正常人群NK細胞上FcγRIIIa基因多態(tài)性分析

1NK細胞上FcγRIIIa基因多態(tài)性分析內(nèi)容背景目的方法結(jié)果討論結(jié)論相關(guān)幫助需要相關(guān)抗體試劑的可以訪問Fantibody全球抗體搜索引擎:fantibody全球抗體搜索引擎是一個供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫，其抗體信息數(shù)據(jù)來源于全球范圍的研究機構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫與抗體應(yīng)用評價數(shù)據(jù)庫兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫之后更為復(fù)雜的應(yīng)用型檢索平臺需要相關(guān)的實驗室儀器設(shè)備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設(shè)備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術(shù)服務(wù)信息的，可以訪問探生網(wǎng)進行咨詢，期待您的加入背景腫瘤是嚴重危害人類生命健康的一類疾病，攻克腫瘤一直是我們迫切希望解決的問題。腫瘤特異性單克隆抗體出現(xiàn)給腫瘤治療帶來了新的希望背景抗體依賴細胞介導(dǎo)的細胞毒性(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，ADCC)被證明是單克隆抗體臨床治療腫瘤的重要機制和手段。IgG型抗體首先通過抗原結(jié)合部位與靶細胞（腫瘤細胞）結(jié)合，再由效應(yīng)細胞上的FcγR識別其Fc段，介導(dǎo)ADCC作用背景FcγR分為三類：FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)以及FcγRIII(CD16)。FcγRIII又分為兩類：FcγRⅢa是一種跨膜糖蛋白，表達于單核細胞、吞噬細胞、NK細胞及選擇性T細胞上；FcγRⅢb是一種糖肌醇磷脂蛋白(GPI-錨蛋白)，只表達于中性粒細胞和IFN誘導(dǎo)的嗜酸性粒細胞上背景Ravetch等最先報道在FcγRIIIa近膜Ig樣區(qū)核苷酸位點559處存在多態(tài)性位點。在核苷酸位點559處核苷酸發(fā)生鳥嘌呤(G)一胸腺嘧啶(T)點突變后，由其轉(zhuǎn)錄合成的受體蛋白內(nèi)第158位纈氨酸(valine，V)被苯丙氨酸(phenylalanine，F(xiàn))所取代。這導(dǎo)致FcγRIIIa有三種基因型：FcγRIIIla-158F/F，F(xiàn)cγRIIIa-158V/V及FcγRIIIa-158V/F背景諸多文獻報道FcγRIIIa基因多態(tài)性與腫瘤病人預(yù)后相關(guān)。于單克隆抗體治療的腫瘤病人中，F(xiàn)cγRIIIa-158V/V的病人預(yù)后較V/F及F/F基因型病人好。這可能與其跟治療性單克隆抗體的Fc段結(jié)合相關(guān)，由不同的親和力導(dǎo)致治療性單克隆抗體介導(dǎo)的ADCC強度不同。目的確定FcγRIIIa的基因多態(tài)性在正常及腫瘤人群中的分布，以了解人群對腫瘤特異性單抗可能療效反應(yīng)的分布規(guī)律。方法標本來源正常健康人群外周血：用含肝素抗凝管收集健康志愿者外周血，標本量為2～3ml，共43份。方法技術(shù)路線方法1.按說明書提取外周血基因組DNA。2.nest-PCR外側(cè)反應(yīng)經(jīng)35個PCR循環(huán)(95℃45S,64℃45S,72℃30S)，擴增產(chǎn)物長度248bp；內(nèi)側(cè)反應(yīng)經(jīng)35個PCR循環(huán)(95℃45S,65℃45S,72℃30S)，擴增產(chǎn)物長度94bp。3.NlaⅢ內(nèi)切酶酶切8ulPCR產(chǎn)物于37℃酶切過夜。酶切產(chǎn)物經(jīng)15％PAGE電泳分離，銀染顯色。結(jié)果結(jié)果結(jié)果討論本研究檢測結(jié)果顯示在健康人群中FcγRIIIa的基因多態(tài)性以V/F型最多，而V/V型次之，F(xiàn)/F型最少，這與國內(nèi)文獻報道（47例健康者中V/F型38例，V/V型7例，F(xiàn)/F型2例）一致。本研究中未檢測出F/F型，可能與樣本量較少有關(guān)。討論但本研究與國外報道的基因型分布（以V/F型及F/F型較多，而V/V型最少）有差異，這可能與地域及種族差異，遺傳環(huán)境等因素有關(guān)。討論FcγRIIIa三種基因型的NK細胞與IgG的親和力順序為V/V＞V/F＞F/F。治療性單克隆抗體介導(dǎo)的不同基因型的NK細胞的ADCC強度不同，對腫瘤細胞的殺傷存在差異，從而取得不同的預(yù)后。我國以FcγRIIIa-158F/F分布最少，可推測出大部分人對單抗治療的預(yù)