ELSD檢測器的選擇和主要的應用介紹

會計學1ELSD檢測器的選擇和主要的應用介紹AWENCE從分析到制備的解決方案

HPLC和GC柱，配件和儀器硅膠基色譜填料HPLC毛細柱和微徑柱

HPLC柱和小型儀器

制備級和工業(yè)級LC柱和裝柱服務

生物分離專用HPLC柱和填料

AWENCEHPLC液相系統(tǒng)及輸液泵第1頁/共86頁大綱常規(guī)檢測器的回顧ELSD的檢測原理ELSD與常規(guī)檢測器的比較ELSD在分析上的優(yōu)點AlltechELSD的介紹ELSD的維護質(zhì)量保證總結(jié)AWENCE第2頁/共86頁其它檢測器的介紹

紫外可見UV/Vis

示差折光RI

熒光Fluorescence

質(zhì)譜MassSpectrometry檢測器是高效液相色譜（HPLC）的核心部件之一，被喻為HPLC的眼睛。它的作用是將色譜柱流出物中樣品含量的變化轉(zhuǎn)換為可供觀測的信號，通常是轉(zhuǎn)換為電信號，以便自動記錄下來進行定性定量分析。AWENCE第3頁/共86頁檢測器的應用分布紫外可見65%示差和蒸發(fā)光10%電化學10%熒光8%質(zhì)譜4%其它3%AWENCE第4頁/共86頁紫外/可見檢測器UV/VIS優(yōu)點：易于操作可靠性費用相對低廉溶劑梯度兼容對樣品沒有破壞性相對靈敏度高局限性：沒有好的發(fā)光基團的化合物響應較差溶劑的使用上受紫外截止波長的限制AWENCE第5頁/共86頁熒光檢測器Fluorescence優(yōu)點：很好的靈敏度很好的選擇性受流速和溫度的變化影響很小局限性：線性范圍窄操作復雜-需要對化合物和儀器的變化了解透徹某些物質(zhì)如氧氣會熄滅熒光-必須嚴格脫氣能夠自然產(chǎn)生熒光的化合物不是很多衍生方法復雜AWENCE第6頁/共86頁示差折光檢測器RI優(yōu)點：通用性-對幾乎所有的物質(zhì)具有相應寬的動態(tài)線性范圍--104易于操作局限性:檢測靈敏度不高對于溫度和壓力的波動敏感平衡慢檢測既有正峰也有負峰不能進行梯度洗脫流動相預先混合后的效果好于泵在線混合的AWENCE第7頁/共86頁質(zhì)譜MS優(yōu)點:靈敏度高選擇性好提供化學結(jié)構(gòu)信息局限性:購買費用高操作復雜需要經(jīng)常維護定量分析困難AWENCE第8頁/共86頁蒸發(fā)光散射檢測器ELSD發(fā)展歷史檢測原理局限性優(yōu)點在分析中的應用AWENCE第9頁/共86頁發(fā)展歷史:

第一臺商業(yè)化的產(chǎn)品出現(xiàn)在80年代初期?

最早的應用集中在聚合物的分析上?90年代初期，更多其它方面的應用?

目前,應用在廣泛的領(lǐng)域AWENCE第10頁/共86頁ELSD行業(yè)超過26年的領(lǐng)先制造經(jīng)驗:500型2000型800型2000ES型3300型AWENCE第11頁/共86頁獨特的檢測方法：檢測三部曲:霧化溶劑的蒸發(fā)檢測ELSD可以對所有揮發(fā)性低于流動相的物質(zhì)作出準確檢測，而與被檢測物質(zhì)的化學基團關(guān)系不大，物理性質(zhì)類似的物質(zhì)響應一致，響應值與樣品的質(zhì)量成正比。AWENCE第12頁/共86頁第一步：霧化色譜柱流出物通過噴霧器針孔與氮氣混合形成均勻的霧狀液滴(氣溶膠)AWENCE第13頁/共86頁第二步：溶劑的蒸發(fā)液滴通過加熱的漂移管流動相蒸發(fā)干燥的樣品顆粒保留AWENCE第14頁/共86頁第三步：檢測樣品顆粒通過流動池激光“撞擊”顆粒被散射光電二極管檢測散射光檢測角度為90℃，避免虛假信號(>90℃折射/衍射光；<90℃反射光)AWENCE第15頁/共86頁兩種類型氣溶膠處理方式：A型-所有液滴進入漂移管及流動池(又稱為“無氣溶膠分流NoAerosolSplitting”)B型-部分液滴分流排掉；只有一部分進入漂移管及流動池(“氣溶膠分流AerosolSplitting”)AWENCE第16頁/共86頁A型ELSD-氣溶膠不分流操作所有樣品從噴霧器進入漂移管及流動池需要較高溫度才能完全蒸發(fā)流動相；A型ELSD只有不分流一種操作模式AWENCE第17頁/共86頁B型ELSD-氣溶膠分流操作部分樣品被排掉較低的溫度已足夠蒸發(fā)所有溶劑

B型ELSD只有分流一種操作模式AWENCE第18頁/共86頁Alltech2000(ES)型ELSD唯一提供兩種操作模式的ELSD，在任何流動相及樣品分析條件下均達到最佳結(jié)果AWENCE第19頁/共86頁一臺儀器，兩種操作模式：撞擊器(Impactor)關(guān)-所有液滴進入漂移管及流動池(A型ELSD-無分流)撞擊器(Impactor)開-部分液滴被排除，只有一部分進入漂移管及流動池(B型ELSD-氣溶膠分流)采用新型專利“氣溶膠分流技術(shù)”

USPatent#6229605

AWENCE第20頁/共86頁撞擊器關(guān)模式撞擊器與氣溶膠流向平行所有樣品流過漂移管到達流通池最適用于非揮發(fā)性樣品及揮發(fā)性溶劑(大部分為有機)DriveShaftNebulizerOpticsImpactor‘Off’NebulizerDriveShaftImpactor‘Off’OpticsExhaustDriftTubeNebulizerImpactorDrainAWENCE第21頁/共86頁撞擊器開模式撞擊器垂直于氣溶膠流向，部分液滴碰上撞擊器從廢液管排掉;其余穿過撞擊器，經(jīng)過漂移管到達流動池最適用于半揮發(fā)性樣品及低揮發(fā)性溶劑(大部分為水溶液)DriveShaftNebulizerImpactor‘On’OpticsNebulizerDriveShaftImpactor‘On’NebulizerDrainImpactorDriftTubeExhaustOpticsAWENCE第22頁/共86頁撞擊器關(guān)-最適合非揮發(fā)性樣品Column: Alltech700CHCarbohydrateColumn 10μm,300x6.5mmMobilePhase: 100%WaterFlowrate: 0.5mL/min1.蜜三糖(50μg/mL)2.

乳糖(50μg/mL)3.

葡萄糖(50μg/mL)4.

甘露糖(50μg/mL)Column: Alltech700CHCarbohydrateColumn 10μm,300x6.5mmMobilePhase: 100%WaterFlowrate: 0.5mL/min#9206#9205Impactor‘On’Impactor‘Off’碳水化合物非揮發(fā)性樣品在撞擊器“關(guān)”的情況下也不揮發(fā)，全部進入流動池，得到最高靈敏度

AWENCE第23頁/共86頁撞擊器關(guān)-最適合揮發(fā)性溶劑有機溶劑在較低溫度蒸發(fā)，在撞擊器“關(guān)”的情況下，也會完全蒸發(fā)，B型ELSD任何條件下均分流，造成樣品損失，降低檢測靈敏度Column: AlltechEconosphere?,C18, 5μm,150x4.6mmMobilePhase: Methanol:Water(90:10)Flowrate: 0.8mL/minColumn: AlltechEconosphere?,C18, 5μm,150x4.6mmMobilePhase: Methanol:Water(90:10)Flowrate: 0.8mL/min1.

n-癸基-b-D-吡喃糖苷(5μg/mL)2.n-辛基-b-D-吡喃糖苷(5μg/mL)3.n-十二烷基-b-D-吡喃糖苷(5μg/mL)葡萄糖苷分析Impactor‘On’Impactor‘Off’#9180#9179AWENCE第24頁/共86頁撞擊器開-最適合半揮發(fā)性樣品在撞擊器開情況下，可以較低溫蒸發(fā)溶劑，防止半揮發(fā)性樣品蒸發(fā)防腐劑分析Column: AlltechEconosphere?,C18, 5μm,150x4.6mmMobilePhase: Methanol:Water(90:10)Flowrate: 0.8mL/minColumn: AlltechEconosphere?,C18, 5μm,150x4.6mmMobilePhase: Methanol:Water(90:10)Flowrate: 0.8mL/min1.羥基苯甲酸甲酯2.羥基苯甲酸乙酯3.羥基苯甲酸丙酯4.羥基苯甲酸丁酯#9202Impactor‘Off’Impactor‘On’#9201AWENCE第25頁/共86頁撞擊器開-在幾乎室溫下檢測半揮發(fā)樣品Column: Prevail?CarbohydrateES,5μm,250x4.6mmMobilePhase:Acetonitrile:0.04%AmmoniumHydroxide(80:20)Flowrate: 1.0mL/min1.

Glycerol甘油AWENCE第26頁/共86頁ELSD的局限性1.只能使用揮發(fā)性的流動相2.

樣品的揮發(fā)性必須要小于流動相3.

檢測器響應是非線性的AWENCE第27頁/共86頁揮發(fā)性的流動相改性劑#1VolatileMobilePhaseModifierspKapKbpHRangeBPMPAcidsTrifluoroaceticAcid三氟乙酸0.313.7072.4°CFormicAcid甲酸3.7510.25100.7°CAceticAcid醋酸4.759.25116.0°CCarbonicAcid碳酸6.377.63—BasesAmmonia氨水9.254.75-33.35°CMethylamine甲胺10.813.1916.6°CEthylamine二乙胺10.663.34-6.3°CTriethylamine三乙胺11.012.9989.3°CBuffersAmmoniumFormate甲酸胺3.0-5.0120°CPyridiniumFormate甲酸吡啶翁3.0-5.0AmmoniumAcetate乙酸胺3.8-5.8111°CPyridiniumAcetate乙酸吡啶翁4.0-6.0AmmoniumCarbonate(forreversephase)碳酸胺(用于反相)8.0(adjusted)AmmoniumCarbonate碳酸胺5.5-7.5and9.3-11.3AWENCE第28頁/共86頁揮發(fā)性的流動相改性劑#2VolatileMobilePhaseModifierspKapKbpHRangeBPMPIon-PairReagentsPentafluoropropionicAcid五氟丙酸~0.696-97°CHeptafluorobutyricAcid七氟丁酸~0.6120°CNonafluoropentanoicAcid九氟戊酸140°CPentadecafluoroocatanoicAcid十五氟辛酸~0.6189°CTridecafluoroheptanoicAcid十三氟庚酸~0.6175°CAWENCE第29頁/共86頁載氣流速與漂移管溫度載氣流速和漂移管溫度是ELSD中可以調(diào)節(jié)的兩個重要參數(shù)，建立適當?shù)腍PLC-ELSD分析方法需要對這兩個參數(shù)進行優(yōu)化。優(yōu)化的原則是降低噪聲到可以接受的程度，并盡量提高信噪比。AWENCE第30頁/共86頁載氣流速與漂移管溫度漂移管溫度對基線水平和噪音的影響并無明顯的規(guī)律性。低于某一溫度，基線水平較高，因為低于這一溫度，流動相得不到充分揮發(fā)，而鹽的加入將會提高這一溫度，因為鹽的揮發(fā)需要更高的溫度，但并不是漂移管溫度越高越好，因為溫度太高會使流動相沸騰，反而會增加背景噪音，同時還有可能導致溶質(zhì)的部分揮發(fā)，降低信噪比。故最優(yōu)溫度應為在流動相（包括其中所含的鹽）基本揮發(fā)的基礎上，產(chǎn)生可接受噪音的最低溫度AWENCE第31頁/共86頁載氣流速與漂移管溫度一般來說，在其它條件不變的情況下，載氣流速越小，形成的物質(zhì)粒子半徑越大，對激光的散射能力越強，相應的響應信號越大。但并不是載氣流速越小越好，因為當載氣流速太小時，流動相不能完全揮發(fā)，背景噪音會增加，信噪比也會降低。最優(yōu)載氣流速應是在可接受噪音的基礎上，產(chǎn)生最大檢測響應值時的最低流速。AWENCE第32頁/共86頁如何應對非線性響應的檢測器？選擇2階方程或者冪指曲線方程使用曲線的僅僅線性部分使用log/log雙對數(shù)方法產(chǎn)生線性曲線即:對照品的濃度和面積同時取對數(shù),至少兩個點得到直線方程在中國藥典2005版中，中藥計算采用兩點雙對數(shù)方法,抗生素計算采用三點雙對數(shù)方法散射光的響應值與粒子質(zhì)量的關(guān)系：

I＝kmb取對數(shù)：

lgI＝blgm＋lgkm：待測組分的粒子質(zhì)量和

I：待測組分所產(chǎn)生的散射光光強

k,b：常數(shù)AWENCE第33頁/共86頁Log-Log線性方程AWENCE第34頁/共86頁ELSD--功能強大的HPLC檢測器通用性高-可檢測任何揮發(fā)性低于流動相的化合物靈敏度好-比示差及低波長紫外靈敏一致的響應-給出準確的樣品濃度用途廣泛-梯度相容，改善分離及縮短分析時間AWENCE第35頁/共86頁ELSD響應因子的一致性不同的物質(zhì)在蒸發(fā)光散射檢測器中幾乎具有相同的響應因子，這種響應因子的一致性，使純度分析結(jié)果和多組分物質(zhì)的相對比例測定結(jié)果更準確。在無合適對照品的情況下，采用另外一種含量已知的物質(zhì)作內(nèi)標，測定未知物含量成為可能。這一點對組合分子庫、無紫外發(fā)色團物質(zhì)的新藥基準品的建立尤為有用。AWENCE第36頁/共86頁ELSD比較其它幾種檢測器的優(yōu)勢示差RI紫外可見UV/Vis熒光Fluorescence質(zhì)譜MSAWENCE第37頁/共86頁ELSD相比示差的優(yōu)勢: 示差檢測器的限制 ELSD優(yōu)點溫度變化會引起基線不穩(wěn)定

不受環(huán)境溫度影響可能出現(xiàn)負峰均是正峰不可以用梯度洗脫梯度洗脫兼容受溶劑峰干擾溶劑無響應，無溶劑峰靈敏度差ng級的檢測限AWENCE第38頁/共86頁ELSD不會出負峰五糖,1.5mg/mLELSD RI RI (反轉(zhuǎn)極性)AWENCE第39頁/共86頁ELSD相對RI，提高了檢測靈敏度和基線穩(wěn)定性RIELSD10277102781.

Fructose果糖2.

Glucose葡萄糖3.Sucrose蔗糖Column: Prevail?CarbohydrateES,5μm,53x7mm(PartNo.35104)MobilePhase:Acetonitrile:Water(75:25)Flowrate: 2.0mL/minColumnTemp:30°CAWENCE第40頁/共86頁碳水化合物的梯度洗脫#7576(Isocratic)1.核糖2.木糖3.果糖4.葡萄糖5.蔗糖6.麥芽糖7.乳糖8.棉子糖1.果糖2.葡萄糖3.蔗糖4.麥芽糖5.乳糖#7570(Gradient)CarbohydratesAWENCE第41頁/共86頁ELSD相比紫外檢測器的優(yōu)勢:UV的局限性ELSD的優(yōu)點

只能檢測吸收紫外或可見光 ?檢測揮發(fā)性低于溶劑的任的化合物 何化合物檢測基于樣品的消光系數(shù)

?檢測基于樣品濃度?低波長紫外檢測作梯度洗脫時 ?梯度洗脫時基線穩(wěn)定出現(xiàn)基線漂移 ?溶劑峰會干擾

?溶劑沒有響應，無溶劑峰?溶劑選擇受其紫外末端吸收限制

?可用任何揮發(fā)性的溶劑

AWENCE第42頁/共86頁甾體化合物#79411.雌酮-3-硫酸鈉,100ng2.

b-雌二醇-17-b-D-葡萄糖苷酸鈉,100ng3.5b-孕烷-3a,20a-二醇-葡萄糖酸苷,220ng#7940

Column: Alltima?C18,5μm,150x2.1mm (PartNo.88370)MobilePhase:

A:0.1%TFAinWater

B:0.1%TFAinMethanolGradient:

Time: 0 10 18

%B: 60 100 100FlowRate: 0.2mL/minAWENCE第43頁/共86頁10446ELSD顯示在UV譜圖中未檢測到的成分

Lotrimim?AFTopicalSolution1.PEG2.ClotrimazoleColumn: Alltima?C18,5μm,150x4.6mm(PartNo.88302)MobilePhase:

A:Water B:MethanolGradient:

Time: 0 8 10 2025

%B: 30 50 100 100 30FlowRate: 1.0mL/minColumnTemp.: 40°C#10446#10447AWENCE第44頁/共86頁ELSD比UV更能準確反映樣品實際的量1:1混合物1.Ephedrine麻黃素2.Caffeine咖啡因1045010449Column: Alltima?HPEPSC18,5μm,150x4.6mm(PartNo.87715)MobilePhase: 1%AceticAcid:Methanol:Acetonitrile(70:20:10)FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第45頁/共86頁ELSD檢測沒有發(fā)光團的化合物不需要衍生1.lauricAcid2.MyristicAcid3.PalmiticAcid4.StearicAcid5.ArachidicAcid6.BehenicAcid9539Column: Prevail?OrganicAcid,5μm,150x4.6mm(PartNo.88640)

MobilePhase:(75:25)Acetonitrile:Methanol

FlowRate:1.0mL/min脂肪酸AWENCE第46頁/共86頁ELSD在分離使用的溶劑選擇上有特點1.LGG2.LGL3.LLL4.OGL5.PGL6.OLL7.OGO+PLL8.OOO10047Column: Alltima?C18,5μm,250x4.6mm(PartNo.88056)

MobilePhase:

A:AcetonitrileB:Dichloromethane

Gradient: Time: 0 40

%B: 30 50FlowRate: 1.0mL/minTriglyceridesinEveningPrimoseOil月見草油中的甘油三酯二氯甲烷對于高分子量的甘油三酯溶解度高.AWENCE第47頁/共86頁熒光檢測器的局限性

大多需要柱前或柱後衍生

無需衍生熒光檢測器的限制 ELSD的優(yōu)點AWENCE第48頁/共86頁柱前衍生法分析氨基酸—紫外&熒光

1. 天門冬氨酸

2. 谷氨酸

3. 絲氨酸

4. 甘氨酸

5. 組氨酸 6. 蘇氨酸

7. 丙氨酸 8. 精氨酸

9. 脯氨酸

10. 酪氨酸

11. 蛋氨酸

12. 纈氨酸

13. 半胱氨酸

14. 異亮氨酸

15. 亮氨酸

16. 苯丙氨酸

17. 賴氨酸

#7596#5164AWENCE第49頁/共86頁

1.Gly2.Ser/Asn3.Asp4.Gln5.Ala/Thr6.Glu7.Cys/Lys8.His9.Pro10.Arg11.Val12.Met13.Tyr14.Ile15.Leu16.Phe17.TrpColumn: Prevail?C18,5μm,250x4.6mm(PartNo.99210)MobilePhase:

A:5mMHeptafluorobutyricAcid,pH1.0w/0.7%TFAB:AcetonitrileGradient:

Time: 0 6 8 25

%B: 0 0 15 35FlowRate: 1.0mL/minELSD對無衍生氨基酸分析AWENCE第50頁/共86頁雖然MS是通用性的檢測器，ELSD也有自己的優(yōu)勢投入和操作的成本低操作容易維護簡單定量相比更準確

對于色譜條件的要求在ELSD和MS上是相似的，所以ELSD方法能夠方便的應用在MS上不需要修改。在ELSD上進行MS的方法研究，能夠節(jié)省MS用于實際樣品的分析

AWENCE第51頁/共86頁并聯(lián)使用UV/ELSD/MS能夠得到最多的結(jié)構(gòu)和濃度信息1.Aspartame2.Hydrocortisone3.Reserpine4.TerfenadineColumn: ZORBAX?StableBondC18,3.5μm,50x4.6mm (PartNo.835975-902)MobilePhase:

A:0.025%FormicAcidinWater

B:0.025%FormicAcidinAcetonitrileGradient:

Time: 0 1 5 5.1

%B: 25 0 0 25FlowRate: 1.0mL/minColumnTemp:30°C

Chrom#10456#10458#10457AWENCE第52頁/共86頁總結(jié):用ELSD替代或補充現(xiàn)有檢測器的益處消除衍生簡化方法比RI有更好的靈敏度和穩(wěn)定性給其它檢測器作補充，能夠看到哪些物質(zhì)沒有檢測到能夠比UV&MS得到更準確的樣品量的信息AWENCE第53頁/共86頁ELSD更多的優(yōu)點：通用性的檢測器:-可以使用微徑柱來提高靈敏度-條件方便放大到制備-在極端的梯度條件下進行快速分離檢測沒有發(fā)光團的化合物的理想選擇:-Lipids磷脂-Polymers聚合物-Surfactants表面活性劑-Carbohydrates碳水化合物AWENCE第54頁/共86頁在ELSD上用微徑柱檢測1.

VitaminA

(100ngon-column)2.

VitaminE

(160ngon-column)3.

VitaminK1

(130ngon-column)Column: Alltima?C18,3μm,150x1mm(PartNo.88384)MobilePhase:Methanol:Chloroform(90:10)FlowRate: 50μL/min#10279AWENCE第55頁/共86頁制備時通過ELSD控制餾分收集器，過濾UV無吸收化合物Column: Alltima?C18,5μm,150x10mm(PartNo.81102)MobilePhase:Water:Acetonitrile(55:45)FlowRate: 5.0mL/minColumnTemp.: 25°C1.Ethinamate(5.0mg/mL)#10438AWENCE第56頁/共86頁ELSD對流動相的組成改變不響應，允許在極端梯度條件下的快速分離1.

Ephedrine

2.

Acetylsalicylicacid

3.

Diphenhydramine

4.

Trimipramine

Column: Alltech?

Alltima?HPC18,3μm,33x7.0mm(PartNo.87671)MobilePhase: A:0.1%TFAinWaterB:0.1%TFAinAcetonitrile

Gradient: Time: 0 3

%B: 10 90

FlowRate: 2.5mL/min

ColumnTemp: 30°C

#10451AWENCE第57頁/共86頁主要的應用領(lǐng)域Pharmaceuticals藥物Non-chromophoricdrugs沒有發(fā)光團的藥品Excipients賦性劑Impurities雜質(zhì)Aminoacids氨基酸Aminoglycosideantibiotics氨基糖甙類Nutraceuticals

天然產(chǎn)物Ginseng人參AstragalosideIV黃芪甲苷Ginkgolides銀杏Glucosamine氨基葡萄糖Polymers/Surfactants聚合物/表面活性劑PEGs Polysorbate聚山梨酸酯Tween PVA聚乙烯醇GPECDimethiconeLipids脂類Phospholipids磷脂Triglycerides甘油三酸酯Fattyacids脂肪酸Carbohydrates碳水化合物Simplesugars單糖Oligomers寡糖Sugaralcohols糖醇AWENCE第58頁/共86頁2005版中國藥典中用ELSD檢測的藥品名稱序號產(chǎn)品名稱檢測化合物色譜條件藥典頁碼1地膚子地膚子皂苷甲醇－水－冰醋酸=85:15:0.2一部P812路路通路路通酸甲醇－水－冰醋酸=87:13:0.1一部P2053黃芪

黃芪甲苷C18柱，乙腈：水=32：68一部P212

4炙黃芪

黃芪甲苷C18柱，乙腈：水=32：68一部P213

5銀杏葉

萜類內(nèi)酯白果內(nèi)酯C18柱，甲醇:四氫呋喃：水=25：10：65

一部P220

6銀杏葉提取物

萜類內(nèi)酯白果內(nèi)酯C18柱，正丙醇：四氫呋喃：水=1：15：84一部P282

7知母

拔契皂苷元

C18柱，甲醇：水=95：5一部P148

8意苡仁

甘油三油酸酯

C18柱，乙腈：二氯甲烷=65：35一部P260

9浙貝母

貝母素

C18柱，乙腈：水：二乙胺=70：30：0.3

一部P205

10乙肝寧顆粒黃芪甲苷甲醇－水=75:25一部P29011玉屏風口服液黃芪甲苷乙腈－水=35:65一部P40912補中益氣丸（水丸）黃芪甲苷C18柱，乙腈：水=35：65一部P48013銀杏葉片萜類內(nèi)酯白果內(nèi)酯C18柱，正丙醇：四氫呋喃：水=1：15：84一部P597AWENCE第59頁/共86頁2005版中國藥典中用ELSD檢測的藥品名稱序號產(chǎn)品名稱檢測化合物色譜條件藥典頁碼13硫酸卡那霉素卡那霉素

C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=95：5

二部P724

14硫酸慶大霉素

慶大霉素小諾霉素

C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=92：8二部P730

15硫酸依替米星

依替米星奈替米星C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=84：16二部P74016硫酸小諾霉素

小諾霉素/慶大霉素C1aC18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=94：6二部P718AWENCE第60頁/共86頁ELSD對氨基葡萄糖有比RI和UV更好的響應Column: Prevail?CarbohydrateES,5μm,150x4.6mm(PartNo.35102)MobilePhase:Acetonitrile:Water(65:35)FlowRate: 1.0mL/min1.Glucosamine(1mg/mL)#10412#10413#10411AWENCE第61頁/共86頁使用ELSD可以梯度洗脫完全分離多種磷脂,靈敏度高

1.

Cholesterol

膽固醇2.

Palmiticacid

棕櫚酸3.

Phosphatidylethanolamine磷脂酰乙醇胺4.

Phosphatidylserine

磷脂酰絲氨酸5.

Phosphatidylcholine

卵磷脂6.

Sphingomyelin神經(jīng)鞘磷脂Column:

Alltech?

Allsphere?Silica,3μm,100x4.6mm(PartNo.778382)MobilePhase:

A:IPAB:HexaneC:WaterGradient:

Time: 0 7 15

%B: 40 40 40

%C: 2 8 8 FlowRate: 1.25mL/minAWENCE第62頁/共86頁ELSD檢測糖醇-高靈敏度和穩(wěn)定的基線

Column: Prevail?CarbohydrateES,5μm,250x4.6mm(PartNo.35101)MobilePhase: Acetonitrile:Water(70:30)FlowRate: 1.0mL/min1.iso-Erythritol異赤藻糖醇2.Xylitol木糖醇3.Mannitol甘露醇4.Maltitol麥芽糖醇#9352糖醇AWENCE第63頁/共86頁ELSD輕松檢測困難化合物--Tween805%Tween80Column:

Alltech?

Alltima?C18,5μm,250x4.6mm(PartNo.88056)MobilePhase: Water:Methanol(60:40)FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第64頁/共86頁ELSD梯度洗脫分離玉米糖漿低聚糖

1.Dextrose2.Maltose3.Maltotriose4.Maltotetraose5.Maltopentaose6.Maltohexaose

7.Maltoheptaose8.Maltooctaose9.Maltononaose10.Maltodecaose11.Maltoundecaose12.Maltododecaose13.Maltotridecaose14.Maltotetradecaose15.MaltopentadecaoseColumn:

Alltech?

Prevail?CarbohydratesES300A,5μm,250x4.6mm(PartNo.35101)MobilePhase:

A:AcetonitrileB:WaterGradient:

Time: 0 15

%B: 35 50FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第65頁/共86頁無需衍生檢測橄欖油中的甘油三酯1.

1,2-Dilinoleyl-3-Oleyl-rac-glycerol(LLO)

2.

1,2-Dilinoleyl-3-Palmityl-rac-glycerol(LLP)

3.

1,2-Dioleyl-3-linolein-rac-glycerol(OOL)

4.

1-Palmityl-2-Olein-3-linolein-rac-glycerol(POL)

5.

1,2-Dipalmityl-3-linolein-rac-glycerol(PPL)

6.

Triolein(OOO)

7.

1,2-Dioleyl-3-palmityl-rac-glycerol(OOP)

8.

1,2-Dipalmityl-3-oleyl-rac-glycerol(PPO)

9.

1,2-Dioleyl-3-stearyl-rac-glycerol(OOS)

Column:

Alltech?

Alltima?C18,3μm,150x4.6mm(PartNo.91387)MobilePhase:

A:

Dichloromethane

B:AcetonitrileGradient:

Time: 0 10 18 20

%B: 70 55 70 70FlowRate: 1.5mL/min脂肪和油一般含有特征性的甘油三酯,分析甘油三酯可以鑒定脂肪和油的品種.AWENCE第66頁/共86頁摻有植物油的橄欖油的鑒定分析1.

LLL2.LLO3.LLP4.OOL5.POL6.

OOO7.OOP8.PPO9.OOSColumn: Alltima?C18,3μm,150x4.6mmMobilePhase: A:Dichloromethane

B:AcetonitrileGradient: Time: 0 10 18 20 %B: 70 55 70 70Flowrate: 1.5mL/minDetector: ELSD2000橄欖油含有大量的油酸甘油三酯,而不含亞麻酸甘油三酯.后者卻存在于菜油中,顯示于摻有菜油的橄欖油譜圖中.AWENCE第67頁/共86頁生物柴油(BiodieselPoster)生產(chǎn)中的反應和質(zhì)量監(jiān)控生物柴油是一種可再生、生物可降解和無毒燃料,它可以通過動植物油的轉(zhuǎn)酯反應來制備.作為天然柴油的替代物.目前國內(nèi)外學者廣泛采用的轉(zhuǎn)酯法,即三甘油酯在酸、堿或酶等催化劑作用下經(jīng)轉(zhuǎn)酯反應制備生物柴油MAGs,DAGs和未反應的TAGs會造成污染影響生物柴油的品質(zhì)AWENCE第68頁/共86頁BiodieselContaminatedwithMono-,Di-andTriacylglycerolsUnreactedTryacylglycerols(豆油SoyOil)

Column: Alltima?HPC18-HL,5μm,250X4.6mmMobilePhase:

A:Acetonitrile

B:DichloromethaneGradient:Time05303235%B01570700Flowrate: 1.0ml/minAWENCE第69頁/共86頁氨基糖苷類抗生素的ELSD分析(中國藥典2005)

Column: ApolloC18,5μm,250x4.6mmMobilePhase:0.2MTrifluoroaceticAcid:Methanol(94:6)FlowRate: 0.6mL/min1.Sulfate2.GentamicinC1a3.GentamicinC24.GentamicinC2b5.GentamicinC2a6.GentamicinC1#10425慶大霉素C組分

*中檢所抗生素室AWENCE第70頁/共86頁銀杏葉提出物中內(nèi)酯含量的ELSD測定(中國藥典2005)

銀杏葉提出物的內(nèi)酯類成份決定了其藥理作用，HPLC-RI法靈敏度與穩(wěn)定性均不理想；若采用紫外分析因為內(nèi)酯類成份吸收差，最大吸收波長在219nm，受試劑末端吸收影響很大。1.銀杏苦內(nèi)酯C2.白果內(nèi)酯3.銀杏苦內(nèi)酯A4.銀杏苦內(nèi)酯BColumn: PlatinumC18,5μm,250x4.6mmMobilePhase:H2O:MeOH:THF=75:20:10FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第71頁/共86頁黃芪中黃芪甲苷的ELSD分析(CHP2005)

黃芪甲苷常作為指標性成份用于黃芪藥材的質(zhì)量監(jiān)控，因為只在220nm有弱的末端吸收，過去未能使用HPLC法定量，ELSD有通用響應，使用HPLC-ELSD法干擾少，分離度高.1.黃芪甲苷Column: ApolloC18,5μm,250x4.6mmMobilePhase:CAN:H2O=(32:68)FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第72頁/共86頁三七藥材及其制劑中

三七皂苷R1,人參皂苷Rg1及Rb1的含量

圖三七藥材及血塞通注射液HPLC色譜圖a.對照品b.三七藥材c.血塞通注射液1.三七皂苷R12.人參皂苷Rg13.人參皂苷Rb1Column:

Alltech?

Alltima?C18,5μm,150x4.6mmMobilePhase:

A:WaterB:AcetonitrileGradient:

Time: 0 21

%B: 30 60FlowRate: 0.6mL/minAWENCE第73頁/共86頁AlltechELSD2000ES光路和電子元件進行更新布儒斯特角光阱,增加光阱尾吹30mW的激光光源光池涂四氟乙烯的抗腐蝕涂層降低背景噪音，比2000ELSD提高一個數(shù)量級的靈敏度AWENCE第74頁/共86頁關(guān)于布儒斯特角

當反射光線和折射光線的傳播方向互相垂直時,入射光線的偏振角稱為布儒斯特角.當透鏡只能通過垂直方向的偏振光時,便可擋住部分散射的光線.自然光在兩種各向同性媒質(zhì)分界面上反射、折射時，反射光和折射光都是部分偏振光。反射光中垂直振動多于平行振動，折射光中平行振動多于垂直振動。

AWENCE第75頁/共86頁ELSD2000ES性能更新靈敏度的挑戰(zhàn)一種措施是僅僅增加光強，但是同時會增加基線的噪音，導致LOD和信噪比沒有變化。ELSD2000ES克服這種障礙，專利設計的布儒斯特角光阱，當光強增加時，信號的增強遠大于噪音的增加。2000ES結(jié)合布儒斯特角光阱和30mW的光源為一體。AWENCE第76頁/共86頁ELSD2000ES靈敏度更新對相同的濃度的樣品有多于10倍的信噪比(S/N)增長增強最小檢出限(LOD)AWENCE第77頁/共86頁靈敏度比較–2000ESvs20002000ES對相同量的氫化可的松增加靈敏度1.Hydrocortisone(100ngoncolumn)Column: Alltima?C18,5μm,4.6x250mm (PartNo.88056)MobilePhase:

Water:Acetonitrile(55:45)FlowRate: 1.0mL/minAWENCE第78頁/共86頁靈敏度比較表–與其它品牌的