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聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)主要內(nèi)容PCR的原理PCR的反應(yīng)過(guò)程PCR反應(yīng)體系PCR的步驟PCR產(chǎn)物的檢測(cè)PCR技術(shù)的基本原理基于核酸體內(nèi)擴(kuò)增的原理，在體外進(jìn)行待擴(kuò)增目的基因或DNA兩端的兩個(gè)引物與該目的基因序列退火而后延伸最終達(dá)到擴(kuò)增的目的，是通過(guò)酶促反應(yīng)在體外成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增一段目的基因。變性、退火、延伸三步變性：雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA退火：部分引物與模板的單鏈DNA的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合延伸：以目的基因?yàn)槟０?，合成互補(bǔ)的新DNA鏈PCR的基本反應(yīng)過(guò)程PCR反應(yīng)體系的基本成分模板DNA引物脫氧核苷三磷酸(dNTP)維持pH值的緩沖液二價(jià)陽(yáng)離子一價(jià)陽(yáng)離子熱穩(wěn)定DNA聚合酶標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系10×擴(kuò)增緩沖液 5μl20mmol/L4種dNTP混合液 1μl20μmol/L正向引物 2.5μl20μmol/L反向引物 2.5μl熱穩(wěn)定DNA聚合酶 1-5μl超純水（UPW） 28-33μl模板DNA 5-10μl總體積 50μl液體石蠟（備選）各成分的終濃度Mg2+ 1.5mmol/LKCl 50mmol/LdNTP 200μmol/L 引物 1μmol/LDNA聚合酶 1-5單位模板DNA 1pg-1μgPCR步驟：設(shè)計(jì)引物，準(zhǔn)備靶DNA混合反應(yīng)液PCR反應(yīng)：預(yù)變性（95oC，5min)

變性（95oC，50sec)

退火（50oC，1min)

延伸（72oC，1.5min)

延伸（72oC，10min)PCR產(chǎn)物的鑒定

電泳鑒定序列測(cè)定核酸凝膠電泳核酸核苷酸堿基戊糖磷酸基團(tuán)：帶負(fù)電荷多聚陰離子（Polyanions)當(dāng)將核酸分子放置在電場(chǎng)中時(shí)，就會(huì)向正電極方向遷移一、基本原理2、瓊脂糖凝膠電泳的制備和檢查配制緩沖液等配制瓊脂糖凝膠裝備電泳裝置核酸上樣核酸遷移觀察BufferWorkingSolutionTAE1x40mMTris-acetate1mMEDTATBE0.5x45mMTris-borate1mMEDTA2、瓊脂糖凝膠電泳的制備和檢查2、瓊脂糖凝膠電泳的制備和檢查瓊脂糖凝膠電泳1,636bp

1,018bp

517bpPCR產(chǎn)物的序列測(cè)定PCR產(chǎn)物直接測(cè)序克隆測(cè)序PCR技術(shù)的應(yīng)用基因克隆染色體步移（

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