驗證滅菌設備的驗證

滅菌設備的驗證

徐志敏

目錄1、滅菌的概念2、滅菌的方法3、滅菌的驗證4、生物指示劑5、消毒與滅菌一滅菌的概念滅菌是用適當?shù)奈锢砘蚧瘜W手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。無菌物品是指物品中不含任何活的微生物。對任一批產(chǎn)品來說，絕對的無菌既無法保證也無法用實驗來證實。實際生成過程中，滅菌是指將物品中污染的微生物殘存概率下降至一定水平，以無菌保證水平SAL表示。最終滅菌的產(chǎn)品微生物存活概率不得高于10-6。二滅菌的方法常用的滅菌方法有：濕熱滅菌法干熱滅菌法輻射滅菌法氣體滅菌法和過濾除菌法。只要產(chǎn)品允許盡量采取最終滅菌的方法。1、濕熱滅菌是用高壓飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中蛋白質、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。滅菌能力強，是熱力滅菌中最有效，應用最廣泛的滅菌方法。適用范圍：遇高溫和潮濕不發(fā)生變化和損壞的物品。如容器、培養(yǎng)基、膠塞、無菌衣等。熱壓滅菌用的滅菌器種類很多，但其基本結構大同小異。注意：被滅菌物應有適當?shù)难b載方式，不能排列過密。以保證滅菌的有效性及均一性。必須將滅菌器內(nèi)的空氣排出。如果滅菌器內(nèi)的空氣存在，則壓力表上所表示的壓力是器內(nèi)蒸氣和空氣二者的總壓而非單純的蒸氣壓力。1、濕熱滅菌2干熱滅菌法

系指物品于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設備中、利用干熱空氣達到殺滅微生物或消除熱原物質的方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品的滅菌，如玻璃器具、金屬制容器、纖維制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅菌。干熱滅菌條件：一般為160～170℃×120min以上、170～180℃×60min以上或250℃×45min以上，也可采用其它溫度和時間參數(shù)。總之，應保證滅菌后的產(chǎn)品其SAL（無菌保證水平）≤10-6注意：被滅菌物品應有適當?shù)陌b和裝載方式，保證滅菌的有效性和均一性2干熱滅菌法

干熱滅菌法驗證與濕熱滅菌法相同，應進行熱分布試驗、熱穿透試驗、生物指示劑驗證試驗或細菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗。以確認滅菌柜中的溫度分布符合設定的標準、確定最冷點位置等。常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子。細菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗是證明除熱原過程有效性的試驗。一般將不小于1000單位的細菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中，證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個對數(shù)單位。細菌內(nèi)毒素滅活驗證試驗所用的細菌內(nèi)毒素一般為大腸埃希菌內(nèi)毒素。驗證時，一般采用最大裝載方式。2干熱滅菌法

系指將滅菌產(chǎn)品置于適宜放射源輻射的γ射線或適宜的電子加速器發(fā)生的電子束中進行電離輻射而達到殺滅微生物的方法。本法最常用的為60Co-γ射線輻射滅菌。醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。3輻射滅菌法

輻射射滅滅菌菌所所控控的的參參數(shù)數(shù)主主要要是是輻輻射射劑劑量量（（指指滅滅菌菌物物品品的的吸吸收收劑劑量量））。。該該劑劑量量的的制制定定應應考考慮慮滅滅菌菌物物品品的的適適應應性性及及可可能能污污染染的的微微生生物物最最大大數(shù)數(shù)量量及及最最強強抗抗輻輻射射力力，，所所使使用用的的劑劑量量事事先先應應驗驗證證其其有有效效性性及及安安全全性性。。常常用用的的輻輻射射滅滅菌菌吸吸收收劑劑量量為為25kGy.對最終產(chǎn)品、、原料藥、某某些醫(yī)療器材材應盡可能采采用低輻射劑劑量滅菌。滅菌時，應采采用適當?shù)幕瘜W或物理方方法對滅菌物物品吸收的輻輻射劑量進行行監(jiān)控，以充充分證實滅菌菌物品吸收的的劑量是在規(guī)規(guī)定的限度內(nèi)內(nèi)。3輻射滅菌法系指用化學消消毒劑形成的的氣體殺滅微微生物的方法法。常用的化學消消毒劑有環(huán)氧氧乙烷、氣態(tài)態(tài)過氧化氫、、甲醛、臭氧氧（O3）等，本法適適用于在氣體體中穩(wěn)定的物物品滅菌。采采用氣體滅菌菌法時，應注注意滅菌氣體體的可燃可爆爆性、致畸性性和殘留毒性性。本法中最常用用的氣體是環(huán)環(huán)氧乙烷，一一般與80％～90％的惰性氣體體混合使用。。該法可用于于醫(yī)療器械，，塑料制品等等不能采用高高溫滅菌的物物品滅菌。含含氯的物品及及能吸附環(huán)氧氧乙烷的物品品則不宜使用用。另外，使使用氣態(tài)過氧氧化氫和臭氧氧（O3）滅菌，因其其無危害性殘殘留物，不會會對操作人員員和環(huán)境造成成危害，適合合于空間和物物品表面的滅滅菌。4氣體滅菌法臭氧滅菌：臭臭氧在常溫、、常壓下分子子結構不穩(wěn)定定，很快自行行分解成氧氣氣和單個氧原原子；后者具具有很強的活活性，對細菌菌有極強的氧氧化作用，將將其殺死，多多余的氧原子子則會自行重重新結合成為為普通氧原子子，不存在任任何有毒殘留留物，故稱無無污染消毒劑劑，它不但對對各種細菌（（包括肝炎病病毒，大腸桿桿菌，綠濃桿桿菌及雜菌等等）有極強的的殺滅能力，，而且對殺死死霉素也很有有效。4氣體滅菌法1、臭氧的滅菌菌機制及過程程類屬于生物物化學過程，，氧化分解解了細菌內(nèi)部部氧化葡萄糖糖所必須的葡葡萄糖氧化酶酶。2、直接與細菌菌、病毒發(fā)生生作用，破壞壞其細胞器和和核糖核酸，，分解DNA、RNA，蛋白質、脂脂質類和多糖糖等大分子聚聚合物，使細細菌的物質代代謝生產(chǎn)和繁繁殖過程到破破壞。3、滲透胞膜組組織，侵入細細胞膜內(nèi)作用用于外膜脂蛋蛋白和內(nèi)部的的脂多糖，使使細胞發(fā)生通通透畸變，導導致細胞溶解解死亡。4氣體滅菌法系利用細菌不不能通過致密密具孔濾材的的原理以除去去氣體或液體體中微生物的的方法。適用于熱不穩(wěn)穩(wěn)定的藥品溶溶液或原料的的除菌。除菌過濾器微微孔濾膜分親親水性和疏水水性兩種。對對除菌過濾器器的要求：除除菌過濾器必必須選擇具有有截留實驗證證明的除菌級級過濾器。藥藥品生產(chǎn)中采采用的除菌濾濾膜孔徑一般般不超過0.22μm.過濾器不得對對被濾過成分分有吸附作用用，也不能釋釋放物質，不不得有纖維脫脫落，禁用含含石棉的過濾濾器。濾器和和濾膜在使用用前應進行潔潔凈處理，并并用高壓蒸汽汽進行滅菌或或作在線滅菌菌。更換品種種和批次應先先清洗濾器，，再更換濾膜膜。5除菌過濾法過濾過程中無無菌保證與過過濾液體的初初始生物負荷荷及過濾器的的對數(shù)下降值值LRV（LogReductionValue）有關。LRV系指規(guī)定條件件下，被過濾濾液體過濾前前的微生物數(shù)數(shù)量與過濾后后的微生物數(shù)數(shù)量比的常用用對數(shù)值。即：LRV=lgN0-LgN式中N0為產(chǎn)品除菌前前的微生物數(shù)數(shù)量。N為產(chǎn)品除菌后后的微生物數(shù)數(shù)量。5除菌過濾法在過濾除菌中中，一般無法法對全過程中中過濾器的關關鍵參數(shù)（濾濾膜孔徑的大大小及分布，，濾膜的完整整性及LRV）進行監(jiān)控。。因此，在每每一次過濾除除菌前后均應應作濾器的完完整性試驗，，即氣泡點試試驗或壓力維維持試驗或氣氣體擴散流量量試驗。確認認濾膜在除菌菌過濾過程中中的有效性和和完整性。除除菌過濾器的的使用時間不不應超過一個個工作日，否否則應進行驗驗證。5除菌過濾法SAL：（SterilityAssuranceLevel）無菌保證水水平，一批物物品的無菌特特性一般以物物品滅菌后微微生物存活的的概率來表示示。最終滅菌產(chǎn)品品微生物存活活的概率不得得高于10-6已滅菌產(chǎn)品達達到的無菌保保證水平可通通過驗證確定定。F0值：為標準滅滅菌時間，系系滅菌過程賦賦予被滅菌物物品121℃下的滅菌時時間。D值：微生物的的耐熱參數(shù)，，系指一定溫溫度下，將微生物殺滅滅90%所需的時間，，以分鐘表示示。1、滅菌程序的的驗證滅菌程序的驗驗證是無菌保保證的必要條條件。滅菌程程序經(jīng)驗證后后，方可交付付正式使用。。驗證內(nèi)容包包括：⑴撰寫驗證方方案及制定評評估標準。⑵確認滅菌設設備技術資料料齊全、安裝裝正確，并能能處于正常運運行（安裝確確認）。⑶確認關鍵控控制設備和儀儀表能在規(guī)定定的參數(shù)范圍圍內(nèi)正常運行行（運行確認認）。⑷采用滅菌物物品或模擬物物品進行重復復試驗，確認認滅菌效果符符合規(guī)定（性性能確認）。。⑸匯總并完善善各種文件和和記錄，撰寫寫驗證報告。。二滅菌的的驗證2滅菌效果的驗驗證（1）濕熱滅菌菌效果驗證：：應進行熱分布布試驗、熱穿穿透試驗和生生物指示劑驗驗證試驗。以以確定滅菌柜柜空載及不同同裝載時腔室室中的熱分布布狀況及可能能存在的冷點點；在空載條條件下，確認認121℃時腔室的各點點的溫度差值值應≤±1℃；使用插入實實際物品或模模擬物品內(nèi)的的溫度探頭，，確認滅菌柜柜在不同裝載載時，最冷點點物品的標準準滅菌時間（（F0）達到設定的的標準；用生生物指示劑進進一步確認在在不同裝載時時冷點處的滅滅菌物品達到到無菌保證水水平。本法常常用的生物指指示劑為嗜熱熱脂肪芽孢桿桿菌孢子。具體方法:將生物指示劑劑和被滅菌物物品儀一起放放入滅菌容器器內(nèi)，二層設設3個點，上層中中央1點，下層前后后部位各1點；三層設3個點，上層與與中央部位各各1個點，下層前前中后各1個點。滅菌后取出，，56~60℃℃培養(yǎng)24~48h，并取另一支支未經(jīng)滅菌的的生物指示劑劑一起培養(yǎng)，，作為陽性對對照。結果判斷：顏顏色的變化。。培養(yǎng)后保持紫色Pass培養(yǎng)后紫色→黃色Fail陽性對照培養(yǎng)后紫色→黃色Pass2滅菌效果的驗驗證（2）干熱滅菌菌法驗證：應進行熱分布布試驗、熱穿穿透試驗、生生物指示劑驗驗證試驗或細細菌內(nèi)毒素滅滅活驗證試驗驗。以確認滅滅菌柜中的溫溫度分布符合合設定的標準準、常用的生生物指示劑為為枯草芽孢桿桿菌孢子。細細菌內(nèi)毒素滅滅活驗證試驗驗是證明除熱熱原過程有效效性的試驗。。一般將不小小于1000單位的細菌內(nèi)內(nèi)毒素加入待待去熱原的物物品中，證明明該去熱原工工藝能使內(nèi)毒毒素至少下降降3個對數(shù)單位。。細菌內(nèi)毒素素滅活驗證試試驗所用的細細菌內(nèi)毒素一一般為大腸桿桿菌內(nèi)毒素。。驗證時，一一般采用最大大裝載方式。。2滅菌效果的驗驗證（3）氣體滅菌法驗驗證：采用環(huán)氧乙烷烷滅菌時，滅滅菌柜內(nèi)的溫溫度、濕度、、滅菌氣體濃濃度、滅菌時時間是影響滅滅菌效果的重重要因數(shù)?？煽刹捎孟铝袦鐪缇鷹l件：溫度（54±10）℃相對濕度（60±10）%滅菌壓力8×105Pa滅菌時間90min2滅菌效果的驗驗證滅菌條件應予予驗證方法：：滅菌時，先先將滅菌腔室室先抽成真空空，然后通入入蒸汽使腔室室內(nèi)達到設定定的溫濕度平平衡的額定值值，再通入經(jīng)經(jīng)過濾和預熱熱的環(huán)氧乙烷烷氣體。滅菌菌過程中，應應嚴密監(jiān)控腔腔室的溫度、、濕度、壓力力、環(huán)氧乙烷烷濃度及滅菌菌時間。必要要時使用生物物指示劑監(jiān)控控滅菌效果。。本法滅菌程程序的控制具具有一定難度度，整個滅菌菌過程應在技技術熟練人員員的監(jiān)督下進進行。滅菌后后，應采取新新鮮空氣置換換，使殘留環(huán)環(huán)氧乙烷和其其他易揮發(fā)性性殘渣消散。。并對環(huán)氧乙乙烷殘留物和和反應產(chǎn)物進進行監(jiān)控，以以證明其不超超過規(guī)定濃度度，避免產(chǎn)生生毒性。環(huán)氧乙乙烷滅滅菌法法驗證證時，，應進進行如如下試試驗：：泄漏漏試驗驗，以以確認認滅菌菌腔室室的密密閉性性。（4）輻射滅滅菌法法驗證證：采用輻輻射滅滅菌法法滅菌菌的無無菌產(chǎn)產(chǎn)品其其SAL應≤10-6.γ射線輻輻射滅滅菌所所控的的參數(shù)數(shù)主要要是輻輻射劑劑量（（指滅滅菌物物品的的吸收收劑量量）。。該劑劑量的的制定定應考考慮滅滅菌物物品的的適應應性及及可能能污染染的微微生物物最大大數(shù)量量及最最強抗抗輻射射力，，所使使用的的劑量量事先先應驗驗證其其有效效性及及安全全性。。常用用的輻輻射滅滅菌吸吸收劑劑量為為25kGy。對最最終產(chǎn)產(chǎn)品、、原料料藥、、某些些醫(yī)療療器材材應盡盡可能能采用用低輻輻射劑劑量滅滅菌。。滅菌菌前，，應對對被滅滅菌物物品微微生物物污染染的數(shù)數(shù)量和和抗輻輻射強強度進進行測測定，，以評評價滅滅菌過過程賦賦予該該滅菌菌物品品的無無菌保保證水水平。。2滅菌效效果的的驗證證滅菌時時，應應采用用適當當?shù)幕瘜W或或物理理方法法對滅滅菌物物品吸吸收的的輻射射劑量量進行行監(jiān)控控，以以充分分證實實滅菌菌物品品吸收收的劑劑量是是在規(guī)規(guī)定的的限度度內(nèi)。。如采采用與與滅菌菌物品品一起起被輻輻射的的放射射性劑劑量計計，劑劑量計計要置置于規(guī)規(guī)定的的部位位。60Co-γ射線輻輻射滅滅菌法法驗證證時，，除進進行生生物指指示劑劑驗證證試驗驗外，，還應應確認認空載載和裝裝載時時滅菌菌腔內(nèi)內(nèi)的輻輻射劑劑量的的分布布圖、、滅菌菌物品品的吸吸收劑劑量及及最大大和最最小吸吸收劑劑量的的分布布、滅滅菌物物品的的均一一性、、滅菌菌腔內(nèi)內(nèi)物品品的裝裝載方方式等等。常常用的的生物物指示示劑為為短小小芽孢孢桿菌菌孢子子。2滅菌效效果的的驗證證三、、生物物指示示劑生物指指示劑劑是一一類特特殊的的活微微生物物制品品，可可用于于確認認滅菌菌設備備的性性能，，滅菌菌程序序的驗驗證、、生產(chǎn)產(chǎn)過程程滅菌可用于滅菌驗證中的生物指示劑一般是細菌的孢子。1、生物指示示劑用微生生物的基本本要求：（1）菌種的耐耐受性應應大于需要要滅菌物品品中所有可能能污染菌的的耐受性。。（2）菌種應無無致病性。。（3）菌株應穩(wěn)穩(wěn)定。存活活期長，易易于保存。。（4）易于培養(yǎng)養(yǎng)。若使用用休眠孢子子，生物指示劑中休休眠孢子含含量要＞90%。2、常用的生生物指示劑劑（1）濕熱滅菌菌法：嗜熱熱脂肪芽孢孢桿菌孢子子（2）干熱滅菌菌法：枯草草芽孢桿菌菌孢子（3）輻射滅菌菌法：短小小芽孢桿菌菌孢子（4）氣體滅菌菌法：枯草草芽孢桿菌菌孢子（5）過濾除菌菌法：缺陷陷假單孢滅菌條件應應予驗證。。滅菌時，，先將滅菌菌腔室先抽抽成真空，，然后通入入蒸汽使腔腔室內(nèi)達到到設定的溫溫濕度平衡衡的額定值值，再通入入經(jīng)過濾和和預熱的環(huán)環(huán)氧乙烷氣氣體。滅菌菌過程中，，應嚴密監(jiān)監(jiān)控腔室的的溫度、濕濕度、壓力力、環(huán)氧乙乙烷濃度及具體驗證方方法1濕熱滅菌常用的生物物指示劑：：嗜熱脂肪肪芽孢桿菌菌孢子。將將生物指示示劑和被滅滅菌物品儀儀一起放入入滅菌容器器內(nèi)，二層層設3個點，上層層中央1點，下層前前后部位各各1點；三層設設3個點，上層層與中央部部位各1個點，下層層前中后各各1個點。滅菌后取出出，56~60℃2干熱滅菌、氣體滅菌均可用枯草黑色變種芽孢作為生物指示劑驗證其效果。具體操作方法可參照生物指示劑說明書。五消毒與與滅菌消毒：用化化學的或物滅菌：用化學的或物理的方法殺滅或清除傳播媒介上的一切微生物，使其達到無活微生物存在的處理過程。滅菌是最徹底的消毒。1、消毒的的方法物理方法：：用物理因因素殺滅或或清除病原原及其它有干熱法濕熱法微波法紅外線法過濾吸附法化學方法：：利用化學學藥物殺