基因工程的基本操作程序五

1.2基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序

主要包括四個(gè)步驟：（1）目的基因的獲?。?）（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（4）目的基因的檢測與鑒定基因表達(dá)載體的構(gòu)建一、目的基因的獲取2、獲取方法：（1）從基因文庫中獲取目的基因；（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因；（3）通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。1、目的基因：主要指的是編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。（一）從基因文庫中獲取目的基因1.什么叫基因文庫？基因文庫

基因組文庫部分基因文庫（如cDNA文庫）將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫。（1）基因組文庫的構(gòu)建模式圖通過對受體菌的培養(yǎng)而儲存基因以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，再反轉(zhuǎn)錄酶的催化下反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成雙鏈DNA，即cDNA，從而獲得所需的基因。（2）cDNA構(gòu)建方法-----反轉(zhuǎn)錄法基因組DNA文庫cDNA文庫（3）基因組DNA文庫與cDNA文庫的構(gòu)建補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子終止子

RNA聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點(diǎn)，并與其結(jié)合。轉(zhuǎn)錄開始后，RNA聚合酶沿DNA分子移動(dòng)，并以DNA分子的一條鏈為模板合成RNA。轉(zhuǎn)錄完畢后，RNA鏈釋放出來，緊接著RNA聚合酶也從DNA模板鏈上脫落下來。啟動(dòng)子：位于基因首端的一段特殊的DNA片斷，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)。終止子：是位于基因尾端的一段特殊的DNA片斷，能終止mRNA的轉(zhuǎn)錄。①不能轉(zhuǎn)錄為信使RNA，不能編碼蛋白質(zhì)。：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使RNA，能編碼蛋白質(zhì)編碼區(qū)非編碼區(qū)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)②有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核苷酸序列，在該序列中，最重要的是位于編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游啟動(dòng)子終止子補(bǔ)：真核細(xì)胞胞的基因結(jié)構(gòu)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)含子外顯子能夠編碼蛋白白質(zhì)的序列叫叫做外顯子不能夠編碼蛋蛋白質(zhì)的序列列叫做內(nèi)含子子啟動(dòng)子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游內(nèi)含子：外顯子：真核細(xì)胞的基基因結(jié)構(gòu)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子：能編編碼蛋白質(zhì)的的序列內(nèi)含子：不能能編碼蛋白質(zhì)質(zhì)的序列：有調(diào)控作用的核核苷酸序列，包括位于編碼碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位位點(diǎn)。非編碼序列：：包括非編碼區(qū)區(qū)和內(nèi)含子結(jié)構(gòu)基因外顯子內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄、加工修修飾mRNA原核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)編碼區(qū)是_____的編碼區(qū)是間隔的、_____的相同點(diǎn)都由能夠編碼蛋白質(zhì)的______和具有調(diào)控作用的______

區(qū)組成的原核細(xì)胞與真真核細(xì)胞的基基因結(jié)構(gòu)比較較連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)非編碼基因組文庫和和部分基因文文庫的比較文庫類型cDNA文庫基因組文庫文庫大小基因中啟動(dòng)子基因中內(nèi)含子基因多少物種間基因交流小大無有無有某種生物的部部分基因某種生物的全全部基因可以部分基因可以以基因表達(dá)的計(jì)計(jì)算在真核生物中中，對應(yīng)的是是的堿基數(shù)DNAmRNA蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯6 31氨基酸數(shù)堿基數(shù)？補(bǔ)充資料基因中外顯子子思考：如何從基因文文庫中得到所所需要的基因因？依據(jù)：目的基基因的有關(guān)信信息。如：根據(jù)基因因的核苷酸序序列；基因的功能；；基因在染色體體上的位置；；基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)產(chǎn)物mRNA；基因翻譯產(chǎn)物物蛋白質(zhì)等特特性。注意：基因文庫中不是直接保保管相應(yīng)基因因，而是保存受體菌，菌中含基因因。（1）鳥槍法：供體細(xì)胞中的的DNA許多DNA片段運(yùn)載體限制酶與載體連接受體細(xì)胞產(chǎn)生特定性狀狀導(dǎo)入外源DNA擴(kuò)增目的基因分離(直接分離法)多用于原核生生物①概念：PCR全稱為_______________，是一項(xiàng)在生物____復(fù)制___________的核酸合成技技術(shù)。多聚合酶鏈?zhǔn)绞椒磻?yīng)體外特定DNA片段②原理：__________DNA復(fù)制③前提條件：：_______________________；有一段已知基基因的核苷酸酸序列（二）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的的基因變性、退火、、延伸三步曲曲變性：加熱至90～95℃雙鏈DNA解鏈成為單鏈鏈DNA退火：冷卻至55～60℃部分引物與模模板的單鏈DNA的特定互補(bǔ)部部位相配對和和結(jié)合延伸：加熱至70～75℃以目的基因?yàn)闉槟０?，合成成互補(bǔ)的新DNA鏈變性退火延伸（二）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的的基因③過程：a、DNA變性（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板在_____作用下，_____斷裂，形成___________b、退火（復(fù)性55℃-60℃）：系統(tǒng)溫度度降低，引物物與DNA模板結(jié)合，形形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，，從引物的5′端→3′端延伸，合成成與模板互補(bǔ)補(bǔ)的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈高溫④原料：___________、___________、__________________、________________。⑤方式：：以_____方式擴(kuò)增增，即____（n為擴(kuò)增循循環(huán)的次數(shù)數(shù)）⑥結(jié)果：：四種脫氧氧核苷酸酸DNA引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶指數(shù)2n使目的基基因的片片段在短時(shí)間內(nèi)內(nèi)大量擴(kuò)擴(kuò)增模板DNAPCR的基本反反應(yīng)步驟驟變性90-95?C延伸70-75?C退火55-60?CPCR總結(jié)：PCR技術(shù)擴(kuò)增增與DNA復(fù)制的比比較PCR技術(shù)DNA復(fù)制相同點(diǎn)原理原料條件不同點(diǎn)解旋方式場所酶結(jié)果堿基互補(bǔ)補(bǔ)配對四種脫氧氧核苷酸酸模板、能能量、酶酶DNA在高溫下變性解旋解旋酶催催化體外復(fù)制細(xì)胞核內(nèi)內(nèi)熱穩(wěn)定的的DNA聚合酶細(xì)胞內(nèi)的的DNA聚合酶大量的DNA片段形成整個(gè)個(gè)DNA分子根據(jù)已知知蛋白質(zhì)質(zhì)的氨基基酸序列列，推測測出相應(yīng)應(yīng)的mRNA序列，然然后按照照堿基互互補(bǔ)配對對原則，，推測出出它的結(jié)結(jié)構(gòu)基因因的核苷苷酸序列列，再通通過化學(xué)學(xué)方法，，以單核苷苷酸為原原料合成成目的基基因。蛋白質(zhì)的的氨基酸酸序列mRNA的核苷酸酸序列結(jié)構(gòu)基因因的核苷苷酸序列列推測推測目的基因因化學(xué)合成成（三）化化學(xué)方法法人工合合成目的的基因人工合成成(基因比較較小，核核苷酸序序列已知知)DNA合成儀從基因文文庫中獲獲取利用PCR技術(shù)術(shù)擴(kuò)增利用化學(xué)學(xué)方法人人工合成成歸納：獲獲取目的的基因的的方法用一定的的_________切割質(zhì)粒，使使其出現(xiàn)現(xiàn)一個(gè)切切口，露出出____________。用_____________切割目的基因，，使其產(chǎn)產(chǎn)生_______________________。將切下的的目的基基因片段段插入質(zhì)質(zhì)粒的______處，再加入適適量___________，形成了了一個(gè)重重組DNA分子（重重組質(zhì)粒粒）限制酶黏性末端端或平末末端同一種限限制酶相同的黏黏性末端端或平末末端切口DNA連接酶1.過程:二、構(gòu)建建表達(dá)載體——核心質(zhì)粒DNA分子限制酶處處理一個(gè)切口口兩個(gè)黏性性末端兩個(gè)切口口獲得目的的基因DNA連接酶重組DNA分子（重重組質(zhì)粒粒）同一種過程:2.構(gòu)建基因表達(dá)達(dá)載體的的目的（1）使目的的基因在在受體細(xì)細(xì)胞中穩(wěn)定存在在并可以遺傳給下下一代；（2）使目的的基因能能夠表達(dá)和發(fā)發(fā)揮作用?？茖W(xué)家在在培育抗抗蟲棉時(shí)時(shí)，經(jīng)歷歷了多次次失敗，，才獲得得成功。。起初把蘇蘇云金芽芽孢桿菌菌的抗蟲基因因插入載體體質(zhì)粒中中，然后后導(dǎo)入棉棉花的受受精卵中中，結(jié)果果抗蟲基基因在棉棉花體內(nèi)內(nèi)沒有表表達(dá)。然后在插插入抗蟲蟲基因的的質(zhì)粒中中插入啟動(dòng)子(抗蟲基因因首端)，導(dǎo)入棉棉花受精精卵，長長成的棉棉花植株株還是沒沒有抗蟲蟲能力。。科學(xué)家家又在有有啟動(dòng)子子、抗蟲蟲基因的的質(zhì)粒中中插入終止子(抗蟲基因因末端)，導(dǎo)入棉棉花受精精卵，結(jié)結(jié)果成長長的植株株，有了了抗蟲能能力。資料:3.基因表達(dá)達(dá)載體的的組成：：它們有什什么作用用？a、目的基基因b、啟動(dòng)子子c、終止子子d、標(biāo)記基基因思考1：：表達(dá)載體體為什么么一定要要有啟動(dòng)動(dòng)子？（1）生生物之間間進(jìn)行基基因交流流，只有使用受體生物物自身基因因的啟動(dòng)動(dòng)子才能能有利于于基因的的表達(dá)；；（2）通通過cDNA文庫獲得的目的基因因沒有啟啟動(dòng)子，只將編編碼序列列導(dǎo)入受受體細(xì)胞胞無法轉(zhuǎn)錄錄。是為了鑒鑒別受體體細(xì)胞中中是否含含有目的的基因，，從而將有目的的基因的的細(xì)胞篩篩選出來。思考3：標(biāo)記基因因有什么么作用？？①載體與表達(dá)載體體的區(qū)別：：二者都都有標(biāo)記記基因和和復(fù)制原原點(diǎn)兩部部分DNA片段。表表達(dá)載體體在載體體基礎(chǔ)上上增加了了目的基基因、啟啟動(dòng)子、、終止子子三部分分結(jié)構(gòu)。。注意②用到的工工具酶：：既用到限制酶切割載體體，又用用到DNA連接酶將目的基基因和載載體拼接接，兩種種酶作用用的化學(xué)學(xué)鍵都是是磷酸二二酯鍵。。③啟動(dòng)子、、終止子子對于目的的基因表表達(dá)必不不可少。。④目的基因因不能單單獨(dú)進(jìn)入入受體細(xì)細(xì)胞，必需以表表達(dá)載體體的方式式攜帶進(jìn)進(jìn)去。三、將目目的基因因?qū)胧苁荏w細(xì)胞胞常用的受受體細(xì)胞胞：有大腸桿桿菌、枯枯草桿菌菌、土壤壤農(nóng)桿菌菌、酵母母菌和動(dòng)動(dòng)植物細(xì)細(xì)胞等。。（一）轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化：目的基因因進(jìn)入_________內(nèi)，并且且在受受體細(xì)細(xì)胞內(nèi)維維持_____和_____的過程受體細(xì)胞胞穩(wěn)定表達(dá)（二）方方法將目的基基因?qū)肴胫参锛?xì)胞胞將目的基基因?qū)肴雱?dòng)物細(xì)胞胞將目的基基因?qū)肴胛⑸锛?xì)細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化法（（最多）基因槍法法花粉管通通道法——顯微注射射法——Ca2+處理法1.將目目的基因因?qū)胫仓参锛?xì)胞胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化法基因槍法法花粉管通通道法（1）農(nóng)桿菌菌轉(zhuǎn)化法法特點(diǎn)：①易感染染雙子葉葉植物和和裸子植植物，對對大多數(shù)數(shù)單子葉葉植物沒沒有感染染能力②Ti質(zhì)粒上的T-DNA可以轉(zhuǎn)移到受受體細(xì)胞，并并整合到受體細(xì)胞染染色體的DNA上。③轉(zhuǎn)化過程:Ti質(zhì)粒目的基因構(gòu)建表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞插入植物細(xì)胞染色色體DNA表達(dá)新性狀轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌基因槍法又稱稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體體產(chǎn)生的動(dòng)力力，將包裹在金金屬顆粒表面面的表達(dá)載體體DNA打入受體細(xì)胞胞中，使目的基因因與其整合并并表達(dá)的方法法。（2）基因槍法適用于單子葉植物（3）花粉通道法法植物花粉在柱柱頭上萌發(fā)后后，花粉管要要穿過花柱直直通胚囊。花花粉管通道法法就是在植物物受粉后，花花粉形成的花花粉管還未愈愈合前，剪去去柱頭，然后后，滴加DNA（含目的基因因），使目的的基因借助花花粉管通道進(jìn)進(jìn)入受體細(xì)胞胞。適用于被子植物2.將目的基基因?qū)雱?dòng)物物細(xì)胞（1）方法：：顯微注射法法（將基因表達(dá)達(dá)載體提純，，用顯微儀注注射到受精卵中）思考：為什么么要用受精卵卵而不用體細(xì)細(xì)胞？（2）操作程序:提純含目的基基因表達(dá)載體體取受精卵顯微注射移植到子宮受精卵發(fā)育新性狀動(dòng)物常用法：常用菌：微生物作受體體細(xì)胞原因：：過程：Ca2+處理大腸桿菌菌感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感感受態(tài)細(xì)胞混混合感受態(tài)細(xì)胞吸吸收DNA3.將目的基基因?qū)胛⑸锛?xì)胞思考：為什么么要用Ca2+處理受體細(xì)胞胞？用Ca2＋處理，增加細(xì)細(xì)菌細(xì)胞膜的的通透性Ca2+處理大腸桿菌繁殖快、多為為單細(xì)胞、遺遺傳物質(zhì)相對對少一定溫度重組表達(dá)載體體DNA溶于緩沖液受體生物植物動(dòng)物微生物受體細(xì)胞導(dǎo)入方法受精卵體細(xì)胞受精卵細(xì)胞/個(gè)體農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法法基因槍法花粉管通道法法顯微注射技術(shù)用Ca2+處理成感受態(tài)態(tài)細(xì)胞歸納：四、目的基因因的檢測與鑒鑒定分子檢測:是否插入目的的基因是否轉(zhuǎn)錄是否翻譯鑒定:個(gè)體生物學(xué)水水平鑒定1、檢測轉(zhuǎn)基因因生物染色體體的DNA上是否插入了了目的基因①首先取出出轉(zhuǎn)基因生物物的基因組DNA；（1）方法:DNA分子雜交（DNA-DNA)（2）過程:②將含目的基因因的DNA片段用放射性性同位素等作作標(biāo)記,以此做探針；③使探針和基因組DNA雜交,若顯示出雜交交帶,表明目的基因因已插入染色色體DNA中。（一）檢測2、檢測目的基基因是否轉(zhuǎn)錄錄出了mRNA3、檢測目的基基因是否翻譯譯成蛋白質(zhì)①方法:分子雜交交(mRNA-DNA)①方法:抗原-抗體雜交②過程:用上述探針和和轉(zhuǎn)基因生物物的mRNA雜交,若出現(xiàn)雜交帶帶,表明目的基因因轉(zhuǎn)錄出了mRNA。②過程:從轉(zhuǎn)基因生物物中提取蛋白白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交，若若出現(xiàn)雜交帶帶,表明目的基因因已形成蛋白白質(zhì)產(chǎn)品。若不能表達(dá)，，要對抗蟲基基因再進(jìn)行修飾。怎樣檢驗(yàn)抗蟲蟲基因在棉細(xì)細(xì)胞內(nèi)是否表表達(dá)呢？沒有抗蟲基因因的棉植株有抗蟲基因的的棉植株棉鈴蟲蟲沒有死蟲被殺死沒有表達(dá)目的基因表達(dá)達(dá)（二）鑒定（（個(gè)體生物學(xué)學(xué)水平）抗蟲鑒定、抗抗病鑒定、活活性鑒定等類型步驟檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子檢測第一步是否成功顯示出雜交帶第二步是否成功顯示出雜交帶第三步是否成功顯示出雜交帶個(gè)體水平鑒定

包括抗蟲、抗病的接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定功能是否相同等。目的基因的表表達(dá)和檢測轉(zhuǎn)基因生物的的DNA上是否插入目目的基因DNA分子雜交（DNA和DNA之間）目的基因是否否轉(zhuǎn)錄出mRNA分子雜交技術(shù)術(shù)（DNA和mRNA之間））目的基基因是是否翻翻譯出出蛋白白質(zhì)抗原—抗體雜雜交提示：：①DNA分子雜雜交技技術(shù)首首先提提取轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)基因因生物物的DNA，然后后高溫溫或提提高pH解成單單鏈，，再與與同位位素標(biāo)標(biāo)記的的DNA探針雜雜交；②抗原－－抗體體雜交交所用用到的的抗體是是用表表達(dá)出出的蛋蛋白質(zhì)質(zhì)注射射動(dòng)物物進(jìn)行行免疫疫，產(chǎn)產(chǎn)生相相應(yīng)的的抗體體，并并提取取出來來的。。歸納:基因工工程的的基本本操作作程序序獲取目目的基基因從基因因文庫庫利用PCR化學(xué)方方法人人工合合成構(gòu)建基基因表表達(dá)載載體目的基基因、、啟動(dòng)動(dòng)子、、終止止子、、標(biāo)記記基因因?qū)⒛康牡幕蛞驅(qū)肴胧荏w體細(xì)胞胞Ca2+處理（微生生物））、農(nóng)桿菌菌轉(zhuǎn)化化法（植物物）、、顯微注注射法法（動(dòng)物物）目的基基因的的檢測測與鑒鑒定檢測：：是否否插入入、轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄、、翻譯譯個(gè)體生生物學(xué)學(xué)水平平的鑒鑒定思考：：作為基基因工工程表表達(dá)載載體，，只需需含有有目的的基因因就可可以完完成任任務(wù)嗎嗎？為為什么么？不可以以。因?yàn)槟磕康幕蛟谠诒磉_(dá)達(dá)載體體中得得到表表達(dá)并并發(fā)揮揮作用用，還需要要有其其他控控制元元件，如啟啟動(dòng)子子、終終止子子和標(biāo)標(biāo)記基基因等等。必須構(gòu)構(gòu)建上上述元元件的的主要理理由是：（1）生生物之之間進(jìn)進(jìn)行基基因交交流，，只有有使用用受體生生物自自身基基因的啟動(dòng)動(dòng)子才才能比比較有有利于于基因因的表表達(dá)；；（2）通通過cDNA文庫獲獲得的的目的的基因因沒有有啟動(dòng)動(dòng)子，，只將將編碼碼序列列導(dǎo)入入受體體生物物中無無法轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄；；（3）目目的基基因是是否導(dǎo)導(dǎo)入受受體生生物中中需要要有篩篩選標(biāo)標(biāo)記；；（4）為為了增增強(qiáng)目目的基基因的的表達(dá)達(dá)水平平，往往往還還要增增加一一些其其他調(diào)調(diào)控元元件，，如增增強(qiáng)子子（增強(qiáng)基基因啟啟動(dòng)子子工作作效率率的順順式作作用序序列，，能夠夠在相相對于于啟動(dòng)動(dòng)子的的任何何方向向和任任何位位置(上游游或或下下游游)上都都發(fā)發(fā)揮揮作作用用。。）等；；（5）有有時(shí)時(shí)需需要要確確定定目目的的基基因因表表達(dá)達(dá)的的產(chǎn)產(chǎn)物物存存在在于于細(xì)細(xì)胞胞的的什什么么部部位位，，往往往往要要加加上上可可以以標(biāo)標(biāo)識識存存在在部部位位的的基基因因（（或或做做成成目目的的基基因因與與標(biāo)標(biāo)識識基基因因的的融融合合基基因因）），，如如綠綠色色熒熒光光蛋蛋白白基基因因等等。。1、、為為什什么么要要構(gòu)構(gòu)建建基基因因文文庫庫？？直直接接從從含含有有目目的的基基因因的的生生物物體體內(nèi)內(nèi)提提取取不不行行嗎嗎？？構(gòu)建建基基因因文文庫庫是是獲獲取取目目的的基基因因的的方方法法之之一一，，并并不不是是唯唯一一的的方方式式。。如如果果所所需需要要的的目目的的基基因因序序列列已已知知，，就就可可以以通通過過PCR方式從含含有該基基因的生生物的DNA中，直接接獲得，，也可以以通過反反轉(zhuǎn)錄，，用PCR方式從mRNA中獲得，，不一定定要構(gòu)建建基因文文庫。但如果所所需要的的目的基基因的序序列完全全不知，，或只知知道目的的基因序序列的一一段，或或想從一一種生物物體內(nèi)獲獲得許多多基因，，或者想想知道這這種生物物與另一一種生物物之間有有多少基基因不同同，或者者想知道道一種生生物在個(gè)個(gè)體發(fā)育育的不同同階段表表達(dá)的基基因有什什么不同同，或者者想得到到一種生生物的全全基因組組序列，，往往就就需要構(gòu)構(gòu)建基因因文庫。。2根據(jù)據(jù)農(nóng)桿菌菌可將目目的基因因?qū)腚p雙子葉植植物的機(jī)機(jī)理,你能分析析出農(nóng)桿桿菌不能能將目的的基因不不能導(dǎo)入入單子葉葉植物的的原因嗎嗎?若將一個(gè)個(gè)抗病基基因?qū)肴胄←溨兄?理論上講講你應(yīng)該該怎樣做做?①要選擇擇合適的的農(nóng)桿菌菌菌株，，因?yàn)椴徊皇撬杏械霓r(nóng)桿桿菌菌株株都可以