免疫細胞功能檢測技術

免疫細胞功能檢測技術第一頁，共三十八頁，2022年，8月28日淋巴細胞T細胞（負責細胞免疫功能）B細胞（執(zhí)行體液免疫功能）NK細胞（非特異性免疫作用）第二頁，共三十八頁，2022年，8月28日一、T細胞功能的檢測T細胞增殖試驗T細胞分泌功能測定T細胞介導的細胞毒試驗體內(nèi)試驗第三頁，共三十八頁，2022年，8月28日（一）T淋巴細胞增殖試驗1.原理：淋巴細胞DNA合成分化母細胞刺激物細胞變大細胞漿擴大空泡核仁明顯核染色質(zhì)疏松第四頁，共三十八頁，2022年，8月28日

未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細胞的形態(tài)特征轉(zhuǎn)化的淋巴細胞未轉(zhuǎn)化的淋巴細胞淋巴母細胞過渡型細胞大小(直徑μm)12～2012～166～8核大小、染色質(zhì)增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4個有或無無有絲分裂有或無無無胞質(zhì)、著色增多、嗜堿增多、嗜堿極少、天青色漿內(nèi)空泡有或無有或無無偽足有或無有或無無第五頁，共三十八頁，2022年，8月28日2.淋巴細胞轉(zhuǎn)化的刺激物非特異性刺激物：

PHA------T細胞

ConA-------T細胞

PWM-------T、B細胞

LPS-------B細胞特異性刺激物：異種抗原同種組織抗原

第六頁，共三十八頁，2022年，8月28日3.檢測方法

形態(tài)法：刺激物淋巴細胞（4-6天）母細胞化同位素法：PHA淋巴細胞（54h）

DNA合成期+3HTdR摻入

收集細胞

檢測β射線

測定細胞內(nèi)的3H－TdR第七頁，共三十八頁，2022年，8月28日（1）形態(tài)學檢查法第八頁，共三十八頁，2022年，8月28日方法學評價：優(yōu)點：形態(tài)學方法簡便易行，普通光學顯微鏡便能觀察結(jié)果，適于基層實驗室應用。缺點：是依靠肉眼觀察形態(tài)學變化，判斷結(jié)果易受主觀因素影響，重復性和準確性較差。第九頁，共三十八頁，2022年，8月28日培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細胞全血分層液離心過濾測量放射性（2）3H-TdR摻入法第十頁，共三十八頁，2022年，8月28日優(yōu)點：3H-TdR摻入法敏感性高，客觀性強，重復性好。缺點：但需一定設備條件，同時還存在放射性核素污染問題。第十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細胞全血分層液離心過濾測量放射性MTT測吸光度(3)MTT比色法第十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日(二)T細胞分泌功能測定

體外培養(yǎng)的T細胞經(jīng)各種絲裂原或抗原刺激后,分泌各種細胞因子,可借助免疫學、細胞生物學及分子生物學技術分別檢測細胞因子含量、生物學活性或基因表達水平，以反映T細胞功能。

第十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日（三）T細胞介導的細胞毒試驗1.原理：靶細胞抗原T細胞觀察殺傷活力致敏CTL靶細胞第十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日形態(tài)學方法：淋巴細胞+腫瘤細胞計數(shù)殘留腫瘤細胞2.方法意義：腫瘤患者CTL殺傷腫瘤細胞的能力

第十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日圖15-2T細胞細胞毒試驗示意圖第十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日靶細胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應細胞測量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時51Cr釋放法第十七頁，共三十八頁，2022年，8月28日(四)體內(nèi)試驗特異性抗原皮膚試驗PHA皮膚試驗第十八頁，共三十八頁，2022年，8月28日二、B細胞功能檢測B細胞增殖能力的試驗溶血空斑試驗B細胞抗體形成功能的檢測體內(nèi)試驗第十九頁，共三十八頁，2022年，8月28日(一)B細胞增殖能力的試驗抗IgM細菌脂多糖SAC的SPA

B細胞增殖形態(tài)學3H－TdR摻入法第二十頁，共三十八頁，2022年，8月28日(二)溶血空斑試驗1.原理：第二十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日2.方法學：經(jīng)典溶血空斑形成試驗被動溶血空斑試驗

第二十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日3．臨床應用與評價溶血空斑試驗主要用于測定藥物和手術等因素對體液免疫功能的影響評價免疫治療或免疫重建后機體產(chǎn)生抗體的能力。

第二十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日(三)

B細胞抗體形成功能的檢測

——酶聯(lián)免疫斑點法ELISPOT1.原理：第二十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日2．應用與方法學評價：該方法既可檢測抗體分泌細胞，又可檢測抗體分泌量。優(yōu)點：穩(wěn)定、特異、抗原用量少；可同時檢測不同抗原誘導的不同抗體分泌，并可定量；可檢測組織切片中分泌抗體的單個細胞。第二十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日(四)體內(nèi)試驗體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素、破傷風類毒素、多價肺炎鏈球菌菌苗等。將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分別采血，分離血清，測定受檢者免疫前后相應抗體的效價，判斷受檢者體內(nèi)B細胞的功能。第二十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日染色計數(shù)離心取上清測LDH或AKP離心取沉淀測活細胞熒光測發(fā)光強度測CPM值形態(tài)法酶釋法熒光法同位素法化學發(fā)光法三、NK細胞活性測定靶細胞溶解常用靶細胞:

K562細胞株第二十七頁，共三十八頁，2022年，8月28日二吞噬細胞功能檢測技術

按其形態(tài)大小分為兩類：大吞噬細胞—單核-吞噬細胞系統(tǒng)小吞噬細胞—中性粒細胞第二十八頁，共三十八頁，2022年，8月28日一、中性粒細胞功能的檢測

細胞趨化功能的檢測吞噬和殺菌功能的檢測第二十九頁，共三十八頁，2022年，8月28日(一)細胞運動功能——趨化功能檢測1.原理：第三十頁，共三十八頁，2022年，8月28日2.方法：

瓊脂糖平板法

濾膜滲透法（Boyden小室法）第三十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日(二)吞噬和殺菌功能測定1．顯微鏡檢查法：第三十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日2.溶菌法第三十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日NBT還原試驗

原理：N-N-C+H+N=N-R-N-NH2CN=NH四氮唑基（淡黃色）甲臜（紫黑色）3．NBT還原試驗

第三十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日中性粒細胞NBT甲臜顆粒沉積于胞質(zhì)中第三十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日二、巨噬細胞功能檢測(一)炭粒廓清試驗

正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10%炭粒。據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。第三十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日(二)吞噬功能檢測

巨噬細胞對顆粒性抗原物質(zhì)具有很強的吞噬功能，常用雞紅細胞