免疫電泳技術(shù)課件

免疫電泳技術(shù)四川大學(xué)華西醫(yī)院臨床免疫室武永康免疫電泳技術(shù)四川大學(xué)華西醫(yī)院臨床免疫室武永康1一、免疫電泳技術(shù)的發(fā)展二、免疫電泳技術(shù)的相關(guān)概念三、介紹幾種經(jīng)典的免疫電泳技術(shù)（重點(diǎn)）四、凝膠免疫電泳技術(shù)要點(diǎn)五、免疫增殖性疾病及免疫檢測本課內(nèi)容一、免疫電泳技術(shù)的發(fā)展本課內(nèi)容2免疫電泳技術(shù)1953年Grabar和Williams將凝膠擴(kuò)散置于直流電場中，讓電流來加速抗原與抗體的擴(kuò)散并規(guī)定其運(yùn)動方向，并與免疫沉淀反應(yīng)相結(jié)合，從而加快了沉淀反應(yīng)的速度，建立了免疫電泳技術(shù)，之后又衍生出對流免疫電泳、火箭電泳、及免疫固定電泳等新方法。

一、免疫電泳技術(shù)的發(fā)展免疫電泳技術(shù)1953年Grabar和Williams3瓊脂電泳與免疫擴(kuò)散沉淀技術(shù)相結(jié)合的一門技術(shù)。(K)1．電泳優(yōu)點(diǎn)（1）將蛋白電泳分開（2）加快反應(yīng)速度2．沉淀反應(yīng)（一）免疫電泳技術(shù)的定義二、免疫電泳技術(shù)的相關(guān)概念免疫電泳分析immunoelectrophoresis瓊脂電泳與免疫擴(kuò)散沉淀技術(shù)相結(jié)合的一門技術(shù)。(K)（一）免疫4蛋白質(zhì)具有可解離的酸性和堿性基團(tuán)，在一定PH值條件下，使蛋白質(zhì)分子帶正電荷或負(fù)電荷。在電場中，帶正電荷的粒子向負(fù)極移動，而帶負(fù)電荷的粒子向正極移動，由于各種蛋白質(zhì)遷移率不同而分為不同的區(qū)帶。

（二）電泳的基本原理及其影響因素I．基本原理電泳（electrophoresis）:帶電顆粒在電場中通過液體介質(zhì)的移動，稱為電泳。蛋白質(zhì)具有可解離的酸性和堿性基團(tuán)，在一定PH值條件下51.

顆粒（蛋白）本身特性：兩性、大小、形狀

2.載體性質(zhì)

：最常用的載體是瓊脂和瓊脂糖凝膠

3.電場強(qiáng)度

4.溶液PH值及離子強(qiáng)度——緩沖液的作用最適電泳緩沖液0.05M，PH8.6巴比妥緩沖液II.電泳的影響因素1.

顆粒（蛋白）本身特性：兩性、大小、形狀

II.電泳的影65.電滲（主要與載體特性有關(guān)）電滲定義電滲方向與電泳方向的關(guān)系J電泳遷移率：指在同一電場條件下，各種帶電粒子在單位時(shí)間內(nèi)移動的距離。6.電源5.電滲（主要與載體特性有關(guān)）7定義：區(qū)帶電泳+免疫雙擴(kuò)散(K)基本原理：在電場作用下，將標(biāo)本于瓊脂凝膠中進(jìn)行區(qū)帶電泳，電泳結(jié)束后，于瓊脂板旁挖一長形槽，加入相應(yīng)抗血清，抗體呈直線擴(kuò)散，電泳分離后的各種抗原呈放射狀擴(kuò)散，反應(yīng)生成弧狀沉淀線。1.免疫電泳三、介紹幾種經(jīng)典的免疫電泳技術(shù)定義：區(qū)帶電泳+免疫雙擴(kuò)散(K)1.免疫電泳8免疫電泳將蛋白質(zhì)抗原在瓊脂平板上進(jìn)行電泳，使不同的抗原彼此分離。撤去電壓，在與電泳方向平行的瓊脂打槽并加入相應(yīng)抗體進(jìn)行雙向免疫分散。分離成區(qū)帶的各種抗原成分與相應(yīng)抗體在瓊脂中擴(kuò)散后相遇，在二者比例合適處形成弧形沉淀線。據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置和形狀，與已知的正常人沉淀線比較，即可對樣品中所含成分及其性質(zhì)進(jìn)行分析、鑒定。(K)免疫電泳將蛋白質(zhì)抗原在瓊脂平板上進(jìn)行電泳，使不同的抗原彼此分9免疫電泳操作步驟：免疫電泳操作步驟：10結(jié)果復(fù)雜(經(jīng)驗(yàn)判斷)可不生成沉淀線（濃度太高或太低），或沉淀線重合技術(shù)評價(jià)：結(jié)果復(fù)雜(經(jīng)驗(yàn)判斷)技術(shù)評價(jià)：11（1）Ig量及單克隆性與沉淀線致密度關(guān)系（2）Ig量與抗體槽距離之間的關(guān)系：抗原抗體最適比關(guān)系結(jié)查分析（K）（1）Ig量及單克隆性與沉淀線致密度關(guān)系結(jié)查分析（K）12血清蛋白的分析，如多發(fā)性骨髓瘤、r球蛋白缺乏癥

應(yīng)用：血清蛋白的分析，如多發(fā)性骨髓瘤、r球蛋白缺乏癥應(yīng)132.對流免疫電泳定義：定向加速度的免疫雙擴(kuò)散技術(shù)（K）對流免疫電泳示意圖在pH8.0的緩沖液中，蛋白質(zhì)抗原帶負(fù)電荷向正極泳動；而抗體Ig由于分子量大，暴露的極性基團(tuán)較少，在離子瓊脂中泳動緩慢，同時(shí)受電滲作用的影響向負(fù)極泳動在抗原抗體相遇的最適比例處形成乳白色沉淀線。電滲：指在電場中液體對于一個(gè)固定介質(zhì)的相對移動。2.對流免疫電泳定義：定向加速度的免疫雙擴(kuò)散技術(shù)（K）對流14出現(xiàn)沉淀線→洗滌、染色、分析結(jié)果對流免疫電泳操作步驟：制瓊脂板→打孔→加樣→電泳AbAg出現(xiàn)沉淀線→洗滌、染色、分析結(jié)果對流免疫電泳操作步驟：制瓊脂15高電滲為特點(diǎn)，但電滲過強(qiáng)會使蛋白質(zhì)向陰極移動（K）對流免疫電泳簡便、快速、敏感度較高抗原、抗體比例要求嚴(yán)格抗原或抗體PI相近或遷移率非常接近，不宜做對流免疫電泳技術(shù)評價(jià)：高電滲為特點(diǎn)，但電滲過強(qiáng)會使蛋白質(zhì)向陰極移動（K）技術(shù)評價(jià)16

可用于乙肝病人血清鑒定；甲胎蛋白的測定，但近年多以ELISA替代。

應(yīng)用：可用于乙肝病人血清鑒定；甲胎蛋白的測定，但近年17定義：加速度的單向擴(kuò)散（J）3.火箭免疫電泳火箭免疫電泳示意圖－標(biāo)準(zhǔn)曲線測定樣本含有抗體的瓊指基本原理：瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動(K)，樣品孔中的抗原向正極泳動，隨抗原含量的逐漸減少，抗原泳動的基底區(qū)越來越窄，抗原抗體分子復(fù)合物形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個(gè)狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰。定義：加速度的單向擴(kuò)散（J）3.火箭免疫電泳火箭免疫電泳示意18制備含抗體的瓊脂板(K)→打孔→加樣→電泳→出現(xiàn)火箭形沉淀線→洗滌、染色、分析結(jié)果

火箭免疫電泳操作步驟：制備含抗體的瓊脂板(K)→打孔→加樣→電泳→出現(xiàn)火箭形19

“峰高——濃度標(biāo)準(zhǔn)”曲線：以不同稀釋度標(biāo)準(zhǔn)抗原泳動后形成的沉淀峰為縱坐標(biāo)，抗原濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計(jì)算出待測抗原的含量。

唯一的定量方法（K）火箭免疫電泳的定量測定“峰高——濃度標(biāo)準(zhǔn)”曲線：以不同稀釋度標(biāo)準(zhǔn)抗原泳動后形20l．電滲小2．電泳終點(diǎn)時(shí)間較難掌握3．開啟小電流后再加樣，否則形成寬底峰4．IgG電泳應(yīng)先將其甲酰化，使只帶負(fù)電荷火箭電泳操作時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：l．電滲小火箭電泳操作時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：21PH8.6時(shí)，分析蛋白質(zhì)抗原帶有負(fù)電荷免球測定應(yīng)先甲?；?，以增加其凈負(fù)電荷量技術(shù)評價(jià)：PH8.6時(shí)，分析蛋白質(zhì)抗原帶有負(fù)電荷技術(shù)評價(jià)：22

大多數(shù)蛋白質(zhì)均可用這一方法進(jìn)行測定，但目前已被敏感度高，特異性好的ELISA等方法代替。應(yīng)用：大多數(shù)蛋白質(zhì)均可用這一方法進(jìn)行測定，但目前已被23基本原理：將抗血清直接加于電泳后蛋白質(zhì)區(qū)帶表面，抗原與對應(yīng)抗體直接發(fā)生沉淀反應(yīng)，未結(jié)合的游離抗原或抗體洗去，則出現(xiàn)被結(jié)合而固定的某種蛋白。

5.免疫固定電泳(K)（immunofixationelectrophoresis。IFE）（IgA型MM）基本原理：5.免疫固定電泳(K)（IgA型MM）24海倫娜免疫固定儀海倫娜免疫固定儀25免疫固定電泳最常用于M蛋白的鑒定。鑒定方法：先將患者血清在瓊脂上等作區(qū)帶電泳，之后，加抗血清，依次加抗IgG、抗IgA、抗IgM、抗K輕鏈和抗L輕鏈。必要時(shí)還可加抗Fab、抗Fc等特殊抗血清，作用后，洗滌，染色后分析固定的M蛋白成分。該方法可用于各種蛋白水平的定性檢測。應(yīng)用：免疫固定電泳最常用于M蛋白的鑒定。應(yīng)用：26

1．電泳載體的選擇與電泳要求的具體條件如摩擦力，電滲、及電泳物質(zhì)分子量大小等決定。2．凝膠打孔及處理用打孔器在凝膠板上打孔后，要用瓊脂溶液封底，以免樣品滲漏。四、凝膠免疫電泳的技術(shù)要點(diǎn)1．電泳載體的選擇四、凝膠免疫電泳的技術(shù)要點(diǎn)273．加樣加樣時(shí)瓊脂板應(yīng)先通上微弱電流，以免樣品過多自由擴(kuò)散。4．選擇抗原與抗體比例適當(dāng)比例抗原抗體反應(yīng)生成大的免疫復(fù)合物，選擇抗原和抗體的比例盡量減少前后帶現(xiàn)象的發(fā)生。3．加樣28

5．檢測方法如果沉淀線理想，通過肉眼觀察即可定性。在一些定量測定中，往往輔助以下方法來提高檢測的敏感度。(1)

染色(2)

光密度測定法(3)

放射性自顯影5．檢測方法29

6．干燥與保存

（1）除鹽及游離蛋白質(zhì)后，干燥（2）保存將染色片浸泡在5％～l0％甘油中30min，保存效果更好。6．干燥與保存30五、免疫增殖性疾病及免疫檢測(重點(diǎn)：臨床和檢驗(yàn)特點(diǎn))免疫增殖病——淋巴細(xì)胞異常增殖

免疫球蛋白異常增生性疾病（漿細(xì)胞異常增殖）良性增殖：常多克隆增殖

惡性增殖：常單克隆增殖五、免疫增殖性疾病及免疫檢測(重點(diǎn)：臨床和檢驗(yàn)特點(diǎn))免疫增殖31免疫球蛋白惡性增生性疾病的免疫損傷

1.免疫球蛋白合成異常,血液粘稠增加2.正常體液免疫抑制3.免疫球蛋白或其片段可以沉積于組織，激活細(xì)胞免疫或補(bǔ)體系統(tǒng),造成器官損傷4.漿細(xì)胞瘤的浸潤性生長,溶骨性病變免疫球蛋白惡性增生性疾病的免疫損傷1.免疫球蛋白合成異常,32多發(fā)性骨髓瘤（MM）特點(diǎn)I.介紹幾種免疫球蛋白異常增生性疾病貧血腎功損害免疫功能障礙骨痛高粘血癥臨床特點(diǎn)檢查特點(diǎn)正常的免疫球蛋白含量明顯降低血M蛋白或尿本周蛋白骨髓發(fā)現(xiàn)大量漿細(xì)胞溶骨性損害多發(fā)性骨髓瘤（MM）特點(diǎn)I.介紹幾種免疫球蛋白異常增生性疾33檢測方法：火箭和對流用于檢測有無抗體，檢測MM效果不好（K）1.血清蛋白電泳——M蛋白2.尿本周氏蛋白檢測3.免疫檢測方法免疫電泳

免疫固定電泳

免疫球蛋白及輕、重鏈定量檢測方法：火箭和對流用于檢測有無抗體，檢測MM效果不好（K）34免疫固定電泳免疫電泳

免疫球蛋白定量免疫固定電泳免疫電泳免疫球蛋白定量35巨球蛋白血癥特點(diǎn)好發(fā)于老年男性

血粘滯過高綜合征臨床特點(diǎn)檢查特點(diǎn)其它免疫球蛋白常在正常范圍血IgM蛋白↑↑淋巴結(jié)、肝和脾腫大

巨球蛋白血癥特點(diǎn)好發(fā)于老年男性血粘滯過高綜合征臨床特點(diǎn)檢36重鏈病：重鏈的不同可分為型

、型

、型

特點(diǎn)貧血細(xì)菌感染淋巴結(jié)腫大臨床特點(diǎn)檢查特點(diǎn)正常的免疫球蛋白含量可降低重鏈↑↑重鏈?。褐劓湹牟煌煞譃樾汀⑿?、型特點(diǎn)貧血細(xì)菌感37輕鏈?。盒汀⑿停ù诵皖A(yù)后差）特點(diǎn)發(fā)熱腎功能損害臨床特點(diǎn)檢查特點(diǎn)免疫球蛋白水平可降低或正常輕鏈↑↑貧血溶骨性損害輕鏈?。盒?、型（此型預(yù)后差）特點(diǎn)發(fā)熱腎功能損害臨床特點(diǎn)檢38良性單克隆免疫球蛋白增殖病特點(diǎn)無明顯臨床癥狀臨床特點(diǎn)：檢查特點(diǎn)其它免疫球蛋白常在正常范圍有M蛋白，但其并不呈進(jìn)行性增加良性單克隆免疫球蛋白增殖病特點(diǎn)無明顯臨床癥狀臨床特點(diǎn)：檢查39小結(jié)免疫電泳、對流免疫電泳、火箭免疫電泳和免疫固定電泳的定義、原理及技術(shù)要點(diǎn)幾種免疫增殖性疾病的臨床特點(diǎn)和檢驗(yàn)特點(diǎn)小結(jié)免疫電泳、對流免疫電泳、火箭免疫電泳和免疫固定電泳的定義40謝謝謝謝41免疫電泳技術(shù)四川大學(xué)華西醫(yī)院臨床免疫室武永康免疫電泳技術(shù)四川大學(xué)華西醫(yī)院臨床免疫室武永康42一、免疫電泳技術(shù)的發(fā)展二、免疫電泳技術(shù)的相關(guān)概念三、介紹幾種經(jīng)典的免疫電泳技術(shù)（重點(diǎn)）四、凝膠免疫電泳技術(shù)要點(diǎn)五、免疫增殖性疾病及免疫檢測本課內(nèi)容一、免疫電泳技術(shù)的發(fā)展本課內(nèi)容43免疫電泳技術(shù)1953年Grabar和Williams將凝膠擴(kuò)散置于直流電場中，讓電流來加速抗原與抗體的擴(kuò)散并規(guī)定其運(yùn)動方向，并與免疫沉淀反應(yīng)相結(jié)合，從而加快了沉淀反應(yīng)的速度，建立了免疫電泳技術(shù)，之后又衍生出對流免疫電泳、火箭電泳、及免疫固定電泳等新方法。

一、免疫電泳技術(shù)的發(fā)展免疫電泳技術(shù)1953年Grabar和Williams44瓊脂電泳與免疫擴(kuò)散沉淀技術(shù)相結(jié)合的一門技術(shù)。(K)1．電泳優(yōu)點(diǎn)（1）將蛋白電泳分開（2）加快反應(yīng)速度2．沉淀反應(yīng)（一）免疫電泳技術(shù)的定義二、免疫電泳技術(shù)的相關(guān)概念免疫電泳分析immunoelectrophoresis瓊脂電泳與免疫擴(kuò)散沉淀技術(shù)相結(jié)合的一門技術(shù)。(K)（一）免疫45蛋白質(zhì)具有可解離的酸性和堿性基團(tuán)，在一定PH值條件下，使蛋白質(zhì)分子帶正電荷或負(fù)電荷。在電場中，帶正電荷的粒子向負(fù)極移動，而帶負(fù)電荷的粒子向正極移動，由于各種蛋白質(zhì)遷移率不同而分為不同的區(qū)帶。

（二）電泳的基本原理及其影響因素I．基本原理電泳（electrophoresis）:帶電顆粒在電場中通過液體介質(zhì)的移動，稱為電泳。蛋白質(zhì)具有可解離的酸性和堿性基團(tuán)，在一定PH值條件下461.

顆粒（蛋白）本身特性：兩性、大小、形狀

2.載體性質(zhì)

：最常用的載體是瓊脂和瓊脂糖凝膠

3.電場強(qiáng)度

4.溶液PH值及離子強(qiáng)度——緩沖液的作用最適電泳緩沖液0.05M，PH8.6巴比妥緩沖液II.電泳的影響因素1.

顆粒（蛋白）本身特性：兩性、大小、形狀

II.電泳的影475.電滲（主要與載體特性有關(guān)）電滲定義電滲方向與電泳方向的關(guān)系J電泳遷移率：指在同一電場條件下，各種帶電粒子在單位時(shí)間內(nèi)移動的距離。6.電源5.電滲（主要與載體特性有關(guān)）48定義：區(qū)帶電泳+免疫雙擴(kuò)散(K)基本原理：在電場作用下，將標(biāo)本于瓊脂凝膠中進(jìn)行區(qū)帶電泳，電泳結(jié)束后，于瓊脂板旁挖一長形槽，加入相應(yīng)抗血清，抗體呈直線擴(kuò)散，電泳分離后的各種抗原呈放射狀擴(kuò)散，反應(yīng)生成弧狀沉淀線。1.免疫電泳三、介紹幾種經(jīng)典的免疫電泳技術(shù)定義：區(qū)帶電泳+免疫雙擴(kuò)散(K)1.免疫電泳49免疫電泳將蛋白質(zhì)抗原在瓊脂平板上進(jìn)行電泳，使不同的抗原彼此分離。撤去電壓，在與電泳方向平行的瓊脂打槽并加入相應(yīng)抗體進(jìn)行雙向免疫分散。分離成區(qū)帶的各種抗原成分與相應(yīng)抗體在瓊脂中擴(kuò)散后相遇，在二者比例合適處形成弧形沉淀線。據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置和形狀，與已知的正常人沉淀線比較，即可對樣品中所含成分及其性質(zhì)進(jìn)行分析、鑒定。(K)免疫電泳將蛋白質(zhì)抗原在瓊脂平板上進(jìn)行電泳，使不同的抗原彼此分50免疫電泳操作步驟：免疫電泳操作步驟：51結(jié)果復(fù)雜(經(jīng)驗(yàn)判斷)可不生成沉淀線（濃度太高或太低），或沉淀線重合技術(shù)評價(jià)：結(jié)果復(fù)雜(經(jīng)驗(yàn)判斷)技術(shù)評價(jià)：52（1）Ig量及單克隆性與沉淀線致密度關(guān)系（2）Ig量與抗體槽距離之間的關(guān)系：抗原抗體最適比關(guān)系結(jié)查分析（K）（1）Ig量及單克隆性與沉淀線致密度關(guān)系結(jié)查分析（K）53血清蛋白的分析，如多發(fā)性骨髓瘤、r球蛋白缺乏癥

應(yīng)用：血清蛋白的分析，如多發(fā)性骨髓瘤、r球蛋白缺乏癥應(yīng)542.對流免疫電泳定義：定向加速度的免疫雙擴(kuò)散技術(shù)（K）對流免疫電泳示意圖在pH8.0的緩沖液中，蛋白質(zhì)抗原帶負(fù)電荷向正極泳動；而抗體Ig由于分子量大，暴露的極性基團(tuán)較少，在離子瓊脂中泳動緩慢，同時(shí)受電滲作用的影響向負(fù)極泳動在抗原抗體相遇的最適比例處形成乳白色沉淀線。電滲：指在電場中液體對于一個(gè)固定介質(zhì)的相對移動。2.對流免疫電泳定義：定向加速度的免疫雙擴(kuò)散技術(shù)（K）對流55出現(xiàn)沉淀線→洗滌、染色、分析結(jié)果對流免疫電泳操作步驟：制瓊脂板→打孔→加樣→電泳AbAg出現(xiàn)沉淀線→洗滌、染色、分析結(jié)果對流免疫電泳操作步驟：制瓊脂56高電滲為特點(diǎn)，但電滲過強(qiáng)會使蛋白質(zhì)向陰極移動（K）對流免疫電泳簡便、快速、敏感度較高抗原、抗體比例要求嚴(yán)格抗原或抗體PI相近或遷移率非常接近，不宜做對流免疫電泳技術(shù)評價(jià)：高電滲為特點(diǎn)，但電滲過強(qiáng)會使蛋白質(zhì)向陰極移動（K）技術(shù)評價(jià)57

可用于乙肝病人血清鑒定；甲胎蛋白的測定，但近年多以ELISA替代。

應(yīng)用：可用于乙肝病人血清鑒定；甲胎蛋白的測定，但近年58定義：加速度的單向擴(kuò)散（J）3.火箭免疫電泳火箭免疫電泳示意圖－標(biāo)準(zhǔn)曲線測定樣本含有抗體的瓊指基本原理：瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動(K)，樣品孔中的抗原向正極泳動，隨抗原含量的逐漸減少，抗原泳動的基底區(qū)越來越窄，抗原抗體分子復(fù)合物形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個(gè)狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰。定義：加速度的單向擴(kuò)散（J）3.火箭免疫電泳火箭免疫電泳示意59制備含抗體的瓊脂板(K)→打孔→加樣→電泳→出現(xiàn)火箭形沉淀線→洗滌、染色、分析結(jié)果

火箭免疫電泳操作步驟：制備含抗體的瓊脂板(K)→打孔→加樣→電泳→出現(xiàn)火箭形60

“峰高——濃度標(biāo)準(zhǔn)”曲線：以不同稀釋度標(biāo)準(zhǔn)抗原泳動后形成的沉淀峰為縱坐標(biāo)，抗原濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計(jì)算出待測抗原的含量。

唯一的定量方法（K）火箭免疫電泳的定量測定“峰高——濃度標(biāo)準(zhǔn)”曲線：以不同稀釋度標(biāo)準(zhǔn)抗原泳動后形61l．電滲小2．電泳終點(diǎn)時(shí)間較難掌握3．開啟小電流后再加樣，否則形成寬底峰4．IgG電泳應(yīng)先將其甲酰化，使只帶負(fù)電荷火箭電泳操作時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：l．電滲小火箭電泳操作時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：62PH8.6時(shí)，分析蛋白質(zhì)抗原帶有負(fù)電荷免球測定應(yīng)先甲?；?，以增加其凈負(fù)電荷量技術(shù)評價(jià)：PH8.6時(shí)，分析蛋白質(zhì)抗原帶有負(fù)電荷技術(shù)評價(jià)：63

大多數(shù)蛋白質(zhì)均可用這一方法進(jìn)行測定，但目前已被敏感度高，特異性好的ELISA等方法代替。應(yīng)用：大多數(shù)蛋白質(zhì)均可用這一方法進(jìn)行測定，但目前已被64基本原理：將抗血清直接加于電泳后蛋白質(zhì)區(qū)帶表面，抗原與對應(yīng)抗體直接發(fā)生沉淀反應(yīng)，未結(jié)合的游離抗原或抗體洗去，則出現(xiàn)被結(jié)合而固定的某種蛋白。

5.免疫固定電泳(K)（immunofixationelectrophoresis。IFE）（IgA型MM）基本原理：5.免疫固定電泳(K)（IgA型MM）65海倫娜免疫固定儀海倫娜免疫固定儀66免疫固定電泳最常用于M蛋白的鑒定。鑒定方法：先將患者血清在瓊脂上等作區(qū)帶電泳，之后，加抗血清，依次加抗IgG、抗IgA、抗IgM、抗K輕鏈和抗L輕鏈。必要時(shí)還可加抗Fab、抗Fc等特殊抗血清，作用后，洗滌，染色后分析固定的M蛋白成分。該方法可用于各種蛋白水平的定性檢測。應(yīng)用：免疫固定電泳最常用于M蛋白的鑒定。應(yīng)用：67

1．電泳載體的選擇與電泳要求的具體條件如摩擦力，電滲、及電泳物質(zhì)分子量大小等決定。2．凝膠打孔及處理用打孔器在凝膠板上打孔后，要用瓊脂溶液封底，以免樣品滲漏。四、凝膠免疫電泳的技術(shù)要點(diǎn)1．電泳載體的選擇四、凝膠免疫電泳的技術(shù)要點(diǎn)683．加樣加樣時(shí)瓊脂板應(yīng)先通上微弱電流，以免樣品過多自由擴(kuò)散。4．選擇抗原與抗體比例適當(dāng)比例抗原抗體反應(yīng)生成大的免疫復(fù)合物，選擇抗原和抗體的比例盡量減少前后帶現(xiàn)象的發(fā)生。3．加樣69

5．檢測方法如果沉淀線理想，通過肉眼觀察即可定性。在一些定量測定中，往往輔助以下方法來提高檢測的敏感度。(1)

染色(2)

光密度測定法(3)

放射性自顯影5．檢測方法70

6．干燥與保存

（1）除鹽及游離蛋白質(zhì)后，干燥（2）保存將染色片浸泡在5％～l0％甘油中30min，保存效果更好。6．干燥與保存71五、免疫增殖性疾病及免疫檢測(重點(diǎn)：臨床和檢驗(yàn)特點(diǎn))免疫增殖病——淋巴細(xì)胞異常增殖

免疫球蛋白異常增生性疾?。{細(xì)胞異常增殖）良性增殖：常多克隆增殖

惡性增殖：常單克隆增殖五、免疫增殖性疾病及免疫檢測(重點(diǎn)：臨床和檢驗(yàn)特點(diǎn))免疫增殖72免疫球蛋白惡性增生性疾病的免疫損傷

1.免疫球蛋白合成異常,血液粘稠增加2.正常體液免疫抑制3.免疫球蛋白或其