放射自顯影教學課件

放射自顯影教學課件放射自顯影教學課件1定義：放射自顯影是一種利用放射性核素發(fā)射的射線，使乳膠中的鹵化銀感光而形成潛影，經(jīng)顯影和定影，形成圖像。借助感光銀顆粒所在的部位和強度，通過影像分析，能準確地判斷放射性示蹤劑的分布部位和數(shù)量（半定量），這種技術稱為放射自顯影術（autoradiography）。這種技術得到的圖像稱為放射自顯影像（autoradiogram），以上兩種術語均可簡稱為放射自顯影（ARG）。定義：放射自顯影是一種利用放射性核素發(fā)射的射線，使乳膠中的鹵2放射自顯影教學課件3放射自顯影教學課件4潛影形成步驟

1、發(fā)射電子：核射線與溴化銀作用，使其電離，射出電子，向敏化中心移動形成陰電層。

AgBr+β粒子→Ag++Br-+e-

2、Ag+的還原：Ag+向敏化中心移動，與e-結合，還原成銀原子。

e-+Ag+→Ag3、潛影形成：還原的銀原子起催化作用，致周圍的Ag+被還原，形成潛影。

Ag……Ag→nAg

潛影經(jīng)顯影液和定影液處理即成為自顯影圖像。潛影形成步驟1、發(fā)射電子：核射線與溴化銀作用，使其電離5（二）潛影的消退有潛影形成的結晶在顯影液的作用下，溴被洗去，銀原子則留下來成一個黑色顆粒。潛影如未及時顯影，則在水、氧等作用下還原的銀原子會減少，使?jié)撚跋?。故曝光應在干燥、低溫、少氧的環(huán)境下進行。（二）潛影的消退有潛影形成的結晶在顯影液的作用下，溴被洗去，6二、放射自顯影的類型（一）宏觀自顯影（macroscopicARG）：又稱大體自顯影，觀察范圍較大，分辨力低，只能供肉眼或放大鏡觀察，或根據(jù)黑度判斷示蹤劑的分布及相對數(shù)量。此種自顯影適用于小動物的整體標本，大動物的整個臟器或肢體，以及層析板、免疫沉淀板、骨骼、牙齒的磨片或剖面等的研究。二、放射自顯影的類型（一）宏觀自顯影（macroscopic7（二）顯微鏡自顯影（lightmicroscopicARG）：又稱光學顯微鏡自顯影，是借助顯微鏡進行組織或細胞學觀察，分辨能力要求較高。根據(jù)銀顆粒來判斷示蹤劑的分布部位和數(shù)量的多少。適用于組織切片、細胞涂片等標本的研究?？梢詫Σ煌毎M行比較，并根據(jù)不同示蹤劑在不同時間的分布，研究細胞水平的代謝過程。制備一般采用液體乳膠法。（二）顯微鏡自顯影（lightmicroscopicAR8（三）電子顯微鏡自顯影（electronmicroscopicARG)：用于示蹤劑在亞細胞結構中分布情況的研究，能顯示出普通顯微鏡觀察不到的細微結構與放射性核素分布的關系。適用于細胞超微結構，甚至大分子（DNA、RNA）上的精確定位和定量，也可觀察動態(tài)過程。此類技術要求標本在100nm以下的超薄切片，乳膠厚度僅相當銀顆粒的直徑（約140nm）。（三）電子顯微鏡自顯影（electronmicroscop9三、常用的感光材料放射自顯影常用的感光材料包括各種類型的原子核乳膠、X線膠片、電影正片、氚片或幻燈片。三、常用的感光材料放射自顯影常用的感光材料包括各種類型的原子10（一）原子核乳膠簡稱核乳膠，由溴化銀和明膠組成。常溫上呈半固體，低溫為明膠狀，溫度升至40℃左右為液態(tài)。使用時乳膠涂層厚度可由乳膠量和稀釋度（用去離子水稀釋）進行調(diào)節(jié)。（一）原子核乳膠簡稱核乳膠，由溴化銀和明膠組成。常溫上呈半固11液體乳膠直接涂在標本或支持物上，多用于光鏡和電鏡自顯影。將液體核乳膠涂在玻片上，可抽成核乳膠干板（nuclearemulsionplate），再于標本接觸形成自顯影像，多用于光鏡自顯影或宏觀自顯影。也可將干板將乳膠層從玻片上揭下來，稱為揭膜核乳膠（strippingfilmemuslon），多用于定量的光鏡自顯影。液體乳膠直接涂在標本或支持物上，多用于光鏡和電鏡自顯影。將液12由溴化銀、碘化銀和明膠組成，銀晶體顆粒平均直徑1μm，對低能β射線敏感度高，對暗室的安全光也有相當耐受。乳膠涂在醋酸纖維素酯片基的單面，乳膠面沒有保護層。使用時要注意保護乳膠層面，該面直接與標本接觸，以獲得最佳靈敏度。主要用于3H標記化合物的宏觀自顯影或低倍光鏡自顯影。（二）氚片（tritumfilm）由溴化銀、碘化銀和明膠組成，銀晶體顆粒平均直徑1μm，對低能13（三）X線片（X-rayfilm）由溴化銀、碘化銀和明膠組成，銀晶體顆粒直徑2.5μm，對射線分辨率較低，對暗室內(nèi)的安全光有一定的耐受。乳膠涂在醋酸纖維素酯兩面，外覆保護層。主要用于核素射線能量較高的宏觀自顯影或低倍光鏡自顯影。（三）X線片（X-rayfilm）由溴化銀、碘化銀和明膠組14四、常用的放射性核素選擇放射性核素應考慮其射線種類、能量和半衰期。核素半衰期射線類型射線平均能量（MeV）3H

12.33年β0.00514C5730年β0.0532P14.28天β0.69535S87.4天β0.05545Ca165天β0.1059Fe44.6天β0.12125I60.2天β、γ0.0037四、常用的放射性核素選擇放射性核素應考慮其射線種類、能量和半15五、照相處理（一）顯影和定影（二）顯影液和定影液（三）干燥、染色和封固五、照相處理（一）顯影和定影16（一）顯影和定影感光材料與標本接觸后，經(jīng)射線的作用溴化銀晶體形成潛影，未受核射線作用的溴化銀則不形成潛影。這兩種晶體經(jīng)顯影和定影，才能將其區(qū)分。顯影的作用是使銀鹽還原，有潛影的結晶比無潛影者顯影快，因此適當控制顯影時間可只使受照射的結晶呈現(xiàn)黑色顆粒，定影的作用是洗去未感光的銀鹽。（一）顯影和定影感光材料與標本接觸后，經(jīng)射線的作用溴化銀晶體17（二）顯影液和定影液顯影和定影是由顯影液和定影液來完成的。常用的顯影液為D-19b，定影液為F-5。顯影液和定影液的溫度應嚴格控制在19±1℃，顯影時間2-4min。顯影結束后用水充分漂洗，然后進行定影。定影時間4-8min，經(jīng)水充分沖洗后晾干。顯影和定影的具體時間可通過實踐選定。（二）顯影液和定影液顯影和定影是由顯影液和定影液來完成的。常18D-19b顯影液和F-5定影液配方

D-19b顯影液配方F-5定影液配方水（5℃）(ml)700水（5℃）(ml)800米吐爾（g）2硫代硫酸鈉(g)240無水亞硫酸鈉(g)72無水亞硫酸鈉(g)15對苯二酚（g）8.828%醋酸(ml)48無水碳酸鈉(g)48硼酸(結晶)(g)7.5溴化鉀(g)4鉀礬(g)15加水至(ml)1000加水至(ml)1000D-19b顯影液和F-5定影液配方19（三）干燥、染色和封固經(jīng)顯影、定影和沖洗等處理的乳膠可空氣或人工干燥，但干燥過程應避免塵粒沾污乳膠，也可用酒精進行脫水干燥。干燥后可按常規(guī)方法染色（如蘇木精-伊紅），染色后可用蓋坡片封固。（三）干燥、染色和封固經(jīng)顯影、定影和沖洗等處理的乳膠可空氣或20六、放射自顯影的分辨力放射自顯影的目的在于研究放射性核素或其標記化合物在組織內(nèi)的位置，所以放射自顯影的分辯力，主要是指位置的分辯力。故分辨力就是指兩個相鄰的放射性核素分子在標本中的距離近以多少能在顯影銀顆粒上顯示為兩個顆粒。銀顆粒顯影放射源可分辨不可分辨六、放射自顯影的分辨力放射自顯影的目的在于研究放射性核素或其21半距離（halfdistance，HD）

衡量分辨力常用半距離來表示。即一線性放射源，其顯影的銀顆粒分散在放射源的兩側，銀顆粒隨著與放射源的距離的增加而減少，當銀顆粒減少到一半時，此距離稱半距離。若放射源為點狀源則以半半徑來表示。HD半距離（halfdistance，HD）HD22影響分辨力的主要因素：1、核素的能量：核素的能量越高，射線的射程較長。分散的銀顆粒就較多，因而分辨力下降。如在相同條件下，3H、14C、32P的自顯影分辨力依次下降。射線能量低的自顯影射線能量高的自顯影影響分辨力的主要因素：射線能量低的自顯影射線能量高的自顯影23影響分辨力的主要因素：2、樣品的厚度：樣品厚，組織表面和深層中放射源的射線同時射入乳膠層，使銀顆粒分散程度加重，影像重疊，分辨力下降。樣品薄，則分辨力高，但曝光時間需加長。薄樣品自顯影厚樣品自顯影影響分辨力的主要因素：薄樣品自顯影厚樣品自顯影24影響分辨力的主要因素：3、乳膠層的厚度：較薄的乳膠層記錄的是離放射源最近的徑跡起始部，隨乳膠加厚，記錄的包括徑跡起始部和遠離放射源的部分，偏離放射源的機會越多，分辨力下降。乳膠層厚，形成較大的影像影響分辨力的主要因素：乳膠層厚，形成較大的影像25影響分辨力的主要因素：4、樣品與乳膠層的間隙：距離大者，射線散射面積也大，影像越不清晰，分辨力下降。樣品與乳膠層間隙大，形成較大顯影影響分辨力的主要因素：樣品與乳膠層間隙大，形成較大顯影26影響分辨力的主要因素：5、乳膠銀晶體大?。猴@影銀顆粒不一定于原有的鹵化銀位置完全一致，故銀晶體越小，則顯影銀顆粒越小，分辨力就越好。6、曝光時間：正常曝光時間，核素中占多數(shù)的中、低能量射線作用于乳膠，分辨力高。時間過長，則高能射線作用乳膠幾率增加，散射加大，分辨力下降。7、顯影時間：顯影時間長，可使一些未感光的銀粒被還原，使影像界限不清，分辨力下降。影響分辨力的主要因素：27七、放射自顯影的本底、效率1、本底：在自顯影上，除標本內(nèi)的放射性核素外，由其他原因造成的顯影顆粒，統(tǒng)稱自顯影的本底。本底過高不僅對低水平放射性的測量，而且降低分辨力。暗室紅燈過量或感光材料在紅燈下曝露時間過長、顯影液溫度過高或時間過長、感光材料過期或保存溫度過高、感光材料的機械彎折或涂液體乳膠干燥過快以及感光材料沾污還原性物質等，是引起自顯影本底過高的常見原因。七、放射自顯影的本底、效率1、本底：在自顯影上，除標本內(nèi)的放28自顯影的效率：系指待測標本中的放射性核素在曝光時間內(nèi)，每100次衰變所給出的顯影銀粒數(shù)目。粗略估計，當3H標本的厚度為1μm、密度為1.1時，光鏡自顯影中的效率為10%~15%，而厚度為5μm者，效率則為4%~5%（很多深層β粒子不能從標本中射出）。32P標本在同樣條件下的效率為30%~40%，在電鏡自顯影中，3H的效率為25%。自顯影的效率：系指待測標本中的放射性核素在曝光時間內(nèi)，每1029第二節(jié)放射自顯影的基本方法

及結果分析醫(yī)學生物學示蹤研究中的自顯影實驗，一般環(huán)節(jié)是：1、示蹤：向實驗動物或離體標本引入放射性核素標記物。2、標本制備：取生物標本并制備成含放射性核素的切片、涂片或電泳、層析分離的標本。3、自顯影制備：暗室中在標本上敷加感光材料。4、曝光：避光條件下核射線作用于感光材料。5、照相處理：顯影、定影、水洗、干燥、染色、封固。最后是閱讀分析。第二節(jié)放射自顯影的基本方法

及結果分析醫(yī)學生物學示蹤研究中30一、示蹤劑引入的方法（一）引入途徑（二）引入方法一、示蹤劑引入的方法（一）引入途徑31（一）引入途徑1、體內(nèi)實驗：可由靜脈、皮下、肌肉、腹腔或直接腦內(nèi)注射和灌胃等途徑引入放射性標記化合物。2、體外實驗：對組織、細胞、體液的培養(yǎng)過程，則可在培養(yǎng)瓶中引入。在離體標本上研究受體等生物活性物質，也常將示蹤劑直接加在切片上進行結合反應，然后洗去多余的示蹤劑后再進行自顯影。（一）引入途徑32二、放射自顯影的標本制備總要求：標本制備過程不能引起示蹤劑的流失或移動。（一）組織切片（二）整體小動物或大動物臟器切片（三）牙齒、骨骼（四）體液、培養(yǎng)液中的細胞或其他成分（五）電鏡標本（六）無細胞的標本二、放射自顯影的標本制備總要求：標本制備過程不能引起示蹤劑的33（一）組織切片1、冰凍切片：標本采集后不經(jīng)固定，直接快速冷凍。冰凍的標本不能反復凍融，直接放置-80℃?zhèn)溆谩Ｈ缓筮M行切片，切片冷凍干燥后，移入室溫后置4℃進行自顯影。適用于擴散性示蹤實驗和需保存生物活性的實驗。2、石蠟切片：標本經(jīng)固定液固定（福爾馬林、多聚甲醛）固定、水洗、脫水、二甲苯浸透、石蠟包埋等過程，常溫下切片。標本不宜用含重金屬鹽的固定液，防止干擾結果。固定后必須充分水洗，制備過程中示蹤劑和某些組織成分可能發(fā)生擴散或流失，一般只用于非擴散性實驗。（一）組織切片34（二）整體小動物或大動物臟器切片實驗動物引入示蹤劑后，用藥物麻醉動物，然后將動物投入干冰丙酮混合液或液氮中快速冷凍，以防組織內(nèi)形成結晶，待全部凍結，用羥甲基纖維素包埋動物，包埋塊在整體切片機上制成切片，再進行自顯影操作。（二）整體小動物或大動物臟器切片35（三）牙齒、骨骼觀察無機成分時，可在磨石上制成磨片。先用10%福爾馬林固定，經(jīng)磨石加水研磨至表面平整的薄片或剖面，然后乙醇脫水、干燥，再進行自顯影。觀察有機成分時，可脫鈣后制成石蠟切片。（三）牙齒、骨骼36（四）體液、培養(yǎng)液中的細胞或其他成分可直接離心濃縮后制成細胞涂片，培養(yǎng)的細胞也可制備細胞爬片，細胞應制成單層。離體實驗中，細胞周圍常有大量游離示蹤劑，應充分洗滌后再制備涂片。固定涂片的固定液應根據(jù)研究對象進行選擇，如研究核酸時用甲醇：冰醋酸（3：1），蛋白質則選用10%福爾馬林做固定液，干燥后進行自顯影。（四）體液、培養(yǎng)液中的細胞或其他成分37（五）電鏡標本電鏡標本的制備與一般標本制備不同，標本先用2%戊二醛固定，緩沖液洗滌，再用鋨酸固定，沖洗，系列丙酮或乙醇脫水，環(huán)氧樹脂包埋。然后用超薄切片抽切片，切片厚度為50~100μm。再涂核乳膠，進行自顯影。（五）電鏡標本38（六）無細胞標本示蹤研究所用的各種電泳譜、色層條、免疫沉淀板，可按常規(guī)方法進行處理、干燥，然后再用接觸法做自顯影。（六）無細胞標本39三、自顯影制備（一）接觸法（二）液體核乳膠浸膜法（三）揭膜乳膠法（四）融裱法（五）金屬環(huán)法三、自顯影制備（一）接觸法40（一）接觸法在暗室中，將標本面與感光膠片或核乳膠干板的乳膠面密切接觸，進行曝光而制備自顯影的方法稱為接觸法。標本與感光材料均不接觸水或有機溶劑，不會造成示蹤劑的擴散或流失，適用于各種實驗。（一）接觸法41（二）液體核乳膠浸膜法在暗室中，將標本或載有標本的玻片浸入適當稀釋的液體核乳膠中，使標本表面敷上一層薄而均勻的乳膠膜，干燥后曝光而制備處顯影的方法稱液體核乳膠浸膜法。在浸膜過程中，標本要與含水的液體核乳膠接觸，會造成擴散性示蹤劑一定程度的擴散和流失，故只適用于非擴散性示蹤實驗。（二）液體核乳膠浸膜法42（三）揭膜乳膠法將揭膜乳膠膜從玻璃基片上揭下來，在溫水中展開，浸透，然后將其貼于標本表面，干燥后曝光而制備自顯影。揭膜乳膠厚度均勻，該法常用于光鏡自顯影的定量研究。因需在水中進行，故適用于非擴散性示蹤實驗。（三）揭膜乳膠法43（四）融裱法用預冷的核乳膠干板沾取剛剛切下的冰凍組織切片，并使其貼牢在乳膠面上，凍干后進行曝光制備自顯影。主要用于光鏡自顯影的擴散性示蹤實驗。（四）融裱法44（五）金屬環(huán)法電鏡自顯影常用的方法。即將核乳膠在暗室中按1：4與蒸餾水稀釋，40℃融化并緩慢攪拌1h，存放4℃過夜使其穩(wěn)定。然后再融化并攪拌1h，將其冷卻到25℃。用不銹鋼制成的金屬環(huán)（10∽30mm）插入核乳膠中，垂直提出，在金屬環(huán)上便形成一層單層乳膠膜。將其敷在電鏡切片所放置的銅網(wǎng)上，4℃曝光制備自顯影。（五）金屬環(huán)法45四、自顯影的閱讀分析（一）宏觀自顯影的閱讀分析（二）光鏡自顯影的閱讀分析（三）電鏡自顯影的閱讀分析四、自顯影的閱讀分析（一）宏觀自顯影的閱讀分析46（一）宏觀自顯影的閱讀分析宏觀自顯影的影像可直接用肉眼觀察。比本底黑的部份即表示放射性示蹤劑的存在，黑度越大，表示該處放射性越強，示蹤劑分布越多。觀察時，需將自顯影像與標本重合起來觀察，以準確定位。如將自顯影像用光密度計進行測量，則可進行定量分析。（一）宏觀自顯影的閱讀分析47（二）光鏡自顯影的閱讀分析通過在光鏡下觀察自顯影像上銀顆粒分布的位置和密度而確定放射性示蹤劑存在部位和數(shù)量。自顯影像上單位面積的顯影銀顆粒數(shù)目，與該處示蹤劑的放射性活度呈正比。（二）光鏡自顯影的閱讀分析48光鏡自顯影的定量分析二種方法：一是計數(shù)被示蹤劑標記的細胞或細胞核在細胞群體中所占的百分率，即標記指數(shù)。通常一個細胞核上有4個以上銀顆粒作為標記細胞。另一種是計數(shù)自顯影像上某部位單位面積（用顯微鏡測微尺測量面積）上銀顆粒數(shù)目，或計數(shù)某種組織細胞上的銀顆粒數(shù)目。光鏡自顯影的定量分析49放射自顯影教學課件50（三）電鏡自顯影的閱讀分析一般在電鏡照片上進行，可以通過銀顆粒的位置、數(shù)目來確定放射性示蹤劑在亞細胞結構的分布，以及數(shù)量。（三）電鏡自顯影的閱讀分析51第三節(jié)自顯影的應用放射自顯影具有示蹤、定位、定量和定時等優(yōu)點，能準確而精細地將機體的生理功能、生化代謝、增殖等變化與細胞、組織和器官緊密結合起來。在生物醫(yī)學領域應用范圍十分廣泛。第三節(jié)自顯影的應用放射自顯影具有示蹤、定位、定量和定時等優(yōu)52一、物質在體內(nèi)的分布、代謝用放射性自顯影可動態(tài)觀察生理或病理狀態(tài)下放射性核素標記的各種藥物、毒物、營養(yǎng)物質等在臟器、組織、細胞中的分布、轉運、蓄積和排泄，以研究其代謝規(guī)律、作用部位及作用機理等。一、物質在體內(nèi)的分布、代謝用放射性自顯影可動態(tài)觀察生理或病理53二、生物活性物質的合成、代謝研究以適宜的放射性核素標記某些生命物質的前體，如DNA的特異性前體胸腺嘧啶核苷、RNA的特異性前體尿嘧啶核苷、蛋白質的特異性前體氨基酸、類固醇激素的前體膽固醇等，用自顯影追蹤這些標記前體在組織、細胞中的部位、參入數(shù)量、參入時間、影響因素以及合成產(chǎn)物的轉運情況等，可能研究各種生物活性物質在體內(nèi)或細胞中合成、代謝的部位、動態(tài)及其機理，還可由此了解細胞功能，應用十分廣泛。二、生物活性物質的合成、代謝研究以適宜的放射性核素標記某些生54三、特異性抗原、受體、DNA片段等的分布用標記抗體、標記受體的配基或互補RNA（DNA）等，將這些特定的標記物引入體內(nèi)或與離體組織細胞標本反應，根據(jù)這些特定的標記物在體內(nèi)或標本分布的情況，以揭示與它們有特異親合力的抗原、受體、DNA片段在組織、細胞中的分布，以進行深入的機理研究。三、特異性抗原、受體、DNA片段等的分布用標記抗體、標記受體55放射自顯影教學課件56四、其他方面應用放射自顯影還在分子生物學研究中的限制性內(nèi)切酶圖譜分析、DNA和RNA的序列分析、DNA指紋圖譜分析，生物化學中的各種電泳圖譜、層析圖譜以及免疫學研究中的各種免疫沉淀反應中被用不顯示不同處理或反應后標記物的位置和數(shù)量。四、其他方面應用放射自顯影還在分子生物學研究中的限制性內(nèi)切酶57思考題一、定義：放射自顯影、自顯影的分辨力二、1、放射自顯影的原理2、放射自顯影的基本方法3、放射自顯影在生物醫(yī)學中的應用思考題一、定義：放射自顯影、自顯影的分辨力58

三、1、自顯影曝光時應在干燥、低溫、少氧的環(huán)境中進行。2、衡量自顯影的分辨力常用半距離表示3、自顯影的類型有宏觀ARG、顯微鏡ARG和電鏡ARG4、顯影的作用是使銀鹽還原為銀顆粒，常用的顯影液是D-19b，定影的作用是洗去未感光的銀鹽，常用的定影液是F-55、影響自顯影分辨力的因素有核素能量、樣品厚度、乳膠層厚度、樣品與乳膠層的間隙、銀晶體的大小、曝光時間和顯影時間。三、1、自顯影曝光時應在干燥、低溫、少氧的環(huán)境中進行。59ARG在細胞周期研究中的應用ARG在細胞周期研究中的應用60細胞增殖是一個復雜的問題，近年來隨著新技術的發(fā)展與應用，在細胞形態(tài)學研究的基礎上，對細胞增殖研究已形成一門新的學科——細胞動力學（cellkinetics）。它是研究生物體內(nèi)各種細胞群體在新生、增殖和消亡過程中處于各種狀態(tài)時的時間參數(shù)、細胞數(shù)量、分布位置、細胞遷移等。細胞動力學是生物學中一門研究范圍廣泛、實用性極強的分支學科。細胞增殖是一個復雜的問題，近年來隨著新技術的發(fā)展與應用，在細61一、細胞周期細胞周期（cellcycle）是指從一次分裂結束到下次分裂終止所經(jīng)歷的歷程，它包括細胞生長和分裂周期。通常將細胞周期分為四個時相（phase），即DNA合成期（S期）、有絲分裂期（M期）、復制前期（G1期）、復制后期（G2期）。一個細胞完成有絲分裂后，并非所有細胞都可進入G1期，其中部分細胞不進入下一個細胞周期而處于“靜止”狀態(tài)，這種細胞被稱為靜止細胞或休止細胞以及G0期細胞。一、細胞周期細胞周期（cellcycle）是指從一次分裂結62無增殖能力細胞或凋亡細胞死亡G0期G1期2nDNAS期2-4nDNAG2期4nDNAM期無增殖能力細胞或凋亡細胞死亡G0期G1期S期2-4nDNA63很久以來，人們就注意到了細胞細胞分裂現(xiàn)象并進行了大量研究。20世紀50年代初，Howard對32P-磷酸鹽培養(yǎng)的RNA酶處理過的蠶豆尖細胞進行了研究，借助放射自顯影技術，首次證明了被標記的細胞不是分裂細胞，而是間期細胞，表明DNA合成是在新時期完成的，并發(fā)現(xiàn)在開始標記8h才出現(xiàn)標記的分裂核，持續(xù)6h后開始減少。這種變化每30h出現(xiàn)一次，因此提出了細胞周期概念。很久以來，人們就注意到了細胞細胞分裂現(xiàn)象并進行了大量研究。26420世紀50年代未Quastler和Sherman用3H-TdR和放射自顯影技術進一步證明了DNA確實在間期合成的，在細胞周期活動中的確存在DNA合成期（S）和細胞分裂期（M）。在S和M期之間以及S期之前，各有一個間隔，分別稱為DNA合成后期（G2）和DNA合成前期（G1），進而將細胞周期分為G1、S、G2、M四個時相。20世紀50年代未Quastler和Sherman用3H-T65二、常有術語1、時間參數(shù)：TG1：G1期持續(xù)時間TG2：G2期持續(xù)時間TS：S期持續(xù)時間TM：M期持續(xù)時間TC：一個細胞周期持續(xù)時間二、常有術語1、時間參數(shù)：662、指數(shù)：LI：標記指數(shù)（標記細胞在群體中所占比例）GF：生長指數(shù)（處于增殖狀態(tài)細胞在群體中所占比例）MI：有絲分裂指數(shù)（有絲分裂細胞在群體中所占比例）2、指數(shù)：67三、原理細胞動力學研究，最重要的是對細胞進行標記。胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA的特有前身物，處于S期細胞能攝取TdR合成DNA。將3H-TdR或14C-TdR放入實驗培養(yǎng)體系中，它只能被S期細胞攝取，而不改變DNA分子的生物、化學特性。根據(jù)探測到的3H或14C量可以了解被標記細胞的增殖、分化和消亡規(guī)律。三、原理細胞動力學研究，最重要的是對細胞進行標記。胸腺嘧啶核68四、方法（一）一次標記一次取樣法

將3H-TdR加入細胞培養(yǎng)15—30min，洗滌后做放射自顯影，計算標記細胞，并按公式計算標記指數(shù)（LI）LI=Ns/NcNs：標記細胞數(shù)；Nc：處于細胞周期中的總數(shù)在一個穩(wěn)定細胞群體中，細胞處于某時相的細胞數(shù)量與該時相的時間呈正比，故：LI=Ts/Tc四、方法（一）一次標記一次取樣法69（二）一次標記多次取樣法

又稱有絲分裂百分率法。即一次標記后，在一定時間內(nèi)多次取樣，用放射自顯影或液閃測量，觀察M期（有絲分裂期）細胞中標記細胞的比例，即有絲分裂標記百分比（PLM）。PLM=標記M期細胞數(shù)/M期細胞總數(shù)以PLM為縱坐標，時間為橫坐標可得PLM曲線。（二）一次標記多次取樣法70TG2TMTsTcTcTsTG1+TG2TG2TG2TMTsTcTcTsTG1TG271五、細胞動力學在生物醫(yī)學中的應用1、腫瘤細胞的周期化、同步化2、腫瘤療效和預后監(jiān)測3、用LI檢測腫瘤細胞對化療藥物的敏感性4、上皮細胞增生性變的細胞動力學監(jiān)測5、在實驗血液學領域中的應用五、細胞動力學在生物醫(yī)學中的應用1、腫瘤細胞的周期化、同步化72放射自顯影教學課件放射自顯影教學課件73定義：放射自顯影是一種利用放射性核素發(fā)射的射線，使乳膠中的鹵化銀感光而形成潛影，經(jīng)顯影和定影，形成圖像。借助感光銀顆粒所在的部位和強度，通過影像分析，能準確地判斷放射性示蹤劑的分布部位和數(shù)量（半定量），這種技術稱為放射自顯影術（autoradiography）。這種技術得到的圖像稱為放射自顯影像（autoradiogram），以上兩種術語均可簡稱為放射自顯影（ARG）。定義：放射自顯影是一種利用放射性核素發(fā)射的射線，使乳膠中的鹵74放射自顯影教學課件75放射自顯影教學課件76潛影形成步驟

1、發(fā)射電子：核射線與溴化銀作用，使其電離，射出電子，向敏化中心移動形成陰電層。

AgBr+β粒子→Ag++Br-+e-

2、Ag+的還原：Ag+向敏化中心移動，與e-結合，還原成銀原子。

e-+Ag+→Ag3、潛影形成：還原的銀原子起催化作用，致周圍的Ag+被還原，形成潛影。

Ag……Ag→nAg

潛影經(jīng)顯影液和定影液處理即成為自顯影圖像。潛影形成步驟1、發(fā)射電子：核射線與溴化銀作用，使其電離77（二）潛影的消退有潛影形成的結晶在顯影液的作用下，溴被洗去，銀原子則留下來成一個黑色顆粒。潛影如未及時顯影，則在水、氧等作用下還原的銀原子會減少，使?jié)撚跋?。故曝光應在干燥、低溫、少氧的環(huán)境下進行。（二）潛影的消退有潛影形成的結晶在顯影液的作用下，溴被洗去，78二、放射自顯影的類型（一）宏觀自顯影（macroscopicARG）：又稱大體自顯影，觀察范圍較大，分辨力低，只能供肉眼或放大鏡觀察，或根據(jù)黑度判斷示蹤劑的分布及相對數(shù)量。此種自顯影適用于小動物的整體標本，大動物的整個臟器或肢體，以及層析板、免疫沉淀板、骨骼、牙齒的磨片或剖面等的研究。二、放射自顯影的類型（一）宏觀自顯影（macroscopic79（二）顯微鏡自顯影（lightmicroscopicARG）：又稱光學顯微鏡自顯影，是借助顯微鏡進行組織或細胞學觀察，分辨能力要求較高。根據(jù)銀顆粒來判斷示蹤劑的分布部位和數(shù)量的多少。適用于組織切片、細胞涂片等標本的研究?？梢詫Σ煌毎M行比較，并根據(jù)不同示蹤劑在不同時間的分布，研究細胞水平的代謝過程。制備一般采用液體乳膠法。（二）顯微鏡自顯影（lightmicroscopicAR80（三）電子顯微鏡自顯影（electronmicroscopicARG)：用于示蹤劑在亞細胞結構中分布情況的研究，能顯示出普通顯微鏡觀察不到的細微結構與放射性核素分布的關系。適用于細胞超微結構，甚至大分子（DNA、RNA）上的精確定位和定量，也可觀察動態(tài)過程。此類技術要求標本在100nm以下的超薄切片，乳膠厚度僅相當銀顆粒的直徑（約140nm）。（三）電子顯微鏡自顯影（electronmicroscop81三、常用的感光材料放射自顯影常用的感光材料包括各種類型的原子核乳膠、X線膠片、電影正片、氚片或幻燈片。三、常用的感光材料放射自顯影常用的感光材料包括各種類型的原子82（一）原子核乳膠簡稱核乳膠，由溴化銀和明膠組成。常溫上呈半固體，低溫為明膠狀，溫度升至40℃左右為液態(tài)。使用時乳膠涂層厚度可由乳膠量和稀釋度（用去離子水稀釋）進行調(diào)節(jié)。（一）原子核乳膠簡稱核乳膠，由溴化銀和明膠組成。常溫上呈半固83液體乳膠直接涂在標本或支持物上，多用于光鏡和電鏡自顯影。將液體核乳膠涂在玻片上，可抽成核乳膠干板（nuclearemulsionplate），再于標本接觸形成自顯影像，多用于光鏡自顯影或宏觀自顯影。也可將干板將乳膠層從玻片上揭下來，稱為揭膜核乳膠（strippingfilmemuslon），多用于定量的光鏡自顯影。液體乳膠直接涂在標本或支持物上，多用于光鏡和電鏡自顯影。將液84由溴化銀、碘化銀和明膠組成，銀晶體顆粒平均直徑1μm，對低能β射線敏感度高，對暗室的安全光也有相當耐受。乳膠涂在醋酸纖維素酯片基的單面，乳膠面沒有保護層。使用時要注意保護乳膠層面，該面直接與標本接觸，以獲得最佳靈敏度。主要用于3H標記化合物的宏觀自顯影或低倍光鏡自顯影。（二）氚片（tritumfilm）由溴化銀、碘化銀和明膠組成，銀晶體顆粒平均直徑1μm，對低能85（三）X線片（X-rayfilm）由溴化銀、碘化銀和明膠組成，銀晶體顆粒直徑2.5μm，對射線分辨率較低，對暗室內(nèi)的安全光有一定的耐受。乳膠涂在醋酸纖維素酯兩面，外覆保護層。主要用于核素射線能量較高的宏觀自顯影或低倍光鏡自顯影。（三）X線片（X-rayfilm）由溴化銀、碘化銀和明膠組86四、常用的放射性核素選擇放射性核素應考慮其射線種類、能量和半衰期。核素半衰期射線類型射線平均能量（MeV）3H

12.33年β0.00514C5730年β0.0532P14.28天β0.69535S87.4天β0.05545Ca165天β0.1059Fe44.6天β0.12125I60.2天β、γ0.0037四、常用的放射性核素選擇放射性核素應考慮其射線種類、能量和半87五、照相處理（一）顯影和定影（二）顯影液和定影液（三）干燥、染色和封固五、照相處理（一）顯影和定影88（一）顯影和定影感光材料與標本接觸后，經(jīng)射線的作用溴化銀晶體形成潛影，未受核射線作用的溴化銀則不形成潛影。這兩種晶體經(jīng)顯影和定影，才能將其區(qū)分。顯影的作用是使銀鹽還原，有潛影的結晶比無潛影者顯影快，因此適當控制顯影時間可只使受照射的結晶呈現(xiàn)黑色顆粒，定影的作用是洗去未感光的銀鹽。（一）顯影和定影感光材料與標本接觸后，經(jīng)射線的作用溴化銀晶體89（二）顯影液和定影液顯影和定影是由顯影液和定影液來完成的。常用的顯影液為D-19b，定影液為F-5。顯影液和定影液的溫度應嚴格控制在19±1℃，顯影時間2-4min。顯影結束后用水充分漂洗，然后進行定影。定影時間4-8min，經(jīng)水充分沖洗后晾干。顯影和定影的具體時間可通過實踐選定。（二）顯影液和定影液顯影和定影是由顯影液和定影液來完成的。常90D-19b顯影液和F-5定影液配方

D-19b顯影液配方F-5定影液配方水（5℃）(ml)700水（5℃）(ml)800米吐爾（g）2硫代硫酸鈉(g)240無水亞硫酸鈉(g)72無水亞硫酸鈉(g)15對苯二酚（g）8.828%醋酸(ml)48無水碳酸鈉(g)48硼酸(結晶)(g)7.5溴化鉀(g)4鉀礬(g)15加水至(ml)1000加水至(ml)1000D-19b顯影液和F-5定影液配方91（三）干燥、染色和封固經(jīng)顯影、定影和沖洗等處理的乳膠可空氣或人工干燥，但干燥過程應避免塵粒沾污乳膠，也可用酒精進行脫水干燥。干燥后可按常規(guī)方法染色（如蘇木精-伊紅），染色后可用蓋坡片封固。（三）干燥、染色和封固經(jīng)顯影、定影和沖洗等處理的乳膠可空氣或92六、放射自顯影的分辨力放射自顯影的目的在于研究放射性核素或其標記化合物在組織內(nèi)的位置，所以放射自顯影的分辯力，主要是指位置的分辯力。故分辨力就是指兩個相鄰的放射性核素分子在標本中的距離近以多少能在顯影銀顆粒上顯示為兩個顆粒。銀顆粒顯影放射源可分辨不可分辨六、放射自顯影的分辨力放射自顯影的目的在于研究放射性核素或其93半距離（halfdistance，HD）

衡量分辨力常用半距離來表示。即一線性放射源，其顯影的銀顆粒分散在放射源的兩側，銀顆粒隨著與放射源的距離的增加而減少，當銀顆粒減少到一半時，此距離稱半距離。若放射源為點狀源則以半半徑來表示。HD半距離（halfdistance，HD）HD94影響分辨力的主要因素：1、核素的能量：核素的能量越高，射線的射程較長。分散的銀顆粒就較多，因而分辨力下降。如在相同條件下，3H、14C、32P的自顯影分辨力依次下降。射線能量低的自顯影射線能量高的自顯影影響分辨力的主要因素：射線能量低的自顯影射線能量高的自顯影95影響分辨力的主要因素：2、樣品的厚度：樣品厚，組織表面和深層中放射源的射線同時射入乳膠層，使銀顆粒分散程度加重，影像重疊，分辨力下降。樣品薄，則分辨力高，但曝光時間需加長。薄樣品自顯影厚樣品自顯影影響分辨力的主要因素：薄樣品自顯影厚樣品自顯影96影響分辨力的主要因素：3、乳膠層的厚度：較薄的乳膠層記錄的是離放射源最近的徑跡起始部，隨乳膠加厚，記錄的包括徑跡起始部和遠離放射源的部分，偏離放射源的機會越多，分辨力下降。乳膠層厚，形成較大的影像影響分辨力的主要因素：乳膠層厚，形成較大的影像97影響分辨力的主要因素：4、樣品與乳膠層的間隙：距離大者，射線散射面積也大，影像越不清晰，分辨力下降。樣品與乳膠層間隙大，形成較大顯影影響分辨力的主要因素：樣品與乳膠層間隙大，形成較大顯影98影響分辨力的主要因素：5、乳膠銀晶體大?。猴@影銀顆粒不一定于原有的鹵化銀位置完全一致，故銀晶體越小，則顯影銀顆粒越小，分辨力就越好。6、曝光時間：正常曝光時間，核素中占多數(shù)的中、低能量射線作用于乳膠，分辨力高。時間過長，則高能射線作用乳膠幾率增加，散射加大，分辨力下降。7、顯影時間：顯影時間長，可使一些未感光的銀粒被還原，使影像界限不清，分辨力下降。影響分辨力的主要因素：99七、放射自顯影的本底、效率1、本底：在自顯影上，除標本內(nèi)的放射性核素外，由其他原因造成的顯影顆粒，統(tǒng)稱自顯影的本底。本底過高不僅對低水平放射性的測量，而且降低分辨力。暗室紅燈過量或感光材料在紅燈下曝露時間過長、顯影液溫度過高或時間過長、感光材料過期或保存溫度過高、感光材料的機械彎折或涂液體乳膠干燥過快以及感光材料沾污還原性物質等，是引起自顯影本底過高的常見原因。七、放射自顯影的本底、效率1、本底：在自顯影上，除標本內(nèi)的放100自顯影的效率：系指待測標本中的放射性核素在曝光時間內(nèi)，每100次衰變所給出的顯影銀粒數(shù)目。粗略估計，當3H標本的厚度為1μm、密度為1.1時，光鏡自顯影中的效率為10%~15%，而厚度為5μm者，效率則為4%~5%（很多深層β粒子不能從標本中射出）。32P標本在同樣條件下的效率為30%~40%，在電鏡自顯影中，3H的效率為25%。自顯影的效率：系指待測標本中的放射性核素在曝光時間內(nèi)，每10101第二節(jié)放射自顯影的基本方法

及結果分析醫(yī)學生物學示蹤研究中的自顯影實驗，一般環(huán)節(jié)是：1、示蹤：向實驗動物或離體標本引入放射性核素標記物。2、標本制備：取生物標本并制備成含放射性核素的切片、涂片或電泳、層析分離的標本。3、自顯影制備：暗室中在標本上敷加感光材料。4、曝光：避光條件下核射線作用于感光材料。5、照相處理：顯影、定影、水洗、干燥、染色、封固。最后是閱讀分析。第二節(jié)放射自顯影的基本方法

及結果分析醫(yī)學生物學示蹤研究中102一、示蹤劑引入的方法（一）引入途徑（二）引入方法一、示蹤劑引入的方法（一）引入途徑103（一）引入途徑1、體內(nèi)實驗：可由靜脈、皮下、肌肉、腹腔或直接腦內(nèi)注射和灌胃等途徑引入放射性標記化合物。2、體外實驗：對組織、細胞、體液的培養(yǎng)過程，則可在培養(yǎng)瓶中引入。在離體標本上研究受體等生物活性物質，也常將示蹤劑直接加在切片上進行結合反應，然后洗去多余的示蹤劑后再進行自顯影。（一）引入途徑104二、放射自顯影的標本制備總要求：標本制備過程不能引起示蹤劑的流失或移動。（一）組織切片（二）整體小動物或大動物臟器切片（三）牙齒、骨骼（四）體液、培養(yǎng)液中的細胞或其他成分（五）電鏡標本（六）無細胞的標本二、放射自顯影的標本制備總要求：標本制備過程不能引起示蹤劑的105（一）組織切片1、冰凍切片：標本采集后不經(jīng)固定，直接快速冷凍。冰凍的標本不能反復凍融，直接放置-80℃?zhèn)溆?。然后進行切片，切片冷凍干燥后，移入室溫后置4℃進行自顯影。適用于擴散性示蹤實驗和需保存生物活性的實驗。2、石蠟切片：標本經(jīng)固定液固定（福爾馬林、多聚甲醛）固定、水洗、脫水、二甲苯浸透、石蠟包埋等過程，常溫下切片。標本不宜用含重金屬鹽的固定液，防止干擾結果。固定后必須充分水洗，制備過程中示蹤劑和某些組織成分可能發(fā)生擴散或流失，一般只用于非擴散性實驗。（一）組織切片106（二）整體小動物或大動物臟器切片實驗動物引入示蹤劑后，用藥物麻醉動物，然后將動物投入干冰丙酮混合液或液氮中快速冷凍，以防組織內(nèi)形成結晶，待全部凍結，用羥甲基纖維素包埋動物，包埋塊在整體切片機上制成切片，再進行自顯影操作。（二）整體小動物或大動物臟器切片107（三）牙齒、骨骼觀察無機成分時，可在磨石上制成磨片。先用10%福爾馬林固定，經(jīng)磨石加水研磨至表面平整的薄片或剖面，然后乙醇脫水、干燥，再進行自顯影。觀察有機成分時，可脫鈣后制成石蠟切片。（三）牙齒、骨骼108（四）體液、培養(yǎng)液中的細胞或其他成分可直接離心濃縮后制成細胞涂片，培養(yǎng)的細胞也可制備細胞爬片，細胞應制成單層。離體實驗中，細胞周圍常有大量游離示蹤劑，應充分洗滌后再制備涂片。固定涂片的固定液應根據(jù)研究對象進行選擇，如研究核酸時用甲醇：冰醋酸（3：1），蛋白質則選用10%福爾馬林做固定液，干燥后進行自顯影。（四）體液、培養(yǎng)液中的細胞或其他成分109（五）電鏡標本電鏡標本的制備與一般標本制備不同，標本先用2%戊二醛固定，緩沖液洗滌，再用鋨酸固定，沖洗，系列丙酮或乙醇脫水，環(huán)氧樹脂包埋。然后用超薄切片抽切片，切片厚度為50~100μm。再涂核乳膠，進行自顯影。（五）電鏡標本110（六）無細胞標本示蹤研究所用的各種電泳譜、色層條、免疫沉淀板，可按常規(guī)方法進行處理、干燥，然后再用接觸法做自顯影。（六）無細胞標本111三、自顯影制備（一）接觸法（二）液體核乳膠浸膜法（三）揭膜乳膠法（四）融裱法（五）金屬環(huán)法三、自顯影制備（一）接觸法112（一）接觸法在暗室中，將標本面與感光膠片或核乳膠干板的乳膠面密切接觸，進行曝光而制備自顯影的方法稱為接觸法。標本與感光材料均不接觸水或有機溶劑，不會造成示蹤劑的擴散或流失，適用于各種實驗。（一）接觸法113（二）液體核乳膠浸膜法在暗室中，將標本或載有標本的玻片浸入適當稀釋的液體核乳膠中，使標本表面敷上一層薄而均勻的乳膠膜，干燥后曝光而制備處顯影的方法稱液體核乳膠浸膜法。在浸膜過程中，標本要與含水的液體核乳膠接觸，會造成擴散性示蹤劑一定程度的擴散和流失，故只適用于非擴散性示蹤實驗。（二）液體核乳膠浸膜法114（三）揭膜乳膠法將揭膜乳膠膜從玻璃基片上揭下來，在溫水中展開，浸透，然后將其貼于標本表面，干燥后曝光而制備自顯影。揭膜乳膠厚度均勻，該法常用于光鏡自顯影的定量研究。因需在水中進行，故適用于非擴散性示蹤實驗。（三）揭膜乳膠法115（四）融裱法用預冷的核乳膠干板沾取剛剛切下的冰凍組織切片，并使其貼牢在乳膠面上，凍干后進行曝光制備自顯影。主要用于光鏡自顯影的擴散性示蹤實驗。（四）融裱法116（五）金屬環(huán)法電鏡自顯影常用的方法。即將核乳膠在暗室中按1：4與蒸餾水稀釋，40℃融化并緩慢攪拌1h，存放4℃過夜使其穩(wěn)定。然后再融化并攪拌1h，將其冷卻到25℃。用不銹鋼制成的金屬環(huán)（10∽30mm）插入核乳膠中，垂直提出，在金屬環(huán)上便形成一層單層乳膠膜。將其敷在電鏡切片所放置的銅網(wǎng)上，4℃曝光制備自顯影。（五）金屬環(huán)法117四、自顯影的閱讀分析（一）宏觀自顯影的閱讀分析（二）光鏡自顯影的閱讀分析（三）電鏡自顯影的閱讀分析四、自顯影的閱讀分析（一）宏觀自顯影的閱讀分析118（一）宏觀自顯影的閱讀分析宏觀自顯影的影像可直接用肉眼觀察。比本底黑的部份即表示放射性示蹤劑的存在，黑度越大，表示該處放射性越強，示蹤劑分布越多。觀察時，需將自顯影像與標本重合起來觀察，以準確定位。如將自顯影像用光密度計進行測量，則可進行定量分析。（一）宏觀自顯影的閱讀分析119（二）光鏡自顯影的閱讀分析通過在光鏡下觀察自顯影像上銀顆粒分布的位置和密度而確定放射性示蹤劑存在部位和數(shù)量。自顯影像上單位面積的顯影銀顆粒數(shù)目，與該處示蹤劑的放射性活度呈正比。（二）光鏡自顯影的閱讀分析120光鏡自顯影的定量分析二種方法：一是計數(shù)被示蹤劑標記的細胞或細胞核在細胞群體中所占的百分率，即標記指數(shù)。通常一個細胞核上有4個以上銀顆粒作為標記細胞。另一種是計數(shù)自顯影像上某部位單位面積（用顯微鏡測微尺測量面積）上銀顆粒數(shù)目，或計數(shù)某種組織細胞上的銀顆粒數(shù)目。光鏡自顯影的定量分析121放射自顯影教學課件122（三）電鏡自顯影的閱讀分析一般在電鏡照片上進行，可以通過銀顆粒的位置、數(shù)目來確定放射性示蹤劑在亞細胞結構的分布，以及數(shù)量。（三）電鏡自顯影的閱讀分析123第三節(jié)自顯影的應用放射自顯影具有示蹤、定位、定量和定時等優(yōu)點，能準確而精細地將機體的生理功能、生化代謝、增殖等變化與細胞、組織和器官緊密結合起來。在生物醫(yī)學領域應用范圍十分廣泛。第三節(jié)自顯影的應用放射自顯影具有示蹤、定位、定量和定時等優(yōu)124一、物質在體內(nèi)的分布、代謝用放射性自顯影可動態(tài)觀察生理或病理狀態(tài)下放射性核素標記的各種藥物、毒物、營養(yǎng)物質等在臟器、組織、細胞中的分布、轉運、蓄積和排泄，以研究其代謝規(guī)律、作用部位及作用機理等。一、物質在體內(nèi)的分布、代謝用放射性自顯影可動態(tài)觀察生理或病理125二、生物活性物質的合成、代謝研究以適宜的放射性核素標記某些生命物質的前體，如DNA的特異性前體胸腺嘧啶核苷、RNA的特異性前體尿嘧啶核苷、蛋白質的特異性前體氨基酸、類固醇激素的前體膽固醇等，用自顯影追蹤這些標記前體在組織、細胞中的部位、參入數(shù)量、參入時間、影響因素以及合成產(chǎn)物的轉運情況等，可能研究各種生物活性物質在體內(nèi)或細胞中合成、代謝的部位、動態(tài)及其機理，還可由此了解細胞功能，應用十分廣泛。二、生物活性物質的合成、代謝研究以適宜的放射性核素標記某些生126三、特異性抗原、受體、DNA片段等的分布用標記抗體、標記受體的配基或互補RNA（DNA）等，將這些特定的標記物引入體內(nèi)或與離體組織細胞標本反應，根據(jù)這些特定的標記物在體內(nèi)或標本分布的情況，以揭示與它們有特異親合力的抗原、受體、DNA片段在組織、細胞中的分布，以進行深入的機理研究。三、特異性抗原、受體、DNA片段等的分布用標記抗體、標記受體127放射自顯影教學課件128四、其他方面應用放射自顯影還在分子生物學研究中的限制性內(nèi)切酶圖譜分析、DNA和RNA的序列分析、DNA指紋圖譜分析，生物化學中的各種電泳圖譜、層析圖譜以及免疫學研究中的各種免疫沉淀反應中被用不顯示不同處理或反應后標記物的位置和數(shù)量。四、其他方面應用放射自顯影還在分子生物學研究中的限制性內(nèi)切酶129思考題一、定義：放射自顯影、自顯影的分辨力二、1、放射自顯影的原理2、放射自顯影的基本方法3、放射自顯影在生物醫(yī)學中的應用思考題一、定義：放射自顯影、自顯影的分辨力130

三、1、自顯影曝光時應在干燥、低溫、少氧的環(huán)境中進行。2、衡量自顯影的分辨力常用半距離表示3、自顯影的類型有宏觀ARG、顯微鏡ARG和電鏡ARG4、顯影的作用是