《梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)》WS-273

WS273--2007 梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了梅毒的診斷依據(jù)、診斷原則、診斷標(biāo)準(zhǔn)和鑒別診斷。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1梅毒Syphilis梅毒是蒼白螺旋體（又名梅毒螺旋體）感染人體所引起的一種系統(tǒng)性、慢性經(jīng)典的性傳播疾病，可累及人體多系統(tǒng)多臟器的損害，產(chǎn)生多種多樣的臨床表現(xiàn)，導(dǎo)致組織破壞、功能失常，甚至危及生命。2.2前帶現(xiàn)象Prozonephenomenon非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)（如RPR試驗(yàn)）中，有時(shí)由于血清抗體水平過(guò)高，抗原抗體比例不合適，而出現(xiàn)弱陽(yáng)性、不典型或陰性的結(jié)果，但臨床上又有典型的二期梅毒體征，將此血清稀釋后再做血清學(xué)試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽(yáng)性的結(jié)果，稱？為quot;前帶現(xiàn)象”。3縮略語(yǔ)下列縮略語(yǔ)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。VDRLVenerealDiseaseResearchLaboratory性病研究實(shí)驗(yàn)室（玻片試驗(yàn)）USRUnheatedserumreagin血清不需加熱的反應(yīng)素（玻片試驗(yàn)）TRUSTToluidineredunheatedserumtest甲苯胺紅血清不需加熱試驗(yàn)RPRRapidplasmareagin快速血漿反應(yīng)素（環(huán)狀卡片試驗(yàn)）FTA-ABSFluorescenttreponemalantibody-absorption熒光螺旋體抗體吸收（試驗(yàn)）TPHATreponemapallidumhemagglutinationassay梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)TPPATreponemapallidumparticleagglutinationassay梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)4診斷依據(jù)4.1一期梅毒4.1.1流行病學(xué)史：有多性伴，不安全性行為，或性伴感染史。4.1.2臨床表現(xiàn)：4.1.2.1硬下疳：潛伏期一般為2?4周。一般為單發(fā)，但也可多發(fā)；直徑約1cm—2cm,圓形或橢圓形淺在性潰瘍，界限清楚、邊緣略隆起，瘡面清潔；觸診基底堅(jiān)實(shí)、浸潤(rùn)明顯，呈軟骨樣的硬度；無(wú)明顯疼痛或觸痛。多見于外生殖器部位。 腹股溝或患部近衛(wèi)淋巴結(jié)腫大： 可為單側(cè)或雙側(cè)，無(wú)痛，相互孤立而不粘連， 質(zhì)硬，不化膿破潰，其表面皮膚無(wú)紅、腫、熱。實(shí)驗(yàn)室檢查： 暗視野顯微鏡檢查：皮膚黏膜損害或淋巴結(jié)穿刺液可查見梅毒螺旋體（見附錄A）。 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽(yáng)性。如感染不足 2?3周，該試驗(yàn)可為陰性，應(yīng)于感染4周后復(fù)查（見附錄 A）。 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽(yáng)性（見附錄 A）。4.2二期梅毒流行病學(xué)史：有多性伴，不安全性行為，或性伴感染史，或有輸血史（早期梅毒病人 為供血者）。 臨床表現(xiàn)：.下載可編輯.可有一期梅毒史，病期在2年以內(nèi)。4.2.2.1皮損呈多形性，包括斑疹、斑丘疹、丘疹、鱗屑性皮損、毛囊疹及膿皰疹等，常泛發(fā)對(duì)稱。掌跖部易見暗紅斑及脫屑性斑丘疹。外陰及肛周皮損多為濕丘疹及扁平濕疣。皮損一般無(wú)自覺(jué)癥狀，可有瘙癢。口腔可發(fā)生黏膜斑。可發(fā)生蟲蝕樣脫發(fā)。二期復(fù)發(fā)梅毒，皮損局限，數(shù)目較少，皮損形態(tài)奇異，常呈環(huán)狀或弓形。4.222全身淺表淋巴結(jié)腫大。4.223可出現(xiàn)梅毒性骨關(guān)節(jié)損害、眼損害、內(nèi)臟及神經(jīng)系統(tǒng)損害等。4.2.3實(shí)驗(yàn)室檢查：4.2.3.1暗視野顯微鏡檢查：二期皮損尤其扁平濕疣、濕丘疹及黏膜斑，易查見梅毒螺旋體（見附錄A）。4.2.3.2非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽(yáng)性（見附錄A）。4.2.3.3梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽(yáng)性（見附錄A）。4.3三期梅毒（晚期梅毒）流行病學(xué)史：有多性伴，不安全性行為，或性伴感染史。 臨床表現(xiàn)：可有一期或二期梅毒史。病期 2年以上。 晚期良性梅毒--皮膚黏膜損害：頭面部及四肢伸側(cè)的結(jié)節(jié)性梅毒疹，大關(guān)節(jié)附近的近關(guān)節(jié)結(jié)節(jié)，皮 膚、口腔、舌咽的樹膠腫，上腭及鼻中隔粘膜樹膠腫可導(dǎo)致上腭及鼻中隔穿孔和鞍鼻。--骨梅毒，眼梅毒，其他內(nèi)臟梅毒，累及呼吸道、消化道、肝脾、泌尿生殖系、內(nèi)分 泌腺及骨骼肌等。4.3.2.2神經(jīng)梅毒，可發(fā)生梅毒性腦膜炎、腦血管栓塞、麻痹性癡呆、脊髓癆等。4.3.2.3心血管梅毒，可發(fā)生單純性主動(dòng)脈炎、主動(dòng)脈瓣閉鎖不全、主動(dòng)脈瘤等。4.3.3實(shí)驗(yàn)室檢查：4.3.3.1非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽(yáng)性（見附錄A）。4.3.3.2梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽(yáng)性（見附錄A）。4.3.3.3腦脊液檢查：白細(xì)胞計(jì)數(shù)》10X106/L,蛋白量〉500mg/L,且無(wú)其他引起這些異常的原因。腦脊液VDRLL式驗(yàn)或FTA-ABS試驗(yàn)陽(yáng)性（見附錄A）。4.3.3.4組織病理檢查：有三期梅毒的組織病理變化（見附錄A）。4.4隱性梅毒（潛伏梅毒）流行病學(xué)史：有多性伴，不安全性行為，或性伴感染史。 臨床表現(xiàn)：早期隱性梅毒：病期在2年內(nèi)，根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)來(lái)判斷： ①在過(guò)去2年內(nèi)，有明確記載的非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)由陰轉(zhuǎn)陽(yáng)， 或其滴度較原先升高達(dá) 4倍或更高。②在過(guò)去 2年內(nèi)，有符合一期或二期梅毒的臨床表現(xiàn)。 ③在過(guò)去2年內(nèi)，有與疑似或確診的一期或二期梅毒， 或疑似早期隱性梅毒的性伴發(fā)生性接觸史。晚期隱性梅毒：病期在 2年以上。無(wú)證據(jù)表明在既往 2年中獲得感染。無(wú)法判斷病期者 亦視為晚期隱性梅毒處理。無(wú)論早期隱性梅毒或晚期隱性梅毒，均無(wú)任何梅毒性的癥狀和體征。 實(shí)驗(yàn)室檢查：.下載可編輯.4.4.3.1非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：對(duì)于無(wú)既往梅毒史者，非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)陽(yáng)性（滴度一般在1:8以上）。對(duì)于有既往梅毒治療史者，與前次非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)結(jié)果相比，本次試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)轉(zhuǎn)或其滴度升高4倍或更高（見附錄A）。4.4.3.2梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽(yáng)性（見附錄A）。4.4.3.3腦脊液檢查：無(wú)異常發(fā)現(xiàn)。4.5胎傳梅毒（先天梅毒）流行病學(xué)史：生母為梅毒患者。4.5.2臨床表現(xiàn)：4.521早期胎傳梅毒：一般在2歲以內(nèi)發(fā)病，類似于獲得性二期梅毒，發(fā)育不良，皮損常為水皰-大皰、紅斑、丘疹、扁平濕疣；梅毒性鼻炎及喉炎；骨髓炎、骨軟骨炎及骨膜炎；可有全身淋巴結(jié)腫大、肝脾腫大、貧血等。 晚期胎傳梅毒：一般在 2歲以后發(fā)病，類似于獲得性三期梅毒。出現(xiàn)炎癥性損害（間 質(zhì)性角膜炎、神經(jīng)性耳聾、鼻或腭樹膠腫、克勒頓關(guān)節(jié)、脛骨骨膜炎等）或標(biāo)記性損害（前額圓凸、馬鞍鼻、佩刀脛、鎖胸關(guān)節(jié)骨質(zhì)肥厚、赫秦生齒、腔口周圍皮膚放射狀裂紋等） 。4.5.2.3胎傳隱性梅毒：即胎傳梅毒未經(jīng)治療，無(wú)臨床癥狀，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)陽(yáng)性，腦脊液檢查正常，年齡小于2歲者為早期胎傳隱性梅毒，大于2歲者為晚期胎傳隱性梅毒。4.5.3實(shí)驗(yàn)室檢查：4.5.3.1暗視野顯微鏡檢查：在早期胎傳梅毒兒的皮膚黏膜損害或胎盤中可查到梅毒螺旋體（見附錄A）。4.5.3.2非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽(yáng)性（見附錄A）。4.5.3.3梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)：陽(yáng)性（見附錄A）。診斷原則應(yīng)根據(jù)病史、臨床癥狀、體檢及實(shí)驗(yàn)室檢查等進(jìn)行綜合分析，作出診斷。診斷標(biāo)準(zhǔn)6.1一期梅毒6.1.1疑似病例：應(yīng)同時(shí)符合4.1.1,4.1.2和4.1.3.2項(xiàng)。6.1.2確診病應(yīng)冋時(shí)符合疑似病例的要求和4.1.3.1、4.1.3.3中的任?項(xiàng)。例：6.2二期梅毒6.2.1疑似病應(yīng)同時(shí)符合4.2.1,4.2.2和4.2.3.2項(xiàng)。例：應(yīng)冋時(shí)符合疑似病例的要求和4.2.3.1、4.2.3.3中的任項(xiàng)。6.2.2確診病例：?6.3三期梅毒（晚期梅毒）6.3.1疑似病應(yīng)同時(shí)符合4.3.1,4.3.2中的任一項(xiàng)和4.3.3.1項(xiàng)。例：6.3.2確診病應(yīng)冋時(shí)符合疑似病例的要求和4.3.3.2、4.3.3.3、4.3.3.4-中的任一項(xiàng)。例：6.4隱性梅毒（潛伏梅毒）6.4.1疑似病應(yīng)同時(shí)符合4.4.1,4.4.2和4.4.3.1項(xiàng)。6.4.2例：應(yīng)冋時(shí)符合疑似病例的要求和4.4.3.2、4.4.3.3項(xiàng)。確診病6.5例：胎傳梅毒（先天梅毒）6.5.1疑似病應(yīng)同時(shí)符合4.5.1,4.5.2和4.5.3.2項(xiàng)。6.5.2例：應(yīng)冋時(shí)符合疑似病例的要求和4.5.3.1、4.5.3.3中的任?項(xiàng)。確診病例：7鑒別診斷7.1 一期梅毒硬下疳：需與軟下疳、生殖器皰疹、性病性淋巴肉芽腫、糜爛性龜頭炎、白塞病、固 定型藥疹、.下載可編輯.癌腫、皮膚結(jié)核等發(fā)生在外陰部的紅斑、糜爛和潰瘍鑒別。梅毒性腹股溝淋巴結(jié)腫大： 需與軟下疳、性病性淋巴肉芽腫引起的腹股溝淋巴結(jié)腫大 ,以及轉(zhuǎn)移癌腫鑒別。7.2二期梅毒梅毒性斑疹：需與玫瑰糠疹、銀屑病、扁平苔蘚、手足癬、白癜風(fēng)、花斑癬、藥疹、多形紅斑、遠(yuǎn)心性環(huán)狀紅斑等鑒別。梅毒性丘疹和扁平濕疣：需與銀屑病、體癬、扁平苔蘚、毛發(fā)紅糠疹、尖銳濕疣等鑒 別。梅毒性膿皰疹：需與各種膿皰病、膿皰瘡、臁瘡、雅司、聚合性痤瘡等鑒別。724黏膜梅毒疹：需與傳染性單核細(xì)胞增多癥、地圖舌、鵝口瘡、扁平苔蘚、化膿性扁桃 體炎等鑒別。梅毒性脫發(fā)：需與斑禿鑒別。7.3三期梅毒結(jié)節(jié)性梅毒疹：需與尋常狼瘡、結(jié)節(jié)病、瘤型麻風(fēng)等鑒別。樹膠腫：需與尋常狼瘡、瘤型麻風(fēng)、硬紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、小腿潰瘍、脂膜炎、癌腫等鑒別。神經(jīng)梅毒：梅毒性腦膜炎需與結(jié)核性腦膜炎、 隱球菌性腦膜炎、鉤端螺旋體病引起的腦膜炎等相鑒別。腦膜血管梅毒需與各種原因引起的腦卒中相鑒別。 麻痹性癡呆需與腦腫瘤、動(dòng)脈硬化、阿爾茨海默?。ɡ夏晷园V呆） 、慢性酒精中毒和癲癇發(fā)作等相鑒別。脊髓癆需與埃迪（Adie）綜合征、糖尿病性假脊髓癆等鑒別。心血管梅毒：梅毒性主動(dòng)脈瘤需與主動(dòng)脈硬化癥相鑒別。 梅毒性冠狀動(dòng)脈病需與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化相鑒別。梅毒性主動(dòng)脈瓣閉鎖不全需與感染性心內(nèi)膜炎、 先天性瓣膜畸形等引起的主動(dòng)脈瓣閉鎖不全相鑒別。附錄A梅毒螺旋體檢查A.1梅毒螺旋體暗視野檢查原理暗視野映光檢查是采用一個(gè)特殊的聚光器， 分為干系和濕系兩種，其中央均為黑漆所遮蔽，僅在圓周邊留有光線斜角處， 光線只可從其圓周邊緣斜角射到載玻片上。 梅毒螺旋體檢查一般采用濕系聚光器。倘若斜射光線遇到載玻片上的物體， 如螺旋體等，物體會(huì)發(fā)光顯現(xiàn)。材料暗視野顯微鏡、鈍刀（刮勺）、載玻片、注射器、注射針頭、無(wú)菌等滲鹽水。取材皮膚黏膜損害取材：首先在載玻片（厚度為 1.0?1.2mm）上滴加50?100L鹽水備用。然后用棉拭子取無(wú)菌鹽水輕輕擦去皮損上的污物。 如皮損上有痂皮，可用鈍刀小心除去。再用鈍刀輕輕地刮數(shù)次（避免出血） ，取組織滲液與載玻片上的鹽水混勻，加蓋玻片置暗視野顯微鏡下檢查。淋巴結(jié)取材：消毒淋巴結(jié)表面皮膚，用無(wú)菌干棉球擦干。用 1mL無(wú)菌注射器配 12號(hào)針頭，吸取無(wú)菌等滲鹽水 0.25mL?0.5mL，以無(wú)菌操作穿刺淋巴結(jié)并注入鹽水，再吸入注射器內(nèi)，反復(fù) 2?3次后，取少量淋巴液于載玻片上，加蓋玻片， 置暗視野顯微鏡下檢查。方法.下載可編輯.在暗視野聚光器（此法用濕系暗視野聚光器）上加一滴甘油緩沖液（甘油和0.1mol/LPBS , pH7.0按7:3配制）。載玻片置載物臺(tái)上，上升聚光器使甘油緩沖液接觸載玻片，先用 10倍物鏡，使物像清晰，再用 40倍物鏡觀察，尋找有特征形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式的梅毒螺旋體。結(jié)果及解釋暗視野顯微鏡下，典型的梅毒螺旋體呈白色發(fā)光 ，其螺旋較密而均勻。運(yùn)動(dòng)規(guī)律，運(yùn)動(dòng)性較強(qiáng)，其運(yùn)動(dòng)方式包括①旋轉(zhuǎn)式， 圍繞其長(zhǎng)軸旋轉(zhuǎn)；②蛇行式 ，全身彎曲如蛇行；③伸縮其螺旋間距離而移動(dòng)。觀察其運(yùn)動(dòng)形式有助于與其他螺旋體相鑒別。未檢出螺旋體不能排除梅毒的診斷，陰性結(jié)果可能說(shuō)明：①螺旋體數(shù)量不足 （單次暗視野顯微鏡檢查陽(yáng)性率小于 50%）。②患者已接受抗生素或殺滅梅毒螺旋體的藥物治療。③損害接近自然消退。④損害不是梅毒。A.2梅毒血清學(xué)檢查當(dāng)人體感染梅毒螺旋體后4?10周左右，血清中可產(chǎn)生一定數(shù)量的抗類脂質(zhì)抗原的非特異性反應(yīng)素（主要是IgM、IgG）和抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體（主要是IgM、IgG）。這些抗體均可用免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)。血清學(xué)檢查是輔助診斷梅毒的重要手段。根據(jù)檢測(cè)所用抗原不同，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)分為兩大類：一類為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，包括VDRL玻片試驗(yàn)、USR玻片試驗(yàn)、RPR試驗(yàn)、TRUST試驗(yàn)，這些試驗(yàn)主要應(yīng)用于梅毒的篩查和療效觀察。另一類為梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，包括TPHA?試驗(yàn)、TPPA試驗(yàn)、FTA-ABS試驗(yàn)、ELISA試驗(yàn)等。這些試驗(yàn)主要用于確證試驗(yàn)，不用于療效觀察。A.2.1非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)A.2.1.1原理梅毒螺旋體一旦感染人體，人體迅速對(duì)被損害的宿主細(xì)胞以及梅毒螺旋體細(xì)胞表面所釋放的類脂物質(zhì)作出免疫應(yīng)答，在3?4周產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（反應(yīng)素）。這些抗體主要是IgG和IgM型混合抗體。非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)是使用心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原的絮狀凝集試驗(yàn)。反應(yīng)素與心磷脂形成抗原抗體反應(yīng)，卵磷脂可加強(qiáng)心磷脂的抗原性，膽固醇可增強(qiáng)抗原的敏感性。心磷脂、卵磷脂遇水形成膠體溶液，膽固醇遇水形成結(jié)晶。當(dāng)抗原與抗體（反應(yīng)素）混合發(fā)生反應(yīng)時(shí)，后者即粘附膠體微粒的周圍，形成疏水性薄膜。由于搖動(dòng)、碰撞，使顆粒與顆?；ハ嗾掣蕉纬扇庋劭梢姷念w粒凝集和沉淀，即為陽(yáng)性反應(yīng)。如遇到非梅毒血清，因體液中的白蛋白多于球蛋白，而白蛋白對(duì)膠體顆粒有保護(hù)作用，形成親水性薄膜，即使同樣搖動(dòng)、碰撞，由于抗原顆粒周圍沒(méi)有粘附免疫球蛋白的作用，不能形成較大顆粒，無(wú)肉眼可見的凝集和沉淀，因此為陰性反應(yīng)。VDRLUSRRPR和TRUST等試驗(yàn)均為此類試驗(yàn)，它們所采用的抗原成分相同，敏感性和特異性基本相似。A.2.1.2VDRL玻片試驗(yàn)A.2.1.2.1材料a.VDRL試劑盒：含VDRL抗原（0.5mL）;VDRL緩沖液，pH6.0±0.1，其配方為中性福爾馬林0.5mL,Na2HPO40.037g,KH2PO40.17g,NaCI10.0g，蒸餾水1000mL;標(biāo)準(zhǔn)針頭60±1滴/mL）,直徑14mm漆圈玻片；VDRL試驗(yàn)結(jié)果圖片。b.其他：0.85%NaCl溶液（等滲鹽水）；可調(diào)水平旋轉(zhuǎn)器。 抗原配制方法：吸取0.3mLVDRL緩沖液置30mL小瓶；吸取0.3mLVDRL抗原迅速滴入小瓶?jī)?nèi)VDRL緩沖液中（約4s）,隨后搖動(dòng)10s，使之混.下載可編輯.勻；c. 立即加2.4mLVDRL 緩沖液，蓋上瓶蓋，來(lái)回顛倒搖動(dòng)小瓶 10s約30次，即為VDRL抗原，此抗原只能用 1d。定性試驗(yàn)血清標(biāo)本需56C滅活30min備用；吸取0.05mL血清放入玻片圈內(nèi)，將血清涂開至整個(gè)圈內(nèi)；用標(biāo)準(zhǔn)針頭加入1滴抗原；將玻片置旋轉(zhuǎn)器上搖動(dòng)4min,180±5次/min，立即置10X10倍顯微鏡下觀察。定量試驗(yàn)經(jīng)VDRL定性試驗(yàn)為陽(yáng)性、弱陽(yáng)性，可疑反應(yīng)或陰性但臨床懷疑為梅毒者，需做定量試 驗(yàn)，前者需明確抗體滴度，后者為排除 ”前帶現(xiàn)象”。a. 在反應(yīng)板1?8孔各加等滲鹽水 0.05mL；b. 吸取0.05mL血清標(biāo)本（血清已滅活）置第 1孔與等滲鹽水混勻，吸取 0.05mL稀釋液至第2孔混勻，再吸取 0.05mL至第3孔，如此連續(xù)稀釋至第 8孔，棄0.05mL稀釋液。 稀釋度為原倍、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128，必要時(shí)可稀釋至更高倍數(shù)。c. 每個(gè)稀釋度加入抗原 1滴；旋轉(zhuǎn)速度和時(shí)間同定性試驗(yàn)。結(jié)果大或中等大小的絮狀物，液體清亮 ：3+~4+強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)；絮狀物較小，液體較清亮 ：2+陽(yáng)性反應(yīng)；絮狀物較小，均勻分布，液體混濁 1+弱陽(yáng)性反應(yīng)；抗原顆粒稍粗，無(wú)凝集 土可疑；抗原顆粒均勻，針狀細(xì)小 ：-陰性反應(yīng)。 環(huán)狀卡片試驗(yàn)原理RPR試驗(yàn)是VDRL試驗(yàn)的一種改良方法。該法是在抗原中加入活性炭顆粒作為指示物， 加入了氯化膽堿，因此血清不需滅活。特制的白色紙卡替代了玻片。試驗(yàn)結(jié)果易于判斷，肉 眼即可觀察。也可用血漿進(jìn)行檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果可保存?？乖?4C冰箱可保存1年。材料a.RPR式劑盒：含RPR抗原；直徑為18mm?圈的特制白色反應(yīng)卡片；標(biāo)準(zhǔn)針頭（60±1滴/mL）; RPR式驗(yàn)結(jié)果圖片。其他：可調(diào)水平旋轉(zhuǎn)器。定性試驗(yàn)a.吸取0.05mL血清或血漿加于卡片圈內(nèi)，并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)（每張紙卡有10個(gè)或12個(gè)反應(yīng)圈）;b.將抗原輕輕搖勻，用標(biāo)準(zhǔn)針頭吸取抗原，每個(gè)標(biāo)本加1滴抗原；將卡片置水平旋轉(zhuǎn)器旋轉(zhuǎn)8min,100±5轉(zhuǎn)/min；立即在明亮光線下觀察結(jié)果。結(jié)果中到大的黑色絮狀物，液體清亮 3+~4+強(qiáng)陽(yáng)性小到中的黑色絮狀物，液體較清亮 2+陽(yáng)性小的黑色絮狀物，液體混濁 1+弱陽(yáng)性僅見活性炭顆粒集于中央一點(diǎn)或均勻分散 -陰性.下載可編輯.定量試驗(yàn)RPR定量試驗(yàn)的指證與 VDRL試驗(yàn)相同。a. 在圈內(nèi)加入 0.05mL等滲鹽水（一般作 6?8個(gè)稀釋度），勿將鹽水涂開；b. 吸取0.05mL血清或血漿作系列稀釋（ 1:2?1:64）,當(dāng)稀釋到最后的第 6孔時(shí)，棄去0.05mL稀釋液。從第 6孔起將血清稀釋液涂布整個(gè)圈內(nèi)，再涂布第 5孔，依此向前到第孔。c.滴加抗原，旋轉(zhuǎn)時(shí)間、速度和觀察結(jié)果同定性試驗(yàn)。 試驗(yàn)原理TRUST式驗(yàn)原理與 RPR試驗(yàn)原理相同。唯 TRUST式驗(yàn)的抗原中加入甲苯胺紅顆粒代替活 性炭顆粒指示物，使陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)紅色絮狀現(xiàn)象， 陰性結(jié)果見紅色顆粒集于中央或均勻分散。方法TRUST式驗(yàn)方法及結(jié)果判斷均與 RPR式驗(yàn)相同。注意事項(xiàng) 實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度應(yīng)為 23?29C,抗原應(yīng)保存于 4C冰箱，試驗(yàn)前應(yīng)恢復(fù)到室溫。 抗原應(yīng)防止凍結(jié)，以免抗原被破壞。A.2.1.5.2校準(zhǔn)針頭，VDRLRPR和TRUST等抗原為60±1滴/mL。A.2.1.5.3血液標(biāo)本應(yīng)防止污染，放置室溫應(yīng)在24h內(nèi)完成。如血清56C滅活或放4C保存，在試驗(yàn)前應(yīng)恢復(fù)試驗(yàn)溫度后再開始試驗(yàn)。試驗(yàn)完畢，應(yīng)立即觀察結(jié)果。臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡(jiǎn)便、 快速，敏感性和特異性較好。對(duì)一期梅毒的敏感性為74%?87%,二期梅毒達(dá) 100%，三期梅毒34%?94%。特異性96%?99%。 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)適用于各期梅毒的診斷。 早期梅毒經(jīng)治療后血清滴度可下降或轉(zhuǎn)陰，故可用于療效觀察、判愈、判定復(fù)發(fā)或再感染。也適用于人群的篩查、產(chǎn)前 檢查及健康體檢等。 試驗(yàn)適用于神經(jīng)梅毒的腦脊液檢查 ，特異性高，但敏感性低。 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)可在某些傳染病及膠原病時(shí)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)， 因此對(duì)陽(yáng)性反應(yīng)應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行鑒別，或作梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)以進(jìn)一步證實(shí)之。梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)采用梅毒螺旋體作抗原，為特異性抗原，檢測(cè)血清中抗梅毒螺旋體 IgG或IgM抗體，其敏感性和特異性均較高。梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（ TPPA原理TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié) 合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)。明膠顆粒為玫瑰紅色，便于肉眼觀察結(jié)果。材料TPPA試劑盒：含蒸餾水（標(biāo)記A）,用于溶解致敏顆粒、未致敏顆粒和質(zhì)控血清；標(biāo)本稀釋液（標(biāo)記 B）,用于稀釋血清標(biāo)本；致敏顆粒（標(biāo)記 C）,冷凍干燥品，用前 30min按規(guī)定量加A液溶解并混勻；未致敏顆粒（標(biāo)記 D）,冷凍干燥品，用前 30min按規(guī)定量加 A液溶解并混勻；質(zhì)控血清（標(biāo)記 E）,冷凍干燥品，用時(shí)按規(guī)定量加入 A液。b. 其他：U型微量反應(yīng)板；微量加樣器 （25 L）;微量滴管（C和D管）；移液管（微量移液管和刻度滴管 ）；微量板振蕩器。.下載可編輯. 定性試驗(yàn)試驗(yàn)前試劑應(yīng)恢復(fù)到 15C~30C。B液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔25iL,第2孔100卩L,第3、4孔各25iL；取血清25iL加至第1孔，混勻后取25iL至第2孔，混勻后取25iL至第3孔，混勻后取25iL至第4孔，混勻后棄去 25iL。C.第3孔加D液（未致敏顆粒） 25iL,第4孔加C液（致敏顆粒）25iL；d. 將反應(yīng)板置振蕩器振蕩 30s；置有蓋濕盒，15?25C避光孵育4h后，或放4C冰箱過(guò)夜觀察結(jié)果。 定量試驗(yàn)a. 加B液至微量反應(yīng)板孔，第 1孔?第4孔與定性試驗(yàn)相同，第 5孔?第10孔各加25iL；b. 取血清25iL加至第1孔，如定性試驗(yàn)稀釋方法， 從第2孔?第10孔混勻，混勻后第10孔棄去25iL；第3孔加D液25iL,第4孔?第10孔各加C液25iL；以后步驟同定性試驗(yàn)。結(jié)果以最高血清稀釋度能產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)的稀釋度為抗體滴度。結(jié)果顆粒光滑覆蓋整個(gè)孔底，有時(shí)邊緣有折疊 陽(yáng)性4+顆粒光滑覆蓋大部分孔底 陽(yáng)性3+顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán) 陽(yáng)性2+顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán) 陽(yáng)性1+顆粒沉集孔底，中央形成一小點(diǎn) 可疑土顆粒緊密沉積孔底中央 陰性- 報(bào)告方法a. 陽(yáng)性報(bào)告：定性試驗(yàn)，血清在 1:80以上稀釋度與致敏顆粒發(fā)生凝集反應(yīng) （1+或更強(qiáng)），與未致敏顆粒（第 3孔）不發(fā)生凝集反應(yīng)。 定量試驗(yàn)則應(yīng)報(bào)告發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)的血清最高稀釋度，為血清滴度。陰性報(bào)告：血清與致敏顆粒和未致敏顆粒均不發(fā)生凝集反應(yīng)。 注意事項(xiàng)a?微量反應(yīng)板要清潔干凈，孔內(nèi)無(wú)異物。加入血清后，使用微量板振蕩器振蕩反應(yīng)板，而不可使用水平旋轉(zhuǎn)儀。試劑盒不可置于0C以下，防止凍結(jié)。不同批號(hào)試劑不可混合使用。有些血清標(biāo)本在血清低稀釋度時(shí)可出現(xiàn)前帶現(xiàn)象，此時(shí)可作定量試驗(yàn)；如未致敏顆粒出現(xiàn)凝集反應(yīng)，應(yīng)將血清進(jìn)行吸收處理后再進(jìn)行試驗(yàn)，或改用其他試驗(yàn)方法。 血清吸收處理取0.95mL已恢復(fù)體積的未致敏顆粒加入清潔的小試管內(nèi)。b.試管內(nèi)加入50L血清標(biāo)本并充分混勻，置15?25C20min或更長(zhǎng)時(shí)間。c.離心2000rpm,5min，取25iL上清液（血清標(biāo)本稀釋1:20）置第3孔，注意不要混入顆粒。自第4孔?第10孔各加25mLB液。e.自第3孔吸25mL至第4孔，混勻后吸25mL至第5孔??如此稀釋至第10孔，棄去25mL。f. 按定量試驗(yàn)法加入 D液和C液，將反應(yīng)板置微量板振蕩器上振蕩 30秒鐘，置濕盒內(nèi)，15?25C孵育2小時(shí)觀察結(jié)果。.下載可編輯.熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（ FTA-ABS原理FTA-ABS試驗(yàn)以完整形態(tài)的 Nichol梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用 Reiter株螺旋體制備而成）處理過(guò)的患者血清形成抗原抗體復(fù)合物，再加入熒光素（ FITC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，與血清梅毒螺旋體抗體結(jié)合。 在熒光顯微鏡下，螺旋體顯示蘋果綠色的熒光，即為陽(yáng)性反應(yīng)。材料a. 梅毒螺旋體抗原玻片，有直徑 0.5cm涂布梅毒螺旋體的圓圈，在高倍鏡下每視野不少于30條螺旋體，丙酮固定。b.吸收劑（5ml冷凍干燥品），由體外培養(yǎng)的Reiter株螺旋體制備而成。使用前用無(wú)菌蒸餾水恢復(fù)原體積。熒光抗體，用熒光素標(biāo)記羊或鼠抗人免疫球蛋白。血清稀釋板。方法將血清標(biāo)本于56C滅活30min，備用；吸收劑加入5mL無(wú)菌蒸餾水，用作血清的稀釋；c. 血清標(biāo)本和吸收劑按 1:5?1:20稀釋，混勻后置有蓋濕盒內(nèi)于 35?37C孵育30min;.下載可編輯.d. 將系列稀釋的血清分別加到抗原片上 （每孔不少于 30卩L）,放入有蓋濕盒內(nèi)，置 35?37C孵育 30min;e. 用0.01mol/L的PBS沖洗抗原片，用磁力攪拌器低速以 0.01mol/LPBS 溶液洗滌抗原片，每5min更換PBS液1次，共3次。最后一次用蒸餾水沖洗一遍，冷風(fēng)吹干備用；f. 抗原片每個(gè)圈內(nèi)加 30卩L熒光抗體（熒光抗體稀釋為工作液） ，放濕盒35?37C孵育30min。重復(fù)步驟5的洗滌和吹干；抗原片加固封劑（甘油緩沖液）1滴，覆以蓋玻片。在熒光顯微鏡下觀察。試驗(yàn)對(duì)照：每批次試驗(yàn)包括下列對(duì)照。-----------4+陽(yáng)性血清和1+陽(yáng)性血清對(duì)照，血清用 PBS液和吸收劑分別按 1:5?1:20稀釋。------- 非特異血清對(duì)照。------染色對(duì)照：用0.01mol/LPBS和吸收劑分別替代熒光抗體。結(jié)果梅毒螺旋體均勻地發(fā)出中等或高強(qiáng)度的蘋果綠色熒光 陽(yáng)性梅毒螺旋體均勻地發(fā)出弱蘋果綠色熒光 弱陽(yáng)性梅毒螺旋體呈微弱黃色光或觀察不到熒光 陰性梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA）原理該試驗(yàn)是用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒螺旋體為抗原包被固相板條， 加上梅毒血清和辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的抗人IgG抗體，利用酶免疫法檢測(cè)患者血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體。采用特異的梅毒螺旋體重組蛋白作為抗原，使試驗(yàn)更加敏感、特異。材料a. ELISA試劑盒：含包被梅毒螺旋體抗原的反應(yīng)板（ 96孔）;標(biāo)本稀釋液；洗滌液，使用前按說(shuō)明書要求稀釋；酶結(jié)合物；底物液（ A液和B液）；反應(yīng)終止液；陽(yáng)性對(duì)照血清； 陰性對(duì)照血清。其他：酶標(biāo)檢測(cè)儀；洗扳機(jī)。A.2.2.3.3方法a.取標(biāo)本稀釋液100卩L加到反應(yīng)板孔內(nèi)，再加入待檢血清10卩L,同時(shí)作陽(yáng)性和陰性對(duì)照，置37C孵育30min。b.洗滌液洗板5次，拍干；c.每孔加酶結(jié)合物100卩L,置37C孵育15min；d.洗滌液洗板5次，拍干；e.卩L）,37C避光孵育15min；每孔加底物液A液、B液各1滴（各501f.滴（50卩L）終止反應(yīng)；