免疫學(xué)質(zhì)量控制流程

免疫學(xué)質(zhì)量控制流程【目的】保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可*,充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn).【該SOP變動程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！痉椒ā俊痉治銮百|(zhì)控】1。人員培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)是人操作的，因此檢驗(yàn)人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟練掌握本專業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識:［1]檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理（ELISA原理)；[2］臨床意義;［3]熟悉檢測技巧,了解易出差錯(cuò)的環(huán)節(jié)及難點(diǎn)；［4]熟悉檢測試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成)；[5］熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識。[6]某些特殊項(xiàng)目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗.【試劑盒選擇】衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑,丙肝試劑，必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標(biāo)簽的產(chǎn)品?！驹噭┖性u價(jià)】試劑評價(jià)需要有權(quán)威的血清考核盤(Panel）進(jìn)行檢測，價(jià)格昂貴，操作繁瑣，一般實(shí)驗(yàn)室不易開展，可以通過以下信息,了解試劑質(zhì)量。1。根據(jù)該試劑生物制品鑒定所的批批檢定報(bào)告，了解其質(zhì)量水平，按照質(zhì)量計(jì)劃選擇靈敏度高的或特異性高的試劑；2（基因工程或合成多肽（比例混合或化學(xué)合成3。參考室間質(zhì)評報(bào)告中對試劑的評價(jià)結(jié)果,了解不同試劑的質(zhì)控成績。4.根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的試劑評價(jià)結(jié)果，了解市場上試劑的質(zhì)量優(yōu)劣.【儀器質(zhì)控】為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱）,洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。1。移液器：ELISA加樣量?。?—100ｕl），其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計(jì)算吸量是否準(zhǔn)確,一般應(yīng)在±10％以內(nèi)；2。水浴箱：經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中（允許有±1℃的誤差；32ul,人工扣板時(shí)，4。酶標(biāo)儀：經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的0.001,準(zhǔn)確性為5％.酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同.普通的酶標(biāo)儀在。000~2。000，新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)900，甚至更高。超出可測上限的A值常以”*”"over"或其它符0.000～20000~2000ELISA時(shí)應(yīng)予注意?！久笜?biāo)儀校正程序】1.UV-2201差為濾光片波長精度。一般酶標(biāo)儀無585nm550nm630nm.450nm濾光片的檢定選用普魯蘭溶液（校正波長為630nm）。2。通道差與孔間差檢測：通道差檢測是取一只酶標(biāo)板小孔杯（污染以酶標(biāo)板架作載體，將其（內(nèi)含200ul0500A8490nm2板條（8條共96200ul（100A）先后置于同一通道，蒸溜水490nm±1.96s）：88200ul490nm3043200ul3490nm（上下午各一次20CV55490nm8±1.96s3（測定波長為490nm,校正波長為585nm），先后于8個(gè)通道檢測，每個(gè)通道測3次，比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，以考察雙波長消除干擾組分的效果?！緲?biāo)本的采集和保存】方法的結(jié)果,以HRP為標(biāo)記的ELISA長菌的標(biāo)本同樣的道理也易產(chǎn)生假陽性，因菌體中可能含有內(nèi)源性HRP也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。不使用用肝素抗凝劑。4IgG4℃5—20℃冰存.5.ELISA1ng/ml【分析中質(zhì)控】ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果受操作影響很大,每個(gè)步驟包括加樣，溫育，洗滌，顯色，酶標(biāo)儀讀數(shù)均應(yīng)認(rèn)真負(fù)責(zé)才能充分發(fā)揮ELISA的高靈敏,強(qiáng)特異的優(yōu)點(diǎn)。因此,應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP)。1。加樣[1］（加樣槍不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。樣本稀釋，目的是為了減少非特異性反應(yīng)，所以一定要先加稀釋液后加樣本，特別注意加樣后要在微量振蕩器上振蕩30加二種以上試劑時(shí)均需振蕩混勻。[4］如用滴瓶滴加試劑應(yīng)先將滴瓶搖勻并擠去第一滴有氣泡的試劑后加樣。溫育［1]抗原抗體反應(yīng)需要在一定溫度下（37°C)，經(jīng)過一定的時(shí)間才能達(dá)到反應(yīng)的平衡點(diǎn)［2]ELISA1/3[3]洗滌［1］手工洗滌一般采用浸泡方法：)甩去孔內(nèi)反應(yīng)液；2)用洗滌液過洗一遍（即注滿孔后即甩去2-35［2］24。顯色[1]HRP催化底物的一步呈色反應(yīng),同樣需要一定的時(shí)間和溫度，［2］一定要按照說明書規(guī)定的時(shí)間溫度（一般為37°C，10-15分鐘）恒定反應(yīng)后終止［3］或根據(jù)臨界值質(zhì)控血清吸光度值達(dá)0。2左右使的時(shí)間而恒定反應(yīng)時(shí)間.5。酶標(biāo)儀判讀結(jié)果(302。常見的顯色系統(tǒng)有OPDTMBTMBOPD490nm；TMB終止后顯黃色，測定450nm630nm。3。使用雙波長的優(yōu)點(diǎn)可以消除反應(yīng)板條上的劃痕手印的干擾。同時(shí)要注意反應(yīng)板應(yīng)用紙吸干后才能置酶標(biāo)儀中比色,否則吸光度易出現(xiàn)負(fù)值或損壞濾光片?！痉治龊筚|(zhì)控】【報(bào)告方式】1。定性試驗(yàn)：國內(nèi)外為便于統(tǒng)一計(jì)算，一律按S/COV方式報(bào)告，S為標(biāo)本A值，COV即CutOff值(或COV)[1]夾心法和間接法以S/COV≥1為陽性；競爭法與中和法以S/COV﹤1為陽性［2］COV的計(jì)算公式以試劑盒說明書的為準(zhǔn)常見的有：COV=2.1×N(當(dāng)N0.05。05計(jì))，此公式由P/N>2。1于夾心法。COV=0.5×N，從抑止率公式換算而來，常用于競爭，中和法。COV=N+C（C），用于間接法。COV=C×P+N（C為常數(shù)），性對照測定值要基本恒定。[1]ELISA曲線每次都要和待測標(biāo)本做在同一塊板上。［2］現(xiàn)有的ELISA確的結(jié)果實(shí)屬不易。【記錄】［1］所有實(shí)驗(yàn)的原始資料均應(yīng)存檔；所有的記錄均應(yīng)規(guī)范登記在冊；原始登記表應(yīng)姓名。[2］如試驗(yàn)結(jié)果對臨床診斷有決定意義,其樣本應(yīng)保留,至少與病歷保存期一致【定性試驗(yàn)】ELISAQC，高值質(zhì)控血清人血清A0.05~0.07（"HOOK"效應(yīng)監(jiān)果，作為QC【定量試驗(yàn)】ELISA定量試驗(yàn)常見于腫瘤因子(如），的質(zhì)控方法可參考生化方式?！?即刻性”質(zhì)控】3次有效值時(shí)就可以計(jì)算RCVX,s