艾滋病的實驗室檢測流程

艾滋病的實驗室檢測流程艾滋病的實驗室檢測流程檢測項目的樣品種類1HIV抗體檢測：全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品。2HIV抗原檢測：全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液。3T淋巴細(xì)胞亞群測定：EDTA或肝素抗凝全血。4HIV-1病毒載量、基因型、耐藥檢測：血漿、濾紙干血斑(DBS)。5HIV核酸定性與定量、基因型檢測和HIV-1分離培養(yǎng)：淋巴細(xì)胞富集液、外周血單核淋巴細(xì)胞(PBMC)及全血。當(dāng)然，實驗室最常用的仍然是血液標(biāo)本，其他只作為補(bǔ)充樣本。HIV抗體檢測HIV抗體檢測是艾滋病實驗室檢測的優(yōu)先選擇項目，在國內(nèi)絕大多數(shù)初篩實驗室應(yīng)用最廣泛。1初篩方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)ELISA法檢測HIV抗體是HIV初篩實驗室最常用最普遍的方法，目前檢測試劑已經(jīng)發(fā)展到第四代，即同時檢測血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體，秉承「寧可錯殺一千，不可漏網(wǎng)一個」的革命精神，其靈敏度遠(yuǎn)高于特異性，直叫HIV抗體無處遁形?；瘜W(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(CIA/IFA)這個試驗方法是近10年迅猛發(fā)展的一種新型檢測方法，其采用發(fā)光或熒光底物，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果，其靈敏度較ELISA有了進(jìn)一步的提高，同時帶來的'是檢測成本的增加和假陽性率的增高?？焖贆z測(RT)方法此類方法操作簡便快速，適用于應(yīng)急檢測、門診急診檢測，但靈敏度和特異性遠(yuǎn)不如ELISA和發(fā)光法，但是經(jīng)濟(jì)實惠，也有一定的市場影響力。主要包括以下幾種方法：明膠顆粒凝集試驗(PA)、免疫滲濾試驗、免疫層析試驗。2確認(rèn)實驗⑴免疫印跡試驗(WB)WB采用間接法檢測樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的HIV-1蛋白分離開來，經(jīng)過一系列處理后，硝酸纖維素膜顯示與特異抗原的結(jié)合的抗體條帶從而確診抗體的存在。(2)條帶/線性免疫試驗(RIBA/LIA)實驗原理基本同WB法，不再贅述。HIV-1抗原檢測1篩查實驗酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA法):即第四代抗原抗體聯(lián)合檢測試劑盒?？贵w包被固相反應(yīng)孔(管)的底部，待測樣本中P24抗原與包被抗體形成抗原抗體復(fù)合物，再加入酶(HRP)標(biāo)記的HIV-1抗體與抗原結(jié)合，加底物顯色，在酶標(biāo)儀上讀取結(jié)果。因同時檢測抗原抗體，靈敏度大大提高，有效縮短了HIV感染的檢測窗口期，但因試劑成本較高，在普通篩查實驗室推廣有一定難度。酶聯(lián)熒光分析法(ELFA):待測樣品的p24抗原與包被在固相孔(管)內(nèi)的p24抗體結(jié)合，并被生物素標(biāo)記的p24抗體識別。臨床實驗室應(yīng)用前景不明朗，需要熒光檢測設(shè)備，成本較高。電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA):待測樣品的p24抗原與包被抗體的磁性微粒和發(fā)光劑標(biāo)記的抗體在反應(yīng)管中溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發(fā)光劑標(biāo)記抗體復(fù)合物?？乖贵w快速檢測法：同快速方法(RT)檢測抗體，不同之處是用HIV抗體包被載體，檢測靈敏度同樣較差。2中和試驗中和試驗主要是p24抗原檢測的補(bǔ)充試驗，還可做HIV-1RNA的定性或定量檢測，以排除篩查試驗的假陽性。酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA法):待檢樣品先與中和劑(p24抗原的抗體)共同孵育，如果樣品中存在p24抗原，中和抗體將與之結(jié)合形成復(fù)合物，而不能與固相載體上的捕獲抗體結(jié)合。酶聯(lián)熒光分析法(ELFA):原理和檢測步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA法)，中和率$60%,認(rèn)為樣品中的p24抗原是真陽性。電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA):原理和檢測步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA法)，中和率大于50%，認(rèn)為樣品中的p24抗原是真陽性。HIV核酸檢測目前國內(nèi)HIV核酸檢測試劑主要為Taqman實時熒光PCR檢測試劑，可檢測血漿、血清、組織器官或血液制品的HIV-1RNA和DNA,DBS可用于檢測RNA/DNAo全球目前正式用于臨床診斷HIV-1急性期感染的核酸檢測試劑比較少，主要是美國FDA批準(zhǔn)的Gen-Probe公司生產(chǎn)的AptimaHIV-IRNA核酸定性檢測試劑和歐盟批準(zhǔn)的AbbottM2000HIVTRNA/DNA定性檢測試劑。臨床診斷相關(guān)的檢測策略及結(jié)果報告HIV檢測陽性結(jié)果的檢測過程一般經(jīng)歷兩個階段，初篩和復(fù)檢程序。以HIV抗體檢測為例，具體流程如下：試劑1進(jìn)行初篩，結(jié)果無反應(yīng)，報告「HIV抗體陰性」；結(jié)果有反應(yīng)，不能出具陽性報告，必須進(jìn)入復(fù)檢試驗。對初篩有反應(yīng)的樣品，用原有試劑雙份或雙孔進(jìn)行復(fù)檢試驗(或者兩種試劑復(fù)檢)，如均無反應(yīng)，報告「HIV抗體陰性」；如均有反應(yīng)或一個有反應(yīng)一個無反應(yīng)，進(jìn)行補(bǔ)充試驗（抗體確證試驗和HIV-1核酸試驗），報告HIV感染待確定。目前大部分臨床實驗室為艾滋病初篩實驗室，開展常規(guī)初篩實驗發(fā)現(xiàn)陽性結(jié)果初步復(fù)檢后送省市CDC或當(dāng)?shù)仄渌_認(rèn)實驗室做確認(rèn)實驗。臨床診斷篩查檢測流程見下圖：目前國內(nèi)實驗室多采用「初