基因芯片技術在病原微生物耐藥性檢測中的應用(講座)

H基因芯片技術在病原微生物耐藥性檢測中的應用一、基因芯片技術的概念和原理（一）概述基因芯片技術是將成千上萬個代表著不同的寡核苷酸探針，顧向華在支持無的表面上成為芯片，然后將待測的樣品，包括像DNA、RNACDNA等進行標記，標記的方式有同（二）基因芯片基本原理基因芯片技術主要涵蓋了一個固相的核酸序列，作為他的靶點而以一種或多種標記的（三）基因芯片的特點和優(yōu)勢HH基因芯片的特點和優(yōu)勢，主要在于①速度快。最新的基因芯片技術她主要在于雜交時就是使芯片更小，檢測更多樣化；④制動化程度高，減少人為誤差。（四）基因芯片的檢測過程基因芯片的檢測過程，首先是寡核苷酸的合成，也就是基因芯片的制備，基因芯片的合成個光科技書，有機地合成在一起，首先將支持物表面按計劃或者羥基化。接下來的過程是熒光標記與同位素相比，熒光的優(yōu)勢是：他的低污染可以同時檢測不的標記，可能是這些銀光集團的距離過大而影響最后的檢測效率?；蛐酒臉颖尽０―NA和RNA芯片DNA準備相對比較簡單耳RNA就要注意以下幾點1減少RNA的降解2優(yōu)選RNA純化方法3在標記前檢測RNA的量4在標記前檢測RNA的質量5使用統(tǒng)一的樣本方案以確保檢測的可重復性因為生物樣品的成分比較復雜為了提高準確性需要先對樣品進行處理比如說來自血液和組織中的DNA或者LRNA樣本要先擴征然后再用銀光素來標記探針。在芯片這一步要注意的是：要通過預雜交來優(yōu)化雜交的條件和緩沖液另外芯片雜交過程與我們熟悉的很多面性過程比較類似也就是說嚴格的洗滌對實驗的成功是至關重要的。HH基因芯片的檢測技術最后一步就是數(shù)據(jù)處理，她包括信號檢測質量評估數(shù)據(jù)整理和聚類分析。首先是原始數(shù)據(jù)的獲取、提取生物樣本的MANA并且反轉錄成CDMA在壓箱中與探針進行雜交這一類的實驗過程些大家公認的方法。（五）基因芯片的技術應用在基因芯片技術上的應用方面，主要有以下幾個方面的應用：基因表達分析這是最主DNA的序列將銀光標記的待測DNA樣品與芯片上的一幀序列片段雜交，假如說二者完全相配則雜交信號較強；如果不配對，信號較弱，經表達分析是一個方面，它的主要優(yōu)勢是：自動化分析快速，表達水平的檢測一般用平行對比的方法。HH基因芯片在臨場上的一般應用舉了兩個例子——一是藥物代謝，二是白血病的分型。CUYP450分出一些像急性淋巴細胞白血病急性粒細胞白血病以及混合細胞的白血病。二、基因芯片技術在病原微生物耐藥性檢測的應用（一）必要性他的必要性也就是病原性微生物的耐藥性問題日趨嚴重，接下來分三點：基因芯片技HH首先我們來看：病原性的耐藥問題日趨嚴重，這里舉了兩個例子一個是金黃色葡萄球菌；另一個是結合診治桿菌。左圖顯示的葡萄桿菌，他顯示的是世界衛(wèi)生組織在2007年發(fā)布的衛(wèi)生報告，在1928年菌霉素被發(fā)現(xiàn)；1942年青霉素得到應用而隨后不斷地增長。下面我們來看：基因芯片技術在細菌耐藥性檢測的應用分論。首先看結合分支桿菌。HH上了不同的對照點，像空白陽性和陰性對照，包括我們在B圖和C圖的右下角看見的IS6110的插入片段的。HH上圖是另一個米撫平和異煙肼耐藥的結核分枝桿菌的耐藥檢測。第一行顯示的是單個基因的變異，而第二行揭示的是多個基因的變異引起的耐藥。HH29100%，他檢測的是RDR這個特意的區(qū)段發(fā)生的區(qū)段和缺失的免疫。接下來繼續(xù)關注的是結核分枝桿菌，這里顯示的是一種叫PCA這個基因的分型，而這我們轉到第二個致菌，也就是金黃色葡萄球菌，這里顯示的對金黃色葡萄球菌對所氧氟沙星的抗性，以及甲氧西林抗性基因MARK——A的檢測，這里這個芯片的特點是它是面對面的方式重疊，芯片之間留下0.120mm高的空隙，而在芯片不同的芯片層之間設置有密封圈。上圖研究做的是金黃色葡萄球菌對象甲氧西林、四環(huán)素類、紅霉素以及萬股霉素的耐芯片的圖上看到它對不同抗生素的抗性基因的分布情況。HHβ內酰胺酶接到的內酰胺酶的抗性基因檢測。上圖顯示的是尿大腸I細菌中對佛喹諾酮類抗性的檢測，我們在右上角看到的三維圖則是檢測的項目和尿大腸I這里對大腸I細菌對三十種抗性基因進行檢測，這些檢測對于大腸I細菌對環(huán)境的影響以及他的病原學和流行病學的研究都有很重要的意義。（二）利用基因芯片的技術HH這一頁設施一抗生素為主題的系還發(fā)能看見環(huán)境誒就是你卡機發(fā)放你的希勒對于等抗性基因。（三）基因芯片技術在病毒，寄生蟲，耐藥性檢測性的應用首先來看流感病毒對金剛烷耐藥性基因的檢測，我們看到