第二節(jié)質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法

第二節(jié)質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法朱逢佳01藥2301190102鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)檢查安全性檢查含量（效價(jià)）測(cè)定一、鑒別試驗(yàn)鑒別：利用化學(xué)法、物理法及生物學(xué)方法來確證生化藥物和基因工程藥物的真?zhèn)?。通常需要用?biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吩谕粭l件下進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)加以確證。理化鑒別法生化鑒別法生物鑒別法（一）理化鑒別法1、化學(xué)鑒別法呈色法

e.g.溶菌酶分子中的四個(gè)肽鍵上的氮原子能與Cu2+絡(luò)合，生成有顏色的配位化合物，肽鍵越多，顏色越深。沉淀法

e.g.胃蛋白酶受酸、堿、重金屬或有機(jī)溶劑的作用，蛋白質(zhì)肽鏈的空間結(jié)構(gòu)被破壞，引起變性而產(chǎn)生不溶性沉淀。鞣酸、沒食子酸或多種重金屬鹽溶液（Ch.P2000)

2、紫外分光光度法利用藥物中的共軛系統(tǒng)在紫外區(qū)有特征吸收用于鑒別。3、高效液相色譜法利用對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖的保留時(shí)間和肽圖譜的一致性進(jìn)行鑒別。

（二）、生化鑒別法1.酶法

e.g.尿激酶能激活牛纖維蛋白溶酶原，而具有相同作用的鏈激酶不能激活牛纖維蛋白溶酶原而加以區(qū)別，并用直接觀察溶解纖維蛋白作用的氣泡上升法作為判斷指標(biāo)。2.電泳法電泳：在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子或離子在電場(chǎng)的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移的現(xiàn)象。e.g.肝素——糖凝膠電泳法3.樣品脫鹽后用等電點(diǎn)聚焦法測(cè)定

對(duì)于同一個(gè)產(chǎn)品來說不管有幾個(gè)等電點(diǎn)，但批與批之間必須一致，可表明其工藝穩(wěn)定（三）、生物鑒別法利用生物體進(jìn)行試驗(yàn)來鑒別藥物。

e.g.胰島素——家兔驚厥試驗(yàn)

二、雜質(zhì)檢查（一）一般雜質(zhì)檢查包括氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重金屬、酸度、溶液的澄清度或溶液的顏色、水分及干燥失重、熾灼殘?jiān)?。（二）特殊雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)主要是指從生產(chǎn)工藝中引入或原料中帶入的雜質(zhì)。許多生化藥物是從生物組織中提取或用微生物發(fā)酵法制得，藥物中易殘存一些雜質(zhì)或其他成分。1.原料藥的純度分析2.生產(chǎn)過程中雜質(zhì)的檢查基因工程藥物的質(zhì)量控制要比用傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的生物藥物有更高的要求。三、安全性檢檢查（一）熱原檢查法和和細(xì)菌內(nèi)毒素素檢查法（二）異常毒性試驗(yàn)驗(yàn)（三）過敏試驗(yàn)（四）降壓物質(zhì)試驗(yàn)驗(yàn)（五）無菌試驗(yàn)（六）基因工程藥物物中可能雜質(zhì)質(zhì)與污染物檢檢查（七）致突變?cè)囼?yàn)（八）生殖毒性試驗(yàn)驗(yàn)熱原檢查法（（家兔法）本本法是將一一定劑量的供供試品，靜脈脈注入家兔體體內(nèi)，以其體體溫升高的程程度，判定該該供試品中所所含熱原是否否符合規(guī)定，，是一種限度度試驗(yàn)法。細(xì)菌內(nèi)毒素檢檢查法———利用鱟試劑劑和細(xì)菌內(nèi)毒毒素的凝聚反反應(yīng)。異常毒性試驗(yàn)驗(yàn)是用一定劑量量的藥物按指指定的操作方方法和給藥途途徑給予規(guī)定定體重的某種種試驗(yàn)動(dòng)物，，觀察其急性性毒性反應(yīng)。。反應(yīng)的判斷斷以試驗(yàn)動(dòng)物物死亡與否為為終點(diǎn)。中國藥典（1995年版版）中規(guī)定了了50多種藥藥物需做異常常毒性檢查。。動(dòng)物：小鼠給藥途徑：尾尾靜脈注射法法，皮下注射射法，腹腔注注射法，口服服給藥結(jié)果判斷：除除另有規(guī)定外外，全部5只只小鼠在給藥藥后48小時(shí)時(shí)內(nèi)不得有死死亡；如有死死亡時(shí)，應(yīng)另另取體重18~19g的小鼠10復(fù)復(fù)試，全部小小鼠在48小小時(shí)內(nèi)不得有有死亡。（ChP2000附錄ⅪC）過敏試驗(yàn)是檢檢查異性蛋白白的試驗(yàn)。藥藥物中若夾雜雜有異性蛋白白，在臨床使使用時(shí)易引起起病人多種過過敏反應(yīng)，輕輕者皮膚出現(xiàn)現(xiàn)紅斑或丘疹疹，嚴(yán)重者可可出現(xiàn)窒息、、發(fā)結(jié)、血管管神經(jīng)性水腫腫、血壓下降降，甚至休克克和死亡。因因此，有可能能存在異性蛋蛋白的藥物、、應(yīng)作過敏試試驗(yàn)。動(dòng)物：豚鼠降壓物質(zhì)：指指某些藥物中中含有的能導(dǎo)導(dǎo)致血壓降低低的雜質(zhì)，包包括組胺、類類組胺或其他他導(dǎo)致血壓降降低的物質(zhì)。。危害：面部潮潮紅，脈搏加加速，血壓下下降來源：在用動(dòng)動(dòng)物臟器或組組織為原料制制備生化藥物物的過程中，，正常組織內(nèi)內(nèi)存在的組胺胺及部分氨基基酸脫羧形成成的組胺、酪酪胺等胺類物物質(zhì)。方法：：比較較對(duì)照照品和和供試試品引引起麻麻醉貓貓（或或狗））血壓壓下降降的程程度，，以判判斷供供試品品中所所含降降壓物物質(zhì)的的限度度是否否符合合規(guī)定定。ChP2000無菌檢檢查法法是檢檢查藥藥品及及敷料料是否否染有有活菌菌的一一種方方法，，是藥藥典中中較重重要的的檢查查項(xiàng)目目之一一。由于許許多生生化藥藥物是是在無無菌條條件下下制備備的，，且不不能高高溫滅滅菌。。因此此，無無菌檢檢查就就更有有必要要。中國藥藥典中中幾乎乎所有有的注注射用用藥均均做無無菌檢檢查。。參照《《中國國生物物制品品規(guī)程程》基因工工程藥藥物中中可能能的雜雜質(zhì)：：殘留DNA、宿主細(xì)細(xì)胞蛋蛋白質(zhì)質(zhì)、內(nèi)內(nèi)毒素素、蛋蛋白質(zhì)質(zhì)突變變體和和蛋白白質(zhì)裂裂解物物等。。主要檢檢查項(xiàng)項(xiàng)目：：外源性性DNA、宿主細(xì)細(xì)胞蛋蛋白質(zhì)質(zhì)、其其他有有關(guān)雜雜質(zhì)和和細(xì)菌菌內(nèi)毒毒素。。致突變變?cè)囼?yàn)驗(yàn)包括括：微生物物回復(fù)復(fù)突變變?cè)囼?yàn)驗(yàn)———檢測(cè)測(cè)基因因突變變哺乳動(dòng)動(dòng)物培培養(yǎng)細(xì)細(xì)胞染染色體體畸變變?cè)囼?yàn)驗(yàn)———檢測(cè)測(cè)是否否影響響DNA結(jié)構(gòu)或或改變變信息息嚙齒動(dòng)動(dòng)物微微核試試驗(yàn)———染染色體體畸變變?cè)囼?yàn)驗(yàn)的補(bǔ)補(bǔ)充微生物物電極極法的的致突突變?cè)囋囼?yàn)鼠傷寒寒沙門門菌營營養(yǎng)缺缺陷型型回復(fù)復(fù)突變變?cè)囼?yàn)驗(yàn)中國倉倉鼠肺肺細(xì)胞胞（CHL)NIH小鼠生殖毒毒性試試驗(yàn)包包括：：一般生生殖毒毒性試試驗(yàn)————反映映對(duì)生生殖過過程第第一階階段的的影響響（妊妊娠前前和妊妊娠初初期））致畸敏敏感期期毒性性試驗(yàn)驗(yàn)———生殖殖過程程第二二階段段的影影響圍生期期毒性性試驗(yàn)驗(yàn)———生殖殖過程程第三三階段段（分分娩前前后和和泌乳乳期））四、含含量（（效價(jià)價(jià)）測(cè)測(cè)定含量表表示方方法百分含含量結(jié)構(gòu)明明確的的小分分子藥藥物或或經(jīng)水水解后后變成成小分分子的的藥物物生物物效效價(jià)價(jià)或或酶酶活活力力單單位位酶類類和和蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)等等藥藥物物含量量測(cè)測(cè)定定1.HPLC法應(yīng)應(yīng)用用適適當(dāng)當(dāng)?shù)牡姆址治鑫鲋鶞y(cè)測(cè)定定產(chǎn)產(chǎn)品品的的總總體體純純度度。。達(dá)達(dá)95％％以以上上。。2.十十二二烷烷基基硫硫酸酸鈉鈉－－聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝膠膠電電泳泳法法（（SDS法））產(chǎn)產(chǎn)品品若若存存在在聚聚合合體體，，在在非非還還原原情情況況下下用用掃掃描描計(jì)計(jì)算算聚聚合合體體的的含含量量，，一一般般控控制制在在10％％以以下下，，單單體體加加聚聚合合體體應(yīng)應(yīng)不不少少于于95％％。。22效價(jià)價(jià)測(cè)測(cè)定定效價(jià)價(jià)測(cè)測(cè)定定均均采采用用國國際際或或國國家家參參考考品品，，或或經(jīng)經(jīng)過過國國家家檢檢定定機(jī)機(jī)構(gòu)構(gòu)認(rèn)認(rèn)可可的的參參考考品品，，以以體體內(nèi)內(nèi)或或體體外外法法（（細(xì)細(xì)胞胞法法））測(cè)測(cè)定定其其生生物物學(xué)學(xué)活活