免疫檢驗(yàn)第十二章免疫組化

免疫檢驗(yàn)第十二章免疫組化第一頁，共六十九頁，2022年，8月28日活體組織：組織切片：冷凍切片、石蠟切片（最常用）；大?。?×1×0.5cm）；取病變組織與正常組織交界處；避免對組織標(biāo)本的損傷和擠壓。印片：肝、脾、淋巴結(jié)等器官或組織(經(jīng)新鮮標(biāo)本最大面積剖開，充分暴露病灶，將載玻片輕輕壓與組織切面，細(xì)胞粘附于玻片上，然后固定）（缺點(diǎn)是細(xì)胞分布不均勻，細(xì)胞有重疊）各種體液、穿刺液：可直接涂片（血液、組織液等）或離心后涂片（細(xì)胞少腦脊液、腹水等）。培養(yǎng)細(xì)胞：懸浮細(xì)胞離心后涂片；貼壁細(xì)胞可爬片。取材時間要早（24小時以內(nèi)），避免組織自溶，使抗原變性消失或嚴(yán)重彌散。組織切塊厚度不易超過0.5cm，以便固定液的及時滲透及脫水。第二頁，共六十九頁，2022年，8月28日①凝固蛋白，終止細(xì)胞內(nèi)酶的作用,防止細(xì)胞自溶；固定細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)②保持組織細(xì)胞的抗原性③防止細(xì)胞層脫落④去除細(xì)胞內(nèi)的脂類（妨礙抗體結(jié)合）⑤防腐

不損傷組織細(xì)胞的固有形態(tài)、結(jié)構(gòu)、抗原性和細(xì)胞膜的通透性；不干擾固定后的抗原與抗體的識別與結(jié)合。固定時間：一般12小時內(nèi)，不易超過24小時。第三頁，共六十九頁，2022年，8月28日固定劑的選擇：所有的標(biāo)本固定必須根據(jù)其性質(zhì)及所進(jìn)行的組織化學(xué)反應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌?。如甲醇、丙酮、甲醛等（根?jù)抗原的耐受性選擇）

缺點(diǎn)：抗原容易被掩蓋，特別是甲醛固定后，形成醛鍵或羧甲基，使蛋白交聯(lián)封閉部分抗原表位。第四頁，共六十九頁，2022年，8月28日能做石蠟切片的就能做冰凍切片，能做冰凍切片的不一定能做石蠟切片

石蠟切片：優(yōu)點(diǎn)：對組織結(jié)構(gòu)形態(tài)保存好，對組織的定位很準(zhǔn)確，是觀察組織和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的理想方法，可以用于回顧性研究。缺點(diǎn)：抗原常被封閉和破壞。對抗原的保存不如冰凍切片。冰凍切片：優(yōu)點(diǎn)：能避免石蠟切片因固定，脫水，浸蠟等對抗原的損失，較好的保存組織抗原的免疫活性，適用于不穩(wěn)定的抗原。缺點(diǎn)：不易保存（-800C）；細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞抗原結(jié)構(gòu)，造成抗原的彌散使定位不準(zhǔn)確。

第五頁，共六十九頁，2022年，8月28日二、抗原的保存與修復(fù)抗原修復(fù):免疫組化在制片的過程中由于廣泛的蛋白交聯(lián)而使其組織的某些抗原決定簇發(fā)生遮蔽、致使免疫細(xì)胞化學(xué)的信號減弱或消失等不良效應(yīng)。使遮蔽的組織抗原決定簇重新暴露的方法，即抗原修復(fù)。第六頁，共六十九頁，2022年，8月28日常用的方法有：

酶消化法：胃蛋白酶、胰蛋白酶和無花果酶鹽酸水解暴露抗原法：注意溫度和時間微波爐恢復(fù)抗原法：微波是一種高頻電磁波，可以打開蛋白質(zhì)之間的交聯(lián)健，從而使抗原修復(fù)。高壓鍋恢復(fù)抗原法煮沸恢復(fù)抗原法抗原修復(fù)液中的化學(xué)成分或離子與部分抗原表位結(jié)合產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，增加了細(xì)胞和組織的通透性，便于抗原抗體的充分結(jié)合。高溫可以使某些已經(jīng)封閉的抗原表位得以重新暴露和修復(fù)第七頁，共六十九頁，2022年，8月28日第八頁，共六十九頁，2022年，8月28日三、抗體的處理與保存（一）抗體的選擇注意選擇具有高特異性、穩(wěn)定的優(yōu)質(zhì)抗體多克隆抗體：敏感性較高、特異性相對較低單克隆抗體：特異性較高、敏感性相對較低（二）抗體的稀釋抗原抗體反應(yīng)要比例合適才能達(dá)到預(yù)期效果使用前根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出抗體的最佳稀釋度第九頁，共六十九頁，2022年，8月28日（三）抗體的保存分裝密封保存，避免對抗體的污染并注明標(biāo)記（批號、名稱、效價、量）根據(jù)廠家提供的保存條件保存避免反復(fù)凍融而使抗體效價降低第十頁，共六十九頁，2022年，8月28日(三）陰性結(jié)果和抗原不表達(dá)（五）免疫組化結(jié)果與HE染色結(jié)果(一）必須設(shè)立對照（二）陽性結(jié)果（四）特異性染色與非特異性染色四、免疫組化的結(jié)果判斷第十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日確證實(shí)驗(yàn)

(一）必須設(shè)立對照空白實(shí)驗(yàn)替代試驗(yàn)吸收或阻斷試驗(yàn)對照實(shí)驗(yàn)：

陽性對照：選擇含已有抗原的標(biāo)本(證明顯示程序正確，尤其實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陰性時更為重要）陰性對照：選擇不含已知抗原的標(biāo)本（排除假陽性）第十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日確證實(shí)驗(yàn)：

空白實(shí)驗(yàn)：PBS（排除內(nèi)源性酶）

替代試驗(yàn)：同一動物免疫前的非免疫血清（證明陽性反應(yīng)不是由異嗜性抗原引起的非特異性反應(yīng)）（這可證明待檢切片中陽性結(jié)果不是抗體以外混雜的血清成分所致，而是所用特異性抗體與組織細(xì)胞內(nèi)待檢抗原的特異性反應(yīng)的結(jié)果。）

吸收或阻斷試驗(yàn)：用過量的已知抗原與特異性抗體反應(yīng)，本已經(jīng)是陽性的標(biāo)本應(yīng)呈陰性（證明免疫組化的陽性結(jié)果是與天然抗原相同的抗原抗體反應(yīng)。）第十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日顯色分布:（二）陽性結(jié)果可以作為判定抗原定位的依據(jù)（三）陰性結(jié)果及抗原不表達(dá)第十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日（四）特異性染色與非特異性染色

特異性染色

非特異性染色分布在特定的部位，顯色不均一無分布規(guī)律，均勻顯色特異性染色非特異性染色分布在特定的部位,具結(jié)構(gòu)性無分布規(guī)律，常出現(xiàn)在切片邊緣、刀痕或皺折部位及壞死或擠壓的細(xì)胞區(qū)域由于細(xì)胞內(nèi)抗原含量不同，所以顯色不均一不限于單個細(xì)胞，而是累及一片細(xì)胞，均勻顯色陽性與陰性細(xì)胞相互交雜，同一切片上顯色強(qiáng)度不一細(xì)胞和周圍的結(jié)締組織均無區(qū)別的著色第十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日出現(xiàn)假陰性的原因第十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日出現(xiàn)假陽性的原因第十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日（五）免疫組化結(jié)果與HE染色結(jié)果第十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日五、質(zhì)量控制（一）試劑質(zhì)量控制

抗體特異性、敏感性測試,抗體最佳稀釋度的選擇,稀釋劑,抗體孵育溫度、時間非特異性染色：縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是最重要的一條。一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。（二）儀器的質(zhì)量控制相關(guān)技術(shù)設(shè)備、儀器和器具定期校對、消毒第十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日（三）操作過程質(zhì)量控制操作：步驟是否正確規(guī)范；每日之間、操作人員之間的變異；試劑復(fù)溶、狀態(tài)是否良好標(biāo)本：陰性、陽性或自身組織對照三種類型質(zhì)控品，可用于監(jiān)控標(biāo)本制備、操作過程、染色步驟、試劑質(zhì)量等問題引起的誤差第二十頁，共六十九頁，2022年，8月28日★酶免疫組織化學(xué)技術(shù)酶標(biāo)記已知抗體（抗原），與標(biāo)本中靶抗原（抗體）發(fā)生反應(yīng)，催化底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，在顯微鏡下識別標(biāo)本中抗原（抗體）的分布位置和性質(zhì)，也可通過圖像分析技術(shù)達(dá)到定量的目的。第二十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日標(biāo)本處理與熒光免疫相似標(biāo)本可長期保存，可用普通顯微鏡觀察分類酶標(biāo)記抗體免疫組化非標(biāo)記抗體酶免疫組化一、組織處理

第二十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日★原理

酶直接標(biāo)記在抗體上，與靶抗原反應(yīng)，通過酶對底物的特異性催化作用，產(chǎn)生的有色物質(zhì)沉積在靶抗原部位，從而對靶抗原定位、定性和定量檢測。二、酶標(biāo)記抗體免疫組化染色第二十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日直接法抗原標(biāo)本載玻片優(yōu)點(diǎn)：操作簡便、特異性高缺點(diǎn)：敏感度偏低、抗體制備麻煩標(biāo)記抗體底物第二十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日標(biāo)記二抗體間接法抗原優(yōu)點(diǎn)：敏感度高缺點(diǎn)：特異性偏低,操作繁瑣底物第二十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日★原理

用酶免疫動物制備抗酶抗體，再將組織抗原與抗酶抗體結(jié)合形成復(fù)合物，通過酶的底物顯色而檢測抗原，避免了用酶標(biāo)記時對抗體的損傷，提高了檢測敏感性。PAP法酶橋法

雙橋PAP法APAAP法三、非標(biāo)記抗體酶免疫組化染色第二十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日（一）酶橋法：抗酶抗體作為第三抗體，通過第二抗體作橋抗體，將結(jié)合在組織抗原上的第一抗體與第三抗體連接起來，最后形成酶聯(lián)的抗原-抗體復(fù)合物，底物顯色第二十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日

抗酶抗體抗原優(yōu)點(diǎn)：敏感性比酶標(biāo)法高缺點(diǎn)：操作繁瑣底物酶橋法橋抗體酶第二十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日

優(yōu)點(diǎn)：

敏感性較酶標(biāo)法有所提高

缺點(diǎn)：

操作分四步，較復(fù)雜如果抗酶抗體與酶結(jié)合弱，在操作中酶常被沖洗掉如果酶標(biāo)記在非特異性抗體上會存在背景著色問題如果抗酶抗體的非特異性成分與橋抗結(jié)合，結(jié)果就與抗酶抗體競爭橋抗的結(jié)合位點(diǎn)，也會影響方法的敏感性

+++HRP底物二抗/Ab2兔源一抗/Ab1Ag兔源抗酶抗體/Ab3Ag-Ab1-Ab2-Ab3-HRP復(fù)合物AgAgAgAg第二十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日（二）PAP法：是酶橋法的改良法。PAP法將酶橋法的第三抗體（抗酶抗體）與酶形成一種穩(wěn)定可溶性(PAP復(fù)合物)

第三十頁，共六十九頁，2022年，8月28日抗原底物PAP法橋抗體

PAP復(fù)合物第一抗與第三抗的動物種屬須相同第三十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日操作只需三步

PAP復(fù)合物穩(wěn)定，酶不易洗脫，避免了酶橋法的弊端大大減弱背景著色①橋連抗體存在的非特異性抗體，因其與第1抗體并非同種屬，不能與抗酶抗體結(jié)合②抗酶抗體中存在的非抗酶抗體，雖可與組織成分結(jié)合，但此抗體不能與酶結(jié)合，不會有酶活性。+++底物二抗/Ab2兔源一抗/Ab1Ag兔源PAP復(fù)合物AgAgAgAg-Ab1-Ab2-PAP復(fù)合物第三十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日（三）雙橋PAP法基本原理:是在PAP法中通過兩次連接橋抗體和PAP而建立起來的，通過雙橋可結(jié)合更多的PAP復(fù)合物于抗原分子上。這種放大方式由于重復(fù)使用橋抗體，使橋抗與PAP復(fù)合物中的抗酶抗體未充分飽和的Fc段結(jié)合，或橋抗體與特異性一抗尚未飽和的Fc段結(jié)合。對抗原有明顯放大作用，對于組織細(xì)胞微量抗原的檢測更有實(shí)用價值。第三十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日

抗原底物雙橋PAP法橋抗體第一抗與第三抗的動物種屬須相同

PAP復(fù)合物第三十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日四、酶免疫組化染色中的常用的酶及顯色底物常用種類:

辣根過氧化物酶/HRP底物顯色（DAB)棕色或灰藍(lán)色(AEC)最常用

堿性磷酸酶/AP

底物顯色玫瑰紅色(α-萘酚磷酸鹽與快紅反應(yīng)）或深藍(lán)色(α-萘酚磷酸鹽與快藍(lán)反應(yīng)）;靛藍(lán)四唑（紫藍(lán)色）最敏感

葡萄糖氧化酶/GO

底物為葡萄糖，配以NBT和PMS顯色藍(lán)色敏感性較低，顯色底物不易保存

β-半乳糖酶等酶的選擇:

HRP染色結(jié)果比AP染色結(jié)果保存時間長含有內(nèi)源性HRP的組織切片:首選標(biāo)記酶為APAP和HRP結(jié)合可進(jìn)行雙重或3重免疫組化標(biāo)記,對比清晰第三十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日

采用熒光素標(biāo)記已知抗體（或抗原）作為探針，檢測標(biāo)本中靶抗原（或抗體），在熒光顯微鏡下，分辨出抗原(或抗體）的所在位置及其性質(zhì)，并可利用熒光定量技術(shù)計(jì)算其含量。以達(dá)到對抗原(或抗體）物質(zhì)定位、定性和定量測定的目的?！餆晒饷庖呓M織化學(xué)技術(shù)第三十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日一、組織的處理標(biāo)本的類型：涂片和印片組織切片細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)本活細(xì)胞標(biāo)本的保存：標(biāo)本固定干燥后，最好立即檢測保持干燥、置4℃甚至-20℃以下保存第三十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日二、熒光免疫組化染色

直接法：優(yōu)點(diǎn)：操作簡便、特異性高

缺點(diǎn)：敏感度偏低、抗體制備麻煩

間接法：

優(yōu)點(diǎn)：較直接法靈敏，標(biāo)記一種抗體可以鑒定多種抗原

缺點(diǎn)：非特異熒光、操作時間較長

第三十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日雙標(biāo)記熒光免疫染色法用兩種熒光素分別標(biāo)記不同抗體，對同一標(biāo)本中的相應(yīng)兩種抗原同時檢測

標(biāo)記抗體A抗原A抗原B標(biāo)記抗體B標(biāo)本載玻片第三十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日親和組織化學(xué)（Affinityhistochemistry）

利用兩種物質(zhì)之間的高度親合力而建立的一種方法。一些具有雙價或多價結(jié)合力的物質(zhì)如植物凝集素（與蛋白糖基）、生物素（親和素）和葡萄球菌A蛋白（IgGFC段結(jié)合）等，都對某種組織成分具有高親和力的特點(diǎn)，可以與標(biāo)記物如熒光素、酶、同位素、鐵蛋白及膠體金等結(jié)合,可采用熒光顯微鏡、酶加底物的顯色反應(yīng)、放射自顯影或電子顯微鏡，在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平進(jìn)行對應(yīng)親和物質(zhì)的定位或定量。第四十頁，共六十九頁，2022年，8月28日待測抗原非特異性抗原A-親合素B-生物素E-酶ABC直接法原理示意圖原理：預(yù)先按一定比例將親合素與酶標(biāo)生物素結(jié)合形成可溶性的ABC復(fù)合物。當(dāng)其與檢測反應(yīng)體系中的生物素化抗體相遇時，ABC中末飽和的親和素結(jié)合部位即可與抗體上的生物素結(jié)合，使抗原－抗體反應(yīng)體系與ABC標(biāo)記體系連成一體進(jìn)行檢測。（一)親合素-生物素-過氧化酶復(fù)合物技術(shù)ABC第四十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日ABC間接法原理示意圖待測抗原非特異性抗原A-親合素B-生物素E-酶原理：預(yù)先按一定比例將親合素與酶標(biāo)生物素結(jié)合形成可溶性的ABC復(fù)合物。當(dāng)其與檢測反應(yīng)體系中的生物素化第二抗體相遇時，ABC中末飽和的親和素結(jié)合部位即可與抗體上的生物素結(jié)合，使抗原－抗體反應(yīng)體系與ABC標(biāo)記體系連成一體進(jìn)行檢測。第四十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日

缺點(diǎn)：有些組織如肝、腎、白細(xì)胞、脂肪組織和乳腺等有內(nèi)源性生物素活性，需要對組織進(jìn)行預(yù)處理

ABC復(fù)合物在中性時帶正電荷，容易與細(xì)胞核等帶負(fù)電荷結(jié)構(gòu)非特異結(jié)合，親合素為糖蛋白，可以與凝集素等碳水化合物結(jié)合

優(yōu)點(diǎn)：

敏感性高特異性高一抗和二抗工作濃度低操作時間縮短可以多重標(biāo)記第四十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日(二）橋聯(lián)親合素-生物素技術(shù)

BridgedAvidin-Biotintechnique，BRAB

原理：是以游離的親合素作為橋聯(lián)劑，利用親合素的多價性，將檢測反應(yīng)體系中抗原、生物素化抗體復(fù)合物與標(biāo)記生物素(酶標(biāo)生物素)聯(lián)結(jié)起來，達(dá)到檢測反應(yīng)分子的目的。由于生物素化抗體分子上連有多個生物素，因此，最終形成的抗原-生物素化抗體-親合素-酶標(biāo)生物素復(fù)合物可積聚大量的酶分子；加入相應(yīng)酶作用底物后，即會產(chǎn)生強(qiáng)烈的酶促反應(yīng)，從而提高檢測的靈敏度。第四十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日BRAB直接法原理示意圖待測抗原非特異性抗原A-親合素B-生物素E-酶第四十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日BRAB間接法原理示意圖待測抗原非特異性抗原A-親合素B-生物素E-酶第四十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日（三）標(biāo)記親和素-生物素技術(shù)

LabelledAvidin-biotintechnique，LAB原理:以標(biāo)記親合素直接與免疫復(fù)合物中的生物素化抗體連接進(jìn)行檢測。特點(diǎn):

相當(dāng)高的靈敏度，省略了加標(biāo)記生物素步驟，操作較BRAB法簡便。間接LAB法采用生物素化第二抗體，可進(jìn)一步提高檢測靈敏度第四十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日二、葡萄球菌A蛋白法定義:葡萄球菌蛋白A/SPA是一種從金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁分離的蛋白質(zhì)，由于它能與多種動物（人、豬、兔、小鼠等）IgG的Fc段結(jié)合，用SPA標(biāo)記物（酶、熒光素、放射性物質(zhì)等）顯示抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的各種免疫檢測實(shí)驗(yàn)第四十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日注意：SPA對IgG

亞型的結(jié)合有選擇性（如IgG3不結(jié)合），不結(jié)合IgA1,可能出現(xiàn)的假陰性結(jié)果。優(yōu)點(diǎn)：解決不同動物樣本檢測時，需分別標(biāo)記相對應(yīng)的二抗的問題。第四十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日三、凝集素法凝集素lectin

是指一類從植物種子、無脊椎動物和較高等動物組織中提純的糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白質(zhì)，可使紅細(xì)胞凝集故稱凝集素，凝集素具有與特定糖基專一結(jié)合的特性，是研究腫瘤細(xì)胞膜糖分子變化的一種理想工具，凝集素法就是一方面利用凝集素可以與標(biāo)記物結(jié)合，另一方面又可以與細(xì)胞膜糖基結(jié)合所形成一種親合反應(yīng)直接法是將標(biāo)記物直接標(biāo)記在凝集素上，與組織細(xì)胞相應(yīng)的糖蛋白或糖脂相結(jié)合。第五十頁，共六十九頁，2022年，8月28日間接法是先將凝集素與組織細(xì)胞膜糖基結(jié)合，然后再用標(biāo)記的抗凝集素抗體與結(jié)合在細(xì)胞上的凝集素反應(yīng)。糖-凝集素-糖法，這種方法是利用生物細(xì)胞膜的特殊糖基與凝集素結(jié)合后，再用標(biāo)記的已知糖基與其反應(yīng)，形成一個“三明治樣”的結(jié)合物。第五十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日四、鏈霉親合素-生物素法(LSAB）

鏈霉親合素(StreptavidinSA)是從鏈霉菌培養(yǎng)物提取的一種純蛋白，不含糖基，有4個生物素結(jié)合位點(diǎn)，并且具有高度的親和力，其功能類似親合素。利用生物素結(jié)合的二抗與酶標(biāo)記的鏈霉親合素蛋白就組合成酶標(biāo)鏈霉親合素-生物素方法第五十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日LSAB法具有幾大特點(diǎn)：可結(jié)合更多的生物素化的二抗，放大效應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過ABC法低背景著色操作時間縮短第五十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日

免疫電子顯微鏡（ImmunoelectronMicroscope，IEM）技術(shù)是利用高電子密度的顆粒性標(biāo)記物（如膠體金、鐵蛋白等）標(biāo)記抗體，或用經(jīng)免疫組織/細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)能產(chǎn)生高電子密度產(chǎn)物，在電子顯微鏡下對高電子密度標(biāo)記的抗原（抗體）進(jìn)行亞細(xì)胞水平定位的技術(shù)。

特點(diǎn):

定位更為精確，可定位至細(xì)胞膜、細(xì)胞器在探索病因、發(fā)病機(jī)制、組織發(fā)生等方面有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)一、免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)的原理第五十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日標(biāo)本制備的要求是保存良好的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，注意保持組織的抗原性，因此在組織固定與取材時選用固定劑不宜過強(qiáng)。在免疫染色方面，又分為包埋前染色、包埋后染色和超薄切片免疫染色三種。二、免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)標(biāo)本的制備要求第五十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日第五十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日從動物到電鏡照片第五十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日（—）免疫膠體金染色法

免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體檢測的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是由氯金酸在還原劑作用下，聚合成為特定大小的金顆，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱為膠體金。它在弱堿環(huán)境下可與蛋白質(zhì)分子形成牢固的靜電結(jié)合而不影響蛋白質(zhì)的生物特性。三、常用的免疫標(biāo)記電鏡技術(shù)第五十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日免疫金銀法

(ImmuNogoldsilvertechNiqueIGST)。其基本原理是用特異性抗體與抗原反應(yīng)，隨后用金標(biāo)記的間接抗體，再與特異性抗體結(jié)合，用乳酸銀處理，使銀顆粒沉積在金顆粒上，還原銀反應(yīng)而顯示出黑褐色。適用于石蠟切片，冰凍切片，培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞涂片和樹脂包埋的電鏡切片，該法敏感性高，可檢測組織中微量抗原，定