大腸桿菌的分離和培養(yǎng)課件

實驗1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離整理ppt實驗1整理ppt1指結(jié)構(gòu)簡單,形體微小的單細胞、多細胞或無細胞結(jié)構(gòu)的低等生物。

一、微生物90%以上的微生物是對人類有利的。微生物的類群病毒

細菌

藍細菌

放線菌

酵母

霉菌

原生動物病毒原核生物真菌原生動物整理ppt指結(jié)構(gòu)簡單,形體微小的單細胞、多細胞或無細胞結(jié)構(gòu)2

細菌細胞由外向里依次有:

鞭毛和菌（纖）毛

莢膜

細胞壁

細胞膜

細胞質(zhì)

擬核區(qū)(類核區(qū))1、細菌的構(gòu)造圖1-3細菌的結(jié)構(gòu)繁殖方式：分裂繁殖（20min分裂一次）整理ppt細菌細胞由外向里依次有:

1、細菌的構(gòu)造圖1-332、菌落：單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。整理ppt2、菌落：單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一4菌落細菌的菌落特征因種而異整理ppt菌落細菌的菌落特征因種而異整理ppt5碳源氮源生長因子無機鹽水微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)3、培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是人工方法配制而成的，是微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)。整理ppt碳源微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)3、培養(yǎng)基61）培養(yǎng)基的成分（a）細菌培養(yǎng)基：特殊成分：蛋白胨、酵母提取液、氯化鈉酸堿度：中性偏堿（b）霉菌培養(yǎng)基：特殊成分：無機物或添加蔗糖的豆芽汁酸堿度：中性偏酸整理ppt1）培養(yǎng)基的成分（a）細菌培養(yǎng)基：整理ppt72）培養(yǎng)基的種類（1）按物理性質(zhì)分:

a.固體培養(yǎng)基通常加瓊脂，作為凝固劑

（凝固劑的要求：不被微生物利用，又可使培養(yǎng)基固化，且不影響培養(yǎng)基中的其他營養(yǎng)物被細菌吸收）作用：分離（純化）細菌、計數(shù)、保留菌種等

b.液體培養(yǎng)基不加瓊脂等凝固劑其它成分與固體培養(yǎng)基相同作用：培養(yǎng)細菌整理ppt2）培養(yǎng)基的種類（1）按物理性質(zhì)分:整理ppt8液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長整理ppt液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長整理ppt9固體培養(yǎng)基：菌落整理ppt固體培養(yǎng)基：菌落整理ppt10（2）根據(jù)化學成分分合成培養(yǎng)基——成分明確天然培養(yǎng)基——成分不明確整理ppt（2）根據(jù)化學成分分整理ppt11（3）按培養(yǎng)基的用途分類a．基礎(chǔ)培養(yǎng)基（LB培養(yǎng)基）:含有一般細菌生長繁殖需要的基本的營養(yǎng)物質(zhì)。最常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是上面提及的天然培養(yǎng)基中的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。b．營養(yǎng)培養(yǎng)基（加富培養(yǎng)基）:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質(zhì)，如血液、血清或生長因子等。用以培養(yǎng)對營養(yǎng)要求高的微生物。整理ppt（3）按培養(yǎng)基的用途分類a．基礎(chǔ)培養(yǎng)基（LB培養(yǎng)基）:含有12c、選擇培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長,如尿素固體培養(yǎng)基可以分離以尿素為氮源的微生物。d、鑒別培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物,如伊紅和美藍,和大腸桿菌的代謝產(chǎn)物結(jié)合,使菌落呈深紫色,并帶有金屬光澤,可以用來鑒別大腸桿菌整理ppt整理ppt13二、無菌操作技術(shù)1、概念

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。無論是隨后將要學到的倒平板、平板劃線操作，還是平板稀釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到“無菌”，即防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)范地進行無菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。整理ppt二、無菌操作技術(shù)1、概念無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的142、無菌技術(shù)包括：（1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌；（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。整理ppt2、無菌技術(shù)包括：整理ppt15

（1）消毒定義：利用化學或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程。3、消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別

（2）滅菌的定義：

以化學或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到完全無菌的過程。

滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。整理ppt（1）消毒定義：3、消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別（216（3）具體無菌處理方法：

（a）消毒：1）對接種室、接種箱或超凈工作臺先用紫外線

進行物理消毒，然后用酒精

增強消毒效果。

2）實驗操作者的雙手使用酒精進行消毒。3）日常生活經(jīng)常用到的是煮沸消毒法。4）對一些不耐高溫的液體，則使用巴氏消毒法。整理ppt（3）具體無菌處理方法：1）對接種室、接種箱或超凈工作臺先用17巴氏消毒法是法國科學家巴斯德創(chuàng)建的一種食品保鮮方法，最早是為了延長法國葡萄酒的保質(zhì)期。這是一種能將絕大多數(shù)的細菌殺死的低溫消毒方法。牛奶消毒也用巴氏消毒法。具體措施：牛奶在62.8攝氏度下30分鐘。

優(yōu)點：最大限度地保持了牛奶的品質(zhì)，顏色，味道和營養(yǎng)。

整理ppt巴氏消毒法是法國科學家巴斯德創(chuàng)建的一種食品保鮮方法，18(b)滅菌：1）灼燒滅菌

接種環(huán)、玻璃刮刀

試管口2）高壓蒸氣滅菌：

1kg/cm2壓力、121℃、15min培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、取樣器的頭、移液管、三角刮刀、接種環(huán)、鑷子、無菌水、培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌不會破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分。整理ppt(b)滅菌：1）灼燒滅菌培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、取樣器的頭、移19三、分離細菌方法1、劃線分離法（P20）（視頻）

1）灼燒接種環(huán)；

2）接種環(huán)冷卻后，蘸取帶菌培養(yǎng)物

3）在近火焰處，讓帶菌接種環(huán)在固體培養(yǎng)

基上劃線。劃線的方法很多，但無論采用那種方法，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進行稀釋，使之形成單個菌落。整理ppt三、分離細菌方法1、劃線分離法（P20）（視頻）20整理ppt整理ppt21整理ppt整理ppt222、涂布分離法1)稀釋菌液（10-5~10-7倍）用無菌吸管吸取1ml細菌培養(yǎng)液加入另一個盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此制成10-1倍的稀釋液。……3)涂布用無菌吸管取0.1ml稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上。再將玻璃刮刀放在酒精燈火焰上灼燒，待刮刀冷卻后，在酒精燈旁打開培養(yǎng)皿，將菌液涂布到整個平面上。4)培養(yǎng)

將培養(yǎng)皿倒置，在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24~48h。整理ppt2、涂布分離法1)稀釋菌液（10-5~10-7倍）整23整理ppt整理ppt24整理ppt整理ppt251.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。思考整理ppt1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外26四、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1、大腸桿菌（1）特性：革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌（2）用途：基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具2、培養(yǎng)：LB液體培養(yǎng)基——擴大培養(yǎng)

LB固體培養(yǎng)基——分離整理ppt四、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離整理ppt273、分離培養(yǎng)基滅菌制作平板擴大培養(yǎng)劃線分離菌種保存將LB液體和固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌將滅菌后冷卻到60℃的LB固體培養(yǎng)基倒入滅菌過的培養(yǎng)皿中，制作平面培養(yǎng)基.將大腸桿菌從斜面接種到LB液體培養(yǎng)基中，然后在37℃搖床中震蕩培養(yǎng)12h。用接種環(huán)取震蕩培養(yǎng)后的菌液，并在固體培養(yǎng)基上劃線，然后將劃線后的培養(yǎng)皿倒置與37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12~24h，觀察劃線末端的菌落生長情況.用接種環(huán)取單菌落，用劃線法接種于斜面上，在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，再放入4℃的冰箱中保存。整理ppt3、分離培養(yǎng)基滅菌制作平板擴大培養(yǎng)劃線分離菌種保存將LB液體28倒平板技術(shù)整理ppt倒平板技術(shù)整理ppt29微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)整理ppt微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)整理ppt30微生物的恒溫培養(yǎng)整理ppt微生物的恒溫培養(yǎng)整理ppt31菌種的保存接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。整理ppt菌種的保存整理ppt321.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到60℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？思考可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。整理ppt1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到60℃左右時，才能用來倒平333.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。整理ppt3.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的34問題討論

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。整理ppt問題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼35

2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。整理ppt2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃36實驗1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離整理ppt實驗1整理ppt37指結(jié)構(gòu)簡單,形體微小的單細胞、多細胞或無細胞結(jié)構(gòu)的低等生物。

一、微生物90%以上的微生物是對人類有利的。微生物的類群病毒

細菌

藍細菌

放線菌

酵母

霉菌

原生動物病毒原核生物真菌原生動物整理ppt指結(jié)構(gòu)簡單,形體微小的單細胞、多細胞或無細胞結(jié)構(gòu)38

細菌細胞由外向里依次有:

鞭毛和菌（纖）毛

莢膜

細胞壁

細胞膜

細胞質(zhì)

擬核區(qū)(類核區(qū))1、細菌的構(gòu)造圖1-3細菌的結(jié)構(gòu)繁殖方式：分裂繁殖（20min分裂一次）整理ppt細菌細胞由外向里依次有:

1、細菌的構(gòu)造圖1-3392、菌落：單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。整理ppt2、菌落：單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一40菌落細菌的菌落特征因種而異整理ppt菌落細菌的菌落特征因種而異整理ppt41碳源氮源生長因子無機鹽水微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)3、培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是人工方法配制而成的，是微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)。整理ppt碳源微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)3、培養(yǎng)基421）培養(yǎng)基的成分（a）細菌培養(yǎng)基：特殊成分：蛋白胨、酵母提取液、氯化鈉酸堿度：中性偏堿（b）霉菌培養(yǎng)基：特殊成分：無機物或添加蔗糖的豆芽汁酸堿度：中性偏酸整理ppt1）培養(yǎng)基的成分（a）細菌培養(yǎng)基：整理ppt432）培養(yǎng)基的種類（1）按物理性質(zhì)分:

a.固體培養(yǎng)基通常加瓊脂，作為凝固劑

（凝固劑的要求：不被微生物利用，又可使培養(yǎng)基固化，且不影響培養(yǎng)基中的其他營養(yǎng)物被細菌吸收）作用：分離（純化）細菌、計數(shù)、保留菌種等

b.液體培養(yǎng)基不加瓊脂等凝固劑其它成分與固體培養(yǎng)基相同作用：培養(yǎng)細菌整理ppt2）培養(yǎng)基的種類（1）按物理性質(zhì)分:整理ppt44液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長整理ppt液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長整理ppt45固體培養(yǎng)基：菌落整理ppt固體培養(yǎng)基：菌落整理ppt46（2）根據(jù)化學成分分合成培養(yǎng)基——成分明確天然培養(yǎng)基——成分不明確整理ppt（2）根據(jù)化學成分分整理ppt47（3）按培養(yǎng)基的用途分類a．基礎(chǔ)培養(yǎng)基（LB培養(yǎng)基）:含有一般細菌生長繁殖需要的基本的營養(yǎng)物質(zhì)。最常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是上面提及的天然培養(yǎng)基中的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。b．營養(yǎng)培養(yǎng)基（加富培養(yǎng)基）:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質(zhì)，如血液、血清或生長因子等。用以培養(yǎng)對營養(yǎng)要求高的微生物。整理ppt（3）按培養(yǎng)基的用途分類a．基礎(chǔ)培養(yǎng)基（LB培養(yǎng)基）:含有48c、選擇培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長,如尿素固體培養(yǎng)基可以分離以尿素為氮源的微生物。d、鑒別培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物,如伊紅和美藍,和大腸桿菌的代謝產(chǎn)物結(jié)合,使菌落呈深紫色,并帶有金屬光澤,可以用來鑒別大腸桿菌整理ppt整理ppt49二、無菌操作技術(shù)1、概念

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。無論是隨后將要學到的倒平板、平板劃線操作，還是平板稀釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到“無菌”，即防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)范地進行無菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。整理ppt二、無菌操作技術(shù)1、概念無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的502、無菌技術(shù)包括：（1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌；（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。整理ppt2、無菌技術(shù)包括：整理ppt51

（1）消毒定義：利用化學或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程。3、消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別

（2）滅菌的定義：

以化學或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到完全無菌的過程。

滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。整理ppt（1）消毒定義：3、消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別（252（3）具體無菌處理方法：

（a）消毒：1）對接種室、接種箱或超凈工作臺先用紫外線

進行物理消毒，然后用酒精

增強消毒效果。

2）實驗操作者的雙手使用酒精進行消毒。3）日常生活經(jīng)常用到的是煮沸消毒法。4）對一些不耐高溫的液體，則使用巴氏消毒法。整理ppt（3）具體無菌處理方法：1）對接種室、接種箱或超凈工作臺先用53巴氏消毒法是法國科學家巴斯德創(chuàng)建的一種食品保鮮方法，最早是為了延長法國葡萄酒的保質(zhì)期。這是一種能將絕大多數(shù)的細菌殺死的低溫消毒方法。牛奶消毒也用巴氏消毒法。具體措施：牛奶在62.8攝氏度下30分鐘。

優(yōu)點：最大限度地保持了牛奶的品質(zhì)，顏色，味道和營養(yǎng)。

整理ppt巴氏消毒法是法國科學家巴斯德創(chuàng)建的一種食品保鮮方法，54(b)滅菌：1）灼燒滅菌

接種環(huán)、玻璃刮刀

試管口2）高壓蒸氣滅菌：

1kg/cm2壓力、121℃、15min培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、取樣器的頭、移液管、三角刮刀、接種環(huán)、鑷子、無菌水、培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌不會破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分。整理ppt(b)滅菌：1）灼燒滅菌培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、取樣器的頭、移55三、分離細菌方法1、劃線分離法（P20）（視頻）

1）灼燒接種環(huán)；

2）接種環(huán)冷卻后，蘸取帶菌培養(yǎng)物

3）在近火焰處，讓帶菌接種環(huán)在固體培養(yǎng)

基上劃線。劃線的方法很多，但無論采用那種方法，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進行稀釋，使之形成單個菌落。整理ppt三、分離細菌方法1、劃線分離法（P20）（視頻）56整理ppt整理ppt57整理ppt整理ppt582、涂布分離法1)稀釋菌液（10-5~10-7倍）用無菌吸管吸取1ml細菌培養(yǎng)液加入另一個盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此制成10-1倍的稀釋液。……3)涂布用無菌吸管取0.1ml稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上。再將玻璃刮刀放在酒精燈火焰上灼燒，待刮刀冷卻后，在酒精燈旁打開培養(yǎng)皿，將菌液涂布到整個平面上。4)培養(yǎng)

將培養(yǎng)皿倒置，在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24~48h。整理ppt2、涂布分離法1)稀釋菌液（10-5~10-7倍）整59整理ppt整理ppt60整理ppt整理ppt611.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。思考整理ppt1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外62四、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1、大腸桿菌（1）特性：革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌（2）用途：基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具2、培養(yǎng)：LB液體培養(yǎng)基——擴大培養(yǎng)

LB固體培養(yǎng)基——分離整理ppt四、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離整理ppt633、分離培養(yǎng)基滅菌制作平板擴大培養(yǎng)劃線分離菌種保存將LB液體和固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌將滅菌后冷卻到60℃的LB固體培養(yǎng)基倒入滅菌過的培養(yǎng)皿中，制作平面培養(yǎng)基.將大腸桿菌從斜面接種到LB液體培養(yǎng)基中，然后在37℃搖床中震蕩培養(yǎng)12h。用接種環(huán)取震蕩培養(yǎng)后的菌液，并在固體培養(yǎng)基上劃線，然后將劃線后的培養(yǎng)皿倒置與37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12~24h，觀察劃線末端的菌落生長情況.用接種環(huán)取單菌落，用劃線法接種于斜面上，在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，再放入4℃的冰箱中保存。整理ppt3、分離培養(yǎng)基滅菌制作平板擴大培養(yǎng)劃線分離菌種保存將LB液體64倒平板技術(shù)整理ppt倒平板技術(shù)整理ppt65