空腸彎曲菌檢驗課件

空腸彎曲菌檢驗

一、概述

空腸彎曲菌是彎曲菌屬中的一個亞種，隸屬于螺菌科。已被認為是引起急性腹瀉的重要原因菌。目前已證明為人畜共患病菌，人們食用受到該菌污染的食品和飲用水可引起急性腸炎?？漳c彎曲菌(C.jejuni)流行病學(xué)特征家畜、家禽腸道正常菌群

傳染源病人，帶菌者，帶菌動物

傳播途徑動物→人密切接觸、糞口傳播人→人糞口傳播

人群易感性人群普遍易感1～5歲兒童發(fā)病率最高二、生物學(xué)特性㈠形態(tài)與染色本菌為革蘭氏陰性多形態(tài)菌，螺旋形，彎曲桿狀。大小為（0.3~0.4）μm×（1.5~3）μm，呈S形或紡錘形，菌體一端或兩端有單根鞭毛，長度約為菌體的2~3倍，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)時間過久，如超過48h以衰老的球形菌居多。動力陽性。

㈡培養(yǎng)特性

⒈初次分離時需要在含5%氧、85%氮和10%二氧化碳環(huán)境中，傳代后能在10%二氧化碳環(huán)境中生長，在多氧和絕對無氧環(huán)境中均不生長。⒉培養(yǎng)適宜溫度為25~43℃，最適溫度為42℃，最適pH7.2。⒊對糖類既不發(fā)酵也不氧化，呼吸代謝無酸性或中性產(chǎn)物，生長不需要血清，從氨基酸或三羧酸循環(huán)獲得能量。⒋在布氏肉湯中生長呈均勻混濁。⒌在血瓊脂上，初分離出現(xiàn)兩種菌落特征：第一型菌落不溶血、灰色、扁平、濕潤、有光澤，看上去像水滴，邊緣不規(guī)則，常沿劃線蔓延生長；第二型菌落也不溶血，常呈分散凸起的單個菌落（直徑1~2mm）、邊緣整齊、半透明、有光澤，呈單個菌落生長。當菌種傳代后，如遇環(huán)境溫度不適宜，易出現(xiàn)第二型。（三）生化特性項目胎兒彎曲菌痰彎曲菌糞彎曲菌胎兒亞種結(jié)腸亞種空腸亞種痰亞種牛亞種過氧化氫酶＋＋＋－－＋氧化酶＋＋＋＋＋＋1%甘氨酸試驗＋＋＋＋＋＋H2S試驗（紙條法）－＋＋＋＋＋35g/LNaCl耐受試驗－－－－＋d25℃生長＋－－＋d－42℃生長－＋＋﹙－﹚d？硝酸鹽還原試驗＋＋＋＋＋d奈啶酸試驗＋－－－？d馬尿酸鈉水解－－＋－－－彎曲菌屬各個種的生化特性（四）抵抗力

本屬菌抵抗力不強，易被干燥、直射陽光及弱消毒劑等殺滅，加熱至58℃經(jīng)5min可殺死。對青霉素、頭孢霉素耐受，對紅霉素、四環(huán)素、慶大霉素敏感。三、檢驗程序2.微需氧條件的制備

最佳微需氧條件是氧氣5%、二氧化碳為10%、氮氣為85%。微需氧條件的制備方法有很多種，例如常用的燃燭法、化學(xué)法、生物法、氣袋法、儀器法等。帶有雙相壓力計的厭氧罐：在裝入平皿密封后，先抽去罐內(nèi)空氣至負壓為7.3×104Pa（550mmHg)處，同樣輸入上述氣體至壓力為零。即可放置恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。3.分離培養(yǎng)

可直接在選擇性培養(yǎng)基，如改良Camp-BAP布氏桿菌培養(yǎng)基或Skirrow氏培養(yǎng)平板上劃線接種。與42℃培養(yǎng)48h后，觀察可疑菌落。4.初步鑒定將可疑菌落做氧化酶和過氧化氫酶試驗，如為陽性，則涂片做革蘭氏染色。根據(jù)菌落生長特征、菌體染色、動力（暗視野或相差顯微鏡下觀察動力明顯）、氧化酶和過氧化氫酶陽性者，可初步確定為彎曲菌。5.確定試驗 經(jīng)初步鑒定后，仍需做下述試驗，并且各項試驗均應(yīng)在5%氧氣的微需氧環(huán)境中培養(yǎng)。（1）甘氨酸耐受性試驗將分離培養(yǎng)所得可疑菌落接種于甘氨酸培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48h，如為陽性，在培養(yǎng)基表面有云霧狀生長，則為彎曲菌空腸亞種。（2）硫化氫生長試驗將分離培養(yǎng)所得可疑菌落接種于TSL斜面上，并吊一根乙酸鉛濾紙條于管口，經(jīng)48~72h培養(yǎng)，空腸彎曲菌一般在斜面上少量生長，其反應(yīng)為堿性/堿性（K/K），濾紙條變黑，但培養(yǎng)基底部不因硫化氫而變黑。（3）馬尿酸鈉水解試驗將分離培養(yǎng)所得可疑菌落接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基，于42℃培養(yǎng)48h，離心沉淀取出部分上清液，加入三氯化鐵試劑，如出現(xiàn)恒久沉淀物則為陽性，空腸彎曲菌呈陽性反應(yīng)。

（4）35g/LNaCl耐受試驗

將分離培養(yǎng)所得可疑菌落接種于含35g/L氯化鈉肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)48h培養(yǎng)，空腸彎曲菌不成長。

（5）42℃和25℃生長試驗

將分離培養(yǎng)所得可疑菌落接種于兩管布氏桿菌肉湯中，一管放在42℃下培養(yǎng)48h，一管放在25℃下培養(yǎng)48h，42℃生長而25℃不生長，則為空腸彎曲菌。

（6）奈啶酸試驗

將分離培養(yǎng)所得可疑菌落涂片于血平板上，然后貼上含有39μm奈啶酸的濾紙于平板上，空腸彎曲菌敏感而腸道彎曲菌不敏感。（7）TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）試驗空腸彎曲菌在TTC培養(yǎng)基上呈陽性，而胎兒彎曲菌為陰性，陽性者有紫色菌苔并有光澤。（8）硝酸鹽還原試驗

取培養(yǎng)物的濃菌懸液，在37℃放置2h，加入試劑觀察顏色反應(yīng)，以空腸彎曲菌呈紅色的陽性反應(yīng)。

6.生物分型（1）快速馬尿酸鈉水解試驗（2）快速硫化氫試驗（3）DNA酶水解試驗試驗生物型空腸彎曲菌彎曲菌嗜熱彎曲菌ⅠⅡⅢⅤⅥⅦⅧⅨ快速馬尿酸鈉水解試驗++++----快速硫化氫試驗--++--++DNA酶水解試驗-+

-+-+-+空腸彎曲菌的生物分型7.血清分型

空腸彎曲菌O因子分型應(yīng)采用間接血凝法，H或K因子分型可用玻片凝集法。8.菌種保存

空腸彎曲菌菌種應(yīng)接種在改良