藥物小腸代謝研究方法課件

藥物腸代謝的研究方法

藥物腸代謝研究方法體外法體內(nèi)法體外法體外方法是研究小腸內(nèi)藥物代謝酶的主要方法，體外代謝研究可以排除體內(nèi)因素干擾。直接觀察酶對底物的選擇代謝性，為整體實驗提供可靠的理論依據(jù)。對于體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化率低、毒性大及缺乏靈敏檢測手段的藥物，體外代謝研究是一種良好的研究方法。腸微粒體法方法：腸微粒體法是由制備的腸微粒體與CYP450特定的探針藥物在模擬生理溫度及生理環(huán)境條件下進行生化反應的體系，制備腸微粒體一般采用差速離心法。優(yōu)點：酶制備技術(shù)簡單、代謝過程快、結(jié)果重現(xiàn)性好、易大量操作、便于積累代謝樣品供結(jié)構(gòu)研究等優(yōu)點。同時，該方法可用于對藥酶的抑制及體外代謝清除等方面的研究，因而在實際工作中應用較為普遍。缺點：腸微粒體體外溫孵法與其他體外腸代謝方法相比。與體內(nèi)情況的一致性方面存在不足，如缺乏膜轉(zhuǎn)運體及一些酶系統(tǒng)的影響，且很大程度上依靠微粒體分離結(jié)果的好壞。糞便溫孵法方法：用富含腸內(nèi)菌的動物或人的糞便懸浮液與藥物在厭氧條件下溫孵，檢測原型成分及其代謝物的種類和含量。優(yōu)點：離體實驗法具有速度快，可調(diào)控的優(yōu)點單一菌種溫孵法

方法：即用單一菌種與藥物共同進行厭氧培養(yǎng)，然后檢查藥物代謝情況的方法。優(yōu)點：利用單一菌種代謝藥物條件易于控制，有利于進一步對代謝藥物的特種酶的純化。缺點：目前，公認的、有代表性的腸道菌有45多種，利用它們與藥物一同進行溫孵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不如腸道混合菌代謝藥物明顯。腸菌酶法方法：明確對藥物中某一有效成分起到代謝轉(zhuǎn)化作用的特定代謝菌株并從細菌中分離、純化和鑒定真正起到代謝作用的代謝酶，把由腸菌中分得的酶作用于藥物，間接地研究腸道菌對藥物作用的方法。

Caco-2細胞模型法方法：細胞模型預測主要采用的是一種結(jié)腸癌細胞（Caco-2），其結(jié)構(gòu)和生理生化作用類似人體小腸上皮細胞，具有各種體內(nèi)代謝酶及主動轉(zhuǎn)運的載體，因此藥物在Caco-2細胞的代謝與藥物在小腸上皮細胞的代謝具有很好的相關性。將Caco-2細胞接種于含藥培養(yǎng)基中培養(yǎng),檢測藥物的代謝產(chǎn)物。完整小腸/結(jié)腸組織切片法方法：結(jié)腸組織切片法是在37℃的瓊脂糖溶液中植入充滿瓊脂糖凝膠的腸段后，置于預冷的組織包埋器中(0℃)，用Krumdieck組織切片機精密切割得到的300μm厚，約2mg的腸片段，于WME液中培養(yǎng)。有文獻中將該片段分別7-乙氧基香豆素(I相代謝底物)，7-羥基香豆素(Ⅱ相代謝底物)，CYP酶的代謝底物(表1)共同孵育3h后，評價腸內(nèi)藥物代謝酶的活性。

體內(nèi)法方法：動物給藥后，在一定時間內(nèi)將動物處死，取消化道各部分內(nèi)容物進行分析，可研究藥物在胃腸道的代謝過程。動物給藥后，檢查尿、糞便、膽汁，測定代謝物的結(jié)構(gòu)及含量經(jīng)時變化，可研究藥物的代謝轉(zhuǎn)化，也可間接推斷其在消化道的代謝過程。體內(nèi)法

該法主要適用于有效成分明確或者具有指標成分的中藥及復方，能夠說明中藥在體內(nèi)的主要代謝部位，但是具體的代謝產(chǎn)物以及代謝機制有待進一步闡明?？偨Y(jié)小腸代謝研究方法有體外法和體內(nèi)法。其中較為常用的是體外法。包括腸微粒體法、離體消化道內(nèi)容物溫孵法、Caco-2細胞模型法及腸組織切