生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的課件

生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2022/12/21生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2022/12/18生1第一節(jié)生物制藥工藝的發(fā)展一、生物藥物類型與品種的發(fā)展（一）生化藥物1.治療酶與診斷用酶（1）超氧化物歧化酶（SOD）抗炎、抗輻射、抗衰老（2）凝血酶（3）L－天冬酰胺酶（4）尿激酶（5）PEG－腺苷脫氨酶（治療免疫缺陷癥）（6）β－半乳糖苷酶（用于生產(chǎn)無糖牛奶）生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的第一節(jié)生物制藥工藝的發(fā)展生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技22.核苷和核苷酸類藥物（1）疊氮脫氧胸苷（AZT）（治療愛滋?。?2)丙氧鳥苷（DHPG）（抗病毒）3.多糖類藥物（1）肝素鈣與小分子量肝素（抗凝血）（2）透明質(zhì)酸（化妝品，關(guān)節(jié)炎）4.蛋白質(zhì)與多肽類藥物（1）水蛭素（抗凝血，防血栓）（2）轉(zhuǎn)移因子（如牛脾轉(zhuǎn)移因子，胎盤轉(zhuǎn)移因子等，免疫）（3）胸腺制劑（抗肝炎，免疫）（4）肝細(xì)胞生長因子（治療肝炎）5.脂類藥物（β－胡蘿卜素，EPA，DHA）生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2.核苷和核苷酸類藥物生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的3（二）基因工程藥物（1）乙肝疫苗（2）人白細(xì)胞干擾素（IFN）（3）基因工程人胰島素（4）人白細(xì)胞介素（IL－2）（5）人生長激素（hGH）（6）人組織纖溶酶原激活劑（htPA）（7）人促紅細(xì)胞生成素（hEPO）（8）細(xì)胞集落刺激因子（CSFs）（三）細(xì)胞工程產(chǎn)品主要動物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品有：α干擾素，γ干擾素，EPO，IL－2及尿激酶等；植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品：羅漢果，洋地黃，延胡索，人參，貝母，紫杉，紫草組織培養(yǎng)等。各種單克隆抗體。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（二）基因工程藥物生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的4二、生化分離制備技術(shù)的發(fā)展（一）生物反應(yīng)器生物反應(yīng)器包括微生物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的發(fā)酵罐和動物細(xì)胞大規(guī)模的培養(yǎng)罐及用于固定化酶或固定化細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)自動化轉(zhuǎn)化生化物質(zhì)的各種生物催化反應(yīng)器。用于微生物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器：

攪拌通氣的反應(yīng)器氣升式反應(yīng)器噴射自吸式反應(yīng)器用于多糖及脂肪酶發(fā)酵生產(chǎn)的離心式生物反應(yīng)器用于乳酸發(fā)酵的螺旋管式連續(xù)發(fā)酵連續(xù)培養(yǎng)光合細(xì)胞的反應(yīng)器動物細(xì)胞培養(yǎng)器用于固定化酶或固定化細(xì)胞生物反應(yīng)器采用固定床和沸騰床。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的二、生化分離制備技術(shù)的發(fā)展生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技5（二）生物藥物下游加工技術(shù)錯流超濾，高效液相色譜，親和色譜，色層層析等?？焖俚鞍滓合嗌V系統(tǒng)。（三）膜分離技術(shù)超濾技術(shù)，已用于酶發(fā)酵工業(yè)的純化和濃縮。三、生物工程技術(shù)在生物制藥工業(yè)中的應(yīng)用（一）酶工程技術(shù)第一代酶—酶制劑第二代酶—固定化酶第三代酶—固定化多酶（包含輔因子再生系統(tǒng)）生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（二）生物藥物下游加工技術(shù)生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技61.酶的固定化方法酶的固定化方法有下述4種：吸附法，包埋法，共價鍵結(jié)合法，交聯(lián)法EEEEEEEEEEEEEEEEEEE吸附法共價結(jié)合法交聯(lián)法包埋法生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的1.酶的固定化方法EEEEEEEEEEEEEEEEEEE吸附7（1）吸附法吸附法分為物理吸附法與離子吸附法。用物理吸附法制成固定化酶，酶活力損失很少，但吸著在載體上的酶，易于脫落，使用價值少。離子吸附法是將酶與含有離子交換劑的水不溶性載體結(jié)合，酶吸附于載體上較為牢固，在工業(yè)上用途頗廣。離子吸附法常用的載體有：1)陰離子樹脂，如DEDA-C,ECTEOLA-纖維素，TEAE－纖維素，DEAE－葡聚糖凝膠，AmberliteCG－50,IRC－50,IR－120,IR－200,Dowex－50等。例：DEAE－SephadexA-25吸附氨基?；福?）包埋法包埋法系將酶包埋于凝膠或高分子聚合物網(wǎng)格內(nèi)，網(wǎng)格生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（1）吸附法生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的8可以防止酶的滲出，底物仍能滲入網(wǎng)格內(nèi)與酶相接觸。包埋法的優(yōu)點是酶分子本身不參與水不溶性網(wǎng)格的形成，許多酶都可用此法固定化。其操作簡單，酶分子只是被保埋起來，而未受到化學(xué)反應(yīng)，因此固定化酶表現(xiàn)活力較高。常用的報埋劑有聚丙烯酰胺，卡拉膠，淀粉凝膠，三醋酸纖維素，海藻酸，膠原，血纖維，大豆蛋白等。例：卡拉膠保埋細(xì)胞生產(chǎn)蘋果酸（3）共價鍵結(jié)合法共價鍵結(jié)合法是通過化學(xué)反應(yīng)使酶與聚合物載體共價偶聯(lián)。酶與載體共價結(jié)合的功能團(tuán)包括氨基，羧基，酚羥基，巰基，羥基，咪唑基。常用共價鍵結(jié)合法有：重氮化法，烷基化和芳基化法，戊二醛結(jié)合反應(yīng)法，鈦螯合法，硫醇－二硫化物的互換反應(yīng)等。固定化糖化酶生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的可以防止酶的滲出，底物仍能滲入網(wǎng)格內(nèi)與酶相接觸。包埋法的優(yōu)點9（4）肽鍵結(jié)合法該法主要將含羧基的水不溶性載體變成?；B氮，異氰酸鹽，鹵化物等衍生物，再使這些衍生物與酶的游離氨基進(jìn)行反應(yīng)，形成肽鍵。（5）交聯(lián)法交聯(lián)法是使用雙功能或多功能試劑與酶分子之間進(jìn)行分子間的交聯(lián)反應(yīng)的固定化方法。由于酶蛋白的功能基團(tuán)，如氨基，酚基，巰基，和咪唑基，參與交聯(lián)反應(yīng)，因此可能影響酶的活性中心結(jié)構(gòu)，而使酶活力顯著失活。交聯(lián)劑有多種，主要為戊二醛。在固定化酶的基礎(chǔ)上，固定化細(xì)胞技術(shù)得到迅速發(fā)展，其實際應(yīng)用速度已超過固定化酶。固定化細(xì)胞具有更多的優(yōu)點，它省去酶的分離操作。在細(xì)胞內(nèi)，酶穩(wěn)定性較高，進(jìn)行固定化時，活力喪失較少，且能利用天然存在的多酶體系，制造成本更低。但是反應(yīng)產(chǎn)物與底物必須容易透過細(xì)胞膜。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（4）肽鍵結(jié)合法生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的102.酶工程技術(shù)的應(yīng)用固定化酶和固定化細(xì)胞在食品發(fā)酵工業(yè)和制藥工業(yè)方面的應(yīng)用，不僅可以改革現(xiàn)有的生產(chǎn)工藝，而且可以創(chuàng)新多酶反應(yīng)工藝，還可以促使發(fā)酵工業(yè)發(fā)生根本性變革，因此在制藥工業(yè)中的應(yīng)用具有很大潛力。（二）細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1.動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及其應(yīng)用動物細(xì)胞的培養(yǎng)是將來自動物體的某些組織或器官，在模擬體內(nèi)生理條件下，在體外進(jìn)行培養(yǎng)，使之存活和生長。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2.酶工程技術(shù)的應(yīng)用生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的11（1）動物細(xì)胞培養(yǎng)條件營養(yǎng)條件培養(yǎng)基（人工合成，半人工合成）pH條件7.2-7.4溫度條件37±0.5℃氣體條件O2和CO2滲透壓無菌條件（2）培養(yǎng)方法體外培養(yǎng)細(xì)胞有原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)兩種方法。原代培養(yǎng)法有單層培養(yǎng)法和組織塊培養(yǎng)法。傳代培養(yǎng)是將原代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行稀釋分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（1）動物細(xì)胞培養(yǎng)條件生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的12（3）動物細(xì)胞大批培養(yǎng)技術(shù)許多有價值得蛋白質(zhì)，多肽制品都可以用動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行生產(chǎn)，如病毒疫苗，干擾素，單克隆抗體等。因此動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)正向大型化，自動化和精巧化方向發(fā)展。①微載體培養(yǎng)系統(tǒng)微載體培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)附著和生長在微載體表面。②氣升式深層發(fā)酵罐法③中空纖維法④微囊法將活細(xì)胞懸浮在海藻酸鈉中，滴入氯化鈣溶液中，形成小珠，用長鏈氨基酸聚合物聚賴氨酸，形成多孔外膜，然后重新液化膠化小球，使成膠物質(zhì)從多孔外膜流出，活細(xì)胞留在膜內(nèi)，然后進(jìn)行培養(yǎng)。（4）動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（人生長激素，乙型肝炎疫苗）生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（3）動物細(xì)胞大批培養(yǎng)技術(shù)生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技132.植物細(xì)胞的培養(yǎng)及其應(yīng)用（1）植物細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)植物細(xì)胞培養(yǎng)是將植物體的某一部分經(jīng)無菌處理后置于人工培養(yǎng)基上使其細(xì)胞增殖，進(jìn)而按需要進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)。用于進(jìn)行培養(yǎng)所需的植物部分成為外殖體。所形成的脫分化的細(xì)胞團(tuán)稱為愈傷組織。將愈傷組織轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)即為懸浮培養(yǎng)。培養(yǎng)基大量無機(jī)鹽，植物激素等（2）植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有著廣泛應(yīng)用，尤其在天然藥物的生產(chǎn)上具有廣闊前景。如長春堿、地高辛，生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2.植物細(xì)胞的培養(yǎng)及其應(yīng)用生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技14（三）單克隆抗體技術(shù)1.單克隆抗體的制備原理B細(xì)胞群受抗原刺激后能產(chǎn)生針對抗原決定族的特異性抗體，一個機(jī)體可產(chǎn)生多達(dá)100萬種特異性的抗體。但是一個B細(xì)胞卻只能分泌一種特異性抗體。例如，小鼠B細(xì)胞受乙肝病毒刺激后，可產(chǎn)生針對乙肝病毒的7種不同標(biāo)志的特異性抗體，它們分別由7種小鼠B細(xì)胞產(chǎn)生。這些B細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合后，形成7種雜交瘤細(xì)胞，稀釋純化，挑出單個雜交瘤細(xì)胞，進(jìn)行無性繁殖（克?。Ｍ粋€克隆的雜交瘤細(xì)胞基因相同，合并分泌的特異性抗體質(zhì)地均一，這種抗體稱之為單克隆抗體。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（三）單克隆抗體技術(shù)生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的152.單克隆抗體的工業(yè)化生產(chǎn)單克隆抗體的生產(chǎn)包括細(xì)胞培養(yǎng)、提純和制劑等工藝過程。（1）雜交瘤細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)生物反應(yīng)器：氣升式發(fā)酵罐，中空纖維培養(yǎng)罐，微囊發(fā)酵罐培養(yǎng)基：牛淋巴液，血清（2）單抗的分離純化（超濾、鹽析、離子交換、HPLC等）（3）單克隆抗體的制劑技術(shù)3.單克隆抗體的應(yīng)用（四）基因工程技術(shù)基因工程實際上包括了體外基因工程（DNA體外重組）和體內(nèi)基因工程（DNA體內(nèi)重組）兩種方式。一般指體外基因工程。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2.單克隆抗體的工業(yè)化生產(chǎn)生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技161.基因工程的基本程序基因工程操作程序包括取得目的基因，將目的基因同載體連接構(gòu)建成DNA重組體，再將經(jīng)過重組的DNA轉(zhuǎn)化導(dǎo)入受體細(xì)胞（宿主細(xì)胞），并使目的基因和載體上其它基因地形狀得以表達(dá)（即基因轉(zhuǎn)錄和翻譯為目的蛋白）見圖p57生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的1.基因工程的基本程序生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的17（五）生物合成技術(shù)1.利用微生物代謝產(chǎn)物的藥物（1）醇酮類藥物：如乙醇，丁醇，丙醇及甘油。（2）有機(jī)酸類藥物：如醋酸，檸檬酸，蘋果酸，乳酸（3）維生素類藥物（4）氨基酸類藥物（5）生物堿類藥物（6）抗生素2.半合成藥物生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（五）生物合成技術(shù)生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的18第二節(jié)生物藥物制劑工藝的發(fā)展生物藥物劑型的開發(fā)主要方向為控釋性，靶向性，脂質(zhì)體，微囊劑等。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的第二節(jié)生物藥物制劑工藝的發(fā)展生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工19演講完畢，謝謝聽講!再見，seeyouagain3rew2022/12/21生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的演講完畢，謝謝聽講!再見，seeyouagain3rew20生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2022/12/21生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2022/12/18生21第一節(jié)生物制藥工藝的發(fā)展一、生物藥物類型與品種的發(fā)展（一）生化藥物1.治療酶與診斷用酶（1）超氧化物歧化酶（SOD）抗炎、抗輻射、抗衰老（2）凝血酶（3）L－天冬酰胺酶（4）尿激酶（5）PEG－腺苷脫氨酶（治療免疫缺陷癥）（6）β－半乳糖苷酶（用于生產(chǎn)無糖牛奶）生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的第一節(jié)生物制藥工藝的發(fā)展生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技222.核苷和核苷酸類藥物（1）疊氮脫氧胸苷（AZT）（治療愛滋?。?2)丙氧鳥苷（DHPG）（抗病毒）3.多糖類藥物（1）肝素鈣與小分子量肝素（抗凝血）（2）透明質(zhì)酸（化妝品，關(guān)節(jié)炎）4.蛋白質(zhì)與多肽類藥物（1）水蛭素（抗凝血，防血栓）（2）轉(zhuǎn)移因子（如牛脾轉(zhuǎn)移因子，胎盤轉(zhuǎn)移因子等，免疫）（3）胸腺制劑（抗肝炎，免疫）（4）肝細(xì)胞生長因子（治療肝炎）5.脂類藥物（β－胡蘿卜素，EPA，DHA）生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2.核苷和核苷酸類藥物生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的23（二）基因工程藥物（1）乙肝疫苗（2）人白細(xì)胞干擾素（IFN）（3）基因工程人胰島素（4）人白細(xì)胞介素（IL－2）（5）人生長激素（hGH）（6）人組織纖溶酶原激活劑（htPA）（7）人促紅細(xì)胞生成素（hEPO）（8）細(xì)胞集落刺激因子（CSFs）（三）細(xì)胞工程產(chǎn)品主要動物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品有：α干擾素，γ干擾素，EPO，IL－2及尿激酶等；植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品：羅漢果，洋地黃，延胡索，人參，貝母，紫杉，紫草組織培養(yǎng)等。各種單克隆抗體。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（二）基因工程藥物生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的24二、生化分離制備技術(shù)的發(fā)展（一）生物反應(yīng)器生物反應(yīng)器包括微生物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的發(fā)酵罐和動物細(xì)胞大規(guī)模的培養(yǎng)罐及用于固定化酶或固定化細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)自動化轉(zhuǎn)化生化物質(zhì)的各種生物催化反應(yīng)器。用于微生物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器：

攪拌通氣的反應(yīng)器氣升式反應(yīng)器噴射自吸式反應(yīng)器用于多糖及脂肪酶發(fā)酵生產(chǎn)的離心式生物反應(yīng)器用于乳酸發(fā)酵的螺旋管式連續(xù)發(fā)酵連續(xù)培養(yǎng)光合細(xì)胞的反應(yīng)器動物細(xì)胞培養(yǎng)器用于固定化酶或固定化細(xì)胞生物反應(yīng)器采用固定床和沸騰床。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的二、生化分離制備技術(shù)的發(fā)展生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技25（二）生物藥物下游加工技術(shù)錯流超濾，高效液相色譜，親和色譜，色層層析等?？焖俚鞍滓合嗌V系統(tǒng)。（三）膜分離技術(shù)超濾技術(shù)，已用于酶發(fā)酵工業(yè)的純化和濃縮。三、生物工程技術(shù)在生物制藥工業(yè)中的應(yīng)用（一）酶工程技術(shù)第一代酶—酶制劑第二代酶—固定化酶第三代酶—固定化多酶（包含輔因子再生系統(tǒng)）生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（二）生物藥物下游加工技術(shù)生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技261.酶的固定化方法酶的固定化方法有下述4種：吸附法，包埋法，共價鍵結(jié)合法，交聯(lián)法EEEEEEEEEEEEEEEEEEE吸附法共價結(jié)合法交聯(lián)法包埋法生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的1.酶的固定化方法EEEEEEEEEEEEEEEEEEE吸附27（1）吸附法吸附法分為物理吸附法與離子吸附法。用物理吸附法制成固定化酶，酶活力損失很少，但吸著在載體上的酶，易于脫落，使用價值少。離子吸附法是將酶與含有離子交換劑的水不溶性載體結(jié)合，酶吸附于載體上較為牢固，在工業(yè)上用途頗廣。離子吸附法常用的載體有：1)陰離子樹脂，如DEDA-C,ECTEOLA-纖維素，TEAE－纖維素，DEAE－葡聚糖凝膠，AmberliteCG－50,IRC－50,IR－120,IR－200,Dowex－50等。例：DEAE－SephadexA-25吸附氨基?；福?）包埋法包埋法系將酶包埋于凝膠或高分子聚合物網(wǎng)格內(nèi)，網(wǎng)格生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（1）吸附法生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的28可以防止酶的滲出，底物仍能滲入網(wǎng)格內(nèi)與酶相接觸。包埋法的優(yōu)點是酶分子本身不參與水不溶性網(wǎng)格的形成，許多酶都可用此法固定化。其操作簡單，酶分子只是被保埋起來，而未受到化學(xué)反應(yīng)，因此固定化酶表現(xiàn)活力較高。常用的報埋劑有聚丙烯酰胺，卡拉膠，淀粉凝膠，三醋酸纖維素，海藻酸，膠原，血纖維，大豆蛋白等。例：卡拉膠保埋細(xì)胞生產(chǎn)蘋果酸（3）共價鍵結(jié)合法共價鍵結(jié)合法是通過化學(xué)反應(yīng)使酶與聚合物載體共價偶聯(lián)。酶與載體共價結(jié)合的功能團(tuán)包括氨基，羧基，酚羥基，巰基，羥基，咪唑基。常用共價鍵結(jié)合法有：重氮化法，烷基化和芳基化法，戊二醛結(jié)合反應(yīng)法，鈦螯合法，硫醇－二硫化物的互換反應(yīng)等。固定化糖化酶生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的可以防止酶的滲出，底物仍能滲入網(wǎng)格內(nèi)與酶相接觸。包埋法的優(yōu)點29（4）肽鍵結(jié)合法該法主要將含羧基的水不溶性載體變成?；B氮，異氰酸鹽，鹵化物等衍生物，再使這些衍生物與酶的游離氨基進(jìn)行反應(yīng)，形成肽鍵。（5）交聯(lián)法交聯(lián)法是使用雙功能或多功能試劑與酶分子之間進(jìn)行分子間的交聯(lián)反應(yīng)的固定化方法。由于酶蛋白的功能基團(tuán)，如氨基，酚基，巰基，和咪唑基，參與交聯(lián)反應(yīng)，因此可能影響酶的活性中心結(jié)構(gòu)，而使酶活力顯著失活。交聯(lián)劑有多種，主要為戊二醛。在固定化酶的基礎(chǔ)上，固定化細(xì)胞技術(shù)得到迅速發(fā)展，其實際應(yīng)用速度已超過固定化酶。固定化細(xì)胞具有更多的優(yōu)點，它省去酶的分離操作。在細(xì)胞內(nèi)，酶穩(wěn)定性較高，進(jìn)行固定化時，活力喪失較少，且能利用天然存在的多酶體系，制造成本更低。但是反應(yīng)產(chǎn)物與底物必須容易透過細(xì)胞膜。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（4）肽鍵結(jié)合法生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的302.酶工程技術(shù)的應(yīng)用固定化酶和固定化細(xì)胞在食品發(fā)酵工業(yè)和制藥工業(yè)方面的應(yīng)用，不僅可以改革現(xiàn)有的生產(chǎn)工藝，而且可以創(chuàng)新多酶反應(yīng)工藝，還可以促使發(fā)酵工業(yè)發(fā)生根本性變革，因此在制藥工業(yè)中的應(yīng)用具有很大潛力。（二）細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1.動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及其應(yīng)用動物細(xì)胞的培養(yǎng)是將來自動物體的某些組織或器官，在模擬體內(nèi)生理條件下，在體外進(jìn)行培養(yǎng)，使之存活和生長。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2.酶工程技術(shù)的應(yīng)用生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的31（1）動物細(xì)胞培養(yǎng)條件營養(yǎng)條件培養(yǎng)基（人工合成，半人工合成）pH條件7.2-7.4溫度條件37±0.5℃氣體條件O2和CO2滲透壓無菌條件（2）培養(yǎng)方法體外培養(yǎng)細(xì)胞有原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)兩種方法。原代培養(yǎng)法有單層培養(yǎng)法和組織塊培養(yǎng)法。傳代培養(yǎng)是將原代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行稀釋分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（1）動物細(xì)胞培養(yǎng)條件生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的32（3）動物細(xì)胞大批培養(yǎng)技術(shù)許多有價值得蛋白質(zhì)，多肽制品都可以用動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行生產(chǎn)，如病毒疫苗，干擾素，單克隆抗體等。因此動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)正向大型化，自動化和精巧化方向發(fā)展。①微載體培養(yǎng)系統(tǒng)微載體培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)附著和生長在微載體表面。②氣升式深層發(fā)酵罐法③中空纖維法④微囊法將活細(xì)胞懸浮在海藻酸鈉中，滴入氯化鈣溶液中，形成小珠，用長鏈氨基酸聚合物聚賴氨酸，形成多孔外膜，然后重新液化膠化小球，使成膠物質(zhì)從多孔外膜流出，活細(xì)胞留在膜內(nèi)，然后進(jìn)行培養(yǎng)。（4）動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（人生長激素，乙型肝炎疫苗）生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的（3）動物細(xì)胞大批培養(yǎng)技術(shù)生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技332.植物細(xì)胞的培養(yǎng)及其應(yīng)用（1）植物細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)植物細(xì)胞培養(yǎng)是將植物體的某一部分經(jīng)無菌處理后置于人工培養(yǎng)基上使其細(xì)胞增殖，進(jìn)而按需要進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)。用于進(jìn)行培養(yǎng)所需的植物部分成為外殖體。所形成的脫分化的細(xì)胞團(tuán)稱為愈傷組織。將愈傷組織轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)即為懸浮培養(yǎng)。培養(yǎng)基大量無機(jī)鹽，植物激素等（2）植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有著廣泛應(yīng)用，尤其在天然藥物的生產(chǎn)上具有廣闊前景。如長春堿、地高辛，生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技術(shù)的2.植物細(xì)胞的培養(yǎng)及其應(yīng)用生物制藥工藝學(xué)第三章生物制藥工藝技34（三）單克隆抗體技術(shù)1.單克隆抗體的制備原理B細(xì)胞群受抗原刺激后能產(chǎn)生針對抗原決定族的特異性抗體，一個機(jī)體可產(chǎn)生多達(dá)100萬種特異性的抗體。但是一個B細(xì)胞卻只能分泌一種特異性抗體。例如，小鼠B細(xì)胞受乙肝病毒刺激后，可產(chǎn)生針對乙肝病毒的7種不同標(biāo)志的特異性抗體，它們分別由7種小鼠B細(xì)胞產(chǎn)生。這些B細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合后，形成7種雜