微生物的鑒定方法總結(jié)2020

第第1頁共1頁微生物的鑒定方法總結(jié)2020微生物鑒定技術(shù)新技術(shù)新方法32、1細胞壁組分分析32、2紅外光譜IR32、3氣相色譜GC42、4高效液相色譜HPLC42、5質(zhì)譜分析MS43微生物鑒別方法傳統(tǒng)方法在傳統(tǒng)的分類鑒定中，微生物分類鑒定的主要依據(jù)是形態(tài)學特征、生理生化反應特征、生態(tài)學特征以及血清學反應、對噬菌體的敏感性等。在鑒定時，我們把這些依據(jù)作為鑒定項目，進行一系列的觀察和鑒定工作。1、1細菌微菌落技術(shù)細菌的形態(tài)、大小、顏色及其它特征與細菌的基本生物學特性如代謝類型、分裂方式、繁殖速度等有密切關(guān)系。肉眼所見菌落，即大菌落是由大量的菌體緊密堆積而成，有不少生物學特性不能辨別；微菌落則是指細菌生長繁殖早期在固相載體上形成的只能借助顯微鏡進行觀察的細菌集落。與大菌落相比，微菌落邊緣及中央有明顯不同的表形特征?？蓳?jù)此對微生物的種類進行鑒定。缺點：受操作人員主觀性影響大。（1）細胞形態(tài)在顯微鏡下觀察細胞外形大小、形狀、排列等，細胞構(gòu)造，革蘭氏染色反應，能否運動、鞭毛著生部位和數(shù)目，有無芽孢和莢膜、芽孢的大小和位置，放線菌和真菌的繁殖器官的形狀、構(gòu)造，孢子的數(shù)目、形狀、大小、顏色和表面特征等。（2）群體形態(tài)群體形態(tài)通常是指以下情況的特征：在一定的固體培養(yǎng)基上生長的菌落特征，包括外形、大小、光澤、黏稠度、透明度、邊緣、隆起情況、正反面顏色、質(zhì)地、氣味、是否分泌水溶性色素等；在一定的斜面培養(yǎng)基上生長的菌苔特征，包括生長程度、形狀、邊緣、隆起、顏色等；在半固體培養(yǎng)基上經(jīng)穿刺接種后的生長情況；在液體培養(yǎng)基中生長情況，包括是否產(chǎn)生菌膜，均勻渾濁還是發(fā)生沉淀，有無氣泡，培養(yǎng)基的顏色等。如是酵母菌，還要注意是成醭狀、環(huán)狀還是島狀。1、2生理生化反應特征（1）利用物質(zhì)的能力包括對各種碳源利用的能力（能否以C02為唯一碳源、各種糖類的利用情況等）、對各種氮源的利用能力（能否固氮、硝酸鹽和銨鹽利用情況等）、能源的要求（光能還是化能、氧化無機物還是氧化有機物等）、對生長因子的要求（是否需要生長因子以及需要什么生長因子等）。（2）代謝產(chǎn)物的特殊性這方面的鑒定項目非常多，如是否產(chǎn)生H2S、吲哚、CO2、醇、有機酸，能否還原硝酸鹽，能否使牛奶凝固、凍化等。（3）與溫度和氧氣的關(guān)系測出適合某種微生物生長的溫度范圍以及它的最適生長溫度、最低生長溫度和最高生長溫度。對氧氣的關(guān)系，看它是好氧、微量好氧、兼性好氧、耐氧還是專性厭氧。1、3生態(tài)學特征生態(tài)學特征主要包括它與其他生物之間的關(guān)系（是寄生還是共生，寄主范圍以及致病的情況）。在自然界的分布情況（pH情況、水分程度等）、滲透壓情況（是否耐髙滲、是否有嗜鹽性等）。1、4血清學反應很多細菌有分相似的外表結(jié)構(gòu)（如鞭毛）或有作用相同的酶（如乳酸桿菌屬內(nèi)各種細菌都有乳酸脫氫酶）。雖然它們的蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)各異，但在普通技術(shù)下（如電子顯微鏡或生化反應），仍無法分辨它們。然而利用抗原與抗體的髙度敏感特異性反應，就可用來鑒別相似的菌種，或?qū)νN微生物分型。用已知菌種、型或菌株制成的抗血清，與待鑒定的對象是否發(fā)生特異性的血清學反應來鑒定未知菌種、型或菌株。該法常用于腸道菌、噬菌體和病毒的分類鑒定。利用此法，已將傷寒桿菌、肺炎鏈球菌等菌分成數(shù)種菌型。1、5選擇、鑒定用培養(yǎng)基法在培養(yǎng)基中加入特異性的生化反應底物、抗體、熒光反應底物、酶反應底物等，可使目標培養(yǎng)物的選擇、分離、鑒定一次性完成。如生物一梅里埃公司的BP+RPF（兔血漿+纖維蛋白原）培養(yǎng)基，可在24h內(nèi)鑒定金黃色葡萄球菌。1、6微量多項實驗鑒定系統(tǒng)該系統(tǒng)的原理是根據(jù)微生物生理生化特征鑒定的結(jié)果，所進行的數(shù)碼分類鑒定。它是針對微生物的生理生化特性，配制各種底物、培養(yǎng)基、試劑等，分別微量加入各個分隔室中，冷凍干燥脫水或不干燥脫水，各分室在同一塑料條或板上構(gòu)成檢測卡。在未知菌加入其中檢測后，通過查檢索表或直接輸入計算機得到鑒定結(jié)果。最短甚至能在2-4h出結(jié)果。微生物多項鑒定技術(shù)優(yōu)點突出，能快速、敏感、準確、重復性好的鑒定微生物，缺點是各系統(tǒng)差異較大，有的價格昂貴，有的個別反應不準。但毫無疑問，它是微生物鑒定技術(shù)向快速、簡易和自動化發(fā)展的重要方向之一。2微生物鑒別方法分子生物學方法3、1分子生物學技術(shù)以上幾種都是應用細菌的表現(xiàn)特性（包括形態(tài)、生理、生化、血清等）進行鑒定。雖然這種方法很成功，但對分相似的細菌卻難以區(qū)別。進二年來，核酸技術(shù)應用于分類鑒定已成為發(fā)展趨勢。3、2PCR技術(shù)PCR技術(shù)采用體外酶促反應合成特異性DNA片段，再通過擴增產(chǎn)物來識別細菌。由于PCR靈敏度髙，理論上可以檢出一個拷貝的基因，因此在細菌的檢測中只需短時間增菌甚至不增菌，即可通過PCR進行篩選，節(jié)約了大量時問，但PCR技術(shù)缺點：增菌培養(yǎng)基成分和其他微生物DNA對Taq酶具有作用，可能導致檢驗結(jié)果假陰性；微量的外源性DNA進入PCR后可以引起無限大產(chǎn)生假陽性結(jié)果；擴增過程中有一定的裝配誤差會對結(jié)果產(chǎn)生影響。3、3基因探針技術(shù)基因探針技術(shù)利用具有同源性序列的核酸單鏈在適當條件下互補形成穩(wěn)定的DNARNA或DNADNA鏈的原理，采用髙度特異性基因片段制備基因探針來識別細菌?；蛱结樀膬?yōu)點是減少了基因片段長度多態(tài)性所需要分析的條帶數(shù)。如法國生物一梅里埃公司的基因探針檢測系統(tǒng)，30min完成微生物的確證試驗，基因探針的缺點是不能鑒定目標菌以外的其他菌。3、416SrDNA基因同源性分析16SrDNA基因同源性分析是一種常用的細菌分子鑒定方法，16SrDNA基因的擴增需要細菌染色體DNA作為模板。目前建立了1種新的快速髙效的細菌染色體DNA提取方法，整個提取過程僅耗時2min，從而使得細菌的快速鑒定成為可能。當前制藥企業(yè)中應有較多的是表型鑒定的一些系統(tǒng)，但隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，微生物鑒定正經(jīng)歷由表現(xiàn)型向基因型鑒定轉(zhuǎn)變的過程。近年來興起的基因探針技術(shù)及全自動微生物檢測系統(tǒng)，將從根本上改變微生物的檢測方法，具有非常廣闊的應用前景。參考文獻：［1］陳艷、微生物鑒定方法的比較J］-中國水產(chǎn)、