最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件

產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)1產(chǎn)前診斷指征夫婦任一方有染色體異常；曾生育過(guò)染色體病患者；夫婦任一方為單基因病患者；曾生育過(guò)單基因病患者；有不明原因的自然流產(chǎn)史、畸胎史、死產(chǎn)或新生兒死亡史；產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院產(chǎn)前診斷指征夫婦任一方有染色體異常；產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院2最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件3最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件4最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件5最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件6最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件7最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件8絨毛穿刺取樣—并發(fā)癥胎兒丟失胎兒肢體發(fā)育缺陷（LRD）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛穿刺取樣—并發(fā)癥胎兒丟失產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院9CVS并發(fā)癥—胎兒丟失CVS的流產(chǎn)率不比amniocentesis高經(jīng)宮頸和經(jīng)腹取樣安全性相同（Jackson,1992）多胎取樣高于單胎取樣（Pergament,1992）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院CVS并發(fā)癥—胎兒丟失CVS的流產(chǎn)率不比amniocente10CVS并發(fā)癥－LRD1999年WHO發(fā)布CVS綜合性資料認(rèn)為CVS與LRD無(wú)關(guān)（216，381例CVS中115例出現(xiàn)LRD發(fā)生率1：1881，總的人群發(fā)生率1：1642）世界各地相關(guān)資料綜合，9周以下CVS出現(xiàn)LRD的機(jī)會(huì)高，但原因尚不清楚CVS不應(yīng)在小于孕10周的條件下進(jìn)行產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院CVS并發(fā)癥－LRD1999年WHO發(fā)布CVS綜合性資料認(rèn)為11絨毛穿刺取樣—方法經(jīng)宮頸（transcervical）經(jīng)腹（transabdorminal）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛穿刺取樣—方法經(jīng)宮頸（transcervical）產(chǎn)前診12CVS方法—經(jīng)宮頸取樣B超采用高分辨的扇掃式或凸陣式實(shí)時(shí)超聲診斷儀，經(jīng)腹探頭頻率3.5MHz,經(jīng)陰道探頭頻率5-7MHz。采用特制較細(xì)的滋養(yǎng)層活檢導(dǎo)管（多聚乙烯導(dǎo)管），其塑料導(dǎo)管外徑1.4–1.6mm,長(zhǎng)20cm,帶有導(dǎo)管芯，導(dǎo)管前端稍彎，外形似宮腔探子。導(dǎo)管另一端連接10-20ml含有2-4ml生理鹽水的注射器產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院CVS方法—經(jīng)宮頸取樣B超采用高分辨的扇掃式或凸陣式實(shí)時(shí)超聲13CVS方法—經(jīng)腹取樣雙針活檢系統(tǒng)由1根長(zhǎng)15cm、外徑1.2mm的18號(hào)引導(dǎo)套針，及1根長(zhǎng)20cm、外徑0.8mm的22號(hào)活檢針組成。在超聲引導(dǎo)下，先將引導(dǎo)套針經(jīng)腹壁及子宮穿刺入胎盤(pán)絨毛邊緣部分，拔出針芯，然后將活檢針經(jīng)引導(dǎo)套針內(nèi)送入胎盤(pán)絨毛組織,連接含2-4ml生理鹽水的20ml注射器，以5ml的負(fù)壓上下移動(dòng)活檢針吸取絨毛組織產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院CVS方法—經(jīng)腹取樣雙針活檢系統(tǒng)由1根長(zhǎng)15cm、外徑1.214CVS注意事項(xiàng)動(dòng)作要輕柔穿刺部位在胎盤(pán)絨毛葉抽吸次數(shù)不宜過(guò)多產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院CVS注意事項(xiàng)動(dòng)作要輕柔產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院15羊膜腔穿刺—?dú)v史1956年Fucks進(jìn)行羊膜腔穿刺行胎兒性別鑒定及胎兒Rh溶血診斷1966年Marksteele和RoyBreg從羊水中分離出羊水細(xì)胞培養(yǎng)成功并行胎兒核型分析產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊膜腔穿刺—?dú)v史1956年Fucks進(jìn)行羊膜腔穿刺行胎兒性16羊膜腔穿刺—時(shí)間16—20周產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊膜腔穿刺—時(shí)間16—20周產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院17羊膜腔穿刺—抽取量20—30ml產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊膜腔穿刺—抽取量20—30ml產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院18抽取的羊水用途核型分析——診斷染色體病DNA分析——診斷單基因病生化測(cè)定——診斷NTD、代謝性疾病產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院抽取的羊水用途核型分析——診斷染色體病產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)19羊水穿刺穿刺前孕婦俯臥位搖動(dòng)腹部超聲波定位引導(dǎo)采用22號(hào)或21號(hào)帶芯長(zhǎng)腰穿刺針頭垂直、快速進(jìn)針抽取羊水2ml棄置，換空針抽取羊水產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊水穿刺產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院20羊膜腔穿刺—并發(fā)癥胎兒丟失羊膜腔感染羊水滲漏穿刺部位的出血、血腫產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊膜腔穿刺—并發(fā)癥胎兒丟失產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院21羊穿并發(fā)癥---胎兒丟失1976年，NihdRegistry報(bào)道流產(chǎn)率3.5%1986年，Taboretal報(bào)道流產(chǎn)率1.7%1995年，Bombardetal報(bào)道流產(chǎn)率1.3%2000年,Antsaklis報(bào)道流產(chǎn)率2.1%產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊穿并發(fā)癥---胎兒丟失1976年，NihdRegistr22臍帶血穿刺—?dú)v史1972年，Valenti用兒科膀胱鏡在中期妊娠孕婦行子宮切開(kāi)術(shù)插入羊膜腔，獲取臍血標(biāo)本。1979年，Rodeck和Campell應(yīng)用胎兒鏡行臍帶血管穿刺，但由于并發(fā)癥高，應(yīng)用受到限制。1983年，TernandDaffos超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮臍血管穿刺取血（Cordocentesis）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺—?dú)v史1972年，Valenti用兒科膀胱鏡在中期23臍帶血穿刺—時(shí)間16周—分娩（最佳24—28周）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺—時(shí)間16周—分娩（最佳24—28周）產(chǎn)前診斷中心24臍帶血穿刺—取血量3—5ml20周后抽取6—8ml對(duì)胎兒循環(huán)無(wú)不良影響產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺—取血量3—5ml產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院25臍帶血穿刺—適應(yīng)癥胎兒核型分析或基因檢測(cè)（胎兒畸形、嚴(yán)重的FGR、羊水或絨毛細(xì)胞培養(yǎng)失敗、羊水或絨毛培養(yǎng)結(jié)果為嵌合體、非免疫性胎兒水腫、脆性X綜合癥等）胎兒血液疾病分析（血型、血小板計(jì)數(shù)等）胎兒感染（弓形蟲(chóng)、病毒感染等）胎兒情況評(píng)估（酸堿平衡、甲功等）遺傳性疾病（單基因病、凝血障礙、血紅蛋白病、代謝性疾病等）胎兒治療（宮內(nèi)輸血、宮內(nèi)藥物治療等）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺—適應(yīng)癥胎兒核型分析或基因檢測(cè)（胎兒畸形、嚴(yán)重的F26臍帶血穿刺—并發(fā)癥穿刺部位的出血臍帶血腫短暫性胎心減慢宮內(nèi)感染胎兒丟失（流產(chǎn)、早產(chǎn)）大多數(shù)并發(fā)癥為短暫性和非致命性產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺—并發(fā)癥穿刺部位的出血產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院27臍帶血穿刺并發(fā)癥—胎兒丟失Maxwell1991年報(bào)道胎兒超聲結(jié)構(gòu)篩查示正常超聲者臍穿的流產(chǎn)率為1%（1/76）；異常超聲者流產(chǎn)率為7%（5/76）；胎兒結(jié)構(gòu)明顯異常者流產(chǎn)率為25%（9/36）Antsaklis1998年報(bào)道胎兒超聲結(jié)構(gòu)篩查示正常超聲者臍穿的流產(chǎn)率1%（2/191）；異常超聲者流產(chǎn)率為13%（11/84）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺并發(fā)癥—胎兒丟失Maxwell1991年報(bào)道胎兒28臍帶穿刺部位產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶穿刺部位產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院29臍血穿刺—確定胎兒血樣血紅蛋白電泳Kleihauer-Betke試驗(yàn)：胎兒紅細(xì)胞在酸中穩(wěn)定APT試驗(yàn)：NaOH中胎兒血為粉紅色有核紅細(xì)胞的出現(xiàn)產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍血穿刺—確定胎兒血樣血紅蛋白電泳產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院30臍血穿刺—排除臍血中母血污染X染色體DMD基因內(nèi)部5對(duì)CA重復(fù)序列的連鎖分析產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍血穿刺—排除臍血中母血污染X染色體DMD基因內(nèi)部5對(duì)CA重31絨毛組織、羊水細(xì)胞、臍血細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織、羊水細(xì)胞、臍血細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院32絨毛組織的培養(yǎng)直接法培養(yǎng)法（懸浮培養(yǎng)、貼壁培養(yǎng)）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織的培養(yǎng)直接法產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院33絨毛組織的染色體檢查—直接法孕早期Langhan’s細(xì)胞有較高的有絲分裂活性，能提供足以分析的良好有絲分裂相，較絨毛培養(yǎng)簡(jiǎn)易可靠、操作簡(jiǎn)單快速產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織的染色體檢查—直接法孕早期Langhan’s細(xì)胞有較34絨毛組織的染色體檢查—直接法絨毛組織的分離洗脫加秋水仙素（終濃度2ug/ml，可一次加，也可分次少量加）37OC5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)45分鐘低滲（1%枸櫞酸鈉低滲10分鐘或1%枸櫞酸鈉和0.075mol/l1：1低滲40分鐘）預(yù)固定（甲醇：冰醋酸3：1）10分鐘固定（甲醇：冰醋酸3：1）10-20分鐘冰醋酸解離絨毛細(xì)胞（輕吹打）制片產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織的染色體檢查—直接法絨毛組織的分離洗脫產(chǎn)前診斷中心南35絨毛組織的染色體檢查—懸浮培養(yǎng)法絨毛挑選洗脫絨毛組織剪成小塊入培養(yǎng)瓶（25ml培養(yǎng)瓶每瓶10mg）加特定培養(yǎng)液3ml培養(yǎng)3-6天收獲（加秋素、低滲、固定、制片）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織的染色體檢查—懸浮培養(yǎng)法絨毛挑選洗脫產(chǎn)前診斷中心南京36絨毛組織的染色體檢查—貼壁培養(yǎng)法絨毛組織挑選洗脫絨毛組織剪成小塊加0.25%+0.02%EDTA5ml37OC搖床中20分鐘加培養(yǎng)基終止消化，離心后棄上清加培養(yǎng)基接種培養(yǎng)5-10天收獲產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織的染色體檢查—貼壁培養(yǎng)法絨毛組織挑選洗脫產(chǎn)前診斷中心37羊水細(xì)胞培養(yǎng)—細(xì)胞類(lèi)型成纖維樣細(xì)胞（F細(xì)胞）上皮樣細(xì)胞（密集型上皮樣細(xì)胞-E細(xì)胞、鐮刀樣上皮細(xì)胞、圓形上皮細(xì)胞）羊水樣細(xì)胞（AF細(xì)胞）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊水細(xì)胞培養(yǎng)—細(xì)胞類(lèi)型成纖維樣細(xì)胞（F細(xì)胞）產(chǎn)前診斷中心南京38羊水細(xì)胞培養(yǎng)—收獲方法原位法消化法刮取法產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊水細(xì)胞培養(yǎng)—收獲方法原位法產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院39羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

——污染細(xì)菌真菌支原體病毒其他細(xì)胞產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

—40羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

——母體細(xì)胞污染若胎兒為男性，由于母體細(xì)胞污染誤將胎兒診斷為嵌合體母體細(xì)胞在培養(yǎng)中占優(yōu)勢(shì)產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

—41羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

——母體細(xì)胞污染的預(yù)防羊水穿刺時(shí)，把最先抽得的1-2ml羊水棄掉染色體多態(tài)現(xiàn)象的測(cè)試羊水細(xì)胞、母體細(xì)胞的HLA組織定型鑒別產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

—42羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

——細(xì)胞不生長(zhǎng)、不貼壁最常見(jiàn)的原因是支原體污染培養(yǎng)基PH不適當(dāng)，偏酸（＜6.4或偏堿＞7.4均不利最合適的穿刺時(shí)間16-20周產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

—43羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

——細(xì)胞及染色體收獲少每天觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)（梭形細(xì)胞背景上有透明透亮的圓形細(xì)胞）滾圓的細(xì)胞與有絲分裂的圓形細(xì)胞鑒別操作應(yīng)輕柔，胰酶消化法要掌握好胰酶消化的時(shí)間羊水中胎脂多時(shí)3-5天可輕輕動(dòng)一動(dòng)，減少胎脂貼壁占據(jù)空間低滲時(shí)間短于外周血（一般3-5分鐘）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊水細(xì)胞培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

—44臍帶血細(xì)胞培養(yǎng)量少于外周血（一般5ml注射器小于14滴）其他同外周血產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血細(xì)胞培養(yǎng)量少于外周血（一般5ml注射器小于14滴）產(chǎn)前45Thanks!產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院Thanks!產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院46

結(jié)束語(yǔ)謝謝大家聆聽(tīng)！?。?7

結(jié)束語(yǔ)謝謝大家聆聽(tīng)?。?！47產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)48產(chǎn)前診斷指征夫婦任一方有染色體異常；曾生育過(guò)染色體病患者；夫婦任一方為單基因病患者；曾生育過(guò)單基因病患者；有不明原因的自然流產(chǎn)史、畸胎史、死產(chǎn)或新生兒死亡史；產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院產(chǎn)前診斷指征夫婦任一方有染色體異常；產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院49最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件50最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件51最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件52最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件53最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件54最新產(chǎn)前診斷中絨毛臍血羊水取樣及標(biāo)本培養(yǎng)課件55絨毛穿刺取樣—并發(fā)癥胎兒丟失胎兒肢體發(fā)育缺陷（LRD）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛穿刺取樣—并發(fā)癥胎兒丟失產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院56CVS并發(fā)癥—胎兒丟失CVS的流產(chǎn)率不比amniocentesis高經(jīng)宮頸和經(jīng)腹取樣安全性相同（Jackson,1992）多胎取樣高于單胎取樣（Pergament,1992）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院CVS并發(fā)癥—胎兒丟失CVS的流產(chǎn)率不比amniocente57CVS并發(fā)癥－LRD1999年WHO發(fā)布CVS綜合性資料認(rèn)為CVS與LRD無(wú)關(guān)（216，381例CVS中115例出現(xiàn)LRD發(fā)生率1：1881，總的人群發(fā)生率1：1642）世界各地相關(guān)資料綜合，9周以下CVS出現(xiàn)LRD的機(jī)會(huì)高，但原因尚不清楚CVS不應(yīng)在小于孕10周的條件下進(jìn)行產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院CVS并發(fā)癥－LRD1999年WHO發(fā)布CVS綜合性資料認(rèn)為58絨毛穿刺取樣—方法經(jīng)宮頸（transcervical）經(jīng)腹（transabdorminal）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛穿刺取樣—方法經(jīng)宮頸（transcervical）產(chǎn)前診59CVS方法—經(jīng)宮頸取樣B超采用高分辨的扇掃式或凸陣式實(shí)時(shí)超聲診斷儀，經(jīng)腹探頭頻率3.5MHz,經(jīng)陰道探頭頻率5-7MHz。采用特制較細(xì)的滋養(yǎng)層活檢導(dǎo)管（多聚乙烯導(dǎo)管），其塑料導(dǎo)管外徑1.4–1.6mm,長(zhǎng)20cm,帶有導(dǎo)管芯，導(dǎo)管前端稍彎，外形似宮腔探子。導(dǎo)管另一端連接10-20ml含有2-4ml生理鹽水的注射器產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院CVS方法—經(jīng)宮頸取樣B超采用高分辨的扇掃式或凸陣式實(shí)時(shí)超聲60CVS方法—經(jīng)腹取樣雙針活檢系統(tǒng)由1根長(zhǎng)15cm、外徑1.2mm的18號(hào)引導(dǎo)套針，及1根長(zhǎng)20cm、外徑0.8mm的22號(hào)活檢針組成。在超聲引導(dǎo)下，先將引導(dǎo)套針經(jīng)腹壁及子宮穿刺入胎盤(pán)絨毛邊緣部分，拔出針芯，然后將活檢針經(jīng)引導(dǎo)套針內(nèi)送入胎盤(pán)絨毛組織,連接含2-4ml生理鹽水的20ml注射器，以5ml的負(fù)壓上下移動(dòng)活檢針吸取絨毛組織產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院CVS方法—經(jīng)腹取樣雙針活檢系統(tǒng)由1根長(zhǎng)15cm、外徑1.261CVS注意事項(xiàng)動(dòng)作要輕柔穿刺部位在胎盤(pán)絨毛葉抽吸次數(shù)不宜過(guò)多產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院CVS注意事項(xiàng)動(dòng)作要輕柔產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院62羊膜腔穿刺—?dú)v史1956年Fucks進(jìn)行羊膜腔穿刺行胎兒性別鑒定及胎兒Rh溶血診斷1966年Marksteele和RoyBreg從羊水中分離出羊水細(xì)胞培養(yǎng)成功并行胎兒核型分析產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊膜腔穿刺—?dú)v史1956年Fucks進(jìn)行羊膜腔穿刺行胎兒性63羊膜腔穿刺—時(shí)間16—20周產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊膜腔穿刺—時(shí)間16—20周產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院64羊膜腔穿刺—抽取量20—30ml產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊膜腔穿刺—抽取量20—30ml產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院65抽取的羊水用途核型分析——診斷染色體病DNA分析——診斷單基因病生化測(cè)定——診斷NTD、代謝性疾病產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院抽取的羊水用途核型分析——診斷染色體病產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)66羊水穿刺穿刺前孕婦俯臥位搖動(dòng)腹部超聲波定位引導(dǎo)采用22號(hào)或21號(hào)帶芯長(zhǎng)腰穿刺針頭垂直、快速進(jìn)針抽取羊水2ml棄置，換空針抽取羊水產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊水穿刺產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院67羊膜腔穿刺—并發(fā)癥胎兒丟失羊膜腔感染羊水滲漏穿刺部位的出血、血腫產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊膜腔穿刺—并發(fā)癥胎兒丟失產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院68羊穿并發(fā)癥---胎兒丟失1976年，NihdRegistry報(bào)道流產(chǎn)率3.5%1986年，Taboretal報(bào)道流產(chǎn)率1.7%1995年，Bombardetal報(bào)道流產(chǎn)率1.3%2000年,Antsaklis報(bào)道流產(chǎn)率2.1%產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院羊穿并發(fā)癥---胎兒丟失1976年，NihdRegistr69臍帶血穿刺—?dú)v史1972年，Valenti用兒科膀胱鏡在中期妊娠孕婦行子宮切開(kāi)術(shù)插入羊膜腔，獲取臍血標(biāo)本。1979年，Rodeck和Campell應(yīng)用胎兒鏡行臍帶血管穿刺，但由于并發(fā)癥高，應(yīng)用受到限制。1983年，TernandDaffos超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮臍血管穿刺取血（Cordocentesis）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺—?dú)v史1972年，Valenti用兒科膀胱鏡在中期70臍帶血穿刺—時(shí)間16周—分娩（最佳24—28周）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺—時(shí)間16周—分娩（最佳24—28周）產(chǎn)前診斷中心71臍帶血穿刺—取血量3—5ml20周后抽取6—8ml對(duì)胎兒循環(huán)無(wú)不良影響產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺—取血量3—5ml產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院72臍帶血穿刺—適應(yīng)癥胎兒核型分析或基因檢測(cè)（胎兒畸形、嚴(yán)重的FGR、羊水或絨毛細(xì)胞培養(yǎng)失敗、羊水或絨毛培養(yǎng)結(jié)果為嵌合體、非免疫性胎兒水腫、脆性X綜合癥等）胎兒血液疾病分析（血型、血小板計(jì)數(shù)等）胎兒感染（弓形蟲(chóng)、病毒感染等）胎兒情況評(píng)估（酸堿平衡、甲功等）遺傳性疾?。▎位虿　⒛系K、血紅蛋白病、代謝性疾病等）胎兒治療（宮內(nèi)輸血、宮內(nèi)藥物治療等）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺—適應(yīng)癥胎兒核型分析或基因檢測(cè)（胎兒畸形、嚴(yán)重的F73臍帶血穿刺—并發(fā)癥穿刺部位的出血臍帶血腫短暫性胎心減慢宮內(nèi)感染胎兒丟失（流產(chǎn)、早產(chǎn)）大多數(shù)并發(fā)癥為短暫性和非致命性產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺—并發(fā)癥穿刺部位的出血產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院74臍帶血穿刺并發(fā)癥—胎兒丟失Maxwell1991年報(bào)道胎兒超聲結(jié)構(gòu)篩查示正常超聲者臍穿的流產(chǎn)率為1%（1/76）；異常超聲者流產(chǎn)率為7%（5/76）；胎兒結(jié)構(gòu)明顯異常者流產(chǎn)率為25%（9/36）Antsaklis1998年報(bào)道胎兒超聲結(jié)構(gòu)篩查示正常超聲者臍穿的流產(chǎn)率1%（2/191）；異常超聲者流產(chǎn)率為13%（11/84）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶血穿刺并發(fā)癥—胎兒丟失Maxwell1991年報(bào)道胎兒75臍帶穿刺部位產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍帶穿刺部位產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院76臍血穿刺—確定胎兒血樣血紅蛋白電泳Kleihauer-Betke試驗(yàn)：胎兒紅細(xì)胞在酸中穩(wěn)定APT試驗(yàn)：NaOH中胎兒血為粉紅色有核紅細(xì)胞的出現(xiàn)產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍血穿刺—確定胎兒血樣血紅蛋白電泳產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院77臍血穿刺—排除臍血中母血污染X染色體DMD基因內(nèi)部5對(duì)CA重復(fù)序列的連鎖分析產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院臍血穿刺—排除臍血中母血污染X染色體DMD基因內(nèi)部5對(duì)CA重78絨毛組織、羊水細(xì)胞、臍血細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織、羊水細(xì)胞、臍血細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院79絨毛組織的培養(yǎng)直接法培養(yǎng)法（懸浮培養(yǎng)、貼壁培養(yǎng)）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織的培養(yǎng)直接法產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院80絨毛組織的染色體檢查—直接法孕早期Langhan’s細(xì)胞有較高的有絲分裂活性，能提供足以分析的良好有絲分裂相，較絨毛培養(yǎng)簡(jiǎn)易可靠、操作簡(jiǎn)單快速產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織的染色體檢查—直接法孕早期Langhan’s細(xì)胞有較81絨毛組織的染色體檢查—直接法絨毛組織的分離洗脫加秋水仙素（終濃度2ug/ml，可一次加，也可分次少量加）37OC5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)45分鐘低滲（1%枸櫞酸鈉低滲10分鐘或1%枸櫞酸鈉和0.075mol/l1：1低滲40分鐘）預(yù)固定（甲醇：冰醋酸3：1）10分鐘固定（甲醇：冰醋酸3：1）10-20分鐘冰醋酸解離絨毛細(xì)胞（輕吹打）制片產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織的染色體檢查—直接法絨毛組織的分離洗脫產(chǎn)前診斷中心南82絨毛組織的染色體檢查—懸浮培養(yǎng)法絨毛挑選洗脫絨毛組織剪成小塊入培養(yǎng)瓶（25ml培養(yǎng)瓶每瓶10mg）加特定培養(yǎng)液3ml培養(yǎng)3-6天收獲（加秋素、低滲、固定、制片）產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織的染色體檢查—懸浮培養(yǎng)法絨毛挑選洗脫產(chǎn)前診斷中心南京83絨毛組織的染色體檢查—貼壁培養(yǎng)法絨毛組織挑選洗脫絨毛組織剪成小塊加0.25%+0.02%EDTA5ml37OC搖床中20分鐘加培養(yǎng)基終止消化，離心后棄上清加培養(yǎng)基接種培養(yǎng)5-10天收獲產(chǎn)前診斷中心南京鼓樓醫(yī)院絨毛組織的染色體檢查—貼壁培養(yǎng)法絨毛組織挑選洗脫產(chǎn)前診斷中心84羊水細(xì)胞培養(yǎng)—細(xì)胞類(lèi)型成纖維樣細(xì)胞（F細(xì)胞）上皮樣細(xì)胞（密集型上皮樣細(xì)胞