微生物實驗教案

111頁《微生物學(xué)》試驗教學(xué)教案[試驗工程]試驗一 學(xué)試驗常用玻璃儀器洗滌及干熱滅菌[教學(xué)時數(shù)]學(xué)時[試驗?zāi)康呐c要求][試驗原理]所以對其質(zhì)量、規(guī)格、洗滌和包扎方法均有肯定要求。清潔的玻璃器皿是試驗得到正確結(jié)果的先決條件，包扎方法要能保證防止污染雜菌。干熱滅菌的原理，空的玻璃器皿一般用干熱滅菌。干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而到達(dá)滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋〔160～170℃〕，時間要180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒。[試驗材料與設(shè)備]6〔500ml〕2〔1000ml〕16〔0.2ml20.5ml21ml2，5ml2〕8去污粉、肥皂、清洗劑、毛刷。[試驗步驟]〔一〕學(xué)習(xí)以下常用儀器的種類、規(guī)格和應(yīng)用范圍培育皿由一底一蓋組成一套，常用的培育皿皿底直徑90mm，高15mm,皿底皿蓋均為玻璃制成。制成平板，可用于分別、純化、鑒定菌種、活菌計數(shù)以及測定抗生素、噬菌體的效價等。試管〔需要大量菌體時用〕，裝液體培育基用于微生物的振蕩培育。中試管[(13～15)mm×(100～150)mm]:清學(xué)試驗。[(10～12)mm×100mm]:一般用于糖發(fā)酵或血清學(xué)試驗，和其它需要節(jié)約材料的試驗。三角瓶100mL、250mL、500mL1000mL燒杯50mL、100mL、250mL、500mL1000mL吸管規(guī)格有0.1mL、1mL、2mL、5mL、10mL量筒規(guī)格有50mL、100mL、250mL、500mL。1.玻璃器皿的洗滌2.舊玻璃器皿的洗滌A裝有固體培育基：刮掉，洗滌240.5C帶病原菌培育物的器皿：先高壓蒸汽滅菌，倒去培育物玻璃吸管：吸管尖端與裝在水龍頭上的橡皮管連接，反復(fù)沖洗AB0.2524D吸管內(nèi)壁有油垢：洗滌液中浸泡數(shù)小時，再沖洗(三)學(xué)習(xí)各種器皿的包扎5～81吸管的包扎：31.5cm〔勿用脫脂棉〕，目的是避開將外界或嘴中雜菌吹入管內(nèi)，或4～5cm3.試管和三角瓶等的包扎：用橡皮塞和牛皮紙。(四)干熱滅菌〔培育皿、吸管等〕放入電烘箱內(nèi)，關(guān)好箱門。物品不要擺太擠，以免阻礙空氣流通；不要接觸電烘箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火。100℃時，關(guān)閉排氣孔。2h。干熱火菌過程。嚴(yán)防恒溫調(diào)整的自動掌握失靈而造成安全事故。降溫 切斷電源、自然降溫。開箱取物 箱門，取出滅菌物品。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]通過本次試驗?zāi)闵枇宋⑸飳W(xué)試驗常用的哪些器皿？簡述玻璃器皿洗滌的根本要求。[試驗工程]試驗二 的制備與滅菌[教學(xué)時數(shù)]學(xué)時[試驗?zāi)康呐c要求]1．了解培育基的配制原理；把握配制培育基的一般方法和步驟。[試驗原理]4方法。從培育基的組成成分可分為:合成培育基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按肯定比例配制而成。半合成培育基：一局部純化學(xué)物質(zhì)和一局部自然物質(zhì)配制而成。自然培育基：利用自然來源的有機(jī)物配制而成。從培育基的物理狀態(tài)可分為: ：不加凝固劑的液體狀態(tài)培育基。固體培育基：在液體培育基中參加2%左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培育基或農(nóng)副產(chǎn)品培育基。0.2—0.5%凝固劑而成的半固體狀培育基。霉菌培育基。1.055kg/cm212120min,即可殺死一切微生物的養(yǎng)分體或芽孢，而到達(dá)滅菌目的。[試驗材料與設(shè)備]pH牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、吸管、培育皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過濾器、鑷子等。NaCl、瓊脂[試驗步驟]稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查1.要嚴(yán)格按配方配制。pH干熱滅菌要留意物品不要堆放過緊，留意溫度的時間掌握，70C高壓滅菌要留意物品不要過多，加熱后排解冷空氣，到時降壓回零取物。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]培育基配好后，為什么必需馬上滅菌?如何檢查滅菌后的培育基是無菌的?在配制培育基的操作過程中應(yīng)留意些什么問題?為什么?培育微生物的培育基應(yīng)具備哪些條件?為什么?培育基的配制原則是什么?5[試驗工程]試驗三 環(huán)境和人體微生物的檢測及無菌操作技術(shù)[教學(xué)時數(shù)]3學(xué)時[試驗?zāi)康呐c要求]通過檢測環(huán)境和人體中微生物的存在，體會微生物分布的廣泛性。[試驗原理]落。每種微生物菌落都有其獨有的特點，如大小、顏色、外表枯燥或潮濕、隆起或扁平、粗糙或光滑、邊緣整齊或不整齊等。因此，可以通過平板培育來檢測不同環(huán)境下微生物的數(shù)量、種類和特點。[試驗材料與設(shè)備]恒溫培育箱、磁力攪拌器、移液槍培育基：牛肉膏蛋白胨培育基、察氏一號培育基；地面以下5-10cm的土壤；[試驗步驟]無菌操作技術(shù)在酒精燈火焰旁操作，將溶化并冷卻至不燙手的滅菌固體培育基倒入無菌的培育皿，倒量為容積1/3~1/25土樣的稀釋分別10-15min，使10-263每次吸上的液面要高于前一次，以削減稀釋中的誤差。)環(huán)境及人體各部位取菌樣標(biāo)記、培育A-Ⅰ-1-10-5按培育基類別：細(xì)菌培育基--A，霉菌培育基--B341-410-5、10-6、口腔--a、鼻腔--b、頭發(fā)--c、空氣--d25-27℃，3-535-37℃，1-2[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]1、無菌倒平板時留意的事項有哪些？2、平板接種后為什么要倒置培育？3、通過本次試驗?zāi)銓W(xué)到了什么？有什么體會？[試驗工程]試驗六細(xì)菌的單染色與革蘭氏染色[教學(xué)時數(shù)]3[試驗?zāi)康呐c要求]學(xué)習(xí)對細(xì)菌的涂片、染色和無菌操作技術(shù)。[試驗原理]到其形態(tài)和構(gòu)造。微生物學(xué)中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。染色部位分芽孢、鞭毛、莢膜染色G-菌，肽聚糖少，脂質(zhì)多，酒精易進(jìn)入[試驗材料與設(shè)備]菌種：E.coli〔大腸桿菌〕、B.subtilis〔枯草芽孢桿菌〕、玉米細(xì)菌等試劑：石炭酸復(fù)紅染色液、革蘭氏染色液(草酸銨結(jié)晶紫、碘液、95%乙醇、沙黃染色液〕7[試驗步驟]〔高倍鏡、油鏡〕二、革蘭氏〔Gram〕染色法涂片初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1-1.5分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。1脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約30秒，后立即用流水沖洗。復(fù)染：滴加番紅染色液，染1-1.5分鐘，水洗后用吸水紙吸干。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]么菌？涂片用的玻璃片為什么不得有油污？為什么涂片要求菌膜要均勻、??？革蘭氏染色的原理4.染色留意事項有哪些？[試驗工程]試驗七微生物的顯微鏡計數(shù)、大小測量和酵母菌的死活鑒別[教學(xué)時數(shù)]5[試驗?zāi)康呐c要求]1.學(xué)習(xí)并把握利用顯微鏡直接計數(shù)的根本方法。2.了解并把握酵母菌的死活鑒別染色的原理和技術(shù)[試驗原理]〔血球計數(shù)板計數(shù)法〕和間接計數(shù)法〔平板菌落計數(shù)法。本試驗是利用血球計數(shù)板進(jìn)展直接計數(shù)。數(shù)目來換算成單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)目。由于此法計得的是活菌體和死菌體的總和，故又稱為總菌計數(shù)法。美蘭〔氧化型呈藍(lán)色，復(fù)原型呈無色而死的酵母菌則被染成了藍(lán)色。2516，就得lml8AB，1mL=A/5×25×104×B=50000A·B〔個〕1mL=A/4×16×104×B=40000A·B〔個〕[試驗材料與設(shè)備]酵母菌懸液〔市售的干酵母粉〕0.1%的美藍(lán)染色液[試驗步驟]制備菌懸液、染色用吸管吸取菌懸液〔1〕參加試管，用生理鹽水〔8〕進(jìn)展稀釋，滴加〔1〕美蘭染色液。加菌懸液樣品 的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用毛細(xì)滴管將搖勻的菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動進(jìn)入計數(shù)室，用吸水紙吸去多余水液〔留意肯定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡。線上的，當(dāng)酵母菌芽體到達(dá)母細(xì)胞大小的二分之一時，可記作兩個細(xì)胞。計數(shù)一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的值來計算樣品的含菌量。清洗血球計數(shù)板計數(shù)完畢，將計數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用電吹風(fēng)吹干。5.計算：利用相應(yīng)公式進(jìn)展計算〔見前面公式或者課本公式試驗留意事項要正確使用顯微鏡，光線亮度要調(diào)的適宜。菌液制備要精準(zhǔn)，稀釋倍數(shù)要適宜。假設(shè)濃度過大就再稀釋，假設(shè)過小再重做。計上不計下，計左不計右。出芽計一半5-1010計數(shù)室內(nèi)肯定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡。其他微生物孢子技術(shù)與酵母菌類似，根本操作一樣。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]使用血球計數(shù)板計數(shù)時，應(yīng)留意什么？將計數(shù)結(jié)果填入表格中。[試驗工程]試驗八微生物細(xì)胞大小的測定[教學(xué)時數(shù)]3[試驗?zāi)康呐c要求]91.[試驗原理]格所代表的實際長度。1mm1000．01mm，10um，它不直接用于測量細(xì)胞大小，而是用于校正目鏡測微尺的每格的相對長度。[試驗材料與設(shè)備]酵母菌懸液〔市售的干酵母粉〕或者制作的霉菌裝片0.1%的美藍(lán)染色液[試驗步驟]〔—〕裝目鏡測微尺〔二〕校正目鏡測微尺將物鏡測微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺上先用低倍鏡觀看，將目鏡測微尺刻度與物鏡測微尺的刻度平行。使兩尺的第一條刻度線相重合，再查找兩尺的另10代表的長度。用同樣的方法換成高倍鏡進(jìn)展校正，記錄并計算在每種倍率下目鏡測微尺每一格所代表的長度?！踩辰湍讣?xì)胞大小的測定〔1〕參加試管，用生理鹽水〔8〕進(jìn)展稀釋，滴加〔1〕美蘭染色液。1〔留意肯定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡將多余菌液用吸水紙吸干。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必需用鏡臺測微尺重對目鏡測微尺進(jìn)展校正?[試驗工程1]試驗1[試驗工程1]試驗1常用玻璃儀器包扎