6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）活性檢測試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4361

本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）活性檢測試劑盒說明書貨號:UPLC-MS-4361規(guī)格:100T/96S產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體100mL×1瓶4℃保存試劑一液體20mL×1瓶4℃保存（切忌放-20℃）試劑二粉劑×1支4℃保存試劑三粉劑×1支4℃保存溶液的配制：1250μL雙蒸水充分溶解備用；2250μL雙蒸水充分溶解備用。3、工作液配制：臨用前將試劑一、試劑二、試劑三以15：0.2：0.2比例混合。

微量法產(chǎn)品說明：G6PDH（EC1.1.1.49）6-磷6-NADP+NADPH，供生物合成及維持細(xì)胞內(nèi)的還原狀態(tài)用。6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。G6PDH催化NADP+還原生成NADPH，在340nm下測定NADPH增加速率。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。需自備的儀器和用品：紫外分光光度計(jì)//96（UV板/勻漿器、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備：5001mL波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（20%3s10s30次。8000g4℃10min0.1g1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃10min2、血清（漿）樣本：直接檢測。二、測定步驟1、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到340nm，蒸餾水調(diào)零。2、試劑一置于37℃水浴預(yù)熱30min以上。3、加樣表：試劑名稱（μL）測定管（μL）空白管（μL）工作液190190樣本10-蒸餾水-10340nm5min0s300sA2ΔA測定=A2測定-A1測定，ΔA空白=A2空白-A1空白。三、G6PDH活力單位的計(jì)算用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下1、血清（漿）G6PDH活力的計(jì)算：單位的定義：每毫升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘生成1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。G6PDH（U/mL）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×109×V反總]÷V樣本÷T=643×（ΔA測定-ΔA空白）2、組織中G6PDH活力的計(jì)算：按樣本蛋白濃度計(jì)算：g1nmolNADPHG6PDH（U/mgprot）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×109×V反總]÷(V樣本×Cpr)÷T=643×（ΔA測定-ΔA空白）÷Cpr按樣本質(zhì)量計(jì)算：mg1nmolNADPHG6PDH（U/g質(zhì)量）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×109×V反總]÷(W÷V提取×V樣本)÷T=643×（ΔA測定-ΔA空白）÷W3、細(xì)菌或細(xì)胞中G6PDH活力的計(jì)算：按樣本蛋白濃度計(jì)算：mg1nmolNADPHG6PDH（U/mgprot）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×109×V反總]÷(V樣本×Cpr)÷T=643×（ΔA測定-ΔA空白）÷Cpr按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：11nmolNADPHG6PDH（U/104cell）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×109×V反總]÷(V樣本×500÷V提取)÷T=1.286×（ΔA測定-ΔA空白）εPH6.22×103L/mo/cmd1mL1cmV2×10-4LV0.01mLT5minV1mLCprg/mL：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬；109：單位換算系數(shù)，1mol=109nmol。用96孔板測定的計(jì)算公式如下1、血清（漿）G6PDH活力的計(jì)算：單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘生成1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。G6PDH（U/mL）=[（ΔA測定-ΔA空白）×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1072×（ΔA測定-ΔA空白）2、組織中G6PDH活力的計(jì)算：按樣本蛋白濃度計(jì)算：單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。G6PDH（U/mgprot）=[（ΔA測定-ΔA空白）×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣)÷T=1072×（ΔA測定-ΔA空白）÷Cpr按樣本質(zhì)量計(jì)算：單位的定義：每g組織每分鐘生成1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。G6PDH（U/g質(zhì)量）=[（ΔA測定-ΔA空白）×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V提取×W)÷T=1072×（ΔA測定-ΔA空白）÷W3、細(xì)菌或細(xì)胞中G6PDH活力的計(jì)算：按樣本蛋白濃度計(jì)算：mg1nmolNADPHG6PDH（U/mgprot）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×109×V反總]÷(V樣本×Cpr)÷T=1072×（ΔA測定-ΔA空白）÷Cpr按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：11nmolNADPHG6PDH（U/104cell）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×109×V反總]÷(V樣本×500÷V提取)÷T=2.144×（ΔA測定-ΔA空白）ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.6cm；V反總：反應(yīng)總體積，2×10-4L；V0.01mLT5minV1mLCprg/mL：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量，500萬；109：單位換算