玉樹獐牙菜對小鼠實驗性肝損傷的愛惜及肝糖原的阻礙

玉樹獐牙菜對小鼠實驗性肝損傷的愛惜及肝

糖原的阻礙丁莉，陳志，金蘭，羅桂花【摘要】目的研究玉樹獐牙菜對小鼠實驗性肝損傷的愛惜作用。方式采納一次性腹腔注射四氯化碳花生油％）方式制作染毒小鼠模型,別離給予不同劑量玉樹獐牙菜對模型動物進行干與性愛惜，測定不同實驗組動物的生化指標(biāo)。結(jié)果該藥能明顯降低四氯化碳引發(fā)的小鼠血清ALT,AST升高;提高肝糖原含量。結(jié)論玉樹獐牙菜對小鼠實驗性肝損傷具有必然的愛惜作用?！娟P(guān)鍵詞】玉樹獐牙菜；四氯化碳；肝損傷；肝糖原TheProtectiveEffectofHerbaSwertiaeMussot11onExperimentalLiverInjuryandtheGlycogenContentofLiverinMiceAbstract：ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectsofHerbaSwertiaeMussotllliverinjuryinmice.MethodsThemodelofliverinjurywasinducedbyintraperitonealinjectionofearthnutoilmixedwithCC14%)andtheserumandlivertissuewerecollected.BiochemicalindexesexaminationwereSwertiaeMussotllobviouslyinhibitedtheincreaseofserumALTandASTcausedbyCC14;theglycogencontentofliverwasraised.ConclusionHerbaSwertiaeMussotllcanprotectliverfromdamagewhenexposedtocarbontetrachloride.Keywords:HerbaSwertiaeMussotll;Carbontetrachloride；Liverinjury；Glycogenofliver玉樹獐牙菜SwertiamussotllFranch,藏茵陳的一種，屬龍膽科(Gentianaceae)植物，生于海拔2800?4000m的高寒地域,要緊產(chǎn)于玉樹一帶。亦叫川西獐牙菜。一年生草本，全草入藥，有清熱解毒，舒肝利膽之功效，對急慢性黃疸型肝炎、病毒型肝炎和黃疸型肝炎有專門好的醫(yī)治成效，為肝炎特效臧藥植物［1］。目前對藏茵陳的藥理和化學(xué)性質(zhì)的研究有諸多報導(dǎo)，而對川西獐牙菜的報導(dǎo)卻很少。本文通過觀看不同劑量的玉樹獐牙菜對四氯化碳性肝損傷模型血清ALT,AST和肝糖原的含量阻礙，研究該藥對動物化學(xué)性肝損傷的愛惜作用，為玉樹獐牙菜在臨床上應(yīng)用提供必然的理論基礎(chǔ)，同時為開發(fā)利用這一天然高寒植物資源提供科學(xué)依據(jù)。1材料與方式材料動物昆明種健康小鼠雌雄各一半，體重18?20g（由蘭州生物制品廠提供）。藥品和試劑醇提取的玉樹獐牙菜浸膏；四氯化碳試劑（分析純,在實驗中應(yīng)用花生油配制成含％的試劑，由廣東西隴化工廠生產(chǎn)）;食用魯花花生油；吐溫80;谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（ALS）試劑盒（由南京建成生物工程研究所提供）。儀器與設(shè)備721分光光度計；高速冷凍離心機;低溫冰箱;電熱水浴鍋等。方式玉樹獐牙菜藥物的提取將該藥粉碎稱取1kg加8L食用酒精回鐳煮2h,濾出提取液,再加8L的食用酒精重復(fù)3次歸并提取液并濃縮（回收酒精）在60℃的烘箱里烘干，實驗歷時用花生油：吐溫80：水為1：1：8配制生藥：濃度為，，g/mlo小鼠的處置將70只小鼠在實驗室飼養(yǎng)2d后,按體重隨機分為A組（正常對照組）、B組（CC14肝損傷組）、C組（低劑量玉樹獐牙菜組）、D組（中劑量玉樹獐牙菜組）、E組（高劑量玉樹獐牙菜組）。自由攝取常規(guī)顆粒狀飼料和自來水，空白對照組不做任何處置,CC14模型組用藥物助溶劑以10ml/kg劑量按體重給藥1個禮拜,藥物組高、中、低3個劑量組別離按，，g/kg體重灌胃給藥6周。末次給藥后2h,除空白對照組的小鼠外,其它各組均按以10ml/kg的劑量按體重一次性腹腔注射%CC14花生油溶劑,禁食不由水，13h后斷頸取血,并取肝組織冷凍。血清樣處置在3500r/min,離心15min,取上清液低溫保留。ALT活性測定參照改良賴氏法測定［2］血清中的ALT能與丙氨酸和酮戊二酸反映生成丙酮酸及谷氨酸，丙酮酸與2,4-二硝基苯肺生成2,4-二硝基苯胺在堿性液中顯棕紅色,在505nm處有最大吸收值。先用丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液作標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后測定樣品的吸光度,查閱標(biāo)準(zhǔn)曲線，而且乘以血清稀釋倍數(shù),計算ALT的活力。AST活性測定參照改良賴氏法測定［2］血清中的AST能與天冬氨酸和a-酮戊二酸反映生成草酰乙酸和谷氨酸，草酰乙酸與2,4-二硝基苯明生成2,4-二硝基苯腺在堿性液中顯棕紅色，在505nm處有最大吸收值。同上法計算AST的活力。肝糖原的測定小鼠于末次給藥30min后，當(dāng)即處死掏出肝臟,經(jīng)生理鹽水空白漂洗，濾紙吸干,精準(zhǔn)稱取肝臟100mg于試管內(nèi)，加入8ml三氯醋酸勻漿1min,3000r/min,離心15min。取上清液于另一支試管內(nèi)，用意酮法于650nm處測其吸光度測定肝糖原含量數(shù)據(jù)處置所有實驗結(jié)果用土s表示采納t查驗。2結(jié)果對血清中ALT和AST的含量的阻礙結(jié)果見表lo表1玉樹獐牙菜提取液對CC14肝損傷小鼠血清ALT和AST的阻礙（略）與空白對照組比較,OP＜,OOP＜；與模型組比較,*P＜；n=14從上表可看出，CC14肝損傷模型組小鼠血清ALT和AST的活性明顯高于空白對照組;與模型組比較,藥物組小鼠血清ALT和AST的活性明顯降低。對小鼠肝糖原含量的阻礙結(jié)果見表2。由表2可見，中、高劑量組肝糖原含量明顯高于空白對照組和模型組，不同有顯著性意義（PO，提示玉樹獐牙菜能增加小鼠肝糖原的含量。對照組與模型組相較，模型組小鼠肝糖元含量下降，說明肝損傷模型是成功的,CC14可能破壞肝功能，使代謝下降。表2玉樹獐牙菜不同劑量對小鼠肝糖元含量的阻礙（略）與模型組比較，*P<;與對照組比較，△PV;n=143討論玉樹獐牙菜醇提物對小鼠CC14化學(xué)性急性肝損傷的愛惜作用本實驗說明CC14對小鼠肝組織有損傷作用，表此刻血清中ALT,AST的含量比空白對照組有顯著性的增高。CC14是一種典型的肝臟毒物,經(jīng)肝臟微粒體細(xì)胞色素P-450激活后，發(fā)生均裂產(chǎn)生自由基（CC13?）o一方面,CC13能夠解決細(xì)胞膜上的磷脂分子，引發(fā)脂質(zhì)過氧化,并與膜蛋白結(jié)合，破壞了膜的結(jié)構(gòu)和功能;另一方面CC14抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的鈣離子泵，使鈣離子升高,從而激活肝細(xì)胞膜上的磷酸化酶，引發(fā)脂質(zhì)過氧化，致使肝細(xì)胞膜損傷［4］。當(dāng)肝細(xì)胞受損時，由于肝細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶的濃度比血清中的高,胞漿內(nèi)的ALT和AST因濃度差釋放入血，造成高血清ALT和AST,故血清中的ALT和AST的含量是反映肝受損的靈敏指標(biāo),也能反映肝細(xì)胞損傷的程度。CC14可引發(fā)化學(xué)性肝損傷,致使肝細(xì)胞變性、壞死、間質(zhì)細(xì)胞浸潤，也能引發(fā)肝纖維化，其中成纖維細(xì)胞在肝纖維化中起著要緊作用L4]o玉樹獐牙菜己知有8種酮,其中藏茵陳酮是新發(fā)覺的，另外還有齊墩果酸、芒果甘、苦龍膽甘、當(dāng)藥黃素等其它有效成份[l]o玉樹獐牙菜醇提物明顯降低CC14引發(fā)的大鼠血清ALT和AST增高，有量效關(guān)系，說明玉樹獐牙菜有效成份在必然程度愛惜肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，減少自由基的解決而減輕肝細(xì)胞的損傷。對實驗性肝損傷具有較好的降酶、愛惜肝細(xì)胞和醫(yī)治作用。玉樹獐牙菜醇提物對小鼠肝糖原含量的阻礙肝臟是藥物代謝的要緊器官，肝對糖的存儲、散布和調(diào)劑起重要作用[5]o肝細(xì)胞有豐碩的線粒體，為活躍的代謝活動提供足夠的能量。肝細(xì)胞還有豐碩的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和大量的核糖體，是肝臟合成血漿蛋白質(zhì)及肝內(nèi)參與物質(zhì)代謝有關(guān)酶類的場所。另外肝細(xì)胞中還含有各類活性較高和完備的酶體系，因此在全身物質(zhì)代謝及生物轉(zhuǎn)化中起著專門重要的作用。對照組與模型組相較較，模型組肝糖原含量下降，這可能與肝組織損傷而引發(fā)糖代謝改變有關(guān)。當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生彌漫性嚴(yán)峻損害時,肝糖原合成障礙及貯存減少，以多種途徑阻礙糖代謝，要緊表現(xiàn)為磷酸戊糖途徑及糖醇解途徑相對增強；糖有氧氧化及三叛酸循環(huán)運轉(zhuǎn)不佳，肝中葡萄糖-6-磷酸酶活性增加，使肝糖原迅速分解為6-磷酸葡萄糖，并在催化下，生成葡萄糖補充血糖，致使模型組的肝糖原含量明顯下降。有文獻報導(dǎo)[6],肝糖原的合成進程大致如下：肝細(xì)胞內(nèi)的6-磷酸葡萄糖在葡萄糖磷酸變位酶的催化下轉(zhuǎn)化為「磷酸葡萄，肝臟(及腎臟)還含有一些酶，能催化某些非糖物質(zhì)如生糖氨基酸、乳酸及甘油等均轉(zhuǎn)變成糖原。實驗說明：藥物組的肝糖原的含量明顯高于模型組，可能是玉樹獐牙菜增進了糖原合成途徑或提高糖原儲蓄能力,從而較好地操縱肝細(xì)胞壞死和增進損傷肝細(xì)胞的修復(fù)，有效地愛惜肝細(xì)胞，幸免有毒物質(zhì)的侵害和自由基大量的產(chǎn)生，并有提高肝細(xì)胞糖原的合成或儲蓄能力藥理作用。不同劑量的玉樹獐牙菜對急性化學(xué)性損傷小鼠都有愛惜作用，何種劑量的用藥效價更好還有待進一步的研究。【參考文獻】[1]紀(jì)蘭菊，廖志新，孫洪發(fā).青海龍膽科部份藏藥植物化學(xué)成份研究進展[J].高原生物學(xué)集刊，2002：243.[2]楊昌國，許葉，江摩海，等.轉(zhuǎn)氨酶測定標(biāo)準(zhǔn)化的意見[J].臨床查驗雜志，1992,10(4)：170.[