團(tuán)、區(qū)區(qū)分晶晶型等等③技術(shù)要要求：：a.按藥典典規(guī)定定方法法校正正和檢檢定儀儀器；；b.正確選選擇測(cè)測(cè)試方方法和和條件件固體樣樣品首首選溴溴化鉀鉀壓片片法；；離子交交換-----氯化鉀鉀壓片片；晶型變變化-----糊法；；c.準(zhǔn)確、、合理理、充充分的的圖譜譜解析析;d.按要求求格式式列表表和撰撰寫(xiě)資資料;儀器型型號(hào)與與測(cè)試試儀器器：：NicoletImpact-400型紅紅外外分分光光光光度度計(jì)計(jì)儀器器測(cè)測(cè)試試：：用用聚聚苯苯乙乙烯烯膜膜儀器器的的測(cè)測(cè)定定條條件件測(cè)定定條條件件：：樣樣品品測(cè)測(cè)定定用用溴溴化化鉀鉀壓壓片片法法測(cè)定定圖圖譜譜：：圖圖1、2附圖圖3：聚聚苯苯乙乙烯烯膜膜紅紅外外吸吸收收光光譜譜。④資料料撰撰寫(xiě)寫(xiě)格格式式儀器器測(cè)試試條條件件儀器器校校正正和和檢檢定定數(shù)據(jù)據(jù)表表解析析吸收峰(cm-1)

強(qiáng)度振動(dòng)類(lèi)型基團(tuán)2.紫外外吸吸收收光光譜譜(UV)①基本本原原理理：：電電子子躍躍遷遷②主主要要應(yīng)應(yīng)用用：：推推測(cè)測(cè)共共軛軛體體系系的的骨骨架架結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)（（發(fā)發(fā)色色團(tuán)團(tuán)、、助助色色團(tuán)團(tuán)））紫外外光光譜譜———定性性吸收收系系數(shù)數(shù)———定量量③技術(shù)術(shù)要要求求a.按藥藥典典規(guī)規(guī)定定方方法法校校正正和和檢檢定定儀儀器器；；b.通常常要要求求三三種種溶溶劑劑：：中中性性、、0.1NHCl、0.1NNaOH；c.要求求定定量量，，準(zhǔn)準(zhǔn)確確計(jì)計(jì)算算摩摩爾爾吸吸收收系系數(shù)數(shù)；；d.歸屬屬主主要要吸吸收收譜譜帶帶；；e.數(shù)據(jù)據(jù)列列表表說(shuō)說(shuō)明明；；④資料料撰撰寫(xiě)寫(xiě)格格式式儀器器測(cè)試試條條件件儀器器校校正正和和檢檢定定數(shù)據(jù)據(jù)表表解析析

溶劑λmax

ε值基團(tuán)和吸收帶溶劑λmaxnmAbs水194.80200.00210,002.06232.28060.82090.1mol/L鹽酸200.00204.00210.002.05892.26251.2121三乙胺198.00203.00210.002.00952.27111.33163.核磁磁共共振振氫氫譜譜(1H-NMR)①基本本原原理理：：利用用原原子子核核的的核核自自旋旋現(xiàn)現(xiàn)象象，，通通過(guò)過(guò)一一定定振振動(dòng)動(dòng)頻頻率率的的電電磁磁波波照照射射時(shí)時(shí)，，原原子子核核吸吸收收電電磁磁波波從從低低能能態(tài)態(tài)向向高高能能態(tài)態(tài)躍躍遷遷，，即即核核磁磁共共振振。。②主主要要應(yīng)應(yīng)用用可提提供供供供試試品品中中氫氫原原子子數(shù)數(shù)目目、、周周?chē)鷩瘜W(xué)學(xué)環(huán)境境、、相相互互間間關(guān)關(guān)系系、、空空間間排排列列等等信信息息。。③技術(shù)術(shù)要要求求a.應(yīng)使使用用200MHz以上上高高分分辨辨NMR儀。。b.對(duì)各各項(xiàng)項(xiàng)測(cè)測(cè)試試條條件件應(yīng)應(yīng)有有明明確確、、詳詳盡盡的的說(shuō)說(shuō)明明，，如如儀儀器器型型號(hào)號(hào)、、規(guī)規(guī)格格、、溶溶劑劑、、內(nèi)內(nèi)標(biāo)標(biāo)。。c.對(duì)分分子子中中全全部部H原子子均均要要有有明明確確的的解解析析和和歸歸屬屬。。d.對(duì)復(fù)復(fù)雜雜結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)化化合合物物，，應(yīng)應(yīng)考考慮慮采采用用合合適適的的其其它它技技術(shù)術(shù)加加以以佐佐證證。。④資料料撰撰寫(xiě)寫(xiě)格格式式儀器器溶劑劑、、內(nèi)內(nèi)標(biāo)標(biāo)給出出原原子子編編號(hào)號(hào)的的分分子子結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)式式數(shù)據(jù)據(jù)表表(如有有對(duì)對(duì)照照品品或或文文獻(xiàn)獻(xiàn)數(shù)數(shù)據(jù)據(jù)可可以以對(duì)對(duì)比比列列入入表表中中)解析析原子序號(hào)化學(xué)位移質(zhì)子數(shù)多重性J值相應(yīng)質(zhì)子4.核磁磁共共振振碳碳譜譜(13C-NMR)①基本原理：利用原子核核的核自旋旋現(xiàn)象，通通過(guò)一定振振動(dòng)頻率率的電磁波波照射時(shí)，，原子核吸吸收電磁波從低能能態(tài)向高能能態(tài)躍遷，，即核磁共共振。②主要應(yīng)用用:可提供供試試品中碳原原子的數(shù)目目、所處的的不同化學(xué)環(huán)環(huán)境信息。。③技術(shù)要求a.對(duì)各項(xiàng)測(cè)試試條件應(yīng)有有明確、詳詳盡的說(shuō)明明，如儀器器型號(hào)、規(guī)規(guī)格、溶劑劑、內(nèi)標(biāo)。。b.在圖譜復(fù)雜雜時(shí)，應(yīng)使使用質(zhì)子噪噪聲去偶或或偏共振去去偶技術(shù)，，使圖譜簡(jiǎn)簡(jiǎn)化。c.對(duì)分子中全全部C原子均要有有明確的解解析和歸屬屬。d.對(duì)復(fù)雜結(jié)構(gòu)構(gòu)化合物，，可與類(lèi)似似結(jié)構(gòu)化合合物的化學(xué)學(xué)位移進(jìn)行行計(jì)算比較較，確定合合理結(jié)構(gòu)。。④資料撰寫(xiě)格格式儀器溶劑給出碳原子子編號(hào)的分分子結(jié)構(gòu)式式數(shù)據(jù)表(如有對(duì)照品品或文獻(xiàn)數(shù)數(shù)據(jù)可以對(duì)對(duì)比列入表表中)解析

碳原子序號(hào)

化學(xué)位移

碳原子類(lèi)型5.其他核磁共共振譜DEPT譜:可區(qū)分碳原原子的類(lèi)型型;1H－1Hcosy:可以顯示相相隔2～3鍵相互之間間存在偶合合的質(zhì)子對(duì)對(duì)信息;C-Hcosy(HMQC,異核多量子子相關(guān)譜):可以了解分分子中C-H聯(lián)結(jié)情況;HSQC(異核單量子子相關(guān)譜):用于測(cè)定1H-13C相關(guān)信息，，可以直接接明確C、H之間的連接接關(guān)系;HMBC(異核多重鍵鍵相關(guān)譜):可以顯示1H、13C之間遠(yuǎn)程偶偶合的信息息，即相隔隔二鍵和三三鍵的1H、13C之間相關(guān)信信號(hào);解析化合物物中存在的的結(jié)構(gòu)單元元，推測(cè)化化合物中各各官能團(tuán)、、結(jié)構(gòu)單元元之間的連連接關(guān)系;19F、31P等:可提供相應(yīng)應(yīng)元素的種種類(lèi)及數(shù)目目、在分子子中所處的的化學(xué)環(huán)境境等信息;常用的二維維核磁共振振測(cè)試包括括H-Hcosy（H-HCorrelatedspectroscopy）、HMBC（1H-detectedmultiple-bondheteronuclearmultiple-quantumcoherence）、HMQC（1H-detectedheteronuclearmultiple-quantumcoherence）等，對(duì)于于結(jié)構(gòu)復(fù)雜雜或用一般般NMR方法難以進(jìn)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確確證的化合合物，進(jìn)行行二維譜測(cè)測(cè)試可更有有效地確證證藥物的結(jié)結(jié)構(gòu)。碳譜注意點(diǎn)點(diǎn)：1.碳信號(hào)數(shù)目目比實(shí)際的的少，原因因可能為信信號(hào)重疊，，或有些季季碳信號(hào)弱弱，或隱藏藏在溶劑信信號(hào)內(nèi)；2.碳信號(hào)數(shù)目目比實(shí)際的的多，原因因可能是某某些化合物物存在構(gòu)象象異構(gòu)。分子式：C44H69NO12.H2O結(jié)構(gòu)式為C44H69NO12，在其13C全去偶譜中中應(yīng)顯示44個(gè)峰，但實(shí)實(shí)際顯示多多達(dá)83個(gè)峰，這是是因?yàn)樵谌苋軇┲杏袃蓛煞N構(gòu)像,一種為優(yōu)勢(shì)勢(shì)一種為劣劣勢(shì)，（文文獻(xiàn)報(bào)道在在氯仿中比比例為3:1）6.質(zhì)譜(MS)①基本原理：：將氣體分子子經(jīng)電子流流轟擊,使分子中的的電子成為為帶正電荷荷的分子離離子,而后裂解成成一系列的的碎片離子子,再通過(guò)磁場(chǎng)場(chǎng)使不同質(zhì)質(zhì)荷比的正正離子分離離并記錄其其相對(duì)強(qiáng)度度,畫(huà)出質(zhì)譜圖圖。②主要應(yīng)用：：提供分子離離子峰、碎碎片峰、豐豐度等信息息，可以確確定分子量量、分子式式以及推測(cè)測(cè)部分結(jié)構(gòu)構(gòu)單元。對(duì)含有同位位素元素(如Cl、Br等)的藥物,利用同位素素簇的豐度度比，可推推斷藥物中中部分元素素的種類(lèi)、、數(shù)量，乃乃至分子式式、裂解方方式等。③技術(shù)要求:a.應(yīng)盡量設(shè)法法獲得化合合物分子離離子峰。當(dāng)當(dāng)用EI法不能出現(xiàn)現(xiàn)分子離子子峰時(shí)，可可試用其它它電離源，，如CI，F(xiàn)AB，F(xiàn)I，F(xiàn)D，ESI等。b.所獲數(shù)據(jù)按按規(guī)定列表表，并對(duì)重重要的碎片片離子峰的的產(chǎn)生進(jìn)行行解釋?zhuān)崽峁╇x子裂裂解圖。c.高分辨質(zhì)譜譜不能反映映藥品的純純度和結(jié)晶晶水，結(jié)晶晶溶劑，殘殘留溶劑的的情況。④資料撰寫(xiě)格格式儀器測(cè)試條件數(shù)據(jù)表裂解圖解析M/Z

相對(duì)豐度

碎片離子7.熱分析①基本原理：：采用程序控控溫下，精精確記錄待待測(cè)物質(zhì)理理化性質(zhì)與與溫度的關(guān)關(guān)系，研究究其受熱過(guò)過(guò)程中晶型型轉(zhuǎn)變、熔熔融、升華華等物理變變化和脫水水、熱分解解、氧化、、還原等化化學(xué)變化。。②主要應(yīng)用：：