《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件

?植物組織培養(yǎng)學(xué)?實(shí)驗(yàn)宜春學(xué)院生命科學(xué)與資源環(huán)境學(xué)院園林教研室楊育紅園藝教研室盧其能卻志群?植物組織培養(yǎng)學(xué)?實(shí)驗(yàn)宜春學(xué)院生命科學(xué)與資源環(huán)境學(xué)院1實(shí)驗(yàn)一植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室參觀一、目的要求通過本次實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生掌握如何組建植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室；同時(shí)熟悉組培中涉及的各種儀器設(shè)備和器皿用具的使用方法。實(shí)驗(yàn)一植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室參觀一、目的要求2二、儀器用具組培室內(nèi)的各種實(shí)驗(yàn)設(shè)備。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1．介紹合理的組培室布局2．介紹實(shí)驗(yàn)設(shè)備和用具3．介紹實(shí)驗(yàn)的操作規(guī)程。四、作業(yè)將本此實(shí)訓(xùn)內(nèi)容整理成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。每人設(shè)計(jì)一個(gè)植物組織培養(yǎng)室的組建方案?！舱f明設(shè)計(jì)思路〕二、儀器用具3超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái)4《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件5《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件6《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件7實(shí)驗(yàn)二MS培養(yǎng)基母液的配制與保存

一、目的要求通過MS培養(yǎng)基的母液配制和保存,掌握配制和保存培養(yǎng)基母液的根本技能.實(shí)驗(yàn)二MS培養(yǎng)基母液的配制與保存

一、目的要求8二、材料與用具1所需儀器及設(shè)備：天平、燒杯、定容瓶、量筒、蒸餾水、母液瓶、標(biāo)簽、冰箱等。2所需藥品及試劑：配制MS培養(yǎng)基所需的藥品、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、蒸餾水、95%酒精、0.1mol/l的NaOH、0.1mol/l的HCl二、材料與用具9三、方法步驟1．母液的配制根據(jù)MS培養(yǎng)基配方表配制六種母液?！苍斠姼奖怼?．母液的保存〔1〕裝瓶：將配制好的母液分別倒入瓶中，瓶上貼好標(biāo)簽，注明培養(yǎng)基名稱、母液號(hào)、吸取量與配制日期。〔2〕儲(chǔ)藏：將母液瓶?jī)?chǔ)放在冰箱內(nèi)備用。四、作業(yè)1．整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2．列一張配制MS培養(yǎng)基母液成分表。三、方法步驟10配制MS培養(yǎng)基母液成分表母液種類成分規(guī)定量（mg/l）擴(kuò)大倍數(shù)稱取量（g）母液定容體積（ml）配1LMS培養(yǎng)基吸取量（ml）大量元素母液1NH4NO316505082.5100020KNO3190095.0MgSO4.7H2O37018.52Cacl2.2H2O44010022.0500103KH2PO41701008.550010微量元素5H3BO36.2500.31100020MnSO4.4H2O22.31.115ZnSO4.7H2O8.60.43KI0.830.0415Na2MoO4.2H2O0.250.0125CuSO4.5H2O0.0250.00125Cocl2.6H2O0.0250.00125鐵鹽4Na2-EDTA37.31001.86550010FeSO4.7H2O27.81.390有機(jī)成分6肌醇1002005.02505甘氨酸20.1煙酸0.50.025VB60.50.025VB10.10.025配制MS培養(yǎng)基母液成分表母液種類成分規(guī)擴(kuò)稱母液配1LMS大11實(shí)驗(yàn)三MS固體培養(yǎng)基的配制

一目的要求通過MS固體培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的根本技能。實(shí)驗(yàn)三MS固體培養(yǎng)基的配制

一目的要求12二材料與用具1所需儀器及設(shè)備：電爐、酸度計(jì)、高壓濕熱滅菌器2所需藥品及試劑：配制MS培養(yǎng)基的各種母液、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液、0.1mol/lNaOH、0.1mol/lHcl、瓊脂、蔗糖、蒸餾水3其他材料：移液管、量筒、定容瓶、培養(yǎng)瓶、標(biāo)簽、鉛筆。二材料與用具1所需儀器及設(shè)備：電爐、酸度計(jì)、高壓濕熱滅13三方法步驟1．按母液順序和規(guī)定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸餾水的量筒母液一20ml母液二10ml母液三10ml母液四10ml母液五20ml母液六5ml2．參加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)：適配制的培養(yǎng)基而定。3．參加蔗糖：30g/l4．加蒸餾水定容后倒入鍋中5．參加瓊脂：6.5g/l〔視瓊脂質(zhì)量而定〕,后調(diào)節(jié)PH值(用1mol/l的NaOH或1mol/l的HCL)6.熔化瓊脂:在電爐上加熱溶液,并不斷攪拌,使瓊脂熔化.7.培養(yǎng)基的分裝三方法步驟1．按母液順序和規(guī)定量，用吸管提取母液，放入14四、作業(yè)1．整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告注：〔1〕配制培養(yǎng)基時(shí)母液吸取量的計(jì)算：吸取量〔ml〕=〔培養(yǎng)基中某成分的規(guī)定濃度〔mg/l〕*配制培養(yǎng)基的體積〔l〕〕/母液中某成分濃度〔mg/l〕〔2〕植物激素母液吸取量計(jì)算：吸取母液量〔ml〕=〔培養(yǎng)基中激素濃度〔mg/l〕*配制培養(yǎng)基體積〔l〕〕/激素母液濃度〔mg/ml〕四、作業(yè)1．整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告15實(shí)驗(yàn)四愈傷組織的誘導(dǎo)

一、目的要求本次試驗(yàn)，首先通過在無菌操作臺(tái)上進(jìn)展無菌操作訓(xùn)練，使學(xué)生初步掌握組織培養(yǎng)的無菌操作技術(shù)。其次，通過本次實(shí)驗(yàn)是了解并掌握愈傷組織誘導(dǎo)的根本程序和方法。實(shí)驗(yàn)四愈傷組織的誘導(dǎo)一、目的要求16《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件17《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件18二材料與用具1所需儀器及工具：超凈工作臺(tái)、70%酒精、95%酒精、接種器械〔主要指剪刀、鑷子等〕、培養(yǎng)材料或外植體、0.1%的升汞、無菌水等。2愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+2.4-D1.0+KT0.2或B5+2.4-D1.0+KT0.2二材料與用具1所需儀器及工具：超凈工作臺(tái)、70%酒精、19三、方法步驟1．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后用水和肥皂洗凈雙手，穿上滅菌過的專用實(shí)驗(yàn)服、帽子、鞋子。2．翻開超凈工作臺(tái)內(nèi)的吹風(fēng)和紫外燈，并翻開無菌操作室內(nèi)的紫外燈，照射20分鐘〔進(jìn)展紫外滅菌〕3．進(jìn)展外植體預(yù)處理〔即對(duì)植物組織進(jìn)展修整，去掉不需要的局部，將準(zhǔn)備使用的植物材料在流水中沖洗干凈。〕4．照射20分鐘后，關(guān)閉紫外燈，翻開照明燈，用70%的酒精擦拭工作臺(tái)和雙手，準(zhǔn)備進(jìn)展外植體的消毒和接種工作。三、方法步驟1．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后用水和肥皂洗凈雙手，穿上滅菌過的205．用蘸有70%的酒精的紗布擦拭裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，放進(jìn)工作臺(tái)。6．把接種器械浸泡在95%酒精中，在火焰上滅菌后，放在器械架上。7．胡蘿卜種子經(jīng)75%乙醇浸泡30s，無菌水沖洗2遍，再用0.1%升汞浸泡10分鐘，無菌水沖洗3-5次后，接種于不含任何激素的1/2MS固體培養(yǎng)基含〔1.5%蔗糖〕上，于24℃暗培養(yǎng)條件下萌發(fā)7-10天后，將子葉和下胚軸切成0.5cm的截段作為組織培養(yǎng)的材料。8.進(jìn)展接種。9.接種完畢后,清理和關(guān)閉超凈工作臺(tái),并將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。5．用蘸有70%的酒精的紗布擦拭裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，放進(jìn)工作21四、作業(yè)1.整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2.接種一周后,觀察接種材料的污染情況,并分析污染原因。3.25天后統(tǒng)計(jì)愈傷組織的誘導(dǎo)率，記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。四、作業(yè)1.整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。22實(shí)驗(yàn)五月季莖段的離體培養(yǎng)一、目的要求通過本次試驗(yàn)，熟練掌握外植體的外表滅菌方法，并穩(wěn)固掌握無菌操作的根本要領(lǐng)，重點(diǎn)掌握一般花卉的器官的離體培養(yǎng)的根本程序。實(shí)驗(yàn)五月季莖段的離體培養(yǎng)一、目的要求23《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件24《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件25二材料與用具1所需儀器及工具：超凈工作臺(tái)、70%酒精、95%酒精、接種器械〔主要指剪刀、鑷子等〕、培養(yǎng)材料或外植體、0.1%的升汞、無菌水等。2所需材料：嫩葉、嫩莖切段、頂芽或側(cè)芽3誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+2.4-D1.0mg/l+6-BA0.1mg/l或MS+NAA0.1mg/l+6-BA0.1mg/L+2.4-D0.5mg/l二材料與用具1所需儀器及工具：超凈工作臺(tái)、70%酒精、26三、方法步驟1．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后用水和肥皂洗凈雙手，穿上滅菌過的專用實(shí)驗(yàn)服、帽子、鞋子。2．翻開超凈工作臺(tái)內(nèi)的吹風(fēng)和紫外燈，并翻開無菌操作室內(nèi)的紫外燈，照射20分鐘〔進(jìn)展紫外滅菌〕3．進(jìn)展外植體預(yù)處理〔即對(duì)植物組織進(jìn)展修整，去掉不需要的局部，將準(zhǔn)備使用的植物材料在流水中沖洗干凈?！?．照射20分鐘后，關(guān)閉紫外燈，翻開照明燈，用70%的酒精擦拭工作臺(tái)和雙手，準(zhǔn)備進(jìn)展外植體的消毒和接種工作。三、方法步驟1．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后用水和肥皂洗凈雙手，穿上滅菌過的275外植體消毒滅菌時(shí)，先用自來水沖洗2小時(shí)，洗去滲出汁液，再用70%的酒精消毒8-9秒后用0.1%的升汞消毒7-8分鐘，無菌水沖洗4-5次，效果較好.接種時(shí)，用干凈濾紙吸干外植體外表水分，可以明顯減少污染率和褐變率6接種完畢后,清理和關(guān)閉超凈工作臺(tái),并將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。5外植體消毒滅菌時(shí)，先用自來水沖洗2小時(shí)，洗去滲出汁液，28四、作業(yè)1.整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2.接種一周后,觀察接種材料的污染情況,并分析污染原因。3.25天后統(tǒng)計(jì)莖段分化率，記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。四、作業(yè)1.整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。29實(shí)驗(yàn)六花藥培養(yǎng)

一、目的要求花藥培養(yǎng)可應(yīng)用于品種育種，即單倍體育種。同時(shí)，有的植物花藥培養(yǎng)還能有效脫除母株所帶病毒，獲得無病毒苗。通過本實(shí)驗(yàn)，學(xué)習(xí)花藥培養(yǎng)技術(shù)，為今后應(yīng)用這一技術(shù)奠定根底。實(shí)驗(yàn)六花藥培養(yǎng)一、目的要求30《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件31二、材料與用具

1.材料：草莓花蕾2.儀器：光學(xué)顯微鏡、蓋玻片、載玻片、超凈工作臺(tái)、手術(shù)剪、接種環(huán)、槍狀鑷子、高壓滅菌器、電磁爐、培養(yǎng)瓶等。3.試劑：70%-75%乙醇、0.1%升汞、無菌水、醋酸洋紅醋酸洋紅的配制：將100ml45%的冰醋酸紅置錐形瓶中煮沸，徐徐參加0.5-1g洋紅粉末〔不要一次參加，以免濺沸〕。繼續(xù)煮沸20min〔可采用回流煮沸〕，冷卻備用。二、材料與用具1.材料：草莓花蕾32三、方法步驟1.培養(yǎng)基配制誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/l+KT0.1mg/l+NAA2.0mg/l分化培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/l+ZT2.0mg/l+NAA0.2mg/l三、方法步驟1.培養(yǎng)基配制332.材料的選擇〔即花粉發(fā)育時(shí)期的鑒定〕選擇花粉處于單核靠邊起的花藥培養(yǎng)鑒定方法：從田間采集花蕾數(shù)個(gè)，從每花蕾取花藥1-2枚置載玻片上，加醋酸洋紅1-2滴，用玻棒頭或鑷子的一頭壓碎花藥，剔除碎片，加蓋玻片鏡鑒。通過鏡鑒記錄處于單核靠邊期花藥花蕾的外觀形態(tài)，便于下次采集。通?；ㄋ巻魏丝窟吰诘牟葺ɡ傩螒B(tài)是：未開放，花萼略長(zhǎng)于花冠或花冠剛露白，花冠白色或淡綠且不松動(dòng)，花藥微黃且充實(shí)。2.材料的選擇〔即花粉發(fā)育時(shí)期的鑒定〕343.材料預(yù)處理、消毒和接種取花粉發(fā)育處于單核靠邊期(約4-6mm大小)的花蕾，放在4℃冰箱中低溫預(yù)處理3d-5d或不經(jīng)低溫處理，用70%的乙醇外表消毒10-15s后，再經(jīng)2%的84消毒液消毒15min，無菌水清洗3-4次，每次4-5min，用無菌試紙吸干花蕾外表水分后，在超凈工作臺(tái)上剝?nèi)』ㄋ?，立即接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。3.材料預(yù)處理、消毒和接種354.培養(yǎng)觀察接種后暗培養(yǎng)7天，再轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)。組培室內(nèi)溫度控制在20℃左右，光照時(shí)間16h/d，光強(qiáng)1500-2000lx。4.培養(yǎng)觀察36四分析討論1觀察并記錄花藥的分化狀況230天后，分析培養(yǎng)基對(duì)于花藥培養(yǎng)的影響四分析討論37實(shí)驗(yàn)七植物頂端分生組織培養(yǎng)脫毒一、目的要求通過本次實(shí)驗(yàn)，了解一般園林植物的組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)，并掌握頂端分生組織的分解方法實(shí)驗(yàn)七植物頂端分生組織培養(yǎng)脫毒一、目的要求38二、材料與用具

1.材料：草莓莖尖2.儀器：光學(xué)顯微鏡、超凈工作臺(tái)、手術(shù)剪、接種環(huán)、槍狀鑷子、高壓滅菌器、電磁爐、培養(yǎng)瓶等。3.試劑：70%-75%乙醇、0.1%升汞、無菌水二、材料與用具1.材料：草莓莖尖39三、方法步驟1.培養(yǎng)基配制誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/l+KT0.1mg/l+NAA2.0mg/l分化培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/l+ZT2.0mg/l+NAA0.2mg/l三、方法步驟1.培養(yǎng)基配制402．翻開超凈工作臺(tái)內(nèi)的吹風(fēng)和紫外燈，并翻開無菌操作室內(nèi)的紫外燈，照射20分鐘〔進(jìn)展紫外滅菌〕3．進(jìn)展外植體預(yù)處理〔即對(duì)植物組織進(jìn)展修整，去掉不需要的局部，將準(zhǔn)備使用的植物材料在流水中沖洗干凈?！?．照射20分鐘后，關(guān)閉紫外燈，翻開照明燈，用70%的酒精擦拭工作臺(tái)和雙手，準(zhǔn)備進(jìn)展外植體的消毒和接種工作。2．翻開超凈工作臺(tái)內(nèi)的吹風(fēng)和紫外燈，并翻開無菌操作室內(nèi)的紫外415將草莓莖尖置于顯微鏡下，用鑷子夾住莖段的后半局部，并用解刨針除去葉片及葉片原基，直至露出閃亮圓錐體，即為頂端分生組織。6用消毒完畢的解剖刀，切下頂端分生組織，并迅速將其轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基上。7接種后暗培養(yǎng)7天，再轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)。5將草莓莖尖置于顯微鏡下，用鑷子夾住莖段的后半局部，并用解42四分析討論1觀察并記錄培養(yǎng)材料得生長(zhǎng)狀況。2分析培養(yǎng)基對(duì)頂端分生組織生長(zhǎng)和分化的影響。四分析討論1觀察并記錄培養(yǎng)材料得生長(zhǎng)狀況。43?植物組織培養(yǎng)學(xué)?實(shí)驗(yàn)宜春學(xué)院生命科學(xué)與資源環(huán)境學(xué)院園林教研室楊育紅園藝教研室盧其能卻志群?植物組織培養(yǎng)學(xué)?實(shí)驗(yàn)宜春學(xué)院生命科學(xué)與資源環(huán)境學(xué)院44實(shí)驗(yàn)一植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室參觀一、目的要求通過本次實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生掌握如何組建植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室；同時(shí)熟悉組培中涉及的各種儀器設(shè)備和器皿用具的使用方法。實(shí)驗(yàn)一植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室參觀一、目的要求45二、儀器用具組培室內(nèi)的各種實(shí)驗(yàn)設(shè)備。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1．介紹合理的組培室布局2．介紹實(shí)驗(yàn)設(shè)備和用具3．介紹實(shí)驗(yàn)的操作規(guī)程。四、作業(yè)將本此實(shí)訓(xùn)內(nèi)容整理成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。每人設(shè)計(jì)一個(gè)植物組織培養(yǎng)室的組建方案。〔說明設(shè)計(jì)思路〕二、儀器用具46超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái)47《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件48《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件49《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件50實(shí)驗(yàn)二MS培養(yǎng)基母液的配制與保存

一、目的要求通過MS培養(yǎng)基的母液配制和保存,掌握配制和保存培養(yǎng)基母液的根本技能.實(shí)驗(yàn)二MS培養(yǎng)基母液的配制與保存

一、目的要求51二、材料與用具1所需儀器及設(shè)備：天平、燒杯、定容瓶、量筒、蒸餾水、母液瓶、標(biāo)簽、冰箱等。2所需藥品及試劑：配制MS培養(yǎng)基所需的藥品、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、蒸餾水、95%酒精、0.1mol/l的NaOH、0.1mol/l的HCl二、材料與用具52三、方法步驟1．母液的配制根據(jù)MS培養(yǎng)基配方表配制六種母液?！苍斠姼奖怼?．母液的保存〔1〕裝瓶：將配制好的母液分別倒入瓶中，瓶上貼好標(biāo)簽，注明培養(yǎng)基名稱、母液號(hào)、吸取量與配制日期。〔2〕儲(chǔ)藏：將母液瓶?jī)?chǔ)放在冰箱內(nèi)備用。四、作業(yè)1．整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2．列一張配制MS培養(yǎng)基母液成分表。三、方法步驟53配制MS培養(yǎng)基母液成分表母液種類成分規(guī)定量（mg/l）擴(kuò)大倍數(shù)稱取量（g）母液定容體積（ml）配1LMS培養(yǎng)基吸取量（ml）大量元素母液1NH4NO316505082.5100020KNO3190095.0MgSO4.7H2O37018.52Cacl2.2H2O44010022.0500103KH2PO41701008.550010微量元素5H3BO36.2500.31100020MnSO4.4H2O22.31.115ZnSO4.7H2O8.60.43KI0.830.0415Na2MoO4.2H2O0.250.0125CuSO4.5H2O0.0250.00125Cocl2.6H2O0.0250.00125鐵鹽4Na2-EDTA37.31001.86550010FeSO4.7H2O27.81.390有機(jī)成分6肌醇1002005.02505甘氨酸20.1煙酸0.50.025VB60.50.025VB10.10.025配制MS培養(yǎng)基母液成分表母液種類成分規(guī)擴(kuò)稱母液配1LMS大54實(shí)驗(yàn)三MS固體培養(yǎng)基的配制

一目的要求通過MS固體培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的根本技能。實(shí)驗(yàn)三MS固體培養(yǎng)基的配制

一目的要求55二材料與用具1所需儀器及設(shè)備：電爐、酸度計(jì)、高壓濕熱滅菌器2所需藥品及試劑：配制MS培養(yǎng)基的各種母液、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液、0.1mol/lNaOH、0.1mol/lHcl、瓊脂、蔗糖、蒸餾水3其他材料：移液管、量筒、定容瓶、培養(yǎng)瓶、標(biāo)簽、鉛筆。二材料與用具1所需儀器及設(shè)備：電爐、酸度計(jì)、高壓濕熱滅56三方法步驟1．按母液順序和規(guī)定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸餾水的量筒母液一20ml母液二10ml母液三10ml母液四10ml母液五20ml母液六5ml2．參加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)：適配制的培養(yǎng)基而定。3．參加蔗糖：30g/l4．加蒸餾水定容后倒入鍋中5．參加瓊脂：6.5g/l〔視瓊脂質(zhì)量而定〕,后調(diào)節(jié)PH值(用1mol/l的NaOH或1mol/l的HCL)6.熔化瓊脂:在電爐上加熱溶液,并不斷攪拌,使瓊脂熔化.7.培養(yǎng)基的分裝三方法步驟1．按母液順序和規(guī)定量，用吸管提取母液，放入57四、作業(yè)1．整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告注：〔1〕配制培養(yǎng)基時(shí)母液吸取量的計(jì)算：吸取量〔ml〕=〔培養(yǎng)基中某成分的規(guī)定濃度〔mg/l〕*配制培養(yǎng)基的體積〔l〕〕/母液中某成分濃度〔mg/l〕〔2〕植物激素母液吸取量計(jì)算：吸取母液量〔ml〕=〔培養(yǎng)基中激素濃度〔mg/l〕*配制培養(yǎng)基體積〔l〕〕/激素母液濃度〔mg/ml〕四、作業(yè)1．整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告58實(shí)驗(yàn)四愈傷組織的誘導(dǎo)

一、目的要求本次試驗(yàn)，首先通過在無菌操作臺(tái)上進(jìn)展無菌操作訓(xùn)練，使學(xué)生初步掌握組織培養(yǎng)的無菌操作技術(shù)。其次，通過本次實(shí)驗(yàn)是了解并掌握愈傷組織誘導(dǎo)的根本程序和方法。實(shí)驗(yàn)四愈傷組織的誘導(dǎo)一、目的要求59《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件60《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件61二材料與用具1所需儀器及工具：超凈工作臺(tái)、70%酒精、95%酒精、接種器械〔主要指剪刀、鑷子等〕、培養(yǎng)材料或外植體、0.1%的升汞、無菌水等。2愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+2.4-D1.0+KT0.2或B5+2.4-D1.0+KT0.2二材料與用具1所需儀器及工具：超凈工作臺(tái)、70%酒精、62三、方法步驟1．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后用水和肥皂洗凈雙手，穿上滅菌過的專用實(shí)驗(yàn)服、帽子、鞋子。2．翻開超凈工作臺(tái)內(nèi)的吹風(fēng)和紫外燈，并翻開無菌操作室內(nèi)的紫外燈，照射20分鐘〔進(jìn)展紫外滅菌〕3．進(jìn)展外植體預(yù)處理〔即對(duì)植物組織進(jìn)展修整，去掉不需要的局部，將準(zhǔn)備使用的植物材料在流水中沖洗干凈?！?．照射20分鐘后，關(guān)閉紫外燈，翻開照明燈，用70%的酒精擦拭工作臺(tái)和雙手，準(zhǔn)備進(jìn)展外植體的消毒和接種工作。三、方法步驟1．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后用水和肥皂洗凈雙手，穿上滅菌過的635．用蘸有70%的酒精的紗布擦拭裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，放進(jìn)工作臺(tái)。6．把接種器械浸泡在95%酒精中，在火焰上滅菌后，放在器械架上。7．胡蘿卜種子經(jīng)75%乙醇浸泡30s，無菌水沖洗2遍，再用0.1%升汞浸泡10分鐘，無菌水沖洗3-5次后，接種于不含任何激素的1/2MS固體培養(yǎng)基含〔1.5%蔗糖〕上，于24℃暗培養(yǎng)條件下萌發(fā)7-10天后，將子葉和下胚軸切成0.5cm的截段作為組織培養(yǎng)的材料。8.進(jìn)展接種。9.接種完畢后,清理和關(guān)閉超凈工作臺(tái),并將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。5．用蘸有70%的酒精的紗布擦拭裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，放進(jìn)工作64四、作業(yè)1.整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2.接種一周后,觀察接種材料的污染情況,并分析污染原因。3.25天后統(tǒng)計(jì)愈傷組織的誘導(dǎo)率，記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。四、作業(yè)1.整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。65實(shí)驗(yàn)五月季莖段的離體培養(yǎng)一、目的要求通過本次試驗(yàn)，熟練掌握外植體的外表滅菌方法，并穩(wěn)固掌握無菌操作的根本要領(lǐng)，重點(diǎn)掌握一般花卉的器官的離體培養(yǎng)的根本程序。實(shí)驗(yàn)五月季莖段的離體培養(yǎng)一、目的要求66《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件67《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件68二材料與用具1所需儀器及工具：超凈工作臺(tái)、70%酒精、95%酒精、接種器械〔主要指剪刀、鑷子等〕、培養(yǎng)材料或外植體、0.1%的升汞、無菌水等。2所需材料：嫩葉、嫩莖切段、頂芽或側(cè)芽3誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+2.4-D1.0mg/l+6-BA0.1mg/l或MS+NAA0.1mg/l+6-BA0.1mg/L+2.4-D0.5mg/l二材料與用具1所需儀器及工具：超凈工作臺(tái)、70%酒精、69三、方法步驟1．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后用水和肥皂洗凈雙手，穿上滅菌過的專用實(shí)驗(yàn)服、帽子、鞋子。2．翻開超凈工作臺(tái)內(nèi)的吹風(fēng)和紫外燈，并翻開無菌操作室內(nèi)的紫外燈，照射20分鐘〔進(jìn)展紫外滅菌〕3．進(jìn)展外植體預(yù)處理〔即對(duì)植物組織進(jìn)展修整，去掉不需要的局部，將準(zhǔn)備使用的植物材料在流水中沖洗干凈?！?．照射20分鐘后，關(guān)閉紫外燈，翻開照明燈，用70%的酒精擦拭工作臺(tái)和雙手，準(zhǔn)備進(jìn)展外植體的消毒和接種工作。三、方法步驟1．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后用水和肥皂洗凈雙手，穿上滅菌過的705外植體消毒滅菌時(shí)，先用自來水沖洗2小時(shí)，洗去滲出汁液，再用70%的酒精消毒8-9秒后用0.1%的升汞消毒7-8分鐘，無菌水沖洗4-5次，效果較好.接種時(shí)，用干凈濾紙吸干外植體外表水分，可以明顯減少污染率和褐變率6接種完畢后,清理和關(guān)閉超凈工作臺(tái),并將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。5外植體消毒滅菌時(shí)，先用自來水沖洗2小時(shí)，洗去滲出汁液，71四、作業(yè)1.整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2.接種一周后,觀察接種材料的污染情況,并分析污染原因。3.25天后統(tǒng)計(jì)莖段分化率，記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。四、作業(yè)1.整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。72實(shí)驗(yàn)六花藥培養(yǎng)

一、目的要求花藥培養(yǎng)可應(yīng)用于品種育種，即單倍體育種。同時(shí)，有的植物花藥培養(yǎng)還能有效脫除母株所帶病毒，獲得無病毒苗。通過本實(shí)驗(yàn)，學(xué)習(xí)花藥培養(yǎng)技術(shù)，為今后應(yīng)用這一技術(shù)奠定根底。實(shí)驗(yàn)六花藥培養(yǎng)一、目的要求73《植物組織培養(yǎng)學(xué)有》教學(xué)課件74二、材料與用具

1.材料：草莓花蕾2.儀器：光學(xué)顯微鏡、蓋玻片、載玻片、超凈工作臺(tái)、手術(shù)剪、接種環(huán)、槍狀鑷子、高壓滅菌器、電磁爐、培養(yǎng)瓶等。3.試劑：70%-75%乙醇、0.1%升汞、無菌水、醋酸洋紅醋酸洋紅的配制：將100ml45%的冰醋酸紅置錐形瓶中煮沸，徐徐參加0.5-1g洋紅粉末〔不要一次參加，以免濺沸〕。繼續(xù)煮沸20min〔可采用回流煮沸〕，冷卻備用。二、材料與用具1.材料：草莓花蕾75三、方法步驟1.培養(yǎng)基配制誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/l+KT0.1mg/l+NAA2.0mg/l分化培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/l+ZT2.0mg/l+NAA0.2mg/l三、方法步驟1.培養(yǎng)基配制762.材料的選擇〔即花粉發(fā)育時(shí)期的鑒定〕選擇花粉處于單核靠邊起的花藥培養(yǎng)鑒定方法：從田間采集花蕾數(shù)個(gè)，從每花蕾取花藥1-2枚置載玻片上，加醋酸洋紅1-2滴，用玻棒頭或鑷子的一頭壓碎花藥，剔除碎片，加蓋玻片鏡鑒。通過鏡鑒記錄處于單核靠邊期花藥花蕾的外觀形態(tài)，便于下次采集。通常花藥單