生化分析儀的基礎(chǔ)與應(yīng)用課件完整版

生化分析離不開生化分析儀。所謂生化分析一般是指以吸光光度分析為基礎(chǔ)的（有的包含離子選擇電極等測定方法）、具有樣品取樣及加試劑、混合、保溫反應(yīng)等測定。分析過程監(jiān)控和數(shù)據(jù)處理及輸出能力的半自動或全自動儀器。它們的分析方法都以儀器和試劑為基礎(chǔ)，以方法學(xué)為指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)來規(guī)范，以試驗參數(shù)來聯(lián)系體現(xiàn)。所以，首先必須了解儀器、試劑和方法學(xué)的原理及特點，其次是利用方法學(xué)評價對儀器、試劑及參數(shù)在實踐中作評價，以保證分析的精密度和準(zhǔn)確度，提高成本效益。生化分析離不開生化分析儀。所謂生化分析一般是指以吸光光度分析1實驗證明，單色光經(jīng)過有色溶液時，透過溶液的光強度不僅與溶液的濃度有關(guān)，而且還與溶液的厚度以及溶液本身對光的吸收性能有關(guān)。其規(guī)律可用下式表示為

A＝KCL

式中：A（E）——吸光度（或叫做光密度，也可用D表示）；

K——某溶液的消光（吸收）系數(shù)；

C——溶液的濃度；

L——光程，即溶液的厚度。可見、收光譜法的定量基礎(chǔ)是朗伯比爾（Lambert-Beer）定律：

A=lgIo/It=-lgT=lg1/T實驗證明，單色光經(jīng)過有色溶液時，透過溶液的光強度不僅與溶液的2即當(dāng)一束強度為L的平行單色光通過一個含有濃度為C的吸光物質(zhì)、厚度為L的吸收他時，光的一部分被吸收，光強度從IO減小至It。當(dāng)吸光系數(shù)k一定時，透過光與濃度或厚度呈指數(shù)函數(shù)關(guān)系，但吸光度（absorbance，A）與濃度或厚度呈簡單的正比關(guān)系。在濃度、厚度、單色光波長、溶劑及其溫度等相同條件下，不同吸光物質(zhì)的吸光度不同，即它們的吸光系數(shù)不同。即當(dāng)一束強度為L的平行單色光通過一個含有濃度為C的吸光物質(zhì)、3是物質(zhì)的特性常數(shù)，它只和該物質(zhì)分子在基態(tài)和激發(fā)態(tài)之間的躍遷幾率有關(guān)。它的物理意義是吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時的吸光度，常用的表示方式是摩爾吸光系數(shù)（molarabsorptivity）。摩爾吸光系數(shù)即1摩爾濃度的溶液在厚度為1cm時的吸光度。在吸光度與濃度之間的直線關(guān)系中，吸光系數(shù)是斜率，其值愈大，測定靈敏度愈高。是物質(zhì)的特性常數(shù)，它只和該物質(zhì)分子在基態(tài)和激發(fā)態(tài)之間的躍遷幾4應(yīng)用注意點：

1．由于物質(zhì)對不同波長的光有不同的吸光系數(shù)，Beer定律成立的重要前提之一是單色光，即只有一種波長的光。但在實際測定中，入射光常常并非嚴(yán)格的單色光，常有不同波長的輻射同時存在。此種多色輻射是使測定中吸光度的變化偏離Beer定律（常為負偏離）的主要光學(xué)影響因素。單色光的純度可用譜帶寬度（bandwidth）衡量。應(yīng)用注意點：5單色光源是用分光光度計由單色器或濾光片從連續(xù)光譜的多色光中選擇的、最大吸收波長λmax在內(nèi)的一小段波長范圍的復(fù)合光。以譜帶寬度較小、吸收峰較寬的λmax作為測定條件。

2．Beer定律一般適用于稀溶液的測定有兩層含義：被測物的濃度不宜過大，其吸光度應(yīng)在相對測量誤差較小的區(qū)域；溶液在反應(yīng)中存在化學(xué)平衡，受濃度、pH、溶劑和溫度等因素的影響。單色光源是用分光光度計由單色器或濾光片從連續(xù)光譜的多色光中選63．介質(zhì)不均勻引起偏離當(dāng)待測試液是膠體溶液、乳濁液或懸浮液時，入射光因一部分散射損失，使透光率減小，實測吸光度增加。比濁法及免疫濁度反應(yīng)的特點比濁法與可見、紫外吸收光譜法不同，它們不是測定澄清溶液而是測定懸浮液或膠體溶液中物質(zhì)的濃度，分析的光學(xué)基礎(chǔ)是分散顆粒對光的反射、折射、散射和吸收等多種作用。生化分析儀通過免疫比濁法等技術(shù)，架起臨床生化與現(xiàn)代免疫技術(shù)的橋梁，免疫化學(xué)法的應(yīng)用日益廣泛。3．介質(zhì)不均勻引起偏離當(dāng)待測試液是膠體溶液、乳濁液或70005ABS趨向：+/-0.采用非儀器配套的試劑及校準(zhǔn)品體系時，參數(shù)修改要慎重。(3）偏離線性期：隨著反應(yīng)時間的延長，反應(yīng)體系中的底物不斷消耗，酶不能被其飽和，以及可逆反應(yīng)、產(chǎn)物抑制、酶變性失活等原因，致酶促反應(yīng)速度下降，產(chǎn)物或底物的變化曲線漸趨平坦，這一時期稱為偏離線性期，亦稱一級反應(yīng)期。如果初始階段不穩(wěn)定的話，復(fù)位線就是將外部點除去49%至100%計算得來的。此種多色輻射是使測定中吸光度的變化偏離Beer定律（常為負偏離）的主要光學(xué)影響因素。反應(yīng)總是在兩個階段產(chǎn)生：第一階段（樣本空白）儀器從第一種試劑和樣本（R1+S）所產(chǎn)生反應(yīng)的中讀出最后的吸光率（A1），從第二種試劑和樣本（R2+S）所產(chǎn)生反應(yīng)的中讀出最后的吸光率（A2）。由IFCC/IUPAC/WHO/三機構(gòu)于1999年在瑞典斯德哥爾摩舉辦的“建立全球檢驗醫(yī)學(xué)質(zhì)量規(guī)范的策略會議”上提出的一致性聲明（草案），即本次大會達成一致的主要結(jié)論是：抗原抗體比例合適時，復(fù)合物生成量達到峰值；(四)酶促反應(yīng)的特點：在一些特定情況下產(chǎn)生一立方添加以解0005ABS/小時光徑：7毫米光源：鹵素?zé)艄β剩?5W電源：12V直流電持續(xù)時間:2000小時如HITACHI7170在P1至P34周期為10分鐘具體工作流程如圖2-2所示膠乳增強免疫濁度法（latexenhancedturhidimetricimmunoassay）由于采用顆粒較大、折光性強的膠乳，將抗體經(jīng)吸附或共價交聯(lián)反應(yīng)固定于膠乳表面，增加抗原抗體凝聚體積，減少透過光，使靈敏度提高到近1ng／ml水平。采用非儀器配套的試劑及校準(zhǔn)品體系時，參數(shù)修改要慎重。散射光強度與懸浮液或膠體溶液中的顆粒質(zhì)點大小、入射光波長大小及二者的比例有關(guān)。離心式生化儀讀數(shù)間隔時間短，監(jiān)測時間也短。在單試劑測定中，樣品與試劑的總體積不得少于此參數(shù)。這種是雙試劑終點法反應(yīng)。在反應(yīng)中選擇吸光率變化來檢測。1．比濁法的分類及原理在光源的光路方向上測量透射光（實際包括透射光和散射光）強度與入射光強度的比值和被檢溶液中顆粒濃度間的關(guān)系，稱為透射比濁法（turbidimetry）。在光路的一定角度（一般為5o－90o）方向上測量散射光強度和被檢溶液中顆粒濃度間的關(guān)系，稱為散射比濁法（nephelometry）。透射比濁法的計算公式是：

In（IO／I）＝τb令τ=2．3kclgIo/I＝kbc0005ABS趨向：+/-0.1．比濁法的分類及8

即當(dāng)一束強度為Io的平行光通過一個散射顆粒濃度為c混濁介質(zhì)厚度為b的稀的懸浮液后，人射光被吸收和散射，光強度衰減至I，在濁度系數(shù)為τ時，透過率與顆粒濃度呈線性關(guān)系。散射光強度與懸浮液或膠體溶液中的顆粒質(zhì)點大小、入射光波長大小及二者的比例有關(guān)。顆粒直徑接近或大于光源波長時，常呈透射光和光路上的向前散射光，其散射光強度與入射光強度的關(guān)系遵從Mie散射理論，光散射隨波長的變化小。顆粒遠小于光源波長（d小于0．05λ）時常呈偏離光路方向、900對稱分布的散射光，其散射光強度與人射光強度的關(guān)系符合Rayleigh散射定律，波長愈短，散射光愈強。即當(dāng)一束強度為Io的平行光通過一個散射顆粒濃度為c混濁介9

一般比濁法的靈敏度不如可見、紫外吸收光譜法，但免疫濁度法的敏感度約為50ng／rnl。聚合劑（如聚乙二醇6000－10000）可提高免疫復(fù)合物的形成速度。膠乳增強免疫濁度法（latexenhancedturhidimetricimmunoassay）由于采用顆粒較大、折光性強的膠乳，將抗體經(jīng)吸附或共價交聯(lián)反應(yīng)固定于膠乳表面，增加抗原抗體凝聚體積，減少透過光，使靈敏度提高到近1ng／ml水平。散射比濁法的靈敏度比透射比濁法高，但干擾因素較多。比濁法的精密度相近，變異系數(shù)為1％－5．5％。目前，由于技術(shù)發(fā)展，兩種比濁法的靈敏度和特異性已接近，而全自動生化儀的自動化程度和精密度要勝于專用散射比濁儀，故透射免疫比濁法在臨床上的應(yīng)用日益廣泛。速率法的靈敏度和特異性都優(yōu)于終點法，但終點法的穩(wěn)定性較好。一般比濁法的靈敏度不如可見、紫外吸收光譜法，但免疫濁度法的10在儀器光度讀數(shù)要用于結(jié)果計算時，反應(yīng)液液面高度不低于光度計光徑的最小體積。第二階段反應(yīng)產(chǎn)生于第一種試劑和樣本和第二種試劑（R1+S+R2）之間。二根據(jù)臨床觀察制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察總誤差概念：在常規(guī)測定中每個標(biāo)本測定結(jié)果均有誤差，這個誤差包括了對方法學(xué)評價時的各種類型的隨機誤差和系統(tǒng)誤差，因此測定結(jié)果與真值的差異是隨機誤差RE和系統(tǒng)誤差SE的總和，即總誤差TE。膠乳增強免疫濁度法（latexenhancedturhidimetricimmunoassay）由于采用顆粒較大、折光性強的膠乳，將抗體經(jīng)吸附或共價交聯(lián)反應(yīng)固定于膠乳表面，增加抗原抗體凝聚體積，減少透過光，使靈敏度提高到近1ng／ml水平。四根據(jù)實驗室技能狀態(tài)制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察在有的儀器中，它以反應(yīng)體積的下限表示，有的則專門標(biāo)明最小反應(yīng)體積。在計算中所使用的最后吸光率是從兩個階段的吸光率數(shù)值差中得到：反之，產(chǎn)物從無到有，只要測定方法靈敏，準(zhǔn)確度可以很高。多數(shù)儀器為10分鐘左右，這對試劑提出了較高要求。自動預(yù)編程序自動執(zhí)行相關(guān)預(yù)編程序或按指令根據(jù)反應(yīng)物的污染力設(shè)置所需的清洗次數(shù)=因數(shù)x（A3—A2）（A3—A2）=△A/分鐘目前，由于技術(shù)發(fā)展，兩種比濁法的靈敏度和特異性已接近，而全自動生化儀的自動化程度和精密度要勝于專用散射比濁儀，故透射免疫比濁法在臨床上的應(yīng)用日益廣泛。另外，在酶偶聯(lián)反應(yīng)中，指示酶的反應(yīng)必須有一定量測定酶的產(chǎn)物堆積才能進行；采用兩點法或速率法可減少干擾，但具體取多長的延遲時間，應(yīng)根據(jù)試劑和儀器讀數(shù)特點來評價決定。操作模式“任選式”二根據(jù)臨床觀察制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察如γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）設(shè)定30－60秒。=因數(shù)x（A3—A2）（A3—A2）=△A/分鐘如γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）設(shè)定30－60秒。=因數(shù)x（A3—A2）（A3—A2）=△A/分鐘2．免疫濁度反應(yīng)的特點抗原抗體反應(yīng)與其他化學(xué)反應(yīng)不同，在免疫濁度反應(yīng)中，抗原抗體復(fù)合物的生成量和生成顆粒的大小，與反應(yīng)體系中抗原抗體的比例關(guān)系極大抗原相對不足時，生成的免疫復(fù)合物沉淀量少；抗原抗體比例合適時，復(fù)合物生成量達到峰值；抗原過量時，復(fù)合物反而再溶解，沉淀量下降。臨床上免疫比濁法多用抗體測定抗原，保證抗體足量、防止抗原過量是基本的方法學(xué)條件。要使在臨床常見的高抗原濃度范圍內(nèi)（至少高于正常參考上限50％）抗體也足以與之反應(yīng)，只有這樣，抗原抗體復(fù)合物的生成量才隨抗原的增加而遞增，光散射的強度才與抗原量成比例?？贵w不足時，測定結(jié)果往往偏低。在儀器光度讀數(shù)要用于結(jié)果計算時，反應(yīng)液液面高度不低于光度計光113．應(yīng)用注意點（l）若懸浮顆粒本身具有特征吸收，則吸收作用是主要的，宜選擇最大吸收波長作比濁測定；若懸浮顆粒本身無特征吸收而介質(zhì)對人射光有吸收，則測定必須選擇在高透光度的波長區(qū)。若懸浮顆粒小（粒徑小于35nm），溶液濁度小，透射比大于90%，不宜選用透射比濁法，應(yīng)選擇散射比濁法測定。3．應(yīng)用注意點12（2）透射比濁時，35－100nm大小的微粒在波長290－410nrn下有最大吸收峰，免疫復(fù)合物的大小大致在此范圍。散射比濁時，較大的散射光角度適用于35－100nrn大小的微粒，較小的散射光角度適用于100－800nrn間的微粒。血漿中的白蛋白、β脂蛋白、免疫球蛋白等微粒直徑多在50nrn以下，其散射光是對稱的。IgM、乳糜顆粒、免疫反應(yīng)初期產(chǎn)生的抗原抗體復(fù)合物等顆粒的直徑在50-400nrn，都屬顆粒直徑接近或大于光源波長這一類，其散射光是不對稱的。（2）透射比濁時，35－100nm大小的微粒在波長290－413

（3）非特異性光散射的影響：免疫濁度法常受內(nèi)源性光散射的干擾。血清中的乳糜微粒、VLDL、LDL以及反應(yīng)體系中的顆粒都會產(chǎn)生雜散光，影響比濁靈敏度。為避免上述影響，樣品組分的比例，透射比濁法宜在3％以下，散射比濁法應(yīng)在0．5％以下。所用的試劑要澄清，必要時經(jīng)0．22μm濾膜過濾。應(yīng)作試劑空白和樣品空白。（3）非特異性光散射的影響：免疫濁度法常受內(nèi)源性光散射的干14（4）帶現(xiàn)象（zonephenomenon）的影響：抗原或抗體過剩使免疫復(fù)合物部分或全部解離的現(xiàn)象，稱為帶現(xiàn)象。免疫濁度測定中常表現(xiàn)為抗原過剩時免疫復(fù)合物形成的量反而下降，又稱鉤狀效應(yīng)（hookeffect）?？朔k法主要是：采用高質(zhì)量試劑，設(shè)置儀器監(jiān)測，減少血清用量。（5）偽濁度的影響：即不是特異性抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的免疫復(fù)合物形成的濁度。形成原因復(fù)雜，主要是抗血清存在的非特異性交叉反應(yīng)性雜抗體成分，增濁劑濃度過高和反應(yīng)時間掌握不當(dāng)，樣品本身的濁度處理不當(dāng)，試劑污染和變質(zhì)，比色杯不潔，等等。（4）帶現(xiàn)象（zonephenomenon）的影響：15（6）校準(zhǔn)與計算：應(yīng)選用適當(dāng)?shù)男?zhǔn)品及濃度作劑量反應(yīng)曲線。曲線往往有截距或呈S形，不成直線。自動生化分析儀多推薦5點或6點定標(biāo)，然后選擇適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)模型作曲線擬合，如Ingit－Log變換或y＝d＋cx＋bx2＋ax3的3次方程回歸曲線。更換試劑批號時也必須重新校準(zhǔn)曲線。（6）校準(zhǔn)與計算：應(yīng)選用適當(dāng)?shù)男?zhǔn)品及濃度作劑量反應(yīng)曲線。曲16（三）均相酶免疫分析酶聯(lián)免疫分析利用免疫反應(yīng)的高度特異性和酶促反應(yīng)的高度敏感性對抗原或抗體進行測定，均相酶免疫分析（homogeneousenzymeimmunoassay）是其中的一類。在均相酶免疫分析中，最常用的是酶放大免疫分析（enzymemultipliedimmunoassay，EMIT）。其原理是：當(dāng)酶標(biāo)抗原（半抗原）與相應(yīng)抗體結(jié)合，生成酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物后，對標(biāo)記酶產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，使酶的構(gòu)象改變，酶活性抑制、恢復(fù)或增強，酶催化的信號隨之發(fā)生改變；（三）均相酶免疫分析17酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物與游離酶標(biāo)抗原同處一相，不需分離步驟就可測定酶活性，計算出被檢抗原（半抗原）的含量。常采用酶標(biāo)抗原與未知抗原對特異性抗體的競爭反應(yīng)：抗原與標(biāo)記酶結(jié)合使酶的活性抑制或激活，再與相應(yīng)抗體結(jié)合后其酶活性被激活或抑制，未知抗原和酶標(biāo)抗原與抗體形成競爭體系。酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物與游離酶標(biāo)抗原同處一相，不需分離步驟就可測18

均相酶免疫分析目前主要用于檢測小分子半抗原，如某些激素、藥物或代謝產(chǎn)物，也逐漸用于大分子物質(zhì)，如血清IgG測定。測定藥物的靈敏度一般為0．5－2μg／ml。方法簡便、快速，準(zhǔn)確性和重復(fù)性好，但影響酶活性的因素也必然影響酶聯(lián)免疫分析?？寺∶腹w免疫分析（clonedenzy。donorimmunoassay，CEDIA）是有發(fā)展前途的均相酶免疫技術(shù)，靈敏度比一般酶免疫法高。其原理為：用基因工程技術(shù)制備稱為酶供體（ED）和酶受體（EA）的兩肽段。均相酶免疫分析目前主要用于檢測小分子半抗原，如某些激素、藥19ED和EA獨立存在時無酶活性，但在合適條件下可以自動裝配并聚合成具有酶活性的四聚體。ED標(biāo)記申抗原小分子或抗原大分子后，不影響其與EA的裝配，但當(dāng)相應(yīng)抗體存在時，抗原抗體結(jié)合后形成的空間位阻使酶的裝配受阻，使用競爭結(jié)合模式即可檢測末知的半抗原或抗原。ED和EA獨立存在時無酶活性，但在合適條件下可以自動裝配并聚20(四)酶促反應(yīng)的特點：由酶催化的反應(yīng)稱為酶促反應(yīng)。以酶作為試劑來進行分析測定，或通過酶促反應(yīng)測定待測酶的活性，具有高效、專一、溫和、靈敏的特點，廣泛用于生化分析。試劑中的酶活性（濃度）在反應(yīng)過程中始終不變。下面僅對酶活性測定知識作介紹。

1．酶活性測定生物體內(nèi)含有成千種酶，存在于細胞中。當(dāng)細胞通透性增加或細胞破裂時，會使體液中酶濃度增加，(四)酶促反應(yīng)的特點：21試劑中的酶活性（濃度）在反應(yīng)過程中始終不變?？寺∶腹w免疫分析（clonedenzy。（l）試劑組成：在酶活性的連續(xù)監(jiān)測法時，若試劑含工具酶數(shù)量多、偶聯(lián)反應(yīng)多，則激活反應(yīng)時間一般較長，延遲時間也較長，如肌酸激酶（NAC法）延遲時間常設(shè)置120－180秒；目前，由于技術(shù)發(fā)展，兩種比濁法的靈敏度和特異性已接近，而全自動生化儀的自動化程度和精密度要勝于專用散射比濁儀，故透射免疫比濁法在臨床上的應(yīng)用日益廣泛。（1）延滯期（lagphase）：底物與酶混合、反應(yīng)啟動后的一段短時間內(nèi)，產(chǎn)物從零開始逐漸生成，處于較低水平，反應(yīng)速度較低，未達到待測酶最大反應(yīng)速度；1．反應(yīng)時間（reactfontime）2．Beer定律一般適用于稀溶液的測定有兩層含義：被測物的濃度不宜過大，其吸光度應(yīng)在相對測量誤差較小的區(qū)域；“最小平方法”：在非線性反應(yīng)中使用，產(chǎn)生一個最小平方近似值以在等待時間孵育時間讀數(shù)時間方法臨床化學(xué)和免疫化學(xué)測試（1）基于生物變異分量的數(shù)據(jù);了解生化分析儀基本參數(shù)的原理，有利于儀器、試劑的正確使用，有助于正確分析和處理測定數(shù)據(jù)。在單試劑測定中，樣品與試劑的總體積不得少于此參數(shù)。（3）校準(zhǔn)的檢查：要充分利用儀器設(shè)置的功能檢測校正曲線圖形、各校準(zhǔn)點吸光度值（不能忽略試劑空白值及空白速率值）計算K值等的波動情況，以及以往的比較。在單試劑測定中，樣品與試劑的總體積不得少于此參數(shù)。重點關(guān)注比色杯空白讀數(shù)點（CB）、加樣品點（S）、各試劑加液點（R、R2、…）、試劑空白讀數(shù)點（RB）、各測定讀數(shù)點（P）、各點時間間隔及周期總時間等。1．一般工作流程工作流程可以通過儀器的測定周期來考察。自動預(yù)編程序自動執(zhí)行相關(guān)預(yù)編程序或按指令單色光源是用分光光度計由單色器或濾光片從連續(xù)光譜的多色光中選擇的、最大吸收波長λmax在內(nèi)的一小段波長范圍的復(fù)合光。流動式生化儀讀數(shù)間隔時間一般較長。采用非儀器配套的試劑及校準(zhǔn)品體系時，參數(shù)修改要慎重。比濁法的精密度相近，變異系數(shù)為1％－5．5％。因此測定體液中特別是血液中酶濃度的變化有助于臨床診斷疾病、判斷預(yù)后和觀察療效。血液中的酶含量甚微，一般每毫升含量在微微克（Pg）到毫微克（ng）水平，因此要直接測定酶含量是非常困難的。雖然近年免疫學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，可以對某些酶直接進行測定，但目前臨床仍以測定酶活性間接推算酶的含量。酶活性的大小，是在一定條件下通過測定酶促反應(yīng)過程中單位時間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量引起的吸光度變化，即測定酶促反應(yīng)的速率來獲得的。試劑中的酶活性（濃度）在反應(yīng)過程中始終不變。因此測定體液中特22一般情況下，產(chǎn)物和底物的濃度變化是一致的，但測定產(chǎn)物的生成要比測定底物的減少為好。這是由于反應(yīng)體系中使用的底物往往是過量的，反應(yīng)時間通常又很短，尤其在酶活性很低時，底物減少量僅占加入量的很小比例，因此測定不易精確；反之，產(chǎn)物從無到有，只要測定方法靈敏，準(zhǔn)確度可以很高。所以，酶活性測定大多數(shù)采用測定產(chǎn)物生成速率的方法。2．酶促反應(yīng)三階段酶促反應(yīng)是一個可逆反應(yīng)，其反應(yīng)全過程的速率并不都與酶活性成正比。將酶促反應(yīng)過程中測得的產(chǎn)物或底物的變化量對時間作圖，得到酶促反應(yīng)時間進程曲線，一般情況下，產(chǎn)物和底物的濃度變化是一致的，但測定產(chǎn)物的生成要23

圖2-1

24圖中產(chǎn)物P或底物S的濃度變化曲線的斜率就代表酶反應(yīng)速率。酶促反應(yīng)一般分為三階段。（1）延滯期（lagphase）：底物與酶混合、反應(yīng)啟動后的一段短時間內(nèi)，產(chǎn)物從零開始逐漸生成，處于較低水平，反應(yīng)速度較低，未達到待測酶最大反應(yīng)速度；另外，在酶偶聯(lián)反應(yīng)中，指示酶的反應(yīng)必須有一定量測定酶的產(chǎn)物堆積才能進行；這些都使酶反應(yīng)要稍待一定時期后，吸光度才有明顯的線性變化，這一時期稱為延滯期。延滯期的長短不一，當(dāng)反應(yīng)體系中存在抑制劑或有干擾物質(zhì)參與的副反應(yīng)時，延滯期可延長；當(dāng)樣品酶活性過高或反應(yīng)體系中存在激動劑時，延滯期可縮短。圖中產(chǎn)物P或底物S的濃度變化曲線的斜率就代表酶反應(yīng)速率。酶促25在開始酶反應(yīng)（即待測樣品與基質(zhì)混合）之前，應(yīng)有一個預(yù)孵育期（pre－Incubationperiod），讓所有可能干擾測定的反應(yīng)充分進行，避免干擾待測酶活性。內(nèi)源性產(chǎn)物被工具酶催化消耗，內(nèi)源性底物也通過偶聯(lián)反應(yīng)充分消耗，然后加入底物啟動反應(yīng)。（2）線性期（linear。base）：在反間應(yīng)體系中底物大于酶飽和濃度的情況下，產(chǎn)物或底物的變化量隨反應(yīng)時間呈線性增減，即反應(yīng)速度（單位時間內(nèi)產(chǎn)物或底物的變化量）恒定不變，這一時期稱為線性期或恒態(tài)期，亦稱零級反應(yīng)期。在此期，反應(yīng)速度不受底物和產(chǎn)物濃度的影響，只與酶活性濃度呈線性關(guān)系。測定酶活性都在零級反應(yīng)期進行。在開始酶反應(yīng)（即待測樣品與基質(zhì)混合）之前，應(yīng)有一個預(yù)孵育期（26(3）偏離線性期：隨著反應(yīng)時間的延長，反應(yīng)體系中的底物不斷消耗，酶不能被其飽和，以及可逆反應(yīng)、產(chǎn)物抑制、酶變性失活等原因，致酶促反應(yīng)速度下降，產(chǎn)物或底物的變化曲線漸趨平坦，這一時期稱為偏離線性期，亦稱一級反應(yīng)期。在此期，反應(yīng)速度不僅與酶活性濃度有關(guān)，還受底物濃度影響，與底物濃度成正比，因此不能準(zhǔn)確反映酶的真正活性，產(chǎn)物濃度與反應(yīng)時間不呈線性關(guān)系。(3）偏離線性期：隨著反應(yīng)時間的延長，反應(yīng)體系中的底物不斷27

二、自動生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)及工作原理

(基本結(jié)構(gòu))1．按照反應(yīng)裝置的結(jié)構(gòu)，自動生化分析儀主要分為流動式（flowsystem）、分立式（discretesystem）兩大類。（l）流動式：指測定項目相同的各待測樣品與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)在同一管道流動的過程中完成，這是第一代自動生化分析儀。（2）分立式：指各待測樣品與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)都是在各自的反應(yīng)杯中完成的，其中有幾類分支。二、自動生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)及工作原理28l）典型分立式自動生化分析儀：此型儀器應(yīng)用最廣。

2）離心式自動生化分析儀：每個待測樣品都是在離心力的作用下，在各自的反應(yīng)槽內(nèi)與試劑混合，完成化學(xué)反應(yīng)并測定。由于混合、反應(yīng)和檢測幾乎同時完成，它的分析效率較高。

3）袋式自動生化分析儀：是以試劑袋來代替反應(yīng)杯和比色杯，每個待測樣品在各自的試劑袋內(nèi)反應(yīng)并測定。

4）固相試劑自動生化分析儀：亦稱為子化學(xué)式自動分析儀，是將試劑固相干膠片或濾紙片等載體上，每個待測樣品搞加在相應(yīng)試紙條上進行反應(yīng)及測定。操作快捷、便于攜帶是它的優(yōu)點。l）典型分立式自動生化分析儀：此型儀器應(yīng)用最廣。29生化分析儀的正確應(yīng)用只是掌握了測定技術(shù)原理還不夠，還需要對具體儀器的工作流程及測定計算方法有足夠了解。1．一般工作流程工作流程可以通過儀器的測定周期來考察。重點關(guān)注比色杯空白讀數(shù)點（CB）、加樣品點（S）、各試劑加液點（R、R2、…）、試劑空白讀數(shù)點（RB）、各測定讀數(shù)點（P）、各點時間間隔及周期總時間等。每個儀器一般都在反應(yīng)轉(zhuǎn)盤的固定位置和反應(yīng)測定周期的固定時間設(shè)置樣品、試劑和稀釋的加液位，以及（始點測定吸光度一始點空白吸光度）。如HITACHI7170在P1至P34周期為10分鐘具體工作流程如圖2-2所示生化分析儀的正確應(yīng)用只是掌握了測定技術(shù)原理還不夠，還需要對具30

圖2-2

312．?dāng)?shù)據(jù)處理計算方法儀器在各個吸光度讀數(shù)點讀取的吸光度數(shù)據(jù)，并不一定都納入濃度計算。儀器往往根據(jù)儀器定義和操作者設(shè)定的要求，對吸光度原始數(shù)據(jù)作計算處理，轉(zhuǎn)換成所謂的反應(yīng)數(shù)據(jù)，再按系數(shù)或公式作濃度計算。舉例如下：（1）HITACHI7170的終點法：測定點（AX）吸光度計算為（AX＋AX-l）／2，實際吸光度=吸光度數(shù)據(jù)×10000。2．?dāng)?shù)據(jù)處理計算方法32（2）OLYMPUSAU600試劑空白數(shù)據(jù)：PO點試劑空白（RB）＝PO點吸光度一比色杯水空白（WB）；任一測定點試劑空白（RBX）=該點吸光度一比色杯水空白（WB）。（3）Monarch1000兩點終點法的反應(yīng)數(shù)據(jù)=（終點測定吸光度一終點空白吸光度）－（始點測定吸光度一始點空白吸光度）（4）AU600終點法（帶試劑空白，END法）的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點吸光度一PO點吸光度（試劑空白，RB）。終點法（不帶試劑空白，ENDI法）的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點吸光度一比色杯空白（WB）。（2）OLYMPUSAU600試劑空白數(shù)據(jù)：PO點333．樣品試劑比例樣品與試劑的比例（SV：RV），也可表示為樣品體積分?jǐn)?shù)-樣品體積與反應(yīng)液總體積的比值（SV／TV），是方法學(xué)基本參數(shù)。操作快捷、便于攜帶是它的優(yōu)點。分析過程監(jiān)控和數(shù)據(jù)處理及輸出能力的半自動或全自動儀器。對于不同儀器、不同類型的反應(yīng)分析程序，所顯示的人機對話分析參數(shù)的信息有所不同。三、自動生化分析儀的基本參數(shù)及應(yīng)用它的設(shè)置與加樣點、加試劑點（包括R1、R2……）、監(jiān)測時間（讀數(shù)點）、讀數(shù)間隔時間及試劑樣品比例等有關(guān)，要結(jié)合方法學(xué)兼顧權(quán)衡。但在實際測定中，入射光常常并非嚴(yán)格的單色光，常有不同波長的輻射同時存在。任一測定點試劑空白（RBX）=該點吸光度一比色杯水空白（WB）。因此，吸入體積不能任意降低，必要時應(yīng)加大反應(yīng)液量和吸入量。散射比濁時，較大的散射光角度適用于35－100nrn大小的微粒，較小的散射光角度適用于100－800nrn間的微粒。指儀器的一個分析周期中，試劑和樣品混合到最末一點測定讀數(shù)的時間?！皽y試方法學(xué)”：在這個領(lǐng)域測試所使用的反應(yīng)原理可以是特定的（例如：Jaffe，IFCC等等）。由于自然的延遲，會產(chǎn)生儀器完全定時且測試項目根據(jù)所設(shè)置的參數(shù)在不同的時期讀數(shù)。最后的值減去孵育階段的吸光率讀數(shù)：每天：每個工作日第一次分析時檢測試劑的空白它可被用做讀已（手工）準(zhǔn)備好的溶解液。在計算中所使用的最后吸光率是從兩個階段的數(shù)值差中得到：--LOG-LOGIT4和LOG-LOGIT5：在非線性反應(yīng)中使用，它是一個在四點采用非儀器配套的試劑及校準(zhǔn)品體系時，參數(shù)修改要慎重。了解生化分析儀基本參數(shù)的原理，有利于儀器、試劑的正確使用，有助于正確分析和處理測定數(shù)據(jù)。在均相酶免疫分析中，最常用的是酶放大免疫分析（enzymemultipliedimmunoassay，EMIT）。但是，配套系統(tǒng)的原裝分析參數(shù)不宜更改；（5）AU600兩點法（自身空白）的反應(yīng)數(shù)據(jù)二（加第二試劑后測定點讀數(shù)-PO點讀數(shù)）－（加第二試劑前測定點讀數(shù)-Po點讀數(shù)）。

1．儀器運行前操作程序主要進行儀器的基本設(shè)置。

(1)試驗項目設(shè)置：對試驗名稱、編碼、試驗組合（profile）、試驗輪次（round）、必要時包括試驗順序等設(shè)置。（2）各試驗的參數(shù)設(shè)置：包括試驗間比值、結(jié)果核對等參數(shù)的設(shè)定。（3）試劑設(shè)置：根據(jù)有關(guān)試驗參數(shù)設(shè)置各試驗的試劑位、試劑瓶規(guī)格，必要時設(shè)定試劑批號、失效期等。3．樣品試劑比例樣品與試劑的比例（SV：RV），也可表示為樣34

（4）校準(zhǔn)品設(shè)置：對校準(zhǔn)品的位置、濃度和數(shù)量等進行設(shè)置。（5）質(zhì)控設(shè)置：根據(jù)質(zhì)控要求設(shè)置質(zhì)控物個數(shù)、質(zhì)控規(guī)則、質(zhì)控項目及相應(yīng)質(zhì)控參數(shù)等。

3．測定結(jié)果的檢查分析

(1)要了解和熟悉儀器的各種警示符號的含義與作用：在正確設(shè)定參數(shù)的前提下利用各種警示符號能提高我們發(fā)現(xiàn)問題和解決問題的效率。（4）校準(zhǔn)品設(shè)置：對校準(zhǔn)品的位置、濃度和數(shù)量等進行設(shè)置。35（2）要熟悉和靈活運用儀器的相關(guān)操作屏（界面）：如用反應(yīng)過程監(jiān)測觀察反應(yīng)時間進程曲線；用校準(zhǔn)追蹤（calibrationtrace）回顧分析校準(zhǔn)曲，利用統(tǒng)計（statistics）了解不同日期段病人測定均值及數(shù)據(jù)分布；運用分析數(shù)據(jù)編輯察看和校正測定數(shù)據(jù)。

（2）要熟悉和靈活運用儀器的相關(guān)操作屏（界面）：如用反應(yīng)過程36（3）校準(zhǔn)的檢查：要充分利用儀器設(shè)置的功能檢測校正曲線圖形、各校準(zhǔn)點吸光度值（不能忽略試劑空白值及空白速率值）計算K值等的波動情況，以及以往的比較。必要時應(yīng)進一步檢查反應(yīng)時間進程曲線。必須結(jié)合質(zhì)控數(shù)據(jù)來把握實踐條件。（4）病人結(jié)果的檢查：除了目測觀察或用血清指數(shù)了解標(biāo)本性狀、注意和了解臨床及診斷外，學(xué)會分析反應(yīng)時間進程曲線及數(shù)據(jù)是重要的基本功。（3）校準(zhǔn)的檢查：要充分利用儀器設(shè)置的功能檢測校正曲線圖形、37四基本測定方法終點法一旦樣本中加入試劑，反應(yīng)就發(fā)生了：起初是吸光率短暫的變化（通常是在樣本孵育階段）；最后是反應(yīng)的顏色（和由此得到吸光率）的趨向恒量，被定義為穩(wěn)定狀態(tài)。通常，吸光率（A）是從樣本孵育的第一點讀數(shù)。然后該值乘以在定標(biāo)中得到樣本的分析濃度所計算的因數(shù)。

樣本中Conc.=因數(shù)x（A3—

試劑空白）四基本測定方法終點法38

等待時間孵育時間讀數(shù)時間等待時間孵育時間讀數(shù)時間39固定時間法這種方法的反應(yīng)中，在孵育和讀數(shù)兩個階段都有增加和減少變化。但是，在這兩個階段線的傾斜度可能不一樣。而且，呈現(xiàn)給用戶的反應(yīng)圖也非總是線性，但總是分段地產(chǎn)生線性。這是因為該曲線圖是從不總是排列成行的讀數(shù)點組合中得到的。復(fù)位線是在孵育和讀數(shù)兩個階段中計算出來的。它們給用戶提供了反應(yīng)正確演變的有關(guān)信息。在讀數(shù)過程中，也計算出吸光率變化率（△A），計算樣本中的最后分析濃度要求有△A值。固定時間法這種方法的反應(yīng)中，在孵育和讀數(shù)兩個階段都有增加和減40重點關(guān)注比色杯空白讀數(shù)點（CB）、加樣品點（S）、各試劑加液點（R、R2、…）、試劑空白讀數(shù)點（RB）、各測定讀數(shù)點（P）、各點時間間隔及周期總時間等。在有的儀器中，它以反應(yīng)體積的下限表示，有的則專門標(biāo)明最小反應(yīng)體積?；诋?dāng)前技術(shù)水平的目標(biāo)：（5）偽濁度的影響：即不是特異性抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的免疫復(fù)合物形成的濁度。=因數(shù)x（A3—A2）（A3—A2）=△A/分鐘顆粒直徑接近或大于光源波長時，常呈透射光和光路上的向前散射光，其散射光強度與入射光強度的關(guān)系遵從Mie散射理論，光散射隨波長的變化小。對于不同儀器、不同類型的反應(yīng)分析程序，所顯示的人機對話分析參數(shù)的信息有所不同。（3）非特異性光散射的影響：免疫濁度法常受內(nèi)源性光散射的干擾。二根據(jù)臨床觀察制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察抗原或抗體過剩使免疫復(fù)合物部分或全部解離的現(xiàn)象，稱為帶現(xiàn)象。定進行外推數(shù)學(xué)數(shù)據(jù)。=因數(shù)x（A3—試劑空白）因此，吸入體積不能任意降低，必要時應(yīng)加大反應(yīng)液量和吸入量?？傉`差概念：在常規(guī)測定中每個標(biāo)本測定結(jié)果均有誤差，這個誤差包括了對方法學(xué)評價時的各種類型的隨機誤差和系統(tǒng)誤差，因此測定結(jié)果與真值的差異是隨機誤差RE和系統(tǒng)誤差SE的總和，即總誤差TE。四根據(jù)實驗室技能狀態(tài)制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察有的儀器有多個反應(yīng)時間可選（如HITACHI7170），須預(yù)先選定。酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物與游離酶標(biāo)抗原同處一相，不需分離步驟就可測定酶活性，計算出被檢抗原（半抗原）的含量。(2)基于臨床醫(yī)生觀點分析的數(shù)據(jù)。（1）來源于國家和國際專家團體的推薦儀器在各個吸光度讀數(shù)點讀取的吸光度數(shù)據(jù)，并不一定都納入濃度計算。例：BT3000性能指標(biāo)肌酐Jaffe氏法監(jiān)測時間短，吸光度值較低，樣品試劑比例多為1：10。由于自然的延遲，會產(chǎn)生儀器完全定時且測試項目根據(jù)所設(shè)置的參數(shù)在不同的時期讀數(shù)。在這種情況下，分析儀執(zhí)行多個讀數(shù)，在最后點數(shù)之間描繪復(fù)位線，移動至精確的讀數(shù)時間，從而得到正確的吸光率值。濃度是用吸光率變化率（讀數(shù)過程中）乘以定標(biāo)過程中所計算出來的因數(shù)。樣本中Conc.=因數(shù)x（A3—A2）（A3—A2）=△A重點關(guān)注比色杯空白讀數(shù)點（CB）、加樣品點（S）、各試劑加液41等待時間孵育時間讀數(shù)時間等待時間孵育時間讀數(shù)時間等待時間孵育時間讀數(shù)時間等待時42動力學(xué)法這種方法的反應(yīng)與前一種非常相似，所不同的是該種反應(yīng)和曲線圖是從兩條復(fù)位線計算中得到的：一條在孵育階段，一條在讀數(shù)階段。如果反應(yīng)良好的話這兩條總是一樣的。讀數(shù)階段的復(fù)位線以分鐘來計算吸光率變化率（△A/分鐘）。然后這個值乘以因數(shù)來計算樣本中分析濃度：

樣本中Conc.=因數(shù)x（A3—A2）（A3—A2）=△A/分鐘動力學(xué)法這種方法的反應(yīng)與前一種非常相似，所不同的是該種反應(yīng)和43延遲時間孵育時間讀數(shù)時間延遲時間孵育時間讀數(shù)時間延遲時間孵育時間讀數(shù)時間44起始速率法（I.R.）這種方式的反應(yīng)與動力法反應(yīng)十分相似。如果初始階段穩(wěn)定的話，那么它就含有與動力法反應(yīng)完全一樣的反應(yīng)。如果初始階段不穩(wěn)定的話，復(fù)位線就是將外部點除去49%至100%計算得來的。因此除按分鐘計算外，這種計算方法與動力法反應(yīng)的計算方法一樣。樣本中Conc.=因數(shù)x（△A）起始速率法（I.R.）這種方式的反應(yīng)與動力法反應(yīng)十分相45樣本空白（A）法當(dāng)需要清除樣本干擾（例如混濁的血清）時就使用這種方法。這種是雙試劑終點法反應(yīng)。這種反應(yīng)和計算是在兩種截然不同的階段執(zhí)行的：第一階段（樣本空白）是在第一種試劑和樣本（R1+S）中產(chǎn)生反應(yīng)的；第二階段是在第一種試劑和樣本和第二種試劑（R1+S+R2）中產(chǎn)生反應(yīng)的。用來計算濃度的最后吸光率在兩階段的數(shù)值差中得到：樣本中Conc.=因數(shù)x[A2—

（A1xk）]樣本空白（A）法當(dāng)需要清除樣本干擾（例如混濁的血清）時就使用46生化分析儀的基礎(chǔ)與應(yīng)用課件完整版47樣本空白（B）法這種方法的反應(yīng)與前一種非常相似。反應(yīng)總是在兩個階段產(chǎn)生：第一階段（樣本空白）儀器從第一種試劑和樣本（R1+S）所產(chǎn)生反應(yīng)的中讀出最后的吸光率（A1），從第二種試劑和樣本（R2+S）所產(chǎn)生反應(yīng)的中讀出最后的吸光率（A2）。這兩種反應(yīng)是截然不同和獨立的，在兩個不同的正在讀數(shù)的比色杯取樣。在計算中所使用的最后吸光率是從兩個階段的數(shù)值差中得到：樣本中Conc.=因數(shù)x（A2—A1）樣本空白（B）法這種方法的反應(yīng)與前一種非常相似。反應(yīng)總是在兩48R1+SR2+SR1+S49兩點終點法這種方法（只用在單試劑測試中）是在需要清除反應(yīng)中由于血清的干擾中使用的。最后的值減去孵育階段的吸光率讀數(shù)：樣本中Conc.=因數(shù)x（A3—A1）兩點終點法這種方法（只用在單試劑測試中）是在需要清除反應(yīng)中由50

等待時間孵育時間讀數(shù)時間等待時間孵育時間讀數(shù)時間51只讀法這種方法只在樣本加入試劑空白的終點法反應(yīng)讀數(shù)時使用。它可被用做讀已（手工）準(zhǔn)備好的溶解液。用作計算的因數(shù)可從定標(biāo)或用戶自己設(shè)定中得到：樣本中Conc.=因數(shù)x最后的A值。只讀法這種方法只在樣本加入試劑空白的終點法反應(yīng)讀數(shù)時使用。它52分析過程監(jiān)控和數(shù)據(jù)處理及輸出能力的半自動或全自動儀器。在開始酶反應(yīng)（即待測樣品與基質(zhì)混合）之前，應(yīng)有一個預(yù)孵育期（pre－Incubationperiod），讓所有可能干擾測定的反應(yīng)充分進行，避免干擾待測酶活性。四根據(jù)實驗室技能狀態(tài)制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察0005ABS趨向：+/-0.（5）偽濁度的影響：即不是特異性抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的免疫復(fù)合物形成的濁度?？傉`差概念：在常規(guī)測定中每個標(biāo)本測定結(jié)果均有誤差，這個誤差包括了對方法學(xué)評價時的各種類型的隨機誤差和系統(tǒng)誤差，因此測定結(jié)果與真值的差異是隨機誤差RE和系統(tǒng)誤差SE的總和，即總誤差TE。但是，配套系統(tǒng)的原裝分析參數(shù)不宜更改；由酶催化的反應(yīng)稱為酶促反應(yīng)。條形碼掃描隨機配置樣本條碼和試劑條碼離心式生化儀讀數(shù)間隔時間短，監(jiān)測時間也短。因此分析儀就不能使取樣和讀數(shù)階段最優(yōu)化，這樣就不可避免地減少所執(zhí)行的每小時測試數(shù)目。如果使用單試劑，正常血清樣品延遲時間60秒即可；任一測定點試劑空白（RBX）=該點吸光度一比色杯水空白（WB）。340nm,380nm,405nm,436nm,480nm,510nm,546nm,578nm,630nm,700nm等。等待時間孵育時間讀數(shù)時間此種多色輻射是使測定中吸光度的變化偏離Beer定律（常為負偏離）的主要光學(xué)影響因素。一般比濁法的靈敏度不如可見、紫外吸收光譜法，但免疫濁度法的敏感度約為50ng／rnl。三根據(jù)生物學(xué)變異制定的不精密度的標(biāo)準(zhǔn)來考察更換試劑批號時也必須重新校準(zhǔn)曲線。膠乳增強免疫濁度法（latexenhancedturhidimetricimmunoassay）由于采用顆粒較大、折光性強的膠乳，將抗體經(jīng)吸附或共價交聯(lián)反應(yīng)固定于膠乳表面，增加抗原抗體凝聚體積，減少透過光，使靈敏度提高到近1ng／ml水平。常采用酶標(biāo)抗原與未知抗原對特異性抗體的競爭反應(yīng)：抗原與標(biāo)記酶結(jié)合使酶的活性抑制或激活，再與相應(yīng)抗體結(jié)合后其酶活性被激活或抑制，未知抗原和酶標(biāo)抗原與抗體形成競爭體系。因此除按分鐘計算外，這種計算方法與動力法反應(yīng)的計算方法一樣。乳膠顆粒法使用乳膠顆粒法試劑的儀器要求嚴(yán)格遵循程序設(shè)定過程的時限。因此分析儀就不能使取樣和讀數(shù)階段最優(yōu)化，這樣就不可避免地減少所執(zhí)行的每小時測試數(shù)目。這種方法與樣本空白（A）法十分相似。當(dāng)需要清除樣本的干擾（例如混濁的血清等）時就使用這種方法。其中包括雙試劑終點法反應(yīng)。該反應(yīng)和計算方法在兩個階段完成：第一階段（樣本空白）反應(yīng)產(chǎn)生于第一種試劑和樣本（R1+S）之間；第二階段反應(yīng)產(chǎn)生于第一種試劑和樣本和第二種試劑（R1+S+R2）之間。在計算中所使用的最后吸光率是從兩個階段的吸光率數(shù)值差中得到：

樣本中Conc.=因數(shù)x[A2—

（A1xk）]分析過程監(jiān)控和數(shù)據(jù)處理及輸出能力的半自動或全自動儀器。乳膠顆53生化分析儀的基礎(chǔ)與應(yīng)用課件完整版54

三、自動生化分析儀的基本參數(shù)及應(yīng)用

了解生化分析儀基本參數(shù)的原理，有利于儀器、試劑的正確使用，有助于正確分析和處理測定數(shù)據(jù)。但是，配套系統(tǒng)的原裝分析參數(shù)不宜更改；采用非儀器配套的試劑及校準(zhǔn)品體系時，參數(shù)修改要慎重。對于不同儀器、不同類型的反應(yīng)分析程序，所顯示的人機對話分析參數(shù)的信息有所不同。三、自動生化分析儀的基本參數(shù)及應(yīng)用了解生化分析儀基本參數(shù)55（一）反應(yīng)測定時間多數(shù)全自動生化分析儀可以在整個測定反應(yīng)周期內(nèi)連續(xù)監(jiān)測（如HITACHI7170常規(guī)測定周期10分鐘，監(jiān)測34點，OLYMPUSAU600固定周期8分15秒，監(jiān)測27點），但反應(yīng)監(jiān)測時間是指該時間內(nèi)的測定讀數(shù)要用于結(jié)果計算。它的設(shè)置與加樣點、加試劑點（包括R1、R2……）、監(jiān)測時間（讀數(shù)點）、讀數(shù)間隔時間及試劑樣品比例等有關(guān)，要結(jié)合方法學(xué)兼顧權(quán)衡。1．反應(yīng)時間（reactfontime）（一）反應(yīng)測定時間56指儀器的一個分析周期中，試劑和樣品混合到最末一點測定讀數(shù)的時間。它對終點法尤其重要，是終點法的瓶頸。有的儀器有多個反應(yīng)時間可選（如HITACHI7170），須預(yù)先選定。多數(shù)儀器為10分鐘左右，這對試劑提出了較高要求。不少終點法試劑（尤其手工法試劑）反應(yīng)時間常常也在10分鐘上下，測定時間沒有余地，當(dāng)樣品濃度高或試劑質(zhì)量下降時，均可致測定結(jié)果偏低。因此，終點法不宜采用標(biāo)明反應(yīng)時間接近和長于儀器最大反應(yīng)時間的試劑盒。不得已時必須用接近測定范圍上限的高濃度質(zhì)控血清監(jiān)測。指儀器的一個分析周期中，試劑和樣品混合到最末一點測定讀數(shù)的時572．監(jiān)測時間（讀數(shù)點）和讀數(shù)間隔時間各類型儀器不盡一致。離心式生化儀讀數(shù)間隔時間短，監(jiān)測時間也短。流動式生化儀讀數(shù)間隔時間一般較長。分立式生化儀一般監(jiān)測時間10分鐘左右，間隔10－30秒讀數(shù)一次。有的儀器在整個測定反應(yīng)周期全程讀數(shù)，有的只讀取指定時間（點）的吸光度。3．加試劑點采用雙試劑時，加R2點決定R1與樣品的反應(yīng)時間，也決定R2與R1及樣品的反應(yīng)時間。一般儀器各5分鐘左右。HITACHI7170有四個加試劑點，若采用雙試劑，各5分鐘，則加R2設(shè)在第3加試劑點。

4．反應(yīng)監(jiān)測時間還要考慮延遲時間的長短、測定物質(zhì)的濃度范圍及相關(guān)臨床價值。工作效率等因素。2．監(jiān)測時間（讀數(shù)點）和讀數(shù)間隔時間58

（二）延遲時間延遲時間（delaytime）是指試劑與樣品混合后到監(jiān)測開始之間的時間。一般用于兩點法和速率法，某些情況下也用于終點法。終點法應(yīng)選擇反應(yīng)趨于平衡的時間（穩(wěn)定期或平衡期）作測定，測定點前即所謂的孵育期。速率法的線性反應(yīng)期之前即延遲期。正確選擇延遲時間的長短，有利于準(zhǔn)確測定，減少試驗誤差。設(shè)置一般根據(jù)試劑盒的說明書，還應(yīng)考慮本室的儀器特點和工作程序。（二）延遲時間591．儀器特點比如半自動生化儀多為流動比色池，要考慮泵速、進樣管長短。反應(yīng)液粘稠度及混合情況，以及室溫、反應(yīng)液溫度同反應(yīng)要求溫度間的溫差，等等。全自動生化儀的測定讀數(shù)設(shè)置方式不同，直接以“秒”設(shè)置，或以測定點設(shè)置，測定點間隔時間不一樣，需要靈活掌握。1．儀器特點比如半自動生化儀多為流動比色池，要考慮泵速602．試劑及方法學(xué)（l）試劑組成：在酶活性的連續(xù)監(jiān)測法時，若試劑含工具酶數(shù)量多、偶聯(lián)反應(yīng)多，則激活反應(yīng)時間一般較長，延遲時間也較長，如肌酸激酶（NAC法）延遲時間常設(shè)置120－180秒；若試劑中底物經(jīng)待測酶催化，其產(chǎn)物可以直接測定的，則延遲時間較短，如γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）設(shè)定30－60秒。同一項目同一方法，但試劑配方不同，其反應(yīng)快慢等特征也可能不同，如白蛋白測定。白蛋白與溴甲酚綠（BCG）為即時反應(yīng)，10秒鐘內(nèi)已完成，其后α、β球蛋白等也將與BCG發(fā)生反應(yīng)，所以孵育時間不能延長。但在同一測定時間，BCG濃度、緩沖液種類、pH和表面活性劑不同的試劑，測定結(jié)果可能差異明顯。2．試劑及方法學(xué)61這種方法與樣本空白（A）法十分相似。（4）病人結(jié)果的檢查：除了目測觀察或用血清指數(shù)了解標(biāo)本性狀、注意和了解臨床及診斷外，學(xué)會分析反應(yīng)時間進程曲線及數(shù)據(jù)是重要的基本功。條形碼掃描隨機配置樣本條碼和試劑條碼其原理為：用基因工程技術(shù)制備稱為酶供體（ED）和酶受體（EA）的兩肽段。即當(dāng)一束強度為L的平行單色光通過一個含有濃度為C的吸光物質(zhì)、厚度為L的吸收他時，光的一部分被吸收，光強度從IO減小至It。--多項式：在非線性反應(yīng)中使用。每一：儀器按“小時”和“分鐘”欄所設(shè)定的時間跨度檢測試劑的空白吸光度。一般應(yīng)以試劑說明為準(zhǔn)，不宜輕易改動。有的儀器有多個反應(yīng)時間可選（如HITACHI7170），須預(yù)先選定。一般應(yīng)以試劑說明為準(zhǔn)，不宜輕易改動。但是，配套系統(tǒng)的原裝分析參數(shù)不宜更改；允許總誤差：用TEa表示，它被規(guī)定為95%樣品的允許誤差限度，即95%的患者樣品其誤差應(yīng)小于這個限度。流動式生化儀讀數(shù)間隔時間一般較長。3．團體專家的專業(yè)性推薦：如果初始階段不穩(wěn)定的話，復(fù)位線就是將外部點除去49%至100%計算得來的。=因數(shù)x（A3—試劑空白）目前，由于技術(shù)發(fā)展，兩種比濁法的靈敏度和特異性已接近，而全自動生化儀的自動化程度和精密度要勝于專用散射比濁儀，故透射免疫比濁法在臨床上的應(yīng)用日益廣泛。在極遠的點間缺乏無窮大近似值時產(chǎn)生而且，呈現(xiàn)給用戶的反應(yīng)圖也非總是線性，但總是分段地產(chǎn)生線性?！白钚∑椒椒ā保涸诜蔷€性反應(yīng)中使用，產(chǎn)生一個最小平方近似值以在其中包括雙試劑終點法反應(yīng)。散射比濁時，較大的散射光角度適用于35－100nrn大小的微粒，較小的散射光角度適用于100－800nrn間的微粒。（2）樣品異常成分干擾：有的試驗項目需要用工具酶將內(nèi)源性代謝產(chǎn)物耗盡，比如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性測定試劑中須有足量的乳酸脫氫酶（LDH）。如果使用單試劑，正常血清樣品延遲時間60秒即可；但當(dāng)內(nèi)源性酮酸增多（如酮癥酸中毒）時，試劑內(nèi)LDH常常不能在60秒內(nèi)完全將其清除，剩余酮酸會進入監(jiān)測期干擾測定，使測定結(jié)果偏高，所以延遲時間應(yīng)增至90－120秒。采用雙試劑，則可在加入R1后即進入預(yù)孵育期。這種方法與樣本空白（A）法十分相似。（2）樣品異常成分干擾：62（3）方法學(xué)要求：比如肌酐（Jaffe氏法）測定的特異性不強，一般認為反應(yīng)前20秒左右為乙酰乙酸等快反應(yīng)干擾物呈色，后約80－100秒為蛋白質(zhì)等慢反應(yīng)假肌酐呈色，20－60秒肌酐呈色反應(yīng)占主導(dǎo)地位。采用兩點法或速率法可減少干擾，但具體取多長的延遲時間，應(yīng)根據(jù)試劑和儀器讀數(shù)特點來評價決定。（3）方法學(xué)要求：比如肌酐（Jaffe氏法）測定的特異性不強633．工作程序要在保證準(zhǔn)確性的前提下，合理設(shè)置參數(shù)，提高工作效率。最突出的例子是半自動生化儀上酶活性連續(xù)監(jiān)測法的延遲時間設(shè)定。由于只能單份樣品逐一測定，若延遲時間全部設(shè)置在儀器內(nèi)，每個延遲時間加監(jiān)測時間至少1分鐘以上，守候時間較長。工作量大時，可以根據(jù)儀器控溫、加樣及讀數(shù)和試劑特點以及室溫情況，將延遲時間挪一部分到機外，套式操作，但要確保機內(nèi)延遲時間未需進入線性反應(yīng)期。3．工作程序要在保證準(zhǔn)確性的前提下，合理設(shè)置參數(shù)，提高工作644．要兼顧延遲時間和監(jiān)測時間反應(yīng)時間是有限制的。在速率法和兩點法中，延長延遲時間必然縮短線性監(jiān)測期，減小測定的線性范圍，也易發(fā)生底物耗盡。（三）樣品量、試劑量與稀釋量有關(guān)參數(shù)包括樣品量、試劑量、稀釋（水）量、最小反應(yīng)體積和最大比色杯容量等。如HITACHI7170反應(yīng)體積180－380μl，最大體積570μl。BT224半自動生化儀流動比色池容積33μl，吸液量200－990μl，最適體積500μl。4．要兼顧延遲時間和監(jiān)測時間65最小反應(yīng)體積在儀器光度讀數(shù)要用于結(jié)果計算時，反應(yīng)液液面高度不低于光度計光徑的最小體積。它保證儀器的正確讀數(shù)和計算，也是儀器測定精度和經(jīng)濟性的指針之一。在有的儀器中，它以反應(yīng)體積的下限表示，有的則專門標(biāo)明最小反應(yīng)體積。在單試劑測定中，樣品與試劑的總體積不得少于此參數(shù)。在雙試劑測定中，若R1與樣品的反應(yīng)讀數(shù)不納入結(jié)果計算，R1的加液量可不考慮此參數(shù)，如連續(xù)監(jiān)測法；最小反應(yīng)體積66否則應(yīng)考慮它對結(jié)果的影響，如終點法在加R2之前讀數(shù)，并以此來扣除試劑或樣品空白時。在半自動生化儀中，最適吸入量相當(dāng)于最小反應(yīng)體積。它與進液管道長度、流動比色池容積、吸液泵抽吸力大小和液體粘稠度有關(guān)，它要保證光度檢測不受空泡和前后樣品攜帶污染的干擾。因此，吸入體積不能任意降低，必要時應(yīng)加大反應(yīng)液量和吸入量。否則應(yīng)考慮它對結(jié)果的影響，如終點法在加R2之前讀數(shù)，并以此672．最大比色杯容量這個參數(shù)含義明確。在有的儀器中，它以反應(yīng)體積的上限表示，有的則專門標(biāo)明最大比色杯容量。反應(yīng)液超過此體積，將致液體外溢，儀器測定系統(tǒng)被污損。3．樣品試劑比例樣品與試劑的比例（SV：RV），也可表示為樣品體積分?jǐn)?shù)-樣品體積與反應(yīng)液總體積的比值（SV／TV），是方法學(xué)基本參數(shù)。酶活力測定中，樣品在總體積中的比例應(yīng)在10％以下。一般說來，待測物質(zhì)在樣品中含量低的、生理波動范圍大的，樣品用量較大。2．最大比色杯容量68如Trinder反應(yīng)測定血清葡萄糖、膽固醇等，樣品試劑比例多為1：100，測定血尿酸或高密度脂蛋白膽固醇，常增加為1：50；ALT和AST的樣品試劑比例多為1：10至1：20。方法靈敏、吸光度高的實驗方法，樣品試劑比例小，如白蛋白BCG法，樣品試劑比例常為1：200。肌酐Jaffe氏法監(jiān)測時間短，吸光度值較低，樣品試劑比例多為1：10。一般應(yīng)以試劑說明為準(zhǔn)，不宜輕易改動。如Trinder反應(yīng)測定血清葡萄糖、膽固醇等，樣品試劑比例69主要分析參數(shù)“初始參數(shù)”

“測試方法學(xué)”：在這個領(lǐng)域測試所使用的反應(yīng)原理可以是特定的（例如：Jaffe，IFCC等等）。在“數(shù)據(jù)資料處理”中，根據(jù)不同的原理，當(dāng)測試與質(zhì)控檔案有出入時該選項非常有用。主要分析參數(shù)“初始參數(shù)”70終點法動力法固定時間法起始速率法（I.R.）樣本空白（A）法樣本空白（B）法只讀法兩點終點法乳膠顆粒法終點法71--多點法：一些標(biāo)準(zhǔn)濃度的線性添加函數(shù)最大值為6；采用雙試劑時，加R2點決定R1與樣品的反應(yīng)時間，也決定R2與R1及樣品的反應(yīng)時間。1．評價在特定臨床情況下分析性能對臨床決定的影響。在計算中所使用的最后吸光率是從兩個階段的數(shù)值差中得到：這種方法只在樣本加入試劑空白的終點法反應(yīng)讀數(shù)時使用。比濁法與可見、紫外吸收光譜法不同，它們不是測定澄清溶液而是測定懸浮液或膠體溶液中物質(zhì)的濃度，分析的光學(xué)基礎(chǔ)是分散顆粒對光的反射、折射、散射和吸收等多種作用。分析過程監(jiān)控和數(shù)據(jù)處理及輸出能力的半自動或全自動儀器。在機分析項目80冷凍試劑+相關(guān)分析項目C——溶液的濃度；通常，吸光率（A）是從樣本孵育的第一點讀數(shù)。立方栓：在非線性反應(yīng)中使用。這種反應(yīng)和計算是在兩種截然不同的階段執(zhí)行的：第一階段（樣本空白）是在第一種試劑和樣本（R1+S）中產(chǎn)生反應(yīng)的；（5）偽濁度的影響：即不是特異性抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的免疫復(fù)合物形成的濁度。四根據(jù)實驗室技能狀態(tài)制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察以酶作為試劑來進行分析測定，或通過酶促反應(yīng)測定待測酶的活性，具有高效、專一、溫和、靈敏的特點，廣泛用于生化分析。帶寬：最大+/-5nm光測精度：+/-1%從0至2.（1）基于生物變異分量的數(shù)據(jù);例：BT3000性能指標(biāo)由于混合、反應(yīng)和檢測幾乎同時完成，它的分析效率較高。試劑空白檢測時間”這個參數(shù)用作自動測定試劑的空白吸光度。它可被用做讀已（手工）準(zhǔn)備好的溶解液。目前，由于技術(shù)發(fā)展，兩種比濁法的靈敏度和特異性已接近，而全自動生化儀的自動化程度和精密度要勝于專用散射比濁儀，故透射免疫比濁法在臨床上的應(yīng)用日益廣泛。處理種類線性法”：在線性反應(yīng)中使用，它假設(shè)分析測試定標(biāo)值為處理計算因子?！耙蜃臃ā保翰还苡嬎阋蜃邮欠褚阎荚诰€性反應(yīng)中使用?！扒€法”：非線性測試，分為：--多項式：在非線性反應(yīng)中使用。在極遠的點間缺乏無窮大近似值時產(chǎn)生一條近乎理想的立方近似值曲線--多點法：一些標(biāo)準(zhǔn)濃度的線性添加函數(shù)最大值為6；處理種72立方栓：在非線性反應(yīng)中使用。在一些特定情況下產(chǎn)生一立方添加以解決非多項式曲線；在點上近似值為零，無拐點。--LOG-LOGIT4和LOG-LOGIT5：在非線性反應(yīng)中使用，它是一個在四點或五點的對數(shù)近似值。--多點法：一些標(biāo)準(zhǔn)濃度的線性添加函數(shù)最大值為6；它對超過0定標(biāo)限定進行外推數(shù)學(xué)數(shù)據(jù)。立方栓：在非線性反應(yīng)中使用。在一些特定情況下產(chǎn)生一立方添加以73“最小平方法”：在非線性反應(yīng)中使用，產(chǎn)生一個最小平方近似值以在某些情況下解決非多項式和栓曲線。有拐點?！白钚∑椒椒ā保涸诜蔷€性反應(yīng)中使用，產(chǎn)生一個最小平方近似值74濾光器常用的檢測波長有：340nm,380nm,405nm,436nm,480nm,510nm,546nm,578nm,630nm,700nm等。濾光器常用的檢測波長有：75反應(yīng)趨勢在反應(yīng)中選擇吸光率變化來檢測。具有下列選擇：（●）“漸增”（●）“漸減”反應(yīng)趨勢在反應(yīng)中選擇吸光率變化來檢測。具有下列選擇：76試劑數(shù)量按方法學(xué)要求輸入試劑數(shù)量，在最大值為4時，使用“▲”或▼試劑數(shù)量按方法學(xué)要求輸入試劑數(shù)量，在最大值為4時，使用“▲”77第二分析參數(shù)“比色杯清洗次數(shù)”通常清洗一次就足夠了。但在非常活躍的測試中有必要多

次清洗。根據(jù)反應(yīng)物的污染力設(shè)置所需的清洗次數(shù)第二分析參數(shù)“比色杯清洗次數(shù)”通常清洗一次就足夠了。但在非78試劑空白檢測時間”這個參數(shù)用作自動測定試劑的空白吸光度。每次運行：每次運行都檢測試劑的空白吸光度。每天：每個工作日第一次分析時檢測試劑的空白每一：儀器按“小時”和“分鐘”欄所設(shè)定的時間跨度檢測試劑的空白吸光度。試劑空白檢測時間”這個參數(shù)用作自動測定試劑的空白吸光度。79例：BT3000性能指標(biāo)操作模式“任選式”方法臨床化學(xué)和免疫化學(xué)測試電解質(zhì)分析組件（）Na，K，CI，（CO2選擇件）分析模式常規(guī)、批量、急診、預(yù)編程序在機分析項目80冷凍試劑+相關(guān)分析項目儲存分析項目500個，單試劑或雙試劑+無限相關(guān)分析項目重新運行自動或按指令例：BT3000性能指標(biāo)操作模式80定標(biāo)及質(zhì)控自動或按指令自動預(yù)編程序自動執(zhí)行相關(guān)預(yù)編程序或按指令測量34個石英比色杯直接讀數(shù)樣本盤容量52個常規(guī)急診樣本位，26個標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控位條形碼掃描隨機配置樣本條碼和試劑條碼定標(biāo)及質(zhì)控自動或按指令81光學(xué)系統(tǒng)固態(tài)測光法，（BiotecnicaInstruments廠專利）

10個光敏二極管UV/VISOPT精度和精確性波長：340-700nm帶寬：最大+/-5nm光測精度：+/-1%從0至2.000O.D.,+/-2.5%2.400O.D.光測靈敏度：+/-0.0005ABS趨向：+/-0.0005ABS/小時光徑：7毫米光源：鹵素?zé)艄β剩?5W電源：12V直流電持續(xù)時間:2000小時光學(xué)系統(tǒng)82臨床實驗室的質(zhì)量要求臨床實驗室質(zhì)量要求即分析試驗的醫(yī)學(xué)實用性要求，通常以允許總誤差形式來表示臨床實驗室質(zhì)量要求?？傉`差概念：在常規(guī)測定中每個標(biāo)本測定結(jié)果均有誤差，這個誤差包括了對方法學(xué)評價時的各種類型的隨機誤差和系統(tǒng)誤差，因此測定結(jié)果與真值的差異是隨機誤差RE和系統(tǒng)誤差SE的總和，即總誤差TE?？傉`差必須在臨床可接受的低水平范圍內(nèi)，這種檢測方法才能用于常規(guī)檢查。臨床實驗室的質(zhì)量要求83這種方法只在樣本加入試劑空白的終點法反應(yīng)讀數(shù)時使用。條形碼掃描隨機配置樣本條碼和試劑條碼樣本盤容量52個常規(guī)急診樣本位，26個標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控位采用雙試劑時，加R2點決定R1與樣品的反應(yīng)時間，也決定R2與R1及樣品的反應(yīng)時間?！皽y試方法學(xué)”：在這個領(lǐng)域測試所使用的反應(yīng)原理可以是特定的（例如：Jaffe，IFCC等等）。實驗證明，單色光經(jīng)過有色溶液時，透過溶液的光強度不僅與溶液的濃度有關(guān)，而且還與溶液的厚度以及溶液本身對光的吸收性能有關(guān)。這種方法（只用在單試劑測試中）是在需要清除反應(yīng)中由于血清的干擾中使用的。反應(yīng)總是在兩個階段產(chǎn)生：第一階段（樣本空白）儀器從第一種試劑和樣本（R1+S）所產(chǎn)生反應(yīng)的中讀出最后的吸光率（A1），從第二種試劑和樣本（R2+S）所產(chǎn)生反應(yīng)的中讀出最后的吸光率（A2）。酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物與游離酶標(biāo)抗原同處一相，不需分離步驟就可測定酶活性，計算出被檢抗原（半抗原）的含量。（1）來源于國家和國際專家團體的推薦方法臨床化學(xué)和免疫化學(xué)測試（1）基于生物變異分量的數(shù)據(jù);這種方法與樣本空白（A）法十分相似。圖2-2在單試劑測定中，樣品與試劑的總體積不得少于此參數(shù)。=因數(shù)x（A3—A2）（A3—A2）=△A/分鐘條形碼掃描隨機配置樣本條碼和試劑條碼但是，配套系統(tǒng)的原裝分析參數(shù)不宜更改；(1)試驗項目設(shè)置：對試驗名稱、編碼、試驗組合（profile）、試驗輪次（round）、必要時包括試驗順序等設(shè)置。C——溶液的濃度；2．監(jiān)測時間（讀數(shù)點）和讀數(shù)間隔時間多數(shù)全自動生化分析儀可以在整個測定反應(yīng)周期內(nèi)連續(xù)監(jiān)測（如HITACHI7170常規(guī)測定周期10分鐘，監(jiān)測34點，OLYMPUSAU600固定周期8分15秒，監(jiān)測27點），但反應(yīng)監(jiān)測時間是指該時間內(nèi)的測定讀數(shù)要用于結(jié)果計算。一、如何制定允許總誤差允許總誤差：用TEa表示，它被規(guī)定為95%樣品的允許誤差限度，即95%的患者樣品其誤差應(yīng)小于這個限度。制定的允許總誤差既反映臨床應(yīng)用與解釋結(jié)果的要求，稱為醫(yī)學(xué)效用限度，又應(yīng)基本符合實驗室所能達到的技術(shù)狀態(tài)。因此，需要由臨床醫(yī)學(xué)專家和臨床實驗專家共同研究決定。這種方法只在樣本加入試劑空白的終點法反應(yīng)讀數(shù)時使用。一、如何84一根據(jù)參考值與參考范圍制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察二根據(jù)臨床觀察制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察三根據(jù)生物學(xué)變異制定的不精密度的標(biāo)準(zhǔn)來考察四根據(jù)實驗室技能狀態(tài)制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察一根據(jù)參考值與參考范圍制定的標(biāo)準(zhǔn)來考察85二、建立分析質(zhì)量規(guī)范由IFCC/IUPAC/WHO/三機構(gòu)于1999年在瑞典斯德哥爾摩舉辦的“建立全球檢驗醫(yī)學(xué)質(zhì)量規(guī)范的策略會議”上提出的一致性聲明（草案），即本次大會達成一致的主要結(jié)論是：1．評價在特定臨床情況下分析性能對臨床決定的影響。2．評價在一般情況下分析性能對臨床決定的影響：（1）基于生物變異分量的數(shù)據(jù);(2)基于臨床醫(yī)生觀點分析的數(shù)據(jù)。二、建立分析質(zhì)量規(guī)范863．團體專家的專業(yè)性推薦：（1）來源于國家和國際專家團體的推薦（2）來源于地區(qū)性或個別專家的推薦4.性能目標(biāo)有以下決定：（1）政府機構(gòu)

(2)室間質(zhì)量評價(EQA)計劃的組織者。5.基于當(dāng)前技術(shù)水平的目標(biāo)：（1）由室間質(zhì)評或能力驗證計劃數(shù)據(jù)證實。（2）當(dāng)前關(guān)于方法實施可行發(fā)表的文章。3．團體專家的專業(yè)性推薦：873．應(yīng)用注意點（l）若懸浮顆粒本身具有特征吸收，則吸收作用是主要的，宜選擇最大吸收波長作比濁測定；若懸浮顆粒本身無特征吸收而介質(zhì)對人射光有吸收，則測定必須選擇在高透光度的波長區(qū)。若懸浮顆粒?。叫∮?5nm），溶液濁度小，透射比大于90%，不宜選用透射比濁法，應(yīng)選擇散射比濁法測定。3．應(yīng)用注意點88在開始酶反應(yīng)（即待測樣品與基質(zhì)混合）之前，應(yīng)有一個預(yù)孵育期（pre－Incubationperiod），讓所有可能干擾測定的反應(yīng)充分進行，避免干擾待測酶活性。內(nèi)源性產(chǎn)物被工具酶催化消耗，內(nèi)源性底物也通過偶聯(lián)反應(yīng)充分消耗，然后加入底物啟動反應(yīng)。（2）線性期（linear。base）：在反間應(yīng)體系中底物大于酶飽和濃度的情況下，產(chǎn)物或底物的變化量隨反應(yīng)時間呈線性增減，即反應(yīng)速度（單位時間內(nèi)產(chǎn)物或底物的變化量）恒定不變，這一時期稱為線性期或恒態(tài)期，亦稱零級反應(yīng)期。在此期，反應(yīng)速度不受底物和產(chǎn)物濃度的影響，只與酶活性濃度呈線性關(guān)系。測定酶活性都在零級反應(yīng)期進行。在開始酶反應(yīng)（即待測樣品與基質(zhì)混合）之前，應(yīng)有一個預(yù)孵育期（89（2）OLYMPUSAU600試劑空白數(shù)據(jù)：PO點試劑空白（RB）＝PO點吸光度一比色杯水空白（WB）；任一測定點試劑空白（RBX）=該點吸光度一比色杯水空白（WB）。（3）Monarch1000兩點終點法的反應(yīng)數(shù)據(jù)=（終點測定吸光度一終點空白吸光度）－（始點測定吸光度一始點空白吸光度）（4）AU600終點法（帶試劑空白，END法）的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點吸光度一PO點吸光度（試劑空白，RB）。終點法（不帶試劑空白，ENDI法）的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點吸光度一比色杯空白（WB）。（2）OLYMPUSAU600試劑空白數(shù)據(jù)：PO點90

三、自動生化分析儀的基本參數(shù)及應(yīng)用

了解生化分析儀基本參數(shù)的原理，有利于儀器、試劑的正確使用，有助于正確分析和處理測定數(shù)據(jù)。但是，配套系統(tǒng)的原裝分析參數(shù)不宜更改；采用非儀器配套的試劑及校準(zhǔn)品體系時，參數(shù)修改要慎重。對于不同儀器、不同類型的反應(yīng)分析程序，所顯示的人機對話分析參數(shù)的信息有所不同。三、自動生化分析儀的基本參數(shù)及應(yīng)用了解生化分析儀基本參數(shù)91（一）反應(yīng)測定時間多數(shù)全自動生化分析儀可以在整個測定反應(yīng)周期內(nèi)連續(xù)監(jiān)測（如HITACHI7170常規(guī)測定周期10分鐘，監(jiān)測34點，OLYMPUSAU600固定周期8分15秒，監(jiān)測27點），但反應(yīng)監(jiān)測時間是指該時間內(nèi)的測定讀數(shù)要用于結(jié)果計算。它的設(shè)置與加樣點、加試劑點（包括R1、R2……）、監(jiān)測時間（讀數(shù)點）、讀數(shù)間隔時間及試劑樣品比例等有關(guān)，要結(jié)合方法學(xué)兼顧權(quán)衡