他汀個(gè)體化檢測的臨床意義

他汀個(gè)體化基因SLCO1B1和ApoE多態(tài)性診斷的介紹【項(xiàng)目背景】汀類藥物分為天然化合物(如洛伐他丁、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀)和完全人工合成化合物(如氟伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、羅伐他汀、pitavastatin)是最為經(jīng)典和有效的降脂藥物，廣泛應(yīng)用于高脂血癥的治療。他汀類藥物(statins)是羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，此類藥物通過競爭性抑制內(nèi)源性膽固醇合成限速酶(HMG-CoA)還原酶，阻斷細(xì)胞內(nèi)羥甲戊酸代謝途徑，使細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成減少，從而反饋性刺激細(xì)胞膜表面(主要為肝細(xì)胞)低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein，LDL)受體數(shù)量和活性增加、使血清膽固醇清除增加、水平降低。自1987年起，他汀開始應(yīng)用于臨床，旨在防范心腦血管事件，處方量很大。因而，臨床對(duì)于他汀的安全性和預(yù)后一直存在顧慮，特別是他汀與肌肉安全性的問題，嚴(yán)重時(shí)可致命，雖然發(fā)生率很低，但卻直接影響患者的生存質(zhì)量及預(yù)后，且可影響患者是否應(yīng)該長期服用他汀的選擇。研究表明，肌肉安全性與他汀代謝中的關(guān)鍵酶SLCO1B1基因編碼的OATP1B1密切相關(guān)【1】，有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽(OATP1B1)參與多種藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)，在他汀藥物代謝中負(fù)責(zé)將血液中的藥物轉(zhuǎn)移至肝臟直接發(fā)揮藥效或代謝轉(zhuǎn)化成為有活性的物質(zhì)。SLCO1B1定位于12號(hào)染色體，研究顯示SLCO1B1基因具有遺傳多態(tài)性，其中388A>G、521T>C是兩種常見的單核苷酸多態(tài)性，可以形成4種單倍型SLCO1B1*1a(388A-521T)、SLCO1B1*1b(388G-521T)、SLCO1B1*5(388A-521C)和SLCO1B1*15(388G-521C)。突變型SLCO1B1基因會(huì)引起編碼的OATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活力減弱，表現(xiàn)為肝臟攝取藥物能力降低，引起他汀類藥物血藥濃度上升，增加橫紋肌溶解癥或肌病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。研究表明，他汀的療效及預(yù)后與載脂蛋白ApoE密切相關(guān)【2】，載脂蛋白E(ApoE)通過多種途徑參與機(jī)體的脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)，是影響機(jī)體血脂水平的重要內(nèi)在因素。ApoE多肽被認(rèn)為是高脂蛋白血癥及動(dòng)脈粥樣硬化性血管病的易感候選基因，與冠心病【3】、老年癡呆【4】等疾病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)，人類ApoE基因定位于19號(hào)染色體上，主要有兩種單核苷酸多態(tài)性526C>T和388T>C，可以形成3種單倍型分別是ApoE3(388T-526C)、ApoE2(388T-526T)、ApoE4(388C-526C)。文獻(xiàn)報(bào)道，ApoE4攜帶者患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)要高40%，并且他汀類藥物對(duì)ApoE4攜帶者療效往往不佳或無療效【2】，而對(duì)ApoE2攜帶者的降脂作用最強(qiáng)?！痉椒ㄔ怼勘井a(chǎn)品使用的方法為多重?zé)晒舛縋CR技術(shù)，該技術(shù)基于熒光定量PCR平臺(tái)，首先針對(duì)SNP位點(diǎn)上下游設(shè)計(jì)特異性引物，分別針對(duì)野生型及突變型位點(diǎn)設(shè)計(jì)不同熒光基團(tuán)標(biāo)記的特異性探針，然后對(duì)引物及探針進(jìn)行科學(xué)的配比組合，配置SNP位點(diǎn)檢測體系，通過熒光定量PCR儀對(duì)臨床樣本DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，同時(shí)收集擴(kuò)增信號(hào)，如果信號(hào)為野生型探針信號(hào)，那么樣本為純合野生型；如果信號(hào)為突變型探針信號(hào)，那么樣本為純合突變型;如果信號(hào)同時(shí)有野生型及突變型探針信號(hào)，那么樣本為雜合突變型。該方法及相關(guān)產(chǎn)品具有以下明顯優(yōu)勢(shì)：1.操作簡便，檢測時(shí)間短、結(jié)果易判讀；2.特異性及靈敏度更高，確保結(jié)果客觀準(zhǔn)確；3.可實(shí)現(xiàn)一管檢測一個(gè)SNP位點(diǎn)，通量大；4.具有UNG防污染體系，可有效預(yù)防臨床氣溶膠污染，避免假陽性；5.具有獨(dú)特的內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)，可監(jiān)控操作過程；6.具有弱陽性對(duì)照及空白對(duì)照，可監(jiān)控試劑及環(huán)境質(zhì)量。

L多重?zé)晒舛縋CR體系L特異性探針識(shí)別特異性模板3.反應(yīng)正常進(jìn)行，釋放熒光信號(hào)EII■■II■IRes'<rs<L多重?zé)晒舛縋CR體系L特異性探針識(shí)別特異性模板3.反應(yīng)正常進(jìn)行，釋放熒光信號(hào)G[I11111iIiIIIiIIILLLL1【適應(yīng)癥】心內(nèi)科（服用他汀患者的個(gè)體化基因診斷，用于風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測、療效及預(yù)后）體檢科、老年科（用于冠心病、老年癡呆等發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測，提供健康管理方案）【臨床意義】SLCO1B1基因檢測的位點(diǎn)為388A>C、521T>C，其可形成4種單倍型*1a、*1b、*5、*15,SLCO1B1基因編碼的蛋白主要參與藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)，負(fù)責(zé)將血液中的藥物轉(zhuǎn)移至肝臟中直接發(fā)揮藥效或代謝轉(zhuǎn)化為有活性的物質(zhì)。突變型SLCO1B1基因引起自身轉(zhuǎn)運(yùn)活力減弱，表現(xiàn)為肝臟攝取藥物能力降低，引起他汀藥物血藥濃度上升，增加橫紋肌溶解癥或肌病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

臨床指導(dǎo)基因基因型臨床意義SLCO1B1*1a/*1a,*1a/*1b,*1b/*1b正常肌病風(fēng)險(xiǎn)，他汀耐受劑量較高*1a/*5,*1a/*15,*1b/*15中度肌病風(fēng)險(xiǎn)，他汀耐受劑量中等*5/*5,*5/*15,*15/*15高度肌病風(fēng)險(xiǎn)，他汀耐受劑量較低ApoE基因檢測的位點(diǎn)為526C>T、388T>C,其可形成3種單倍型ApoE2、ApoE3、ApoE4,ApoE基因編碼的蛋白是影響機(jī)體血脂水平的重要內(nèi)在因素，文獻(xiàn)報(bào)道，ApoE4的攜帶者服用他汀療效往往不佳或無效，ApoE2攜帶者服用他汀效果最佳。臨床指導(dǎo)基因型建議飲食預(yù)防疾病提示用藥提示E2/E2魚油降脂效果最好適量飲酒風(fēng)險(xiǎn)明顯降低注意黃斑變性、III類高脂血癥；老年癡呆、腦梗塞有保護(hù)因子，冠心病風(fēng)險(xiǎn)低他汀療效較好E2/E3E2/E4魚油降脂效果最好適量飲酒風(fēng)險(xiǎn)明顯降低正?；蛐?，老年癡呆、腦梗塞、冠心病正常他汀治療療效正常E3/E3E3/E4魚油降脂風(fēng)險(xiǎn)加大適量飲酒風(fēng)險(xiǎn)明顯大增增加冠心病、心梗、腦梗、老年癡呆風(fēng)險(xiǎn)，宜低脂低鹽低糖，忌煙酒魚肉他汀療效較差【參考文獻(xiàn)】MikkoNiemi,MarjaK.Pasanen,andPerttiJ.Neuvonen.OrganicAnionTransportingPolypeptide1B1:aGeneticallyPolymorphicTransporterofMajorImportanceforHepaticDrugUptake.PharmacolRev63:157181,2011.JohnF.Thompson,PhD;CraigL.Hyde,PhD;LindaS.Wood,MS;SaraA.Paciga,MA;DavidA.Hinds,PhD;DavidR.Cox,MD,PhD;G.KeesHovingh,MD,PhD;JohnJ.P.Kastelein,MD,PhD.ComprehensiveWhole-GenomeandCandidateGeneAnalysisforResponsetoStatinTherapyintheTreatingtoNewTargets(TNT)Cohort.CircCardiovascGenet.2009;2:173-181.RaphaelChouinard-WatkinsandMelaniePlourdeFattyAcidMetabolisminCarriersofApolipoproteinEEpsilon4Allele:IsItContributingtoHigherRiskofCognitiveDeclineandCoronaryHeartDisease?Nutrients2014,6,4452-4471;doi:10.3390/nu6104452PingWu1,2Hong-LeiLi1Zhi-JunLiu1Qing-QingTao1MiaoXu1Qi-HaoGuo1Zh