溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查課件

溶血性貧血的分類按發(fā)病機(jī)制分類1.RBC內(nèi)在因素（遺傳性/獲得性）RBC膜缺陷：遺傳球、PNHRBC酶缺陷：G-6PD缺乏癥珠蛋白異常（肽鏈不平衡）：海洋性貧血、異常血紅蛋白病2.RBC外在因素（獲得性）免疫性溶貧:AIHA、新生兒溶血癥、藥物誘發(fā)紅細(xì)胞相關(guān)抗體機(jī)械損傷性：DIC、TTP、人造瓣膜感染：瘧疾物理因素：灼傷毒素：蛇毒脾亢:單核巨噬細(xì)胞功能亢進(jìn)溶血性貧血的分類按發(fā)病機(jī)制分類1溶血性貧血的分類按溶血發(fā)生部位分類（RBC破壞場所）血管內(nèi)溶血：RBC在血管內(nèi)破壞見于DIC、機(jī)械性微血管病變、燒傷、輸血、PNH血管外溶血：RBC在單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬或破壞AIHA，遺傳性球形細(xì)胞增多癥溶血性貧血的分類按溶血發(fā)生部位分類（RBC破壞場所）2溶血性貧血第一步確定是否有溶血（篩查檢測）1.紅細(xì)胞破壞增加2.紅細(xì)胞代償性增生第二步哪一類溶貧（病因檢測）溶血性貧血第一步確定是否有溶血（篩查檢測）3一、溶血性貧血的篩查檢測一、溶血性貧血的篩查檢測4（一）、紅細(xì)胞破壞增加RBC壽命測定51Cr同位素標(biāo)記參考值：25~32天半衰期<15天，說明有溶血存在（一）、紅細(xì)胞破壞增加RBC壽命測定52.血漿游離血紅蛋白測定

（plasmafreehemoglobin）【參考值】：<50mg/L

【意義】：血管內(nèi)溶血時明顯增高

血管外溶血時正常或輕度升高2.血漿游離血紅蛋白測定

（plasmafreehem63.血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）

【參考值】：0.7～1.5g/L【臨床意義】：

Hp減少，提示溶血存在，血管內(nèi)溶血時顯著減低

Hp增加，提示急慢性感染、惡性腫瘤、創(chuàng)傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE等鑒別肝內(nèi)外阻塞性黃疸肝內(nèi)阻塞性黃疸顯著減少或缺乏肝外阻塞性黃疸正?；蛟龈?.血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）

【參7【臨床意義】陽性提示PNH。【參考范圍】外周血中CD55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％主要取決于紅細(xì)胞表面積與體積之比?！九R床意義】陽性提示PNH。反之，抵抗力較?。创嘈暂^大）。常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等?！驹怼考?xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等抗人球蛋白是完全抗體，可與多個紅細(xì)胞表面不完全抗體結(jié)合，使紅細(xì)胞相互連接起來出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。（二）、

紅細(xì)胞代償增生外周血紅細(xì)胞形態(tài)改變【參考值】未孵育50%溶血4.免疫性溶貧:AIHA、新生兒溶血癥、藥物誘發(fā)紅細(xì)胞相關(guān)抗體血漿游離血紅蛋白增高，結(jié)合珠蛋白(Hp)降低，血紅蛋白尿及尿中出現(xiàn)含鐵血黃素等可能是紡錘體的殘余物或是胞質(zhì)中脂蛋白變性所致。GPI錨連蛋白缺失是由于體細(xì)胞發(fā)生X連鎖的PIG-A基因突變造成的。第一步確定是否有溶血（篩查檢測）4.尿含鐵血黃素試驗(yàn)

（Roustest）腎小管上皮細(xì)胞吸收血紅蛋白，代謝成含鐵血黃素。當(dāng)細(xì)胞脫落至尿中，鐵離子在酸化的低鐵氰化鉀溶液中生成藍(lán)色的鐵氰化鐵，顯微鏡下尿沉渣可有深藍(lán)色物質(zhì)出現(xiàn)，即為陽性?！窘Y(jié)果判定】陰性【臨床意義】見于慢性血管內(nèi)溶血，如PNH【臨床意義】陽性提示PNH。4.尿含鐵血黃素試驗(yàn)

（Rou85.血紅蛋白尿測定（hemoglobinuria）血管內(nèi)有大量紅細(xì)胞破壞，血漿中的游離血紅蛋白量超過1000mg/L時出現(xiàn)醬油色尿【結(jié)果判定】陰性【臨床意義】溶血時陽性5.血紅蛋白尿測定（hemoglobinuria）血管內(nèi)有96.血漿高鐵血紅素白蛋白試驗(yàn)

（methemalbumintest）血漿中游離血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，接著分解為高鐵血紅素，后者與白蛋白結(jié)合形成高鐵血紅素白蛋白【結(jié)果判定】陰性【臨床意義】見于各種原因所致的嚴(yán)重血管內(nèi)溶血6.血漿高鐵血紅素白蛋白試驗(yàn)

（methem107.外周血紅細(xì)胞形態(tài)改變7.外周血紅細(xì)胞形態(tài)改變11裂細(xì)胞schistocyte（紅細(xì)胞異形癥poikilocytosis）系指紅細(xì)胞發(fā)生各種明顯的形態(tài)學(xué)異常改變而言。紅細(xì)胞可呈梨形、淚滴性、新月形、長圓形、啞鈴型、逗點(diǎn)性、三角形、盔形，以及球形、靶形等。

見于紅細(xì)胞因機(jī)械或物理因素所致的破壞，如微血管病性溶血性貧血如彌散性血管內(nèi)凝血、血栓性血小板減少性紫癜、溶血尿毒癥綜合征等。也可見于嚴(yán)重?zé)齻∪恕Ａ鸭?xì)胞schistocyte128.血清膽紅素（TBIL）增高，已非結(jié)合膽紅素（間接膽紅素，IBIL）增高為主【參考值】TBIL0~1.2mg/dl(0~20.5ummol/L)IBIL0~0.8mg/dl(0~13.7ummol/L)【臨床意義】提示溶血8.血清膽紅素（TBIL）增高，已非結(jié)合膽紅素（間接膽紅素，138.血清乳酸脫氫酶

【參考值】80～220U/L【臨床意義】提示溶血8.血清乳酸脫氫酶

【參考值】80～220U/L14（二）、

紅細(xì)胞代償增生紅細(xì)胞大小不均

網(wǎng)織紅細(xì)胞增多

外周血見有核RBC

骨髓紅細(xì)胞系統(tǒng)增生明顯活躍，形態(tài)異常細(xì)胞嗜多色性出現(xiàn)嗜堿點(diǎn)彩紅細(xì)胞出現(xiàn)豪－喬小體出現(xiàn)卡波環(huán)（二）、

紅細(xì)胞代償增生紅細(xì)胞大小不均15紅細(xì)胞大小不均anisocytosis

紅細(xì)胞大小懸殊，直徑可相差一倍以上。

反映骨髓中紅細(xì)胞增生明顯旺盛。見于增生性貧血，而在巨幼細(xì)胞貧血中尤為明顯。MDS中也可見。溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查課件16嗜多色性

紅細(xì)胞呈淡灰藍(lán)或紫灰色，是未完全成熟的紅細(xì)胞，體積較正常紅細(xì)胞稍大，胞質(zhì)呈嗜堿性著色的物質(zhì)為少量殘留的核糖體、線粒體等成分。其增多反映骨髓造血功能活躍，紅細(xì)胞系增生旺盛。見于增生性貧血，尤以急性溶血性貧血時為最多見。嗜多色性17嗜堿性點(diǎn)彩細(xì)胞內(nèi)見到散在的大小和數(shù)量不一深藍(lán)色顆粒。點(diǎn)彩紅細(xì)胞屬于未完全成熟的紅細(xì)胞，有時與嗜多性并存。多見于鉛中毒及骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧。嗜堿性點(diǎn)彩18Hp減少，提示溶血存在，血管內(nèi)溶血時顯著減低【臨床意義】溶血時陽性可能是紡錘體的殘余物或是胞質(zhì)中脂蛋白變性所致。動態(tài)檢測，凝集效價增高4倍以上較有診斷價值?！驹怼考?xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。酸化血清溶血試驗(yàn)(Ham’s試驗(yàn))、蔗糖溶血試驗(yàn)、蛇毒因子溶血試驗(yàn)等【臨床意義】有異常血紅蛋白區(qū)帶見于海洋性貧血、異常血紅蛋白病(一)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)用正常人血清免疫家兔，獲得抗人球蛋白血清。常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等。紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等【臨床意義】正常陰性。血漿中游離血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，接著分解為高鐵血紅素，后者與白蛋白結(jié)合形成高鐵血紅素白蛋白抗人球蛋白試驗(yàn)(Coombs’test)裂細(xì)胞schistocyte見于：①各種溶血性貧血②紅白血?、鬯柰庠煅芄撬柁D(zhuǎn)移腫瘤血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）半衰期<15天，說明有溶血存在RBC膜缺陷：遺傳球、PNH【參考值】溶血度<5%染色質(zhì)小體又稱豪－喬小體，為紫紅色圓形小體，是核染色質(zhì)的殘留部分。常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等Hp減少，提示溶血存在，血管內(nèi)溶血時顯著減低染色質(zhì)小體19卡波環(huán)（Cabot)一種紫紅色成圓形或8字形細(xì)線狀環(huán)?？赡苁羌忓N體的殘余物或是胞質(zhì)中脂蛋白變性所致。常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等?？úōh(huán)（Cabot)20有核紅細(xì)胞

有核紅細(xì)胞即幼稚紅細(xì)胞，均存在于骨髓中，正常人外周血中不能見到，在出生一周之內(nèi)的新生兒外周血中可見到少量。見于：①各種溶血性貧血②紅白血?、鬯柰庠煅芄撬柁D(zhuǎn)移腫瘤有核紅細(xì)胞21二、哪一類溶血性貧血？二、哪一類溶血性貧血？22(一)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)酸溶血試驗(yàn)蔗糖溶血試驗(yàn)蛇毒溶血試驗(yàn)CD55,CD59檢測(一)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞孵育滲透23

1.紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)【原理】是測定紅細(xì)胞對不同濃度低滲氯化鈉溶血的抵抗能力。主要取決于紅細(xì)胞表面積與體積之比。表面積大而體積小，對低滲鹽水抵抗力大（即脆性較?。?。反之，抵抗力較小（即脆性較大）。

【參考值】開始溶血：0.42%～0.46%（4.2～4.6g/L）NaCL完全溶血：0.28%～0.34%（2.8～3.4g/L）NaCL【臨床意義】

（1）脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥（開始溶血5.2g/L，甚至在6.8g/L即開始溶血）（2）脆性減低小細(xì)胞低色素性貧血：海洋性貧血、缺鐵性貧血

1.紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)【原理】是測定紅細(xì)胞對不同濃度低滲242.紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)【原理】37℃孵育24小時，細(xì)胞內(nèi)葡萄糖消耗增加，ATP減少，鈉離子泵出減少，細(xì)胞膨脹脆性增高【參考值】未孵育50%溶血4.0~4.45g/L 孵育50%溶血4.65~5.9g/L【意義】

脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥脆性減低缺鐵性貧血珠蛋白生成障礙性貧血2.紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)【原理】37℃孵育24小時，細(xì)25陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)一種后天獲得性血細(xì)胞膜缺陷的克隆性疾病，臨床上可表現(xiàn)血管內(nèi)溶血、栓塞、全血細(xì)胞減少等，有時可出現(xiàn)骨髓衰竭。大多數(shù)PNH患者異常克隆與正常造血并存，使本病的診斷和發(fā)病機(jī)制的研究受到限制。PNH患者紅細(xì)胞膜表面缺乏加速衰變因子（DAF，CD55）反應(yīng)性溶血的膜抑制物（MIRL，CD59）等，使紅細(xì)胞對補(bǔ)體敏感而溶血。上述3種蛋白都經(jīng)糖基化磷脂酰肌醇(GPI)連接在細(xì)胞膜上，稱為GPI錨連蛋白。GPI錨連蛋白缺失是由于體細(xì)胞發(fā)生X連鎖的PIG-A基因突變造成的。陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)一種后天獲得性血細(xì)胞膜缺陷263.酸溶血試驗(yàn)(Ham試驗(yàn))

【原理】膜蛋白缺陷的紅細(xì)胞對補(bǔ)體敏感增加，在弱酸血清（pH6.6~6.8）中，經(jīng)37℃孵育后紅細(xì)胞發(fā)生溶血?！九R床意義】正常人陰性，陽性見于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）。該法敏感性較高。特異性高。3.酸溶血試驗(yàn)(Ham試驗(yàn))【原理】膜蛋白缺陷的紅細(xì)胞27Ham試驗(yàn)Ham試驗(yàn)28【臨床意義】溶血時陽性一、溶血性貧血的篩查檢測【參考值】正常人直接、間接均抗人球蛋白試驗(yàn)均陰性紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)點(diǎn)彩紅細(xì)胞屬于未完全成熟的紅細(xì)胞，有時與嗜多性并存。紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)其增多反映骨髓造血功能活躍，紅細(xì)胞系增生旺盛?！驹怼空崽请x子濃度低，增強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞結(jié)合，使紅細(xì)胞膜上形成小孔，蔗糖進(jìn)入紅細(xì)胞而致溶血。主要取決于紅細(xì)胞表面積與體積之比?！九R床意義】見于各種原因所致的嚴(yán)重血管內(nèi)溶血可作為PNH篩選試驗(yàn)，陰性可排除，陽性應(yīng)作Ham試驗(yàn)。CD55,CD59檢測紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)肝外阻塞性黃疸正?；蛟龈咭?、溶血性貧血的篩查檢測紅細(xì)胞大小懸殊，直徑可相差一倍以上。紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)酸化血清溶血試驗(yàn)(Ham’s試驗(yàn))、蔗糖溶血試驗(yàn)、蛇毒因子溶血試驗(yàn)等又稱豪－喬小體，為紫紅色圓形小體，是核染色質(zhì)的殘留部分。裂細(xì)胞schistocyte【臨床意義】溶血時陽性Coombs’試驗(yàn)、酸溶血試驗(yàn)、滲透脆性試驗(yàn)等的臨床意義血紅蛋白尿測定（hemoglobinuria）大多數(shù)PNH患者異?？寺∨c正常造血并存，使本病的診斷和發(fā)病機(jī)制的研究受到限制?！驹怼繖C(jī)體存在抗自身紅細(xì)胞抗體，在低溫時與相應(yīng)抗原結(jié)合，使紅細(xì)胞凝集，特別是在4℃時最強(qiáng)烈，但溫度升高到37℃后凝集消失，稱為冷凝集試驗(yàn)。【參考范圍】外周血中CD55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％【臨床意義】溶血時陽性第一步確定是否有溶血（篩查檢測）半衰期<15天，說明有溶血存在CD55和CD59檢測：用雙色熒光流式細(xì)胞術(shù)檢測PNH患者紅細(xì)胞膜上的CD55和CD59，當(dāng)PNH患者的CD59陰性細(xì)胞占3％以上時即可檢出血清RBC抗IgG有核紅細(xì)胞即幼稚紅細(xì)胞，均存在于骨髓中，正常人外周血中不能見到，在出生一周之內(nèi)的新生兒外周血中可見到少量。（二）、

紅細(xì)胞代償增生可作為PNH篩選試驗(yàn)，陰性可排除，陽性應(yīng)作Ham試驗(yàn)。表面積大而體積小，對低滲鹽水抵抗力大（即脆性較?。D55CD59檢測免疫性溶貧:AIHA、新生兒溶血癥、藥物誘發(fā)紅細(xì)胞相關(guān)抗體【參考值】正常人直接、間接均抗人球蛋白試驗(yàn)均陰性常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等機(jī)械損傷性：DIC、TTP、人造瓣膜【參考范圍】外周血中CD55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％GPI錨連蛋白缺失是由于體細(xì)胞發(fā)生X連鎖的PIG-A基因突變造成的。PNH不同時間尿樣【臨床意義】溶血時陽性Coombs’試驗(yàn)、酸溶血試驗(yàn)、滲透294.蔗糖水溶血試驗(yàn)【原理】

蔗糖離子濃度低，增強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞結(jié)合，使紅細(xì)胞膜上形成小孔，蔗糖進(jìn)入紅細(xì)胞而致溶血?！九R床意義】正常陰性。PNH本試驗(yàn)常為陽性。可作為PNH篩選試驗(yàn)，陰性可排除，陽性應(yīng)作Ham試驗(yàn)。4.蔗糖水溶血試驗(yàn)【原理】蔗糖離子濃度低，增強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞305.蛇毒溶血試驗(yàn)【原理】蛇毒因子是種溶血因子，能直接激活補(bǔ)體C3，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，造成溶血?！緟⒖贾怠咳苎?lt;5%【臨床意義】陽性提示PNH。5.蛇毒溶血試驗(yàn)【原理】蛇毒因子是種溶血因子，能直接激活補(bǔ)316.CD55CD59檢測【原理】CD55，CD59是補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白，具有GPI錨定蛋白作用。PNH患者紅細(xì)胞和粒細(xì)胞上GPI錨缺陷，無法結(jié)合在細(xì)胞膜上，導(dǎo)致對補(bǔ)體敏感，容易發(fā)生溶血?！緟⒖挤秶客庵苎蠧D55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％【臨床意義】PNH患者該類細(xì)胞>10％6.CD55CD59檢測【原理】CD55，CD59是補(bǔ)體32PNH診斷1.初篩試驗(yàn)血管內(nèi)溶血的特點(diǎn)：血漿游離血紅蛋白增高，結(jié)合珠蛋白(Hp)降低，血紅蛋白尿及尿中出現(xiàn)含鐵血黃素等2.診斷試驗(yàn)酸化血清溶血試驗(yàn)(Ham’s試驗(yàn))、蔗糖溶血試驗(yàn)、蛇毒因子溶血試驗(yàn)等3.特異的診斷PNH的實(shí)驗(yàn)方法CD55和CD59檢測：用雙色熒光流式細(xì)胞術(shù)檢測PNH患者紅細(xì)胞膜上的CD55和CD59，當(dāng)PNH患者的CD59陰性細(xì)胞占3％以上時即可檢出PNH診斷1.初篩試驗(yàn)33（二）紅細(xì)胞內(nèi)酶缺陷的檢驗(yàn)1.自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)【原理】細(xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。在溫育過程中分別加入葡萄糖和ATP作糾正物，看溶血能否糾正。（二）紅細(xì)胞內(nèi)酶缺陷的檢驗(yàn)1.自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)34【參考值】正常人輕微溶血，溶血度<3.5%；加葡萄糖、ATP溶血明顯糾正，溶血度<1%?！九R床意義】

1）葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G-6PD）缺乏癥、蠶豆病溶血增加，加葡萄糖、ATP溶血部分糾正。2）丙酮酸激酶缺乏癥加葡萄糖不能糾正，加入ATP能糾正?！緟⒖贾怠空Ｈ溯p微溶血，溶血度<3.5%；加葡萄糖、A35（三）異常血紅蛋白的檢測

血紅蛋白電泳檢測【參考值】正常成人電泳圖譜顯示4條區(qū)帶，最多的是HbA,少量HbA2，再后為兩條兩更少的紅細(xì)胞內(nèi)的非血紅蛋白成分（NH1、NH2）。【臨床意義】有異常血紅蛋白區(qū)帶見于海洋性貧血、異常血紅蛋白?。ㄈ┊惓Ｑt蛋白的檢測血紅蛋白電泳檢測36(四)自身免疫性溶血的檢驗(yàn)1.抗人球蛋白試驗(yàn)(Coombs’test)

【原理】紅細(xì)胞的膜電位使兩個紅細(xì)胞間保持一定距離。不完全抗體IgG分子較小，無法連接兩個鄰近的紅細(xì)胞而只能和一個紅細(xì)胞抗原相結(jié)合。用正常人血清免疫家兔，獲得抗人球蛋白血清?？谷饲虻鞍资峭耆贵w，可與多個紅細(xì)胞表面不完全抗體結(jié)合，使紅細(xì)胞相互連接起來出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。

直接抗人球蛋白試驗(yàn)：檢測紅細(xì)胞表面結(jié)合有不完全抗體。

間接抗人球蛋白試驗(yàn)：檢查血清中有無游離的不完全抗體。(四)自身免疫性溶血的檢驗(yàn)1.抗人球蛋白試驗(yàn)(Coom37抗人球蛋白IgG不完全抗體RBC抗人球蛋白IgG不完全抗體RBC38溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查課件39將病人血清和正常RBC混合，再加入抗IgG試劑病人血清RBC抗IgG將病人血清和正常RBC混合，再加入抗IgG試劑40【參考值】正常人直接、間接均抗人球蛋白試驗(yàn)均陰性【臨床意義】1）陽性見于AIHA，新生兒溶血病，SLE等2）AIHA大多為IgG（溫抗體型37℃條件下作用最強(qiáng)），少數(shù)為IgM(冷抗體型4℃條件下進(jìn)行試驗(yàn))3）間接試驗(yàn)主要見于Rh或ABO妊娠免疫性新生兒溶血病母體血清中不完全抗體檢測?！緟⒖贾怠空Ｈ酥苯印㈤g接均抗人球蛋白試驗(yàn)均陰性41（五）冷凝集試驗(yàn)【原理】機(jī)體存在抗自身紅細(xì)胞抗體，在低溫時與相應(yīng)抗原結(jié)合，使紅細(xì)胞凝集，特別是在4℃時最強(qiáng)烈，但溫度升高到37℃后凝集消失，稱為冷凝集試驗(yàn)?！緟⒖贾怠啃r<1：40【臨床意義】某些AIHA，傳染性單核細(xì)胞增多癥、惡性淋巴瘤等可陽性。動態(tài)檢測，凝集效價增高4倍以上較有診斷價值。（五）冷凝集試驗(yàn)【原理】機(jī)體存在抗自身紅細(xì)胞抗體，在低溫時與42溶血性貧血的檢測1.是否為溶血性貧血2.區(qū)分溶血部位3.溶血原因診斷溶血性貧血的檢測1.是否為溶血性貧血43【原理】是測定紅細(xì)胞對不同濃度低滲氯化鈉溶血的抵抗能力。紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)GPI錨連蛋白缺失是由于體細(xì)胞發(fā)生X連鎖的PIG-A基因突變造成的。【參考范圍】外周血中CD55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％【參考值】正常人輕微溶血，溶血度<3.【原理】細(xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。(一)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等?！驹怼渴菧y定紅細(xì)胞對不同濃度低滲氯化鈉溶血的抵抗能力?！驹怼可叨疽蜃邮欠N溶血因子，能直接激活補(bǔ)體C3，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，造成溶血。常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等。裂細(xì)胞schistocyte常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等肝內(nèi)阻塞性黃疸顯著減少或缺乏【原理】細(xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等。3）間接試驗(yàn)主要見于Rh或ABO妊娠免疫性新生兒溶血病母體血清中不完全抗體檢測?！九R床意義】見于各種原因所致的嚴(yán)重血管內(nèi)溶血紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)RBC膜缺陷：遺傳球、PNH【臨床意義】陽性提示PNH。學(xué)習(xí)重點(diǎn)Coombs’試驗(yàn)、酸溶血試驗(yàn)、滲透脆性試驗(yàn)等的臨床意義【原理】是測定紅細(xì)胞對不同濃度低滲氯化鈉溶血的抵抗能力。學(xué)習(xí)44思考題哪些實(shí)驗(yàn)室檢查主要提示血管內(nèi)溶血？思考題哪些實(shí)驗(yàn)室檢查主要提示血管內(nèi)溶血？45一、溶血性貧血的篩查檢測一、溶血性貧血的篩查檢測463.血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）

【參考值】：0.7～1.5g/L【臨床意義】：

Hp減少，提示溶血存在，血管內(nèi)溶血時顯著減低

Hp增加，提示急慢性感染、惡性腫瘤、創(chuàng)傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE等鑒別肝內(nèi)外阻塞性黃疸肝內(nèi)阻塞性黃疸顯著減少或缺乏肝外阻塞性黃疸正?；蛟龈?.血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）

【參47卡波環(huán)（Cabot)一種紫紅色成圓形或8字形細(xì)線狀環(huán)?？赡苁羌忓N體的殘余物或是胞質(zhì)中脂蛋白變性所致。常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等?？úōh(huán)（Cabot)48(一)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)酸溶血試驗(yàn)蔗糖溶血試驗(yàn)蛇毒溶血試驗(yàn)CD55,CD59檢測(一)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞孵育滲透49

1.紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)【原理】是測定紅細(xì)胞對不同濃度低滲氯化鈉溶血的抵抗能力。主要取決于紅細(xì)胞表面積與體積之比。表面積大而體積小，對低滲鹽水抵抗力大（即脆性較?。?。反之，抵抗力較小（即脆性較大）。

【參考值】開始溶血：0.42%～0.46%（4.2～4.6g/L）NaCL完全溶血：0.28%～0.34%（2.8～3.4g/L）NaCL【臨床意義】

（1）脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥（開始溶血5.2g/L，甚至在6.8g/L即開始溶血）（2）脆性減低小細(xì)胞低色素性貧血：海洋性貧血、缺鐵性貧血

1.紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)【原理】是測定紅細(xì)胞對不同濃度低滲504.蔗糖水溶血試驗(yàn)【原理】

蔗糖離子濃度低，增強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞結(jié)合，使紅細(xì)胞膜上形成小孔，蔗糖進(jìn)入紅細(xì)胞而致溶血。【臨床意義】正常陰性。PNH本試驗(yàn)常為陽性?？勺鳛镻NH篩選試驗(yàn)，陰性可排除，陽性應(yīng)作Ham試驗(yàn)。4.蔗糖水溶血試驗(yàn)【原理】蔗糖離子濃度低，增強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞51（五）冷凝集試驗(yàn)【原理】機(jī)體存在抗自身紅細(xì)胞抗體，在低溫時與相應(yīng)抗原結(jié)合，使紅細(xì)胞凝集，特別是在4℃時最強(qiáng)烈，但溫度升高到37℃后凝集消失，稱為冷凝集試驗(yàn)。【參考值】效價<1：40【臨床意義】某些AIHA，傳染性單核細(xì)胞增多癥、惡性淋巴瘤等可陽性。動態(tài)檢測，凝集效價增高4倍以上較有診斷價值。（五）冷凝集試驗(yàn)【原理】機(jī)體存在抗自身紅細(xì)胞抗體，在低溫時與52【原理】細(xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加?！緟⒖挤秶客庵苎蠧D55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％抗人球蛋白是完全抗體，可與多個紅細(xì)胞表面不完全抗體結(jié)合，使紅細(xì)胞相互連接起來出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。RBC膜缺陷：遺傳球、PNH直接抗人球蛋白試驗(yàn)：檢測紅細(xì)胞表面結(jié)合有不完全抗體。一種紫紅色成圓形或8字形細(xì)線狀環(huán)。用正常人血清免疫家兔，獲得抗人球蛋白血清?！驹怼繖C(jī)體存在抗自身紅細(xì)胞抗體，在低溫時與相應(yīng)抗原結(jié)合，使紅細(xì)胞凝集，特別是在4℃時最強(qiáng)烈，但溫度升高到37℃后凝集消失，稱為冷凝集試驗(yàn)。腎小管上皮細(xì)胞吸收血紅蛋白，代謝成含鐵血黃素?！緟⒖贾怠空Ｈ酥苯?、間接均抗人球蛋白試驗(yàn)均陰性【原理】細(xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等脾亢:單核巨噬細(xì)胞功能亢進(jìn)孵育50%溶血4.【原理】蛇毒因子是種溶血因子，能直接激活補(bǔ)體C3，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，造成溶血。（二）、

紅細(xì)胞代償增生【參考值】正常人直接、間接均抗人球蛋白試驗(yàn)均陰性【臨床意義】陽性提示PNH。半衰期<15天，說明有溶血存在【原理】蛇毒因子是種溶血因子，能直接激活補(bǔ)體C3，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，造成溶血?！九R床意義】有異常血紅蛋白區(qū)帶見于海洋性貧血、異常血紅蛋白病溶血性貧血的檢測1.是否為溶血性貧血2.區(qū)分溶血部位3.溶血原因診斷【原理】細(xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、53溶血性貧血的分類按發(fā)病機(jī)制分類1.RBC內(nèi)在因素（遺傳性/獲得性）RBC膜缺陷：遺傳球、PNHRBC酶缺陷：G-6PD缺乏癥珠蛋白異常（肽鏈不平衡）：海洋性貧血、異常血紅蛋白病2.RBC外在因素（獲得性）免疫性溶貧:AIHA、新生兒溶血癥、藥物誘發(fā)紅細(xì)胞相關(guān)抗體機(jī)械損傷性：DIC、TTP、人造瓣膜感染：瘧疾物理因素：灼傷毒素：蛇毒脾亢:單核巨噬細(xì)胞功能亢進(jìn)溶血性貧血的分類按發(fā)病機(jī)制分類54溶血性貧血的分類按溶血發(fā)生部位分類（RBC破壞場所）血管內(nèi)溶血：RBC在血管內(nèi)破壞見于DIC、機(jī)械性微血管病變、燒傷、輸血、PNH血管外溶血：RBC在單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬或破壞AIHA，遺傳性球形細(xì)胞增多癥溶血性貧血的分類按溶血發(fā)生部位分類（RBC破壞場所）55溶血性貧血第一步確定是否有溶血（篩查檢測）1.紅細(xì)胞破壞增加2.紅細(xì)胞代償性增生第二步哪一類溶貧（病因檢測）溶血性貧血第一步確定是否有溶血（篩查檢測）56一、溶血性貧血的篩查檢測一、溶血性貧血的篩查檢測57（一）、紅細(xì)胞破壞增加RBC壽命測定51Cr同位素標(biāo)記參考值：25~32天半衰期<15天，說明有溶血存在（一）、紅細(xì)胞破壞增加RBC壽命測定582.血漿游離血紅蛋白測定

（plasmafreehemoglobin）【參考值】：<50mg/L

【意義】：血管內(nèi)溶血時明顯增高

血管外溶血時正?；蜉p度升高2.血漿游離血紅蛋白測定

（plasmafreehem593.血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）

【參考值】：0.7～1.5g/L【臨床意義】：

Hp減少，提示溶血存在，血管內(nèi)溶血時顯著減低

Hp增加，提示急慢性感染、惡性腫瘤、創(chuàng)傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE等鑒別肝內(nèi)外阻塞性黃疸肝內(nèi)阻塞性黃疸顯著減少或缺乏肝外阻塞性黃疸正?；蛟龈?.血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）

【參60【臨床意義】陽性提示PNH。【參考范圍】外周血中CD55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％主要取決于紅細(xì)胞表面積與體積之比。【臨床意義】陽性提示PNH。反之，抵抗力較?。创嘈暂^大）。常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等?！驹怼考?xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等抗人球蛋白是完全抗體，可與多個紅細(xì)胞表面不完全抗體結(jié)合，使紅細(xì)胞相互連接起來出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。（二）、

紅細(xì)胞代償增生外周血紅細(xì)胞形態(tài)改變【參考值】未孵育50%溶血4.免疫性溶貧:AIHA、新生兒溶血癥、藥物誘發(fā)紅細(xì)胞相關(guān)抗體血漿游離血紅蛋白增高，結(jié)合珠蛋白(Hp)降低，血紅蛋白尿及尿中出現(xiàn)含鐵血黃素等可能是紡錘體的殘余物或是胞質(zhì)中脂蛋白變性所致。GPI錨連蛋白缺失是由于體細(xì)胞發(fā)生X連鎖的PIG-A基因突變造成的。第一步確定是否有溶血（篩查檢測）4.尿含鐵血黃素試驗(yàn)

（Roustest）腎小管上皮細(xì)胞吸收血紅蛋白，代謝成含鐵血黃素。當(dāng)細(xì)胞脫落至尿中，鐵離子在酸化的低鐵氰化鉀溶液中生成藍(lán)色的鐵氰化鐵，顯微鏡下尿沉渣可有深藍(lán)色物質(zhì)出現(xiàn)，即為陽性?！窘Y(jié)果判定】陰性【臨床意義】見于慢性血管內(nèi)溶血，如PNH【臨床意義】陽性提示PNH。4.尿含鐵血黃素試驗(yàn)

（Rou615.血紅蛋白尿測定（hemoglobinuria）血管內(nèi)有大量紅細(xì)胞破壞，血漿中的游離血紅蛋白量超過1000mg/L時出現(xiàn)醬油色尿【結(jié)果判定】陰性【臨床意義】溶血時陽性5.血紅蛋白尿測定（hemoglobinuria）血管內(nèi)有626.血漿高鐵血紅素白蛋白試驗(yàn)

（methemalbumintest）血漿中游離血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，接著分解為高鐵血紅素，后者與白蛋白結(jié)合形成高鐵血紅素白蛋白【結(jié)果判定】陰性【臨床意義】見于各種原因所致的嚴(yán)重血管內(nèi)溶血6.血漿高鐵血紅素白蛋白試驗(yàn)

（methem637.外周血紅細(xì)胞形態(tài)改變7.外周血紅細(xì)胞形態(tài)改變64裂細(xì)胞schistocyte（紅細(xì)胞異形癥poikilocytosis）系指紅細(xì)胞發(fā)生各種明顯的形態(tài)學(xué)異常改變而言。紅細(xì)胞可呈梨形、淚滴性、新月形、長圓形、啞鈴型、逗點(diǎn)性、三角形、盔形，以及球形、靶形等。

見于紅細(xì)胞因機(jī)械或物理因素所致的破壞，如微血管病性溶血性貧血如彌散性血管內(nèi)凝血、血栓性血小板減少性紫癜、溶血尿毒癥綜合征等。也可見于嚴(yán)重?zé)齻∪?。裂?xì)胞schistocyte658.血清膽紅素（TBIL）增高，已非結(jié)合膽紅素（間接膽紅素，IBIL）增高為主【參考值】TBIL0~1.2mg/dl(0~20.5ummol/L)IBIL0~0.8mg/dl(0~13.7ummol/L)【臨床意義】提示溶血8.血清膽紅素（TBIL）增高，已非結(jié)合膽紅素（間接膽紅素，668.血清乳酸脫氫酶

【參考值】80～220U/L【臨床意義】提示溶血8.血清乳酸脫氫酶

【參考值】80～220U/L67（二）、

紅細(xì)胞代償增生紅細(xì)胞大小不均

網(wǎng)織紅細(xì)胞增多

外周血見有核RBC

骨髓紅細(xì)胞系統(tǒng)增生明顯活躍，形態(tài)異常細(xì)胞嗜多色性出現(xiàn)嗜堿點(diǎn)彩紅細(xì)胞出現(xiàn)豪－喬小體出現(xiàn)卡波環(huán)（二）、

紅細(xì)胞代償增生紅細(xì)胞大小不均68紅細(xì)胞大小不均anisocytosis

紅細(xì)胞大小懸殊，直徑可相差一倍以上。

反映骨髓中紅細(xì)胞增生明顯旺盛。見于增生性貧血，而在巨幼細(xì)胞貧血中尤為明顯。MDS中也可見。溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查課件69嗜多色性

紅細(xì)胞呈淡灰藍(lán)或紫灰色，是未完全成熟的紅細(xì)胞，體積較正常紅細(xì)胞稍大，胞質(zhì)呈嗜堿性著色的物質(zhì)為少量殘留的核糖體、線粒體等成分。其增多反映骨髓造血功能活躍，紅細(xì)胞系增生旺盛。見于增生性貧血，尤以急性溶血性貧血時為最多見。嗜多色性70嗜堿性點(diǎn)彩細(xì)胞內(nèi)見到散在的大小和數(shù)量不一深藍(lán)色顆粒。點(diǎn)彩紅細(xì)胞屬于未完全成熟的紅細(xì)胞，有時與嗜多性并存。多見于鉛中毒及骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧。嗜堿性點(diǎn)彩71Hp減少，提示溶血存在，血管內(nèi)溶血時顯著減低【臨床意義】溶血時陽性可能是紡錘體的殘余物或是胞質(zhì)中脂蛋白變性所致。動態(tài)檢測，凝集效價增高4倍以上較有診斷價值。【原理】細(xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。酸化血清溶血試驗(yàn)(Ham’s試驗(yàn))、蔗糖溶血試驗(yàn)、蛇毒因子溶血試驗(yàn)等【臨床意義】有異常血紅蛋白區(qū)帶見于海洋性貧血、異常血紅蛋白病(一)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)用正常人血清免疫家兔，獲得抗人球蛋白血清。常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等。紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等【臨床意義】正常陰性。血漿中游離血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，接著分解為高鐵血紅素，后者與白蛋白結(jié)合形成高鐵血紅素白蛋白抗人球蛋白試驗(yàn)(Coombs’test)裂細(xì)胞schistocyte見于：①各種溶血性貧血②紅白血?、鬯柰庠煅芄撬柁D(zhuǎn)移腫瘤血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）半衰期<15天，說明有溶血存在RBC膜缺陷：遺傳球、PNH【參考值】溶血度<5%染色質(zhì)小體又稱豪－喬小體，為紫紅色圓形小體，是核染色質(zhì)的殘留部分。常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等Hp減少，提示溶血存在，血管內(nèi)溶血時顯著減低染色質(zhì)小體72卡波環(huán)（Cabot)一種紫紅色成圓形或8字形細(xì)線狀環(huán)?？赡苁羌忓N體的殘余物或是胞質(zhì)中脂蛋白變性所致。常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等?？úōh(huán)（Cabot)73有核紅細(xì)胞

有核紅細(xì)胞即幼稚紅細(xì)胞，均存在于骨髓中，正常人外周血中不能見到，在出生一周之內(nèi)的新生兒外周血中可見到少量。見于：①各種溶血性貧血②紅白血?、鬯柰庠煅芄撬柁D(zhuǎn)移腫瘤有核紅細(xì)胞74二、哪一類溶血性貧血？二、哪一類溶血性貧血？75(一)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)酸溶血試驗(yàn)蔗糖溶血試驗(yàn)蛇毒溶血試驗(yàn)CD55,CD59檢測(一)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞孵育滲透76

1.紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)【原理】是測定紅細(xì)胞對不同濃度低滲氯化鈉溶血的抵抗能力。主要取決于紅細(xì)胞表面積與體積之比。表面積大而體積小，對低滲鹽水抵抗力大（即脆性較?。?。反之，抵抗力較?。创嘈暂^大）。

【參考值】開始溶血：0.42%～0.46%（4.2～4.6g/L）NaCL完全溶血：0.28%～0.34%（2.8～3.4g/L）NaCL【臨床意義】

（1）脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥（開始溶血5.2g/L，甚至在6.8g/L即開始溶血）（2）脆性減低小細(xì)胞低色素性貧血：海洋性貧血、缺鐵性貧血

1.紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)【原理】是測定紅細(xì)胞對不同濃度低滲772.紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)【原理】37℃孵育24小時，細(xì)胞內(nèi)葡萄糖消耗增加，ATP減少，鈉離子泵出減少，細(xì)胞膨脹脆性增高【參考值】未孵育50%溶血4.0~4.45g/L 孵育50%溶血4.65~5.9g/L【意義】

脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥脆性減低缺鐵性貧血珠蛋白生成障礙性貧血2.紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)【原理】37℃孵育24小時，細(xì)78陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)一種后天獲得性血細(xì)胞膜缺陷的克隆性疾病，臨床上可表現(xiàn)血管內(nèi)溶血、栓塞、全血細(xì)胞減少等，有時可出現(xiàn)骨髓衰竭。大多數(shù)PNH患者異常克隆與正常造血并存，使本病的診斷和發(fā)病機(jī)制的研究受到限制。PNH患者紅細(xì)胞膜表面缺乏加速衰變因子（DAF，CD55）反應(yīng)性溶血的膜抑制物（MIRL，CD59）等，使紅細(xì)胞對補(bǔ)體敏感而溶血。上述3種蛋白都經(jīng)糖基化磷脂酰肌醇(GPI)連接在細(xì)胞膜上，稱為GPI錨連蛋白。GPI錨連蛋白缺失是由于體細(xì)胞發(fā)生X連鎖的PIG-A基因突變造成的。陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)一種后天獲得性血細(xì)胞膜缺陷793.酸溶血試驗(yàn)(Ham試驗(yàn))

【原理】膜蛋白缺陷的紅細(xì)胞對補(bǔ)體敏感增加，在弱酸血清（pH6.6~6.8）中，經(jīng)37℃孵育后紅細(xì)胞發(fā)生溶血?！九R床意義】正常人陰性，陽性見于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）。該法敏感性較高。特異性高。3.酸溶血試驗(yàn)(Ham試驗(yàn))【原理】膜蛋白缺陷的紅細(xì)胞80Ham試驗(yàn)Ham試驗(yàn)81【臨床意義】溶血時陽性一、溶血性貧血的篩查檢測【參考值】正常人直接、間接均抗人球蛋白試驗(yàn)均陰性紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)點(diǎn)彩紅細(xì)胞屬于未完全成熟的紅細(xì)胞，有時與嗜多性并存。紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)其增多反映骨髓造血功能活躍，紅細(xì)胞系增生旺盛?！驹怼空崽请x子濃度低，增強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞結(jié)合，使紅細(xì)胞膜上形成小孔，蔗糖進(jìn)入紅細(xì)胞而致溶血。主要取決于紅細(xì)胞表面積與體積之比?！九R床意義】見于各種原因所致的嚴(yán)重血管內(nèi)溶血可作為PNH篩選試驗(yàn)，陰性可排除，陽性應(yīng)作Ham試驗(yàn)。CD55,CD59檢測紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)肝外阻塞性黃疸正?；蛟龈咭弧⑷苎载氀暮Y查檢測紅細(xì)胞大小懸殊，直徑可相差一倍以上。紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)酸化血清溶血試驗(yàn)(Ham’s試驗(yàn))、蔗糖溶血試驗(yàn)、蛇毒因子溶血試驗(yàn)等又稱豪－喬小體，為紫紅色圓形小體，是核染色質(zhì)的殘留部分。裂細(xì)胞schistocyte【臨床意義】溶血時陽性Coombs’試驗(yàn)、酸溶血試驗(yàn)、滲透脆性試驗(yàn)等的臨床意義血紅蛋白尿測定（hemoglobinuria）大多數(shù)PNH患者異?？寺∨c正常造血并存，使本病的診斷和發(fā)病機(jī)制的研究受到限制?！驹怼繖C(jī)體存在抗自身紅細(xì)胞抗體，在低溫時與相應(yīng)抗原結(jié)合，使紅細(xì)胞凝集，特別是在4℃時最強(qiáng)烈，但溫度升高到37℃后凝集消失，稱為冷凝集試驗(yàn)?！緟⒖挤秶客庵苎蠧D55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％【臨床意義】溶血時陽性第一步確定是否有溶血（篩查檢測）半衰期<15天，說明有溶血存在CD55和CD59檢測：用雙色熒光流式細(xì)胞術(shù)檢測PNH患者紅細(xì)胞膜上的CD55和CD59，當(dāng)PNH患者的CD59陰性細(xì)胞占3％以上時即可檢出血清RBC抗IgG有核紅細(xì)胞即幼稚紅細(xì)胞，均存在于骨髓中，正常人外周血中不能見到，在出生一周之內(nèi)的新生兒外周血中可見到少量。（二）、

紅細(xì)胞代償增生可作為PNH篩選試驗(yàn)，陰性可排除，陽性應(yīng)作Ham試驗(yàn)。表面積大而體積小，對低滲鹽水抵抗力大（即脆性較小）。CD55CD59檢測免疫性溶貧:AIHA、新生兒溶血癥、藥物誘發(fā)紅細(xì)胞相關(guān)抗體【參考值】正常人直接、間接均抗人球蛋白試驗(yàn)均陰性常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等機(jī)械損傷性：DIC、TTP、人造瓣膜【參考范圍】外周血中CD55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％GPI錨連蛋白缺失是由于體細(xì)胞發(fā)生X連鎖的PIG-A基因突變造成的。PNH不同時間尿樣【臨床意義】溶血時陽性Coombs’試驗(yàn)、酸溶血試驗(yàn)、滲透824.蔗糖水溶血試驗(yàn)【原理】

蔗糖離子濃度低，增強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞結(jié)合，使紅細(xì)胞膜上形成小孔，蔗糖進(jìn)入紅細(xì)胞而致溶血。【臨床意義】正常陰性。PNH本試驗(yàn)常為陽性?？勺鳛镻NH篩選試驗(yàn)，陰性可排除，陽性應(yīng)作Ham試驗(yàn)。4.蔗糖水溶血試驗(yàn)【原理】蔗糖離子濃度低，增強(qiáng)補(bǔ)體與紅細(xì)胞835.蛇毒溶血試驗(yàn)【原理】蛇毒因子是種溶血因子，能直接激活補(bǔ)體C3，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，造成溶血。【參考值】溶血度<5%【臨床意義】陽性提示PNH。5.蛇毒溶血試驗(yàn)【原理】蛇毒因子是種溶血因子，能直接激活補(bǔ)846.CD55CD59檢測【原理】CD55，CD59是補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白，具有GPI錨定蛋白作用。PNH患者紅細(xì)胞和粒細(xì)胞上GPI錨缺陷，無法結(jié)合在細(xì)胞膜上，導(dǎo)致對補(bǔ)體敏感，容易發(fā)生溶血?！緟⒖挤秶客庵苎蠧D55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％【臨床意義】PNH患者該類細(xì)胞>10％6.CD55CD59檢測【原理】CD55，CD59是補(bǔ)體85PNH診斷1.初篩試驗(yàn)血管內(nèi)溶血的特點(diǎn)：血漿游離血紅蛋白增高，結(jié)合珠蛋白(Hp)降低，血紅蛋白尿及尿中出現(xiàn)含鐵血黃素等2.診斷試驗(yàn)酸化血清溶血試驗(yàn)(Ham’s試驗(yàn))、蔗糖溶血試驗(yàn)、蛇毒因子溶血試驗(yàn)等3.特異的診斷PNH的實(shí)驗(yàn)方法CD55和CD59檢測：用雙色熒光流式細(xì)胞術(shù)檢測PNH患者紅細(xì)胞膜上的CD55和CD59，當(dāng)PNH患者的CD59陰性細(xì)胞占3％以上時即可檢出PNH診斷1.初篩試驗(yàn)86（二）紅細(xì)胞內(nèi)酶缺陷的檢驗(yàn)1.自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)【原理】細(xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。在溫育過程中分別加入葡萄糖和ATP作糾正物，看溶血能否糾正。（二）紅細(xì)胞內(nèi)酶缺陷的檢驗(yàn)1.自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)87【參考值】正常人輕微溶血，溶血度<3.5%；加葡萄糖、ATP溶血明顯糾正，溶血度<1%?！九R床意義】

1）葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G-6PD）缺乏癥、蠶豆病溶血增加，加葡萄糖、ATP溶血部分糾正。2）丙酮酸激酶缺乏癥加葡萄糖不能糾正，加入ATP能糾正?！緟⒖贾怠空Ｈ溯p微溶血，溶血度<3.5%；加葡萄糖、A88（三）異常血紅蛋白的檢測

血紅蛋白電泳檢測【參考值】正常成人電泳圖譜顯示4條區(qū)帶，最多的是HbA,少量HbA2，再后為兩條兩更少的紅細(xì)胞內(nèi)的非血紅蛋白成分（NH1、NH2）。【臨床意義】有異常血紅蛋白區(qū)帶見于海洋性貧血、異常血紅蛋白?。ㄈ┊惓Ｑt蛋白的檢測血紅蛋白電泳檢測89(四)自身免疫性溶血的檢驗(yàn)1.抗人球蛋白試驗(yàn)(Coombs’test)

【原理】紅細(xì)胞的膜電位使兩個紅細(xì)胞間保持一定距離。不完全抗體IgG分子較小，無法連接兩個鄰近的紅細(xì)胞而只能和一個紅細(xì)胞抗原相結(jié)合。用正常人血清免疫家兔，獲得抗人球蛋白血清?？谷饲虻鞍资峭耆贵w，可與多個紅細(xì)胞表面不完全抗體結(jié)合，使紅細(xì)胞相互連接起來出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。

直接抗人球蛋白試驗(yàn)：檢測紅細(xì)胞表面結(jié)合有不完全抗體。

間接抗人球蛋白試驗(yàn)：檢查血清中有無游離的不完全抗體。(四)自身免疫性溶血的檢驗(yàn)1.抗人球蛋白試驗(yàn)(Coom90抗人球蛋白IgG不完全抗體RBC抗人球蛋白IgG不完全抗體RBC91溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查課件92將病人血清和正常RBC混合，再加入抗IgG試劑病人血清RBC抗IgG將病人血清和正常RBC混合，再加入抗IgG試劑93【參考值】正常人直接、間接均抗人球蛋白試驗(yàn)均陰性【臨床意義】1）陽性見于AIHA，新生兒溶血病，SLE等2）AIHA大多為IgG（溫抗體型37℃條件下作用最強(qiáng)），少數(shù)為IgM(冷抗體型4℃條件下進(jìn)行試驗(yàn))3）間接試驗(yàn)主要見于Rh或ABO妊娠免疫性新生兒溶血病母體血清中不完全抗體檢測。【參考值】正常人直接、間接均抗人球蛋白試驗(yàn)均陰性94（五）冷凝集試驗(yàn)【原理】機(jī)體存在抗自身紅細(xì)胞抗體，在低溫時與相應(yīng)抗原結(jié)合，使紅細(xì)胞凝集，特別是在4℃時最強(qiáng)烈，但溫度升高到37℃后凝集消失，稱為冷凝集試驗(yàn)。【參考值】效價<1：40【臨床意義】某些AIHA，傳染性單核細(xì)胞增多癥、惡性淋巴瘤等可陽性。動態(tài)檢測，凝集效價增高4倍以上較有診斷價值。（五）冷凝集試驗(yàn)【原理】機(jī)體存在抗自身紅細(xì)胞抗體，在低溫時與95溶血性貧血的檢測1.是否為溶血性貧血2.區(qū)分溶血部位3.溶血原因診斷溶血性貧血的檢測1.是否為溶血性貧血96【原理】是測定紅細(xì)胞對不同濃度低滲氯化鈉溶血的抵抗能力。紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)GPI錨連蛋白缺失是由于體細(xì)胞發(fā)生X連鎖的PIG-A基因突變造成的?！緟⒖挤秶客庵苎蠧D55，CD59陰性紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均<5％【參考值】正常人輕微溶血，溶血度<3.【原理】細(xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)鈉泵作用，導(dǎo)致溶血增加。(一)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)血清結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等?！驹怼渴菧y定紅細(xì)胞對不同濃度低滲氯化鈉溶血的抵抗能力?！驹怼可叨疽蜃邮欠N溶血因子，能直接激活補(bǔ)體C3，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，造成溶血。常與染色質(zhì)小體同時出現(xiàn)，見于溶血性貧血、巨幼細(xì)胞貧血、鉛中毒及白血病等。裂細(xì)胞schistocyte常見于骨髓增生旺盛的貧血如溶貧，巨幼貧等肝內(nèi)阻塞性黃疸顯著減少或缺乏【原理】細(xì)胞內(nèi)酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障礙，不能提供足量ATP，紅細(xì)胞在自身血漿中溫育48小時，不能繼續(xù)從血漿攝取葡萄糖作能量來源，ATP減少，不能維持紅細(xì)胞內(nèi)