第二中藥化學(xué)成分研究方法課件

第二章中藥化學(xué)成分的一般研究方法中藥化學(xué)成分的主要類型中藥化學(xué)成分提取分離方法的基本原理及應(yīng)用中藥化學(xué)成分結(jié)構(gòu)鑒定的一般程序和方法第二章中藥化學(xué)成分的一般研究方法中藥化學(xué)成分的主要類型1第一節(jié)中藥化學(xué)成分主要類型從物質(zhì)基本類型分：有機(jī)物、無(wú)機(jī)物。按元素組成和結(jié)構(gòu)母核分：生物堿、黃酮、苷、醌、甾、萜、苯丙素等。按酸堿性分：酸性、堿性和中性。按溶解性分：非極性（親脂性）、中極性、極性（親水性）。第一節(jié)中藥化學(xué)成分主要類型從物質(zhì)基本類型分：有機(jī)物、無(wú)機(jī)2按活性分：有效成分、無(wú)效成分具有生物活性，能用分子式和結(jié)構(gòu)式表示，并具有一定的物理常數(shù)的單體化合物，稱為有效成分。與有效成分共存的無(wú)生物活性的成分稱為無(wú)效成分。按生合成途徑分：一級(jí)代謝產(chǎn)物（如糖、蛋白質(zhì)）、二級(jí)代謝產(chǎn)物（如生物堿、黃酮、皂苷）。按活性分：有效成分、無(wú)效成分3一次代謝過(guò)程：對(duì)維持植物生命活動(dòng)來(lái)說(shuō)是不可缺少的過(guò)程，且?guī)缀醮嬖谟谒械木G色植物中。一次代謝產(chǎn)物：糖、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸等這些對(duì)植物機(jī)體生命活動(dòng)來(lái)說(shuō)不可缺少的物質(zhì)。二次代謝過(guò)程：并非在所有的植物中都能發(fā)生，對(duì)維持植物生命活動(dòng)來(lái)說(shuō)又不起重要作用的過(guò)程。二次代謝產(chǎn)物：生物堿、黃酮、苷、醌、甾、萜、苯丙素等。一次代謝過(guò)程：對(duì)維持植物生命活動(dòng)來(lái)說(shuō)是不可缺少的過(guò)程，4第二節(jié)中藥化學(xué)成分提取分離方法

的基本原理及應(yīng)用基本概念：1、提?。豪眠m當(dāng)?shù)娜軇┗蚍椒ǎ瑢⑺煞直M可能從原料中完全提出的過(guò)程。2、分離：將提取物中所含的各種成分一一分開，并將得到的單體加以精制的過(guò)程。第二節(jié)中藥化學(xué)成分提取分離方法

的基本原理及應(yīng)用基本5提取方法：

水親水性有機(jī)溶劑親脂性有機(jī)溶劑溶劑提取法：

根據(jù)中藥中各種成分的溶解性不同，選用對(duì)所需成分溶解度大而對(duì)其他成分溶解度小的溶劑，將所需成分從藥材組織中溶解出來(lái)的一種提取方法。提取方法：6水蒸氣蒸餾法：

適于具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞的有效成分的提取。揮發(fā)油、小分子生物堿、酚類、游離醌類等。超臨界流體萃取法：

最常用的是二氧化碳超臨界萃取法，環(huán)保、成本低、提取分離一步完成。分子的極性、沸點(diǎn)和分子量的大小與其在二氧化碳超臨界流體中的溶解性密切相關(guān)。升華法壓榨法水蒸氣蒸餾法：7溶劑提取法:1、原理

根據(jù)中藥中各種成分的溶解性不同，選用對(duì)所需成分溶解度大而對(duì)其他成分溶解度小的溶劑，將所需成分從藥材組織中溶解出來(lái)的一種提取方法。選擇溶劑依據(jù)相似相溶原理。

溶劑提取法:82、溶劑的分類

*強(qiáng)極性溶劑：水*親水性有機(jī)溶劑：

能與水任意混溶（甲醇、乙醇、丙酮）*親脂性有機(jī)溶劑：

不與水任意混溶，可分層（正丁醇、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、環(huán)己烷、石油醚）

常用溶劑的極性大小順序：石油醚<四氯化碳<苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇（甲醇）<水2、溶劑的分類93、化合物的結(jié)構(gòu)與溶劑極性的關(guān)系（1）分子結(jié)構(gòu)中親水性基團(tuán)（羧基、羥基、氨基）越多，極性越大，親水性越強(qiáng)，反之則親脂性越強(qiáng)。（2）分子中非極性部分越大，碳鏈越長(zhǎng)或結(jié)構(gòu)越大，則親脂性越強(qiáng)。（3）結(jié)構(gòu)母核相同的成分，分子中功能基的極性越大，或極性功能基數(shù)量越多，則整個(gè)分子的極性越大，親水性越強(qiáng)，親脂性越弱。3、化合物的結(jié)構(gòu)與溶劑極性的關(guān)系104、選擇溶劑的要點(diǎn)*對(duì)所要成分溶解度大*沸點(diǎn)適中容易回收*低毒安全

中藥化學(xué)成分中，萜、甾等大環(huán)、稠環(huán)化合物極性小，易溶于氯仿、乙醚等；糖、苷等易溶于水、乙醇等極性溶劑中；酸堿性成分因存在狀態(tài)不同溶解性不同。最常用的溶劑為乙醇。4、選擇溶劑的要點(diǎn)115、溶劑的選擇水：價(jià)廉、易得、使用安全的強(qiáng)極性溶劑。適于提取無(wú)機(jī)鹽、糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽、苷類等。親水性有機(jī)溶劑：乙醇最常用。高濃度提取親脂性成分，低濃度提取親水性成分。親脂性有機(jī)溶劑：具有較強(qiáng)的選擇性，對(duì)揮發(fā)油、油脂、葉綠素、樹脂、內(nèi)酯、某些生物堿及一些苷元均可提取出來(lái)。優(yōu)缺點(diǎn)：沸點(diǎn)低，濃縮回收方便，但易燃、有毒、價(jià)貴，穿透力差。5、溶劑的選擇126、溶劑提取的方法溶劑提取的方法：

浸漬法滲漉法煎煮法回流提取法連續(xù)回流提取法超聲法6、溶劑提取的方法13（1）浸漬法：以水或稀醇反復(fù)提取，適于遇熱易破壞或揮發(fā)性成分及含淀粉、粘液質(zhì)較多的中藥。（2）滲漉法：以稀乙醇或酸水作溶劑，先浸后滲，提取效率高于浸漬法。（3）煎煮法：以水為溶劑，對(duì)遇熱易破壞和揮發(fā)性成分有影響，對(duì)含多量淀粉、黏液質(zhì)的中藥也不適用。（4）回流提取：用有機(jī)溶劑。對(duì)遇熱易破壞的成分有影響。（5）連續(xù)回流提取：用有機(jī)溶劑。提取效率高，節(jié)省溶劑。（6）超聲法7、影響溶劑提取法的因素合適的溶劑和方法、藥材的粉碎度、提取溫度及時(shí)間。（1）浸漬法：以水或稀醇反復(fù)提取，適于遇熱易破壞或揮發(fā)14第二中藥化學(xué)成分研究方法課件15

分離精制方法：

溶劑法沉淀法分餾法膜分離法結(jié)晶法色譜分離法分離精制方法：溶劑法16一、溶劑法

1、酸堿溶劑法

酸溶：有機(jī)堿性成分可與無(wú)機(jī)酸成鹽而溶于水。堿溶：具有羧基，用碳酸氫鈉；具有酚羥基，用氫氧化鈉；具有內(nèi)酯或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的成分可被皂化而溶于水。

注意事項(xiàng)：酸堿的強(qiáng)度、加熱溫度、與被分離成分接觸的時(shí)間等。一、溶劑法

1、酸堿溶劑法17第二中藥化學(xué)成分研究方法課件182、溶劑分配法原理：利用混合物中各成分在互不相溶的兩相溶劑中分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的方法。

各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高。一般采用全量多次分配提高萃取效率。需要注意的是防止乳化。溶劑的選擇：對(duì)于分離極性較大的成分，用正丁醇-水；分離中等極性成分，用乙酸乙酯-水；分離低極性成分，用氯仿（或乙醚、石油醚等）-水。所用裝置：分液漏斗、連續(xù)液-液萃取和液滴逆流層析裝置。2、溶劑分配法19（1）系統(tǒng)溶劑萃取法：常用來(lái)粗分，是將總提物分散于水中，依次用石油醚（或環(huán)己烷）、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別減壓回收溶劑得到相應(yīng)極性的成分。極性成分類型適宜溶劑強(qiáng)親脂性揮發(fā)油、脂肪油、苷元石油醚脂溶性色素、甾醇己烷親脂性苷元、生物堿、樹脂乙醚醛、醇、酯、有機(jī)酸氯仿小強(qiáng)心苷氯仿-乙醇（2：1）中極性中黃酮苷乙酸乙酯大皂苷、蒽醌苷正丁醇親水性極性很大的苷、糖類丙酮

氨基酸、某些生物堿鹽甲醇、乙醇強(qiáng)親水性蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、氨基酸水果膠、糖類、、無(wú)機(jī)鹽類（1）系統(tǒng)溶劑萃取法：極性20（2）逆流連續(xù)萃取法

利用兩相溶劑比重不同可自然分層和分散液滴穿過(guò)連續(xù)相溶劑時(shí)發(fā)生傳質(zhì)的原理，用一根或數(shù)根萃取管制成逆流連續(xù)萃取裝置。管內(nèi)的瓷環(huán)，增加液滴上升的路程和在連續(xù)相中停留的時(shí)間，更重要的是上升的液滴因撞擊填充物而被分散，擴(kuò)大了兩相溶劑萃取的接觸面積，使更萃取完全。優(yōu)點(diǎn)：

克服了分液漏斗多次萃取和易乳化的麻煩。（2）逆流連續(xù)萃取法21（3）逆流分布法（CCD）對(duì)性質(zhì)相似的異構(gòu)體或同系物分離效果好?；驹砣允抢没旌衔镏谐煞衷趦煞N不相混溶的溶劑中分配系數(shù)的不同，經(jīng)過(guò)在兩相溶劑中多次轉(zhuǎn)移，而使它們達(dá)到分離的目的。（4）液滴逆流層析法（DCCC）

是在逆流分布法基礎(chǔ)上發(fā)展的高分離效能的逆流分布法，分離管有100~1000根，互相串聯(lián)，上行法時(shí)，分離管內(nèi)充滿重相作為固定液相，利用泵將輕相（移動(dòng)相）帶著樣品液進(jìn)入分離管，形成液滴通過(guò)分離管，流出的移動(dòng)相通過(guò)檢測(cè)，分部收集。（3）逆流分布法（CCD）22溶劑分配法中溶劑系統(tǒng)的選擇：

兩相溶劑不相混溶，混合物中各單一成分在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)差別越大越好。分離酸堿兩性化合物時(shí)，緩沖液是很好的溶劑。

操作注意：（1）先將兩相溶劑相互充分飽和。（2）采用等體積兩相溶劑的方式。（3）欲分離混合物的濃度不宜過(guò)高。溶劑分配法中溶劑系統(tǒng)的選擇：23二沉淀法

1、酸堿沉淀法：

例如：生物堿、黃酮、蒽醌2、專屬試劑沉淀法：

例如：雷氏銨鹽沉淀季銨堿、膽甾醇沉淀甾體皂苷；明膠沉淀鞣質(zhì)。3、分級(jí)沉淀法：

改變加入溶劑的極性或數(shù)量使沉淀逐步析出的方法。例如：多糖、蛋白質(zhì)的水溶液，分次加乙醇，使含醇量逐步提高，則可得到分子量由大到小的多糖、蛋白質(zhì)；皂苷的乙醇液，分次加入乙醚或乙醚-丙酮，可按極性從小到大逐步沉淀。二沉淀法

1、酸堿沉淀法：244、鉛鹽沉淀法中性醋酸鉛：與酸性或酚性物質(zhì)沉淀堿性醋酸鉛：除以上物質(zhì)外，還可沉淀具有醇羥基、酮基、醛基結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。脫鉛：通入硫化氫法；中性硫酸鹽法；陽(yáng)離子交換法。5、鹽析法在混合物的水溶液中，加入無(wú)機(jī)鹽（常用的是NaCL，其它還有Na2S、MgSO4、NH4SO4）至一定濃度或達(dá)到飽和，使某些成分沉淀析出或用有機(jī)溶劑萃取出而達(dá)到分離的目的。4、鉛鹽沉淀法25三分餾法

利用混合組分中各成分的沸點(diǎn)不同而分離的一種方法。用于液體混合物的分離。四膜分離法利用天然或人工合成的高分子膜，以外加壓力或化學(xué)位差為推動(dòng)力，對(duì)混合物溶液進(jìn)行分離、分級(jí)、提純和富集的方法。反滲透、超濾、微濾、電滲析及傳統(tǒng)的透析法均為膜分離技術(shù)。原理是大分子不能透過(guò)膜而被截留，小分子能透過(guò)膜，使分子大小不同的物質(zhì)得到分離。關(guān)鍵是選擇適宜的膜。三分餾法26五升華法

固體物質(zhì)加熱直接變成氣體，遇冷又凝結(jié)為固體的現(xiàn)象。主要是針對(duì)中藥中小分子生物堿、香豆素等。五升華法27六結(jié)晶法1、結(jié)晶的條件（1）溶劑：選擇合適的溶劑對(duì)結(jié)晶的形成是關(guān)鍵。合適的溶劑應(yīng)對(duì)欲分離的成分熱時(shí)溶解度大，冷時(shí)溶解度小，而對(duì)雜質(zhì)則冷熱溶解度一致；沸點(diǎn)要適中；不與被分離成分產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。

選擇溶劑依據(jù)“相似相溶”原理。六結(jié)晶法28（2）溫度通常在加溫的情況下，溶解過(guò)濾，除雜，濃縮，放冷。最合適的結(jié)晶溫度5_10度。（3）時(shí)間一般3_5天或更長(zhǎng)時(shí)間。（4）濃度一般是多一些溶劑，放置使其慢慢揮發(fā)到合適的濃度。（5）雜質(zhì)（6）有效成分的含量越高，越易結(jié)晶。（2）溫度292、結(jié)晶溶劑的選擇

對(duì)所需成分的溶解度隨溫度不同而有顯著差別，同時(shí)不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；查閱相關(guān)文件，參考“相似相溶”規(guī)律；選擇混合溶劑，低沸點(diǎn)溶劑對(duì)物質(zhì)溶解度大，高沸點(diǎn)溶劑對(duì)物質(zhì)的溶解度??；常用溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚等。2、結(jié)晶溶劑的選擇30七色譜分離法1、吸附色譜利用同一吸附劑對(duì)混合物中各種成分吸附能力的差異，而使各成分達(dá)到分離目的的色譜方法。吸附能力的強(qiáng)弱是由吸附劑和被吸附物質(zhì)的性質(zhì)決定的。吸附色譜法的分離效果，完全由吸附劑，溶劑和被分離物質(zhì)的性質(zhì)決定。七色譜分離法31（1）常用吸附劑：*硅膠：多孔，微酸性，其吸附能力稍弱于氧化鋁。吸附作用是由于顆粒表面有很多硅醇基，它可以和許多化合物形成氫鍵而具有一定的吸附作用，所以硅膠吸附作用的強(qiáng)弱與硅醇基的含量有關(guān)。硅醇基還易吸附水分，吸附的水分越多，吸附其他化合物的能力越弱。吸水量超過(guò)12%就不能做為吸附劑了。（1）常用吸附劑：32當(dāng)加熱到了100-110℃時(shí)即可除去絕大多數(shù)硅醇基吸附的水分，恢復(fù)吸附活力，這一過(guò)程稱為活化。當(dāng)溫度上升到500℃時(shí)，硅膠表面的硅醇基則脫水縮合轉(zhuǎn)變?yōu)楣柩醐h(huán)結(jié)構(gòu)，從而喪失吸附活性。硅膠適于分離的化合物范圍很廣泛，但不宜分離堿性化合物。當(dāng)加熱到了100-110℃時(shí)即可除去絕大多數(shù)硅醇33*

氧化鋁由氫氧化鋁直接在高溫下脫水制得，帶微堿性，適于分離堿性成分。*聚酰胺適于分離黃酮、酚、醌類、有機(jī)酸及鞣質(zhì)，可使性質(zhì)極相近的化合物得到分離。原理：聚酰胺中的酰胺基可與酚羥基、羧基、羰基、硝基等形成氫鍵吸附。聚酰胺的吸附容量大。

*氧化鋁34被分離成分的結(jié)構(gòu)與吸附力的關(guān)系：1）可形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng)，越難被洗脫。2）形成分子內(nèi)氫鍵的吸附能力會(huì)減弱。3）分子中芳香化程度越高，吸附能力越強(qiáng)。4）對(duì)聚酰胺柱的洗脫能力，與溶劑的種類有關(guān)：

甲酰胺，丙酮，甲、乙醇，水依次減弱。被分離成分的結(jié)構(gòu)與吸附力的關(guān)系：35（2）溶劑對(duì)于極性吸附劑，溶劑極性越大，洗脫能力越強(qiáng)。對(duì)于非極性吸附劑，則相反。（3）被分離物質(zhì)對(duì)于極性吸附劑，被分離物質(zhì)的極性越強(qiáng)，吸附力越大，越難洗脫。（2）溶劑36

物理吸附原理：吸附與解吸附的循環(huán)往復(fù)

基本要素：吸附劑、被分離物質(zhì)、溶劑

弱強(qiáng)弱強(qiáng)弱強(qiáng)吸附劑被分離物質(zhì)溶劑物理吸附原理：吸附與解吸附的循環(huán)往復(fù)弱強(qiáng)弱強(qiáng)弱強(qiáng)吸附劑被分37（4）操作方式薄層色譜：

制板點(diǎn)樣展開顯色柱色譜：

裝柱上樣洗脫收集濃縮檢識(shí)合并結(jié)晶（4）操作方式382分配色譜(1)基本原理:利用物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間分配系數(shù)不同而達(dá)到分離。(2)分類:正相色譜：固定相極性>流動(dòng)相極性.用于分離極性和中等極性的成分。反相色譜：固定相極性<流動(dòng)相極性，用于分離非極性和中等極性的成分.2分配色譜39(3)洗脫規(guī)律：正相色譜:極性小的化合物先被洗脫，極性大的化合物后被洗脫；反相色譜正好相反。(4)常用的固定相和流動(dòng)相固定相：正相色譜中常用氰基或氨基鍵合相；反相色譜中常用C18或C8鍵合相。流動(dòng)相：正相色譜中主要用有機(jī)溶劑；反相色譜中常用甲醇-水或乙腈-水系統(tǒng)。(3)洗脫規(guī)律：403離子交換色譜法(1)基本原理基于各成分解離度的不同而分離。(2)離子交換劑的種類離子交換樹脂、離子交換纖維素、離子交換凝膠。(3)應(yīng)用主要用于生物堿、有機(jī)酸及氨基酸、蛋白質(zhì)和多糖等水溶性成分的分離純化。(4)操作要點(diǎn)裝柱前要用水充分溶脹，并用酸、堿預(yù)處理。3離子交換色譜法414大孔吸附樹脂法（1）性能及分離原理性能：大孔樹脂是一種不含交換基團(tuán)，具有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑。一般為白色顆粒，20-60目。性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶劑。水溶液中吸附力較強(qiáng)，且有很好的選擇性。原理：既有吸附性，又有分子篩的篩選性。吸附性是范德華引力或氫鍵吸附的結(jié)果；篩選性則由其多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)引起的。4大孔吸附樹脂法42（2）影響分離的因素：

分子極性的大?。簶O性較大的化合物適宜于在中極性的樹脂上分離，而極性較小的化合物則適于在非極性樹脂上分離。對(duì)于中極性樹脂來(lái)說(shuō)，被分離化合物分子上能形成氫鍵的基團(tuán)越多，吸附力越強(qiáng)。

分子體積的影響：對(duì)于非極性大孔吸附樹脂而言，化合物體積越大，吸附力越強(qiáng)，這與大體積分子疏水性強(qiáng)有關(guān)。

PH

一般酸性化合物在適當(dāng)酸性溶液中可被充分吸附，堿性化合物則在堿性條件下易被吸附，中性化合物在中性情況下吸附較好。（2）影響分離的因素：43（3）樹脂柱的清冼和再生

用乙醇、丙酮、異丙醇、2-5%鹽酸、2-5%氫氧化鈉滲漉法洗脫或回流。（4）洗脫順序

一般被分離物質(zhì)極性越小，越先被洗脫下來(lái)，極性越大，越后洗脫下來(lái)。（3）樹脂柱的清冼和再生44（5）應(yīng)用成分的類型與樹脂的選擇：優(yōu)點(diǎn)：吸附容量大，選擇性好，成本低，收率較高，再生容易等優(yōu)點(diǎn)。

成分類型大孔樹脂類型

樹脂型號(hào)舉例脂溶性成分（甾、萜、黃酮、苯丙素、生物堿）非極性或弱極性樹脂D-101,AB-8,HPD-100皂苷、生物堿苷弱極性或極性D-201,D-301,HPD-300,AB-8,NKA-9黃酮苷、蒽醌苷、苯丙素苷弱極性或極性樹脂D-201,D-301,HPD-600,AB-8,NKA-9環(huán)烯醚萜苷極性樹脂D-301,HPD-600,NKA-9（5）應(yīng)用成分類型大孔樹脂類型455凝膠色譜法（1）性能及分類葡聚糖凝膠是葡聚糖和甘油，通過(guò)醚橋鍵相交而成的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)。交鏈度越大，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越緊密，網(wǎng)孔越小，吸水膨脹就越大，可用于小分子量物質(zhì)的分離。反之，則用于大分子量物質(zhì)的分離。

常用的有葡聚糖凝膠（SephadexG）、羥丙基葡聚糖凝膠（SephadexLH-20）、聚丙烯酰胺凝膠(Sephacrylose,商品名Bio-gelP）及瓊脂糖凝膠(Sepharose,商品名Bio-GelA）等。5凝膠色譜法46

(2)分離原理葡聚糖凝膠吸水后，形成凝膠粒子，在交鏈鍵的骨架中存在著許多網(wǎng)眼，只能使小分子量的化合物進(jìn)入，大分子量的化合物被排阻在凝膠顆粒的外部難以進(jìn)入網(wǎng)眼內(nèi)部，因此大分子物質(zhì)首先被洗出。(3)應(yīng)用主要用于分離水溶性大分子化合物。6高效液相色譜7氣相色譜(2)分離原理478超臨界流體萃取

是集提取和分離于一體，又基本上不用有機(jī)溶劑的新技術(shù)。當(dāng)一種物質(zhì)處于臨界溫度與臨界壓力以上的狀態(tài)下，形成即非液體又非氣體的單一相態(tài)，稱超臨界流體（SCF）。利用一種物質(zhì)在超臨界區(qū)域形成的流體進(jìn)行提取的方法稱SCFE。SCF與常溫常壓下的氣體和液體比較，其密度接近液體，而粘度又接近氣體，擴(kuò)散系數(shù)比液體大100倍，浸透性優(yōu)于液體。8超臨界流體萃取48

物質(zhì)的溶解過(guò)程包括分子間的相互作用和擴(kuò)散作用。所以物質(zhì)的溶解度與溶劑的密度、擴(kuò)散系數(shù)成正比與粘度成反比，因此超臨界流體對(duì)許多物質(zhì)有很強(qiáng)的溶解能力。

SCF做流動(dòng)相時(shí)，兼具氣層和液層的特點(diǎn)，可以分離氣相不能適用的不揮發(fā)性的較大分子，又能分離揮發(fā)油，其分離速度比液相可以快5~10倍，分辨能力大5倍。物質(zhì)的溶解過(guò)程包括分子間的相互作用和49

常用的超臨界流體為CO2,它的臨界溫度為31.4℃，臨界壓力為7.37Mpa,易操作，價(jià)格便宜，無(wú)毒?？梢酝ㄟ^(guò)改變壓力而改變超臨界流體的特性，因?yàn)樵谝欢囟葪l件下，改變壓力即可改變流體的密度和極性，利用程序升壓即可將不同極性成分進(jìn)行分步提取。CO2在高于臨界溫度和壓力的條件下，溶解出中藥原料中的成分，當(dāng)恢復(fù)常壓時(shí)，溶解在CO2超臨界流體中的成分便與氣體CO2自動(dòng)分離。常用的超臨界流體為CO2,它的臨界溫度50

二氧化碳超臨界流體對(duì)物質(zhì)溶解作用有一定選擇性，極性較低的化合物，如酯、醚、內(nèi)酯和含氧化合物易被萃取；極性化合物，如帶羥基、羧基的難于萃取。也可以在流動(dòng)相中加入夾帶劑以改變其性能。對(duì)溶質(zhì)具有較好溶解性的溶劑也往往是很好的夾帶劑，常用甲、乙醇、丙酮，夾帶劑的用量一般不超過(guò)15%。優(yōu)點(diǎn)：在接近室溫下工作，防止某些對(duì)熱不穩(wěn)定的成分被破壞或揮發(fā)。萃取過(guò)程中無(wú)有機(jī)溶劑殘留。提取效率高，節(jié)約能耗。二氧化碳超臨界流體對(duì)物質(zhì)溶解作用有一定選擇51第三節(jié)中藥化學(xué)成分結(jié)構(gòu)測(cè)定的一般程序和方法

純度測(cè)定

外觀顏色形態(tài)是否均一；測(cè)定物理常數(shù)如：熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、比旋度、折光率等；用薄層色譜或高效液相色譜鑒別；如為已知物，可用對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照?；瘜W(xué)方法

顏色反應(yīng)；化學(xué)降解法；衍生物制備。第三節(jié)中藥化學(xué)成分結(jié)構(gòu)測(cè)定的一般程序和方法52波譜在結(jié)構(gòu)測(cè)定中的應(yīng)用

1、紅外光譜（IR)

化合物用量只需5~10微克，測(cè)定范圍500~4000cm-1,有兩個(gè)區(qū)，一個(gè)是指紋區(qū)在1000cm-1以下，每個(gè)化合物有自己的特征指紋圖譜；另一個(gè)是特殊功能區(qū)，在1000~4000cm-1，可以確定羰基、苯環(huán)、羥基等功能基。

波譜在結(jié)構(gòu)測(cè)定中的應(yīng)用532、紫外光譜（UV）

只有在分子結(jié)構(gòu)中具有共軛體系，即在分子中具有產(chǎn)生π-π、n-π躍遷和某些n-σ躍遷的化合物才能在紫外光區(qū)產(chǎn)生紫外吸收光譜。可根據(jù)紫外吸收光譜的位置及吸收峰的數(shù)目，可初步推測(cè)化合物的不飽和部分結(jié)構(gòu)。

2、紫外光譜（UV）543、核磁共振(NMR)

(1)1H-NMR:

提供不同種類氫原子的情況。給出氫的數(shù)目、種類、相鄰基團(tuán)的結(jié)構(gòu)?？商峁┑慕Y(jié)構(gòu)信息參數(shù)，主要為化學(xué)位移(δ),偶合常數(shù)(J)及質(zhì)子數(shù)。化學(xué)位移(δ)：因氫核周圍化學(xué)環(huán)境不同，其外圍電子云密度及繞核旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的磁屏蔽效應(yīng)不同，則不同的氫出現(xiàn)在不同區(qū)域。3、核磁共振(NMR)55偶和常數(shù)(J)：磁不等同的兩個(gè)或兩組氫核，在一定距離內(nèi)因相互自旋偶合產(chǎn)生裂分，裂分峰間的距離為J。（2）13C-NMR:

提供碳原子的情況。可提供的結(jié)構(gòu)信息參數(shù)，主要為化學(xué)位移、異核偶合常數(shù)(JCH)及弛豫時(shí)間。測(cè)定技術(shù)也有各種去偶方法，最常用的是質(zhì)子寬帶去偶，13C信號(hào)在圖譜上為單峰。偶和常數(shù)(J)：磁不等同的兩個(gè)或兩組氫核，在一定距離內(nèi)因相564、質(zhì)譜(MS)測(cè)定有機(jī)分子的分子量。正確判斷離子峰，提供分子量。分析碎片離子，推斷結(jié)構(gòu)信息。常用的有：電子轟擊質(zhì)譜（提供分子離子峰和碎片離子峰）；場(chǎng)解析質(zhì)譜（可得到明顯的分子離子峰）等。

4、質(zhì)譜(MS)57第二章中藥化學(xué)成分的一般研究方法中藥化學(xué)成分的主要類型中藥化學(xué)成分提取分離方法的基本原理及應(yīng)用中藥化學(xué)成分結(jié)構(gòu)鑒定的一般程序和方法第二章中藥化學(xué)成分的一般研究方法中藥化學(xué)成分的主要類型58第一節(jié)中藥化學(xué)成分主要類型從物質(zhì)基本類型分：有機(jī)物、無(wú)機(jī)物。按元素組成和結(jié)構(gòu)母核分：生物堿、黃酮、苷、醌、甾、萜、苯丙素等。按酸堿性分：酸性、堿性和中性。按溶解性分：非極性（親脂性）、中極性、極性（親水性）。第一節(jié)中藥化學(xué)成分主要類型從物質(zhì)基本類型分：有機(jī)物、無(wú)機(jī)59按活性分：有效成分、無(wú)效成分具有生物活性，能用分子式和結(jié)構(gòu)式表示，并具有一定的物理常數(shù)的單體化合物，稱為有效成分。與有效成分共存的無(wú)生物活性的成分稱為無(wú)效成分。按生合成途徑分：一級(jí)代謝產(chǎn)物（如糖、蛋白質(zhì)）、二級(jí)代謝產(chǎn)物（如生物堿、黃酮、皂苷）。按活性分：有效成分、無(wú)效成分60一次代謝過(guò)程：對(duì)維持植物生命活動(dòng)來(lái)說(shuō)是不可缺少的過(guò)程，且?guī)缀醮嬖谟谒械木G色植物中。一次代謝產(chǎn)物：糖、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸等這些對(duì)植物機(jī)體生命活動(dòng)來(lái)說(shuō)不可缺少的物質(zhì)。二次代謝過(guò)程：并非在所有的植物中都能發(fā)生，對(duì)維持植物生命活動(dòng)來(lái)說(shuō)又不起重要作用的過(guò)程。二次代謝產(chǎn)物：生物堿、黃酮、苷、醌、甾、萜、苯丙素等。一次代謝過(guò)程：對(duì)維持植物生命活動(dòng)來(lái)說(shuō)是不可缺少的過(guò)程，61第二節(jié)中藥化學(xué)成分提取分離方法

的基本原理及應(yīng)用基本概念：1、提?。豪眠m當(dāng)?shù)娜軇┗蚍椒?，將所要成分盡可能從原料中完全提出的過(guò)程。2、分離：將提取物中所含的各種成分一一分開，并將得到的單體加以精制的過(guò)程。第二節(jié)中藥化學(xué)成分提取分離方法

的基本原理及應(yīng)用基本62提取方法：

水親水性有機(jī)溶劑親脂性有機(jī)溶劑溶劑提取法：

根據(jù)中藥中各種成分的溶解性不同，選用對(duì)所需成分溶解度大而對(duì)其他成分溶解度小的溶劑，將所需成分從藥材組織中溶解出來(lái)的一種提取方法。提取方法：63水蒸氣蒸餾法：

適于具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞的有效成分的提取。揮發(fā)油、小分子生物堿、酚類、游離醌類等。超臨界流體萃取法：

最常用的是二氧化碳超臨界萃取法，環(huán)保、成本低、提取分離一步完成。分子的極性、沸點(diǎn)和分子量的大小與其在二氧化碳超臨界流體中的溶解性密切相關(guān)。升華法壓榨法水蒸氣蒸餾法：64溶劑提取法:1、原理

根據(jù)中藥中各種成分的溶解性不同，選用對(duì)所需成分溶解度大而對(duì)其他成分溶解度小的溶劑，將所需成分從藥材組織中溶解出來(lái)的一種提取方法。選擇溶劑依據(jù)相似相溶原理。

溶劑提取法:652、溶劑的分類

*強(qiáng)極性溶劑：水*親水性有機(jī)溶劑：

能與水任意混溶（甲醇、乙醇、丙酮）*親脂性有機(jī)溶劑：

不與水任意混溶，可分層（正丁醇、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、環(huán)己烷、石油醚）

常用溶劑的極性大小順序：石油醚<四氯化碳<苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇（甲醇）<水2、溶劑的分類663、化合物的結(jié)構(gòu)與溶劑極性的關(guān)系（1）分子結(jié)構(gòu)中親水性基團(tuán)（羧基、羥基、氨基）越多，極性越大，親水性越強(qiáng)，反之則親脂性越強(qiáng)。（2）分子中非極性部分越大，碳鏈越長(zhǎng)或結(jié)構(gòu)越大，則親脂性越強(qiáng)。（3）結(jié)構(gòu)母核相同的成分，分子中功能基的極性越大，或極性功能基數(shù)量越多，則整個(gè)分子的極性越大，親水性越強(qiáng)，親脂性越弱。3、化合物的結(jié)構(gòu)與溶劑極性的關(guān)系674、選擇溶劑的要點(diǎn)*對(duì)所要成分溶解度大*沸點(diǎn)適中容易回收*低毒安全

中藥化學(xué)成分中，萜、甾等大環(huán)、稠環(huán)化合物極性小，易溶于氯仿、乙醚等；糖、苷等易溶于水、乙醇等極性溶劑中；酸堿性成分因存在狀態(tài)不同溶解性不同。最常用的溶劑為乙醇。4、選擇溶劑的要點(diǎn)685、溶劑的選擇水：價(jià)廉、易得、使用安全的強(qiáng)極性溶劑。適于提取無(wú)機(jī)鹽、糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽、苷類等。親水性有機(jī)溶劑：乙醇最常用。高濃度提取親脂性成分，低濃度提取親水性成分。親脂性有機(jī)溶劑：具有較強(qiáng)的選擇性，對(duì)揮發(fā)油、油脂、葉綠素、樹脂、內(nèi)酯、某些生物堿及一些苷元均可提取出來(lái)。優(yōu)缺點(diǎn)：沸點(diǎn)低，濃縮回收方便，但易燃、有毒、價(jià)貴，穿透力差。5、溶劑的選擇696、溶劑提取的方法溶劑提取的方法：

浸漬法滲漉法煎煮法回流提取法連續(xù)回流提取法超聲法6、溶劑提取的方法70（1）浸漬法：以水或稀醇反復(fù)提取，適于遇熱易破壞或揮發(fā)性成分及含淀粉、粘液質(zhì)較多的中藥。（2）滲漉法：以稀乙醇或酸水作溶劑，先浸后滲，提取效率高于浸漬法。（3）煎煮法：以水為溶劑，對(duì)遇熱易破壞和揮發(fā)性成分有影響，對(duì)含多量淀粉、黏液質(zhì)的中藥也不適用。（4）回流提?。河糜袡C(jī)溶劑。對(duì)遇熱易破壞的成分有影響。（5）連續(xù)回流提?。河糜袡C(jī)溶劑。提取效率高，節(jié)省溶劑。（6）超聲法7、影響溶劑提取法的因素合適的溶劑和方法、藥材的粉碎度、提取溫度及時(shí)間。（1）浸漬法：以水或稀醇反復(fù)提取，適于遇熱易破壞或揮發(fā)71第二中藥化學(xué)成分研究方法課件72

分離精制方法：

溶劑法沉淀法分餾法膜分離法結(jié)晶法色譜分離法分離精制方法：溶劑法73一、溶劑法

1、酸堿溶劑法

酸溶：有機(jī)堿性成分可與無(wú)機(jī)酸成鹽而溶于水。堿溶：具有羧基，用碳酸氫鈉；具有酚羥基，用氫氧化鈉；具有內(nèi)酯或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的成分可被皂化而溶于水。

注意事項(xiàng)：酸堿的強(qiáng)度、加熱溫度、與被分離成分接觸的時(shí)間等。一、溶劑法

1、酸堿溶劑法74第二中藥化學(xué)成分研究方法課件752、溶劑分配法原理：利用混合物中各成分在互不相溶的兩相溶劑中分配系數(shù)不同而達(dá)到分離的方法。

各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高。一般采用全量多次分配提高萃取效率。需要注意的是防止乳化。溶劑的選擇：對(duì)于分離極性較大的成分，用正丁醇-水；分離中等極性成分，用乙酸乙酯-水；分離低極性成分，用氯仿（或乙醚、石油醚等）-水。所用裝置：分液漏斗、連續(xù)液-液萃取和液滴逆流層析裝置。2、溶劑分配法76（1）系統(tǒng)溶劑萃取法：常用來(lái)粗分，是將總提物分散于水中，依次用石油醚（或環(huán)己烷）、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別減壓回收溶劑得到相應(yīng)極性的成分。極性成分類型適宜溶劑強(qiáng)親脂性揮發(fā)油、脂肪油、苷元石油醚脂溶性色素、甾醇己烷親脂性苷元、生物堿、樹脂乙醚醛、醇、酯、有機(jī)酸氯仿小強(qiáng)心苷氯仿-乙醇（2：1）中極性中黃酮苷乙酸乙酯大皂苷、蒽醌苷正丁醇親水性極性很大的苷、糖類丙酮

氨基酸、某些生物堿鹽甲醇、乙醇強(qiáng)親水性蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、氨基酸水果膠、糖類、、無(wú)機(jī)鹽類（1）系統(tǒng)溶劑萃取法：極性77（2）逆流連續(xù)萃取法

利用兩相溶劑比重不同可自然分層和分散液滴穿過(guò)連續(xù)相溶劑時(shí)發(fā)生傳質(zhì)的原理，用一根或數(shù)根萃取管制成逆流連續(xù)萃取裝置。管內(nèi)的瓷環(huán)，增加液滴上升的路程和在連續(xù)相中停留的時(shí)間，更重要的是上升的液滴因撞擊填充物而被分散，擴(kuò)大了兩相溶劑萃取的接觸面積，使更萃取完全。優(yōu)點(diǎn)：

克服了分液漏斗多次萃取和易乳化的麻煩。（2）逆流連續(xù)萃取法78（3）逆流分布法（CCD）對(duì)性質(zhì)相似的異構(gòu)體或同系物分離效果好?；驹砣允抢没旌衔镏谐煞衷趦煞N不相混溶的溶劑中分配系數(shù)的不同，經(jīng)過(guò)在兩相溶劑中多次轉(zhuǎn)移，而使它們達(dá)到分離的目的。（4）液滴逆流層析法（DCCC）

是在逆流分布法基礎(chǔ)上發(fā)展的高分離效能的逆流分布法，分離管有100~1000根，互相串聯(lián)，上行法時(shí)，分離管內(nèi)充滿重相作為固定液相，利用泵將輕相（移動(dòng)相）帶著樣品液進(jìn)入分離管，形成液滴通過(guò)分離管，流出的移動(dòng)相通過(guò)檢測(cè)，分部收集。（3）逆流分布法（CCD）79溶劑分配法中溶劑系統(tǒng)的選擇：

兩相溶劑不相混溶，混合物中各單一成分在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)差別越大越好。分離酸堿兩性化合物時(shí)，緩沖液是很好的溶劑。

操作注意：（1）先將兩相溶劑相互充分飽和。（2）采用等體積兩相溶劑的方式。（3）欲分離混合物的濃度不宜過(guò)高。溶劑分配法中溶劑系統(tǒng)的選擇：80二沉淀法

1、酸堿沉淀法：

例如：生物堿、黃酮、蒽醌2、專屬試劑沉淀法：

例如：雷氏銨鹽沉淀季銨堿、膽甾醇沉淀甾體皂苷；明膠沉淀鞣質(zhì)。3、分級(jí)沉淀法：

改變加入溶劑的極性或數(shù)量使沉淀逐步析出的方法。例如：多糖、蛋白質(zhì)的水溶液，分次加乙醇，使含醇量逐步提高，則可得到分子量由大到小的多糖、蛋白質(zhì)；皂苷的乙醇液，分次加入乙醚或乙醚-丙酮，可按極性從小到大逐步沉淀。二沉淀法

1、酸堿沉淀法：814、鉛鹽沉淀法中性醋酸鉛：與酸性或酚性物質(zhì)沉淀堿性醋酸鉛：除以上物質(zhì)外，還可沉淀具有醇羥基、酮基、醛基結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。脫鉛：通入硫化氫法；中性硫酸鹽法；陽(yáng)離子交換法。5、鹽析法在混合物的水溶液中，加入無(wú)機(jī)鹽（常用的是NaCL，其它還有Na2S、MgSO4、NH4SO4）至一定濃度或達(dá)到飽和，使某些成分沉淀析出或用有機(jī)溶劑萃取出而達(dá)到分離的目的。4、鉛鹽沉淀法82三分餾法

利用混合組分中各成分的沸點(diǎn)不同而分離的一種方法。用于液體混合物的分離。四膜分離法利用天然或人工合成的高分子膜，以外加壓力或化學(xué)位差為推動(dòng)力，對(duì)混合物溶液進(jìn)行分離、分級(jí)、提純和富集的方法。反滲透、超濾、微濾、電滲析及傳統(tǒng)的透析法均為膜分離技術(shù)。原理是大分子不能透過(guò)膜而被截留，小分子能透過(guò)膜，使分子大小不同的物質(zhì)得到分離。關(guān)鍵是選擇適宜的膜。三分餾法83五升華法

固體物質(zhì)加熱直接變成氣體，遇冷又凝結(jié)為固體的現(xiàn)象。主要是針對(duì)中藥中小分子生物堿、香豆素等。五升華法84六結(jié)晶法1、結(jié)晶的條件（1）溶劑：選擇合適的溶劑對(duì)結(jié)晶的形成是關(guān)鍵。合適的溶劑應(yīng)對(duì)欲分離的成分熱時(shí)溶解度大，冷時(shí)溶解度小，而對(duì)雜質(zhì)則冷熱溶解度一致；沸點(diǎn)要適中；不與被分離成分產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。

選擇溶劑依據(jù)“相似相溶”原理。六結(jié)晶法85（2）溫度通常在加溫的情況下，溶解過(guò)濾，除雜，濃縮，放冷。最合適的結(jié)晶溫度5_10度。（3）時(shí)間一般3_5天或更長(zhǎng)時(shí)間。（4）濃度一般是多一些溶劑，放置使其慢慢揮發(fā)到合適的濃度。（5）雜質(zhì)（6）有效成分的含量越高，越易結(jié)晶。（2）溫度862、結(jié)晶溶劑的選擇

對(duì)所需成分的溶解度隨溫度不同而有顯著差別，同時(shí)不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；查閱相關(guān)文件，參考“相似相溶”規(guī)律；選擇混合溶劑，低沸點(diǎn)溶劑對(duì)物質(zhì)溶解度大，高沸點(diǎn)溶劑對(duì)物質(zhì)的溶解度小；常用溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚等。2、結(jié)晶溶劑的選擇87七色譜分離法1、吸附色譜利用同一吸附劑對(duì)混合物中各種成分吸附能力的差異，而使各成分達(dá)到分離目的的色譜方法。吸附能力的強(qiáng)弱是由吸附劑和被吸附物質(zhì)的性質(zhì)決定的。吸附色譜法的分離效果，完全由吸附劑，溶劑和被分離物質(zhì)的性質(zhì)決定。七色譜分離法88（1）常用吸附劑：*硅膠：多孔，微酸性，其吸附能力稍弱于氧化鋁。吸附作用是由于顆粒表面有很多硅醇基，它可以和許多化合物形成氫鍵而具有一定的吸附作用，所以硅膠吸附作用的強(qiáng)弱與硅醇基的含量有關(guān)。硅醇基還易吸附水分，吸附的水分越多，吸附其他化合物的能力越弱。吸水量超過(guò)12%就不能做為吸附劑了。（1）常用吸附劑：89當(dāng)加熱到了100-110℃時(shí)即可除去絕大多數(shù)硅醇基吸附的水分，恢復(fù)吸附活力，這一過(guò)程稱為活化。當(dāng)溫度上升到500℃時(shí)，硅膠表面的硅醇基則脫水縮合轉(zhuǎn)變?yōu)楣柩醐h(huán)結(jié)構(gòu)，從而喪失吸附活性。硅膠適于分離的化合物范圍很廣泛，但不宜分離堿性化合物。當(dāng)加熱到了100-110℃時(shí)即可除去絕大多數(shù)硅醇90*

氧化鋁由氫氧化鋁直接在高溫下脫水制得，帶微堿性，適于分離堿性成分。*聚酰胺適于分離黃酮、酚、醌類、有機(jī)酸及鞣質(zhì)，可使性質(zhì)極相近的化合物得到分離。原理：聚酰胺中的酰胺基可與酚羥基、羧基、羰基、硝基等形成氫鍵吸附。聚酰胺的吸附容量大。

*氧化鋁91被分離成分的結(jié)構(gòu)與吸附力的關(guān)系：1）可形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng)，越難被洗脫。2）形成分子內(nèi)氫鍵的吸附能力會(huì)減弱。3）分子中芳香化程度越高，吸附能力越強(qiáng)。4）對(duì)聚酰胺柱的洗脫能力，與溶劑的種類有關(guān)：

甲酰胺，丙酮，甲、乙醇，水依次減弱。被分離成分的結(jié)構(gòu)與吸附力的關(guān)系：92（2）溶劑對(duì)于極性吸附劑，溶劑極性越大，洗脫能力越強(qiáng)。對(duì)于非極性吸附劑，則相反。（3）被分離物質(zhì)對(duì)于極性吸附劑，被分離物質(zhì)的極性越強(qiáng)，吸附力越大，越難洗脫。（2）溶劑93

物理吸附原理：吸附與解吸附的循環(huán)往復(fù)

基本要素：吸附劑、被分離物質(zhì)、溶劑

弱強(qiáng)弱強(qiáng)弱強(qiáng)吸附劑被分離物質(zhì)溶劑物理吸附原理：吸附與解吸附的循環(huán)往復(fù)弱強(qiáng)弱強(qiáng)弱強(qiáng)吸附劑被分94（4）操作方式薄層色譜：

制板點(diǎn)樣展開顯色柱色譜：

裝柱上樣洗脫收集濃縮檢識(shí)合并結(jié)晶（4）操作方式952分配色譜(1)基本原理:利用物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間分配系數(shù)不同而達(dá)到分離。(2)分類:正相色譜：固定相極性>流動(dòng)相極性.用于分離極性和中等極性的成分。反相色譜：固定相極性<流動(dòng)相極性，用于分離非極性和中等極性的成分.2分配色譜96(3)洗脫規(guī)律：正相色譜:極性小的化合物先被洗脫，極性大的化合物后被洗脫；反相色譜正好相反。(4)常用的固定相和流動(dòng)相固定相：正相色譜中常用氰基或氨基鍵合相；反相色譜中常用C18或C8鍵合相。流動(dòng)相：正相色譜中主要用有機(jī)溶劑；反相色譜中常用甲醇-水或乙腈-水系統(tǒng)。(3)洗脫規(guī)律：973離子交換色譜法(1)基本原理基于各成分解離度的不同而分離。(2)離子交換劑的種類離子交換樹脂、離子交換纖維素、離子交換凝膠。(3)應(yīng)用主要用于生物堿、有機(jī)酸及氨基酸、蛋白質(zhì)和多糖等水溶性成分的分離純化。(4)操作要點(diǎn)裝柱前要用水充分溶脹，并用酸、堿預(yù)處理。3離子交換色譜法984大孔吸附樹脂法（1）性能及分離原理性能：大孔樹脂是一種不含交換基團(tuán)，具有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑。一般為白色顆粒，20-60目。性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶劑。水溶液中吸附力較強(qiáng)，且有很好的選擇性。原理：既有吸附性，又有分子篩的篩選性。吸附性是范德華引力或氫鍵吸附的結(jié)果；篩選性則由其多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)引起的。4大孔吸附樹脂法99（2）影響分離的因素：

分子極性的大小：極性較大的化合物適宜于在中極性的樹脂上分離，而極性較小的化合物則適于在非極性樹脂上分離。對(duì)于中極性樹脂來(lái)說(shuō)，被分離化合物分子上能形成氫鍵的基團(tuán)越多，吸附力越強(qiáng)。

分子體積的影響：對(duì)于非極性大孔吸附樹脂而言，化合物體積越大，吸附力越強(qiáng)，這與大體積分子疏水性強(qiáng)有關(guān)。

PH

一般酸性化合物在適當(dāng)酸性溶液中可被充分吸附，堿性化合物則在堿性條件下易被吸附，中性化合物在中性情況下吸附較好。（2）影響分離的因素：100（3）樹脂柱的清冼和再生

用乙醇、丙酮、異丙醇、2-5%鹽酸、2-5%氫氧化鈉滲漉法洗脫或回流。（4）洗脫順序

一般被分離物質(zhì)極性越小，越先被洗脫下來(lái)，極性越大，越后洗脫下來(lái)。（3）樹脂柱的清冼和再生101（5）應(yīng)用成分的類型與樹脂的選擇：優(yōu)點(diǎn)：吸附容量大，選擇性好，成本低，收率較高，再生容易等優(yōu)點(diǎn)。

成分類型大孔樹脂類型

樹脂型號(hào)舉例脂溶性成分（甾、萜、黃酮、苯丙素、生物堿）非極性或弱極性樹脂D-101,AB-8,HPD-100皂苷、生物堿苷弱極性或極性D-201,D-301,HPD-300,AB-8,NKA-9黃酮苷、蒽醌苷、苯丙素苷弱極性或極性樹脂D-201,D-301,HPD-600,AB-8,NKA-9環(huán)烯醚萜苷極性樹脂D-301,HPD-600,NKA-9（5）應(yīng)用成分類型大孔樹脂類型1025凝膠色譜法（1）性能及分類葡聚糖凝膠是葡聚糖和甘油，通過(guò)醚橋鍵相交而成的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)。交鏈度越大，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越緊密，網(wǎng)孔越小，吸水膨脹就越大，可用于小分子量物質(zhì)的分離。反之，則用于大分子量物質(zhì)的分離。

常用的有葡聚糖凝膠（SephadexG）、羥丙基葡聚糖凝膠（SephadexLH-20）、聚丙烯酰胺凝膠(Sephacrylose,商品名Bio-gelP）及瓊脂糖凝膠(Sepharose,商品名Bio-GelA）等。5凝膠色譜法103

(2)分離原理葡聚糖凝膠吸水后，形成凝膠粒子，在交鏈鍵的