技能訓(xùn)練一單胞藻的形態(tài)觀察及濃度的測(cè)定

技能訓(xùn)練一單胞藻的密度的測(cè)定微藻培養(yǎng)——微藻的計(jì)數(shù)及培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià)任務(wù)

教學(xué)目標(biāo)：（一）能力目標(biāo)1.掌握血球計(jì)數(shù)板的使用方法2.掌握小球藻、扁藻、硅藻的計(jì)數(shù)3.通過(guò)計(jì)數(shù)學(xué)會(huì)評(píng)價(jià)微藻培養(yǎng)的效果（二）知識(shí)目標(biāo)1.掌握微藻的計(jì)數(shù)原理2.微藻生長(zhǎng)特點(diǎn)一、計(jì)數(shù)方法選擇1.血球計(jì)數(shù)板2.分光光度計(jì)的使用1.1血球計(jì)數(shù)方法此法是利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接進(jìn)行測(cè)定。它觀察在一定的容積中的微生物的個(gè)體數(shù)目，然后推算出含藻細(xì)胞數(shù)，包括死活細(xì)胞均被計(jì)算在內(nèi)，這樣得出結(jié)果往往偏高。這種方法常用于形態(tài)個(gè)體較大的菌體、微藻、孢子。1.2血球計(jì)數(shù)構(gòu)造顯微鏡下計(jì)數(shù)框1mm模式圖計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚玻璃片，玻片上有四個(gè)槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)，中央平臺(tái)又由一短槽隔成兩半，其上各刻有一小方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分九個(gè)大格，中央的一大格作為計(jì)數(shù)用，稱為計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室刻度有2種：一種是25中格X16小格，而另一種為16中格X25小格，它們都是由400個(gè)小格組成。每個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1mm，則每個(gè)大方格面積為1X1=1mm2。蓋上蓋玻片后，載玻片與蓋玻片之間高度為0.1mm,所以每個(gè)計(jì)數(shù)室的體積為0.1X1X1=0.1mm3,每個(gè)大格有400個(gè)小格，所以每個(gè)小方格體積為0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。計(jì)數(shù)原則1.取出藻液的原液時(shí)一定要混勻!!2.不同的移液管吸取不同濃度的、不同品種的藻液,不要混用!!!!注意細(xì)節(jié)操作!!3.計(jì)數(shù)小格采取計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右的方式血球計(jì)數(shù)板的分區(qū)與分格例一例二1大格=16中格1大格=25中格

=16X25小格=25X16小格

=400小格=400小格****#####三、材料與儀器1、待測(cè)樣品：微藻懸液2、顯微鏡，血球計(jì)數(shù)板，蓋玻片等。四、方法與步驟:1、取潔凈的血球計(jì)數(shù)板，在計(jì)數(shù)室上面蓋上蓋玻片。2、取稀釋到一定程度（5~10個(gè)細(xì)胞/小格）藻液，從蓋片邊緣滴一小滴，使藻液自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)不能有氣泡。先在低倍鏡下找到小方格網(wǎng)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。3、如用16X25計(jì)數(shù)板，只計(jì)四個(gè)角上中方格的藻細(xì)胞數(shù)。若是25X16的計(jì)數(shù)板，除計(jì)數(shù)四個(gè)角上的中格藻細(xì)胞數(shù)外，還要計(jì)算中央中格的菌數(shù)。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2~3次。計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)不時(shí)調(diào)節(jié)焦距，才能觀察到不同深度的細(xì)胞。4、位于格線上的細(xì)胞一般只計(jì)此格的上方線及左方線上的菌體。5、計(jì)數(shù)方法：樣品中細(xì)胞數(shù)/ml=每小格平均細(xì)胞數(shù)x4000,000x稀釋倍數(shù)，本實(shí)驗(yàn)采用25x16規(guī)格，要求數(shù)這些方格中的全部小格即80個(gè)小格。設(shè)：每個(gè)中方格的細(xì)胞數(shù)為A，則每小格平均細(xì)胞數(shù)=（A1+A2+A3+A4+A5)/80

A1+A2+A3+A4+A5樣品中的細(xì)胞數(shù)/ml=X4000,000X稀釋倍數(shù)

80

結(jié)果記錄：微藻名稱總細(xì)胞數(shù)個(gè)/ml第一個(gè)中格第二個(gè)中格第三個(gè)中格第四個(gè)中格第五個(gè)中格第一次測(cè)定第二次測(cè)定平均六、測(cè)定注意事項(xiàng):1、測(cè)定時(shí)，藻液要搖勻，防止藻細(xì)胞凝聚沉淀。2、位于格線上的藻細(xì)胞一般只計(jì)此格的上方線及左方線上的菌體。血球計(jì)數(shù)板的清潔血球汁數(shù)板使用后,用自來(lái)水沖洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,或用95%的乙醇,無(wú)水乙醇,丙酮等有機(jī)溶劑脫水使其干燥.通過(guò)鏡檢觀察每小格內(nèi)是否殘留菌體或其他沉淀物.若不干凈,則必須重復(fù)清洗直到干凈