制藥用水微生物檢查方法的驗(yàn)證課件

微生物檢查方法驗(yàn)證微生物檢查方法驗(yàn)證1

介紹內(nèi)容

一、微生物的基礎(chǔ)知識(shí)二、微生物檢查方法驗(yàn)證

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微生物基礎(chǔ)知識(shí)

微生物（microorganism,microbe）是一些肉眼看不見的微小生物的總稱。微生物（microorganism）包括細(xì)菌、支原體、螺旋體、衣原體、立克次體、病毒及真菌（霉菌、酵母菌和放線菌）等。微生物基礎(chǔ)知識(shí)微生物（3

微生物的特點(diǎn)

種類多分布廣迄今為止，我們知道的微生物約有10萬種，目前已知的種類只占地球上實(shí)際存在的微生物總數(shù)的20%。微生物的特點(diǎn)種類多4

微生物的特點(diǎn)

各體小，面積大物體的表面積和體積之比稱為表面積大腸埃希菌的表面積是人的30萬倍。

微生物的特點(diǎn)各5

微生物的特點(diǎn)吸收多轉(zhuǎn)化快如大腸埃希菌在合適條件下，每小時(shí)可以消耗相當(dāng)于自身重量2000倍的數(shù)量，而人體則需要40年之久。

微生物的特點(diǎn)吸6

微生物的特點(diǎn)適應(yīng)強(qiáng)易變異多數(shù)細(xì)菌能耐0～－196℃的低溫；硫細(xì)菌可在250～300℃的高溫條件下正常生長(zhǎng)；一些嗜鹽細(xì)菌甚至能在飽和鹽水中正常生活；產(chǎn)芽孢細(xì)菌和真菌孢子在干燥條件下能保藏幾十年、幾百年。微生物的特點(diǎn)適7微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)

微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等分為三大類：原核細(xì)胞型：細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體等真核細(xì)胞型：真菌非細(xì)胞型：病毒噬菌體

微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及8細(xì)菌的繁殖

細(xì)菌（bacterium）屬于原核細(xì)胞型微生物，其特點(diǎn)是具有細(xì)胞壁、原始的核質(zhì)，以二分裂方式繁殖。細(xì)菌的9

細(xì)菌的形態(tài)

⒈細(xì)菌體積微小，是無色半透明的，用肉眼直接觀察難以看到，其結(jié)構(gòu)和形狀須經(jīng)過顯微鏡放大數(shù)百倍至上千倍才能觀察。⒉一般以微米（μm）作為測(cè)量單位。⒊在細(xì)菌學(xué)中，按其形態(tài)可分為球菌、桿菌、弧菌和螺桿菌。⒋經(jīng)革蘭染色法（Gramstain）可將細(xì)菌分成兩大類：即革蘭陽性菌（G+）和革蘭陰性菌（G-）。

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真菌（fungus；eumycetes）是具有真核和細(xì)胞壁的生物。種類很多，已報(bào)道的種超過10萬個(gè)。大多是由纖細(xì)管狀菌絲構(gòu)成的菌絲體。許多菌絲在一起統(tǒng)稱菌絲體。菌絲體在基質(zhì)上生長(zhǎng)的形態(tài)稱為菌落。真菌（fungus；eumycetes）11

真菌的形態(tài)具有多樣性，大小不一，大的用肉眼可以看到，小的用普通光學(xué)顯微鏡放大數(shù)倍乃至千倍方可觀察到。其形態(tài)分單細(xì)胞、多細(xì)胞，單細(xì)胞呈圓形或卵圓形，如酵母菌（yeast）。多細(xì)胞由菌絲和孢子組成，并交織成團(tuán)。真菌的形態(tài)具有多樣性，大小不一，大的用肉眼可以看到，小12

藥品污染常見的真菌

毛霉屬、根霉屬、曲霉屬、青霉屬、木霉屬一、毛霉屬（MucorMicheliexFries）

毛霉屬在自然界分布很廣，常用于發(fā)酵工業(yè)。并引起水分高的糧食及食品的霉?fàn)€變質(zhì)。藥品污染常見的真菌毛霉屬、根霉屬、曲霉13根霉屬（RhizopusEhrenberg）

根霉屬?gòu)V泛應(yīng)用于發(fā)酵工業(yè)，在潮濕的糧食及食品上能迅速蔓延生長(zhǎng)，引起糧食及食品的腐爛。根霉屬（RhizopusEhrenberg）根霉屬?gòu)V泛14曲霉屬（Aspergillus）

曲霉屬的菌絲無色、淡色或表面凝聚有色物質(zhì)，為有隔的多細(xì)胞。本屬的常見產(chǎn)毒霉菌有8個(gè)種，具有強(qiáng)烈的致癌性。

曲霉屬（Aspergillus）15

青霉屬菌絲無色或有色，為有隔的多細(xì)胞。分生孢子梗從菌絲垂直生出，無足細(xì)胞，頂端不膨大，無頂囊，產(chǎn)生一輪至數(shù)輪分叉，在最后一級(jí)分枝的小梗上，長(zhǎng)出成串的分生孢子，形似掃帚狀，稱為帚狀枝。本屬的常見產(chǎn)毒霉菌有9個(gè)種，其中展青霉可產(chǎn)生展青霉素，是一種神經(jīng)毒素，并具有致畸、致突變和致癌性；

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霉菌菌落形態(tài)霉菌菌落形態(tài)17

霉菌在孟加拉紅培養(yǎng)基上的形態(tài)霉菌在孟加拉紅培養(yǎng)基上的形態(tài)18

酵母菌顯微鏡下形態(tài)酵母菌顯微鏡下形態(tài)19

微生物檢查法微生物限度檢查方法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。檢查方法多用平皿法、薄膜過濾法、涂抹法和MPN法。

微生物檢查法微生20檢查方法的驗(yàn)證

試驗(yàn)環(huán)境

無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。檢驗(yàn)依據(jù)單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。-2010版藥典

檢查方法的驗(yàn)證21

隔離系統(tǒng)的應(yīng)用

應(yīng)用隔離系統(tǒng)重要的目的⒈是保護(hù)產(chǎn)品免受外源性污染保證無菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，實(shí)現(xiàn)一次檢出的要求。⒉是保護(hù)操作人員安全。隔離系統(tǒng)應(yīng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)還需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。隔離系統(tǒng)的應(yīng)用22

方法驗(yàn)證的必要性⒈為保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性，真實(shí)性，選擇正確的檢驗(yàn)方法是至關(guān)重要的。因此試驗(yàn)前必須對(duì)選擇的方法進(jìn)行驗(yàn)證。⒉證明所采用的方法是適宜的，確認(rèn)所采用的方法適宜于被檢供試品的微生物污染的檢驗(yàn)。

方法驗(yàn)證的必要性23

檢驗(yàn)結(jié)果的影響因素⒈供試品的組分抑菌劑、增溶劑、乳化劑及抗氧化劑，這些組分在一定濃度下對(duì)微生物起一定的抑制作用也可對(duì)污染菌造成損傷。⒉環(huán)境影響不同類型的微生物及不同的存活狀態(tài)對(duì)環(huán)境的抗性是不同的。⒊檢驗(yàn)方法⒋檢驗(yàn)條件如培養(yǎng)基的質(zhì)量、檢驗(yàn)人員的操作誤差等。檢驗(yàn)結(jié)果的影響因素⒈供試品24

試驗(yàn)全方面驗(yàn)證

如試驗(yàn)環(huán)境，培養(yǎng)基，供試液的制備，滅菌方法等全部進(jìn)行驗(yàn)證。當(dāng)驗(yàn)證試驗(yàn)符合要求時(shí)，就可認(rèn)為在該試驗(yàn)條件下該供試品對(duì)微生物無抑菌作用或抑菌作用可忽略不計(jì)，供試品檢驗(yàn)結(jié)果可真實(shí)的體現(xiàn)。試驗(yàn)全方面驗(yàn)證25

驗(yàn)證方法菌液制備50～100cfu/ml。驗(yàn)證方法試驗(yàn)組、菌液組、供試品對(duì)照組、釋劑對(duì)照組。結(jié)果判斷供試品組、對(duì)照組、稀釋劑對(duì)照組的菌回收率均不低70%。驗(yàn)證方法菌液制備50～100cfu/ml。26

驗(yàn)證方法

⑴按供試液的制備和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)所規(guī)定的方法及下列要求進(jìn)行。⑵對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。⑶驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。驗(yàn)證方法27試驗(yàn)菌株大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、枯草桿菌。菌液制備

同計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查。試驗(yàn)菌株大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、28

（1）試驗(yàn)組

①平皿法

取最低稀釋級(jí)供試液1ml和50～100cfu試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基(平行制備2個(gè)平皿)，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。

②薄膜過濾法

取最低稀釋級(jí)供試液，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入50～100cfu試驗(yàn)菌，過濾，按薄膜過濾法測(cè)定其菌數(shù)。（1）試驗(yàn)組29（2）菌液組所加的試驗(yàn)菌數(shù)。（3）供試品對(duì)照組測(cè)定供試品本底菌數(shù)。（4）稀釋劑對(duì)照組用相應(yīng)的稀釋液替代供試品，加入試驗(yàn)菌按試驗(yàn)組測(cè)定其菌數(shù)。考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。（2）菌液組所加的試驗(yàn)菌數(shù)。30謝謝謝謝31微生物檢查方法驗(yàn)證微生物檢查方法驗(yàn)證32

介紹內(nèi)容

一、微生物的基礎(chǔ)知識(shí)二、微生物檢查方法驗(yàn)證

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微生物基礎(chǔ)知識(shí)

微生物（microorganism,microbe）是一些肉眼看不見的微小生物的總稱。微生物（microorganism）包括細(xì)菌、支原體、螺旋體、衣原體、立克次體、病毒及真菌（霉菌、酵母菌和放線菌）等。微生物基礎(chǔ)知識(shí)微生物（34

微生物的特點(diǎn)

種類多分布廣迄今為止，我們知道的微生物約有10萬種，目前已知的種類只占地球上實(shí)際存在的微生物總數(shù)的20%。微生物的特點(diǎn)種類多35

微生物的特點(diǎn)

各體小，面積大物體的表面積和體積之比稱為表面積大腸埃希菌的表面積是人的30萬倍。

微生物的特點(diǎn)各36

微生物的特點(diǎn)吸收多轉(zhuǎn)化快如大腸埃希菌在合適條件下，每小時(shí)可以消耗相當(dāng)于自身重量2000倍的數(shù)量，而人體則需要40年之久。

微生物的特點(diǎn)吸37

微生物的特點(diǎn)適應(yīng)強(qiáng)易變異多數(shù)細(xì)菌能耐0～－196℃的低溫；硫細(xì)菌可在250～300℃的高溫條件下正常生長(zhǎng)；一些嗜鹽細(xì)菌甚至能在飽和鹽水中正常生活；產(chǎn)芽孢細(xì)菌和真菌孢子在干燥條件下能保藏幾十年、幾百年。微生物的特點(diǎn)適38微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)

微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等分為三大類：原核細(xì)胞型：細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體等真核細(xì)胞型：真菌非細(xì)胞型：病毒噬菌體

微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及39細(xì)菌的繁殖

細(xì)菌（bacterium）屬于原核細(xì)胞型微生物，其特點(diǎn)是具有細(xì)胞壁、原始的核質(zhì)，以二分裂方式繁殖。細(xì)菌的40

細(xì)菌的形態(tài)

⒈細(xì)菌體積微小，是無色半透明的，用肉眼直接觀察難以看到，其結(jié)構(gòu)和形狀須經(jīng)過顯微鏡放大數(shù)百倍至上千倍才能觀察。⒉一般以微米（μm）作為測(cè)量單位。⒊在細(xì)菌學(xué)中，按其形態(tài)可分為球菌、桿菌、弧菌和螺桿菌。⒋經(jīng)革蘭染色法（Gramstain）可將細(xì)菌分成兩大類：即革蘭陽性菌（G+）和革蘭陰性菌（G-）。

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真菌（fungus；eumycetes）是具有真核和細(xì)胞壁的生物。種類很多，已報(bào)道的種超過10萬個(gè)。大多是由纖細(xì)管狀菌絲構(gòu)成的菌絲體。許多菌絲在一起統(tǒng)稱菌絲體。菌絲體在基質(zhì)上生長(zhǎng)的形態(tài)稱為菌落。真菌（fungus；eumycetes）42

真菌的形態(tài)具有多樣性，大小不一，大的用肉眼可以看到，小的用普通光學(xué)顯微鏡放大數(shù)倍乃至千倍方可觀察到。其形態(tài)分單細(xì)胞、多細(xì)胞，單細(xì)胞呈圓形或卵圓形，如酵母菌（yeast）。多細(xì)胞由菌絲和孢子組成，并交織成團(tuán)。真菌的形態(tài)具有多樣性，大小不一，大的用肉眼可以看到，小43

藥品污染常見的真菌

毛霉屬、根霉屬、曲霉屬、青霉屬、木霉屬一、毛霉屬（MucorMicheliexFries）

毛霉屬在自然界分布很廣，常用于發(fā)酵工業(yè)。并引起水分高的糧食及食品的霉?fàn)€變質(zhì)。藥品污染常見的真菌毛霉屬、根霉屬、曲霉44根霉屬（RhizopusEhrenberg）

根霉屬?gòu)V泛應(yīng)用于發(fā)酵工業(yè)，在潮濕的糧食及食品上能迅速蔓延生長(zhǎng)，引起糧食及食品的腐爛。根霉屬（RhizopusEhrenberg）根霉屬?gòu)V泛45曲霉屬（Aspergillus）

曲霉屬的菌絲無色、淡色或表面凝聚有色物質(zhì)，為有隔的多細(xì)胞。本屬的常見產(chǎn)毒霉菌有8個(gè)種，具有強(qiáng)烈的致癌性。

曲霉屬（Aspergillus）46

青霉屬菌絲無色或有色，為有隔的多細(xì)胞。分生孢子梗從菌絲垂直生出，無足細(xì)胞，頂端不膨大，無頂囊，產(chǎn)生一輪至數(shù)輪分叉，在最后一級(jí)分枝的小梗上，長(zhǎng)出成串的分生孢子，形似掃帚狀，稱為帚狀枝。本屬的常見產(chǎn)毒霉菌有9個(gè)種，其中展青霉可產(chǎn)生展青霉素，是一種神經(jīng)毒素，并具有致畸、致突變和致癌性；

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霉菌菌落形態(tài)霉菌菌落形態(tài)48

霉菌在孟加拉紅培養(yǎng)基上的形態(tài)霉菌在孟加拉紅培養(yǎng)基上的形態(tài)49

酵母菌顯微鏡下形態(tài)酵母菌顯微鏡下形態(tài)50

微生物檢查法微生物限度檢查方法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。檢查方法多用平皿法、薄膜過濾法、涂抹法和MPN法。

微生物檢查法微生51檢查方法的驗(yàn)證

試驗(yàn)環(huán)境

無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。檢驗(yàn)依據(jù)單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。-2010版藥典

檢查方法的驗(yàn)證52

隔離系統(tǒng)的應(yīng)用

應(yīng)用隔離系統(tǒng)重要的目的⒈是保護(hù)產(chǎn)品免受外源性污染保證無菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，實(shí)現(xiàn)一次檢出的要求。⒉是保護(hù)操作人員安全。隔離系統(tǒng)應(yīng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)還需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。隔離系統(tǒng)的應(yīng)用53

方法驗(yàn)證的必要性⒈為保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性，真實(shí)性，選擇正確的檢驗(yàn)方法是至關(guān)重要的。因此試驗(yàn)前必須對(duì)選擇的方法進(jìn)行驗(yàn)證。⒉證明所采用的方法是適宜的，確認(rèn)所采用的方法適宜于被檢供試品的微生物污染的檢驗(yàn)。

方法驗(yàn)證的必要性54

檢驗(yàn)結(jié)果的影響因素⒈供試品的組分抑菌劑、增溶劑、乳化劑及抗氧化劑，這些組分在一定濃度下對(duì)微生物起一定的抑制作用也可對(duì)污染菌造成損傷。⒉環(huán)境影響不同類型的微生物及不同的存活狀態(tài)對(duì)環(huán)境的抗性是不同的。⒊檢驗(yàn)方法⒋檢驗(yàn)條件如培養(yǎng)基的質(zhì)