第5章黃酮類化合物

第五章黃酮類化合物主講：陳欲云

*2第一節(jié)概述第二節(jié)黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顯色反應(yīng)第三節(jié)黃酮類化合物的提取和分離第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)鑒定*3（一）基本結(jié)構(gòu)

1952年以前，黃酮類化合物主要是指基本母核為2-苯基色原酮的一系列化合物。色原酮2-苯基色原酮（黃酮）一、基本結(jié)構(gòu)和分類第一節(jié)概述*4現(xiàn)在的黃酮類化合物則泛指兩個(gè)苯環(huán)（A與B環(huán)）通過(guò)中央三碳鏈相互連接而成的一類化合物。

C6-C3-C6第一節(jié)概述BA*5

黃酮類化合物的苷元的結(jié)構(gòu)類型根據(jù)三碳鏈氧化程度、B環(huán)（苯基）連接位置（2-位或3-位）以及三碳鏈?zhǔn)欠駱?gòu)成環(huán)狀分為下列類型：第一節(jié)概述*6１．黃酮類（flavones）

木犀草素（luteolin），存在于忍冬藤、菊花、浮萍中，具有抗菌作用。luteolin第一節(jié)概述*7luteolin第一節(jié)概述*8

黃芩為清熱解毒類中藥，抗菌成分主要有黃芩苷(baicalin)、次黃芩素(wogonin)等。第一節(jié)概述*9第一節(jié)概述*10２．黃酮醇類（flavonols）

槲皮素(quercetin)具有抗炎、止咳祛痰等作用。槲皮素片用于治療支氣管炎。此外還有降低血壓、增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、減少毛細(xì)血管脆性、降血脂、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量等作用。蘆丁(rutin)是槲皮素的３－O蕓香糖苷。用于治療毛細(xì)管脆弱引起的出血病，并用作高血壓的輔助治療劑。quercetinrutin第一節(jié)概述*11

豆科植物槐米中含有蘆丁和槲皮素。第一節(jié)概述*12３．二氫黃酮類(flavanones)

橙皮苷（hesperidin），具有Vp樣作用第一節(jié)概述*13甘草苷（liquiritin）具有潰瘍抑制作用第一節(jié)概述*14

柚皮素（Naringenin）：來(lái)源于蕓香科植物柚(CitrusparadisiMacfadyen)的果實(shí)；分子式C15H12O；分子量272.25

結(jié)構(gòu)式：

第一節(jié)概述*154．二氫黃酮醇類(flavanonols)

水飛薊素是二氫黃酮醇與苯丙素衍生物縮合成的黃酮木脂素類成分。具有保肝作用，用于治療急、慢性肝炎及肝硬化，代謝中毒性肝損傷。水飛薊素（silybin）第一節(jié)概述*165．查爾酮類（chalcones）

查爾酮為苯甲醛縮苯乙酮類化合物，其鄰羥基衍生物可視為二氫黃酮的異構(gòu)體，二者可相互轉(zhuǎn)化。查耳酮第一節(jié)概述*17

二氫黃酮的吡酮環(huán)芳香性低，在堿的作用下易開(kāi)環(huán)生成6’-羥基查耳酮，由無(wú)色轉(zhuǎn)為深黃色，后者經(jīng)酸化又能轉(zhuǎn)化為原來(lái)的二氫黃酮。鄰羥基查耳酮二氫黃酮第一節(jié)概述*18

紅花所含的色素紅花苷是第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的查耳酮類植物成分。

紅花在開(kāi)花初期，花冠呈淡黃色；開(kāi)花中期，花冠呈深黃色；開(kāi)花后期或采收干燥過(guò)程中由于酶的作用，氧化成紅色。第一節(jié)概述*19菊科植物紅花。第一節(jié)概述*206．異黃酮類(isoflavones)

主要存在于豆科、鳶尾科等植物中。如葛根主要含有下列幾種異黃酮類成分。葛根總黃酮具有擴(kuò)冠、增加冠脈流量及降低心肌耗氧量等作用。大豆素具有類似罌粟堿的解痙作用。大豆苷、葛根素及大豆素均能緩解高血壓患者的頭痛等癥狀第一節(jié)概述*21豆科植物葛。第一節(jié)概述*227．二氫異黃酮類

第一節(jié)概述*238．雙黃酮類

由二分子黃酮衍生物聚合生成的二聚物，多分布于裸子植物中。銀杏中含有多種雙黃酮，如銀杏素。銀杏黃酮（ginkgetin）第一節(jié)概述*24銀杏科植物銀杏*259．花色苷類(anthocyanidins)

是使花、葉、果、莖等呈現(xiàn)藍(lán)、紫、紅等顏色的色素。以苷的形式存在于細(xì)胞液中，經(jīng)水解可生成苷元——花色素及糖。第一節(jié)概述*2610．黃烷-3-醇(flavan-3-ols)及黃烷-3，4-二醇(flavan-3,4-diols)類

第一節(jié)概述*2711．苯駢色酮(xanthanes)

石韋中的異芒果素具有止咳祛痰的功效。

第一節(jié)概述*28

水龍骨科植物石韋第一節(jié)概述*2912．橙酮類化合物硫磺菊素(sulphuretin)第一節(jié)概述*30二、黃酮類化合物的生物合成途徑

第一節(jié)概述*31三、黃酮類化合物的生物活性

1.對(duì)心血管系統(tǒng)的作用

Vp樣作用：蘆丁、橙皮苷等有Vp樣作用，能降低血管脆性及異常通透性，可用作防治高血壓及動(dòng)脈硬化的輔助治療劑。擴(kuò)冠作用：蘆丁、槲皮素、葛根素、人工合成的力可定。降血脂及膽固醇：木樨草素第一節(jié)概述*32蘆丁片

蘆丁是從中國(guó)所獨(dú)有的國(guó)槐的花蕾中提取的植物藥，也稱維生素P，具有降低毛細(xì)血管的異常通透性和脆性的作用，是心腦血管保護(hù)藥，國(guó)內(nèi)用于心腦血管藥品制劑的主要成分，國(guó)外還大量用于食品添加劑和化妝品。鑒別：

(1)取本品的細(xì)粉少許，加氫氧化鈉試液5mL，溶液顯橘黃色。

(2)取本品的細(xì)粉少許，加乙醇15mL，微熱使蘆丁溶解，溶液分成二份：一份中加鹽酸1mL與金屬鎂或金屬鋅數(shù)小粒，漸顯紅色；另一份中加三氯化鐵試液1滴，顯棕綠色。第一節(jié)概述*332.抗肝臟毒作用從水飛薊種子中得到的水飛薊素具有保肝作用，用于治療急、慢性肝炎、肝硬化及多種中毒性肝損傷。（+）-兒茶素(catergen)也可抗肝臟毒作用，治療脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起的中毒性肝損傷。第一節(jié)概述*34水飛薊第一節(jié)概述*35水飛薊片

本品為菊科植物水飛薊（紫花）[Silybummarianum(L)Gacntm的果實(shí)，經(jīng)提取精制所得的淡黃色粉末，或結(jié)晶性粉末。無(wú)味、無(wú)臭、易溶于丙酮、模酸乙酯、乙醇及由醇、難溶于氯仿，不溶于水，主要化學(xué)成份為水飛薊賓（Silybin)C25H22O10及其異物等黃酮類物質(zhì)。

功能與主治：本品具有保肝及降血脂作用，用于治療慢性肝炎，早期肝硬變、代謝中毒性肝損傷及高血脂癥。

第一節(jié)概述*36

3.抗炎蘆丁及其衍生物羥乙基蘆丁、二氫槲皮素等具抗炎作用。

4.抗菌及抗病毒作用如木樨草素、黃芩苷、黃芩素

5.解痙作用異甘草素、大豆素：解除平滑肌痙攣；大豆苷、葛根素及葛根總黃酮可緩解高血壓患者的頭痛等癥狀；杜鵑素、川陳皮素、槲皮素、山奈酚、芫花素、羥基芫花素：止咳祛痰。第一節(jié)概述*376.雌性激素樣作用大豆素(daidzein)等異黃酮具有雌性激素樣作用，可能與它們與己烯雌酚結(jié)構(gòu)類似。第一節(jié)概述*387.清除人體自由基作用

黃酮類化合物多具有酚羥基，易氧化成醌類而提供氫離子，故有顯著的抗氧特點(diǎn)。

另外還有降血脂、血糖，抗動(dòng)脈粥樣硬化及抗癌抗突變等作用。第一節(jié)概述*398.抗腫瘤作用

抗癌新藥Flavopiridol的發(fā)現(xiàn)與研Flavopiridol是一種源于植物（CDYSOXYLUMBINECTARIFERUM）的黃酮類化合物。目前正被用于十幾項(xiàng)一期和二期的癌癥臨床試驗(yàn)。最近，不同的研究者證實(shí)其對(duì)艾滋病也有異于其他藥物的療效。它的早期發(fā)現(xiàn)得益于工業(yè)界對(duì)自然產(chǎn)物的研究興趣。在從樹(shù)皮中提取出純化合物后，前HOECHST公司又進(jìn)行了結(jié)構(gòu)與人工合成的研究。由此建立了一系列同型物，包括Flavopiridol的專利。

第一節(jié)概述*40

在NIH大規(guī)?？拱┪锖Y選中，F(xiàn)lavopiridol脫穎而出，成為一種新的低毒性的研究藥物。它的治癌機(jī)理被認(rèn)為是作用于激酶，從而阻斷細(xì)胞循環(huán)。這一解釋間接地為CDK2-Flavopiridol的復(fù)合晶體結(jié)構(gòu)所證實(shí)。跨學(xué)科外向的合作以及現(xiàn)代技術(shù)的應(yīng)用是加速Flavopiridol和其他后續(xù)藥物的研究與開(kāi)發(fā)所不可缺少的。第一節(jié)概述*41第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)

一、性狀

1.多為結(jié)晶性固體，少為（如黃酮苷類）無(wú)定形粉末。

2.旋光性：游離苷元中，除二氫黃酮、二氫黃酮醇、黃烷、黃烷醇及雙黃酮有旋光外，其余無(wú)旋光性。苷類由于結(jié)構(gòu)中引入糖的分子，均有旋光性，且多為左旋。*42

3.顏色：①分子中是否存在交叉共軛體系②助色團(tuán)的數(shù)目③取代基的位置有關(guān)。色原酮部分原本無(wú)色，但在2位引入苯環(huán)后，即形成交叉共軛體系，且通過(guò)電子的轉(zhuǎn)移，重排，使共軛鏈延長(zhǎng)，而表現(xiàn)出顏色。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)

*43

黃酮、黃酮醇及苷類灰黃-黃色查耳酮黃-橙黃色二氫黃酮、二氫黃酮醇無(wú)色異黃酮微黃色其中，黃酮、黃酮醇及苷類、查耳酮等因分子中存在交叉共軛體系，在7,4’位引入-OH,OCH3等供電子基團(tuán)則促進(jìn)電子移位、重排，使化合物顏色加深?；ㄉ占捌滠赵念伾SpH的不同而改變：呈現(xiàn)紅（pH<7），紫（pH8.5）、蘭（pH>8.5）第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)

*44二、溶解度1.游離苷元難溶或不溶于水，易溶于MeOH,EtOH,EtOAc,Et2O

黃酮、黃酮醇及查耳酮是平面型分子，分子堆砌緊密，分子間引力較大，更難溶于水。二氫黃酮、二氫黃酮醇是非平面型分子，分子排列不緊密，分子間引力降低，對(duì)水的溶解度較大。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)

*45

花色苷元（花青素）類雖系平面型分子，但因以離子形式存在，具有鹽的通性，故親水性較強(qiáng)，水溶度較大。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)

*46

黃酮苷元引入羥基越多，水溶性越強(qiáng)，羥基甲基化后，則增加在有機(jī)溶劑中的溶解度。如一般黃酮類化合物不溶于石油醚中，可與脂溶性雜質(zhì)分開(kāi)，但川陳皮素（5,6,7,8,3’,4’-六甲氧基黃酮）卻可溶于石油醚。

第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)

*472.黃酮類化合物的羥基苷化后，水溶性相應(yīng)增大，而在有機(jī)溶劑中的溶解度相應(yīng)減小。黃酮苷一般易溶于H2O,MeOH,EtOH等，難溶或不溶于苯，氯仿等。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)

*48三、酸堿性

1.酸性黃酮類化合物多具有酚羥基而呈酸性，可溶于堿性水液，吡啶，甲酰胺及二甲基甲酰胺。酸性強(qiáng)弱順序：7,4’-二羥基>7,或4’羥基>一般酚羥基>5-羥基>3-羥基此性質(zhì)可用于提取、分離及鑒定工作。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)

*492.堿性

-吡喃酮上的1-位氧原子上有未共用電子對(duì)，表性微弱的堿性，可與強(qiáng)無(wú)機(jī)酸如濃硫酸，鹽酸生成yang鹽，但極不穩(wěn)定，加水即可分解。

黃酮類化合物溶于濃硫酸中生成的yang鹽常表性特殊的顏色，可用于鑒別。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*50四、顯色反應(yīng)(一)還原反應(yīng)

1.鹽酸-鎂粉（鹽酸-鋅粉）反應(yīng)

黃酮、黃酮醇及二氫黃酮、二氫黃酮醇類在鹽酸-鎂粉作用下，易被氫化還原，迅速生成紅-紫紅（個(gè)別有綠-蘭色）。將樣品溶于甲醇或乙醇，加少量鎂粉振搖，滴加幾滴濃鹽酸，1-2分鐘內(nèi)（必要時(shí)微熱）即可出現(xiàn)顏色。多顯橙紅-紫紅色，少數(shù)蘭-紫色，B環(huán)有-OH或OCH3取代時(shí)，顏色隨之加深，查耳酮、橙酮、兒茶素類則不反應(yīng)?；ㄉ丶安糠植槎?、橙酮等在濃鹽酸酸性條件下也會(huì)發(fā)生色變，故須先做一對(duì)照。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*512.四氫硼鈉反應(yīng)與二氫黃酮類化合物產(chǎn)生紅-紫色。取樣品10mg溶于甲醇，加NaBH410mg，再滴加1%濃鹽酸或濃硫酸，呈紅-紫色。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*52（二）金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)

黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)中多有3-OH,4=O;5-OH,4=O;鄰二酚羥基，?？膳c鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽等試劑生成有色絡(luò)合物。

1.鋁鹽

1%AlCl3或Al(NO3)3：生成絡(luò)合物為黃色(max=415nm)，并有熒光。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*532.鉛鹽

1%PbAc2或堿式醋酸鉛水液。生成黃-紅色沉淀。醋酸鉛可沉淀具有鄰二酚羥基或兼有3-OH,4=O或5-OH,4=O者。堿式醋酸鉛可沉淀具有一般酚類化合物。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*543.鋯鹽:2%氯氧化鋯甲醇液第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*55

4.鎂鹽

醋酸鎂甲醇液作顯色劑，可在紙上進(jìn)行。二氫黃酮（醇）類顯天藍(lán)色熒光，若具有C5-OH，色澤更明顯。而黃酮、黃酮醇及異黃酮類則顯黃-橙黃-褐色。

5.氯化鍶(SrCl2)

使具有鄰二酚羥基的黃酮顯綠-棕色-黑色沉淀。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*56

6.氯化鐵(FeCl3)

檢查酚羥基。多數(shù)黃酮類化合物具有酚羥基，可產(chǎn)生正反應(yīng)，生成綠、藍(lán)、黑、紫等顏色。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*57（三）硼酸顯色反應(yīng)

條件：1具有下列結(jié)構(gòu)（5-羥基黃酮，2’-羥基查耳酮）

2有無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸存在在草酸存在下，顯黃色并帶綠色熒光。在枸櫞酸丙酮存在條件下，只顯黃色而無(wú)熒光。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*58（四）堿性試劑顯色反應(yīng)

日光及紫外光下，通過(guò)紙斑反應(yīng)，觀察樣品用堿性試劑處理后的色變情況。

1.二氫黃酮類易在堿液中開(kāi)環(huán)，轉(zhuǎn)變成相應(yīng)異構(gòu)體——查耳酮類化合物，顯橙-紅色。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*59

2.黃酮醇類在堿液中先呈黃色，通入空氣后變?yōu)樽厣?，?jù)此可與黃酮類區(qū)別。

3.黃酮類化合物當(dāng)分子中有鄰二酚羥基取代或3,4’-二羥基取代時(shí)，在堿液中不安定，很快氧化，由黃色深紅色綠棕色沉淀。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*60(五)與五氯化銻的反應(yīng)

查耳酮的無(wú)水(!)CCl4溶液與五氯化銻作用生成紅或紫紅沉淀,黃酮、黃酮醇、二氫黃酮類顯黃-橙黃色。

方法：

樣品5-10mg溶于5ml無(wú)水CCl4中，加1ml2%的五氯化銻的CCl4溶液。反應(yīng)必須無(wú)水，否則生成沉淀不穩(wěn)定。第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)*61（六）Gibbs反應(yīng)

檢查5-OH對(duì)位未被取代的黃酮。將樣品溶于吡啶中，加入Gibbs試劑顯藍(lán)或藍(lán)綠色。Gibbs試劑:

甲液：0.5%2,6-二氯苯醌-4氯亞胺的乙醇溶液。乙液：硼酸-氯化鉀-氫氧化鉀緩沖液(pH9.4)第二節(jié)

黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顏色反應(yīng)練習(xí)1：

HCl-Mg反應(yīng)

NaBH4反應(yīng)

鋯-枸櫞酸反應(yīng)SrCl2反應(yīng)

硼酸+草酸反應(yīng)

Molish反應(yīng)

*62(＋)(－)黃色，加枸櫞酸后褪色(＋)(＋)(＋)*63一、提取黃酮類化合物在花、液、果等組織中，多以苷的形式存在；在木部堅(jiān)硬組織中，多以游離苷元形式存在；根據(jù)化合物極性不同，溶解性不同，采用不同溶劑提取。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*641.苷元

多用CHCl3、Et2O、EtOAc等極性較小溶劑提?。粚?duì)于多OCH3化的成分，用苯、石油醚提取；對(duì)于極性大的成分，如查耳酮、橙酮、雙黃酮、羥基黃酮等，用EtOAc、EtOH、Me2CO、MeOH;H2O(1;1)等溶劑提取。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*65

2.苷類水或熱水提取，（多糖苷在熱水中溶解度較大，在冷水中溶解度較小）；也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。

3.含羥基的苷或苷元，可用堿水提取。

4.提取花青素類可加入少量酸，但一般黃酮類化合物則應(yīng)避免。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*66二、粗提物的精制處理

1．

溶劑萃取法去雜石油醚：除去葉綠素、胡羅卜素等脂溶性色素水溶醇沉：除去蛋白質(zhì)、多糖、大分子水溶性物質(zhì)逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚在萃取除雜的同時(shí)，可使不同極性或極性相差較大者分離，如極性不同的苷和苷元，極性苷元和非極性苷元。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*672．

堿水提酸沉淀法

適用于含酚羥基的化合物，如槐米中蘆丁的提取。注意事項(xiàng)：①酸堿度不宜過(guò)大②鄰二酚羥基的保護(hù)：堿性條件下，鄰二酚羥基易被氧化，加硼砂保護(hù)③石灰乳的加入可除去果膠、粘液等水溶性酸性雜質(zhì)第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*683．

炭粉吸附法

適用于苷類的精制工作。植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，過(guò)濾得吸附苷的活性炭粉末。依次用沸水、沸甲醇、7%酚/水、15%酚/醇洗脫，分步收集、檢查、合并。大部分苷類可用7%酚/水洗下，經(jīng)減壓濃縮至小體積，乙醚除酚，余下水層經(jīng)減壓濃縮得較純黃酮苷。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*694．

離子交換法

用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂從水提液中吸附黃酮類化合物，與不被吸附的雜質(zhì)分離，再用甲醇將黃酮類化合物洗脫。

RSO3-H+ArOH（黃酮）無(wú)法交換，故實(shí)際上樹(shù)脂僅起到吸附作用。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*70三、分離

1.極性大小不同，利用吸附或分配原理進(jìn)行分離常用吸附劑有聚酰胺、硅膠、纖維素粉。１）聚酰胺層析：主要有聚己內(nèi)酰胺型(Perlon)、六次甲基二胺已二酸鹽(Nylon)型、聚乙烯吡咯烷酮(Polyclar)型三種。其原理是酰胺羰基與黃酮酚羥基形成氫鍵締合而吸附，吸附能力與酚羥基多少、位置及氫鍵締合力大小有關(guān)。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*71

各種溶劑在聚酰胺柱上洗脫能力由弱至強(qiáng)依次為：水，甲醇，丙酮，氫氧化鈉水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*72黃酮類化合物從聚酰胺柱洗脫時(shí)有下列規(guī)律：①苷元相同，洗脫先后順序一般為：三糖苷雙糖苷單糖苷苷元②母核上增加羥基，洗脫速度相應(yīng)減慢羥基位置的影響：具有鄰位羥基黃酮具有對(duì)位（或間位）羥基黃酮③不同類型的黃酮類化合物，先后流出順序一般是：異黃酮二氫黃酮醇黃酮黃酮醇④分子中芳香核、共軛雙鍵多者吸附力強(qiáng)，故查耳酮往往較相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*73２）硅膠層析

①對(duì)酚羥基多的黃酮類，如多羥基黃酮及其苷類，硅膠減活性使用②對(duì)酚羥基少的黃酮類，如甲基化、乙?；S酮及二氫黃酮、異黃酮，則無(wú)須減活性。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*742.利用分子大小不同，用葡聚糖凝膠分子篩分離

主要用兩種型號(hào)的凝膠Sephadex-G型和Sephadex-LH20型分離游離黃酮主要是吸附作用，極性小大洗脫。分離黃酮苷類，主要是分子篩作用，分子大小洗脫。總的洗脫順序：糖多的苷糖少的苷游離苷元（極性小大）常用洗脫劑：①堿性水溶液，含鹽水溶液②醇及含水醇③含水丙酮，甲醇－氯仿

第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*75３．利用酸性強(qiáng)弱，采用pH梯度萃取法

混合物溶于有機(jī)溶劑，依次用５％NaHCO3、５％Na2CO3、0.2%NaOH、4%NaOH萃取，相應(yīng)的黃酮類化合物洗脫順序：7,4’－二羥基7或4’羥基一般酚羥基５－羥基黃酮第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*76４．根據(jù)分子中某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離

醋酸鉛沉淀法硼酸絡(luò)合法：根據(jù)具有鄰二酚羥基的黃酮與硼酸絡(luò)合，生成物易溶于水的性質(zhì)與其它類型黃酮分離。通常在不與水混溶的有機(jī)溶劑如乙醚中，用硼酸液萃取，水相即為鄰二酚羥基類黃酮。第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*77

舉例：從芹菜［ApiumgraveolensL.］種子中分離graveobiodideA及B

第三節(jié)

黃酮類化合物的提取分離*78*79目前主要采用的方法有：①與標(biāo)準(zhǔn)品或與文獻(xiàn)對(duì)照PPC或TLC得到的Rf或hRf值（Rf100）②分析對(duì)比樣品在甲醇溶液中及加入酸、堿或金屬鹽類試劑后得到的UV光譜③1H-NMR④13C-NMR⑤MS第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*80一、色譜在黃酮類鑒定中的作用

1.紙色譜(PPC)

苷類成分可采用雙向展開(kāi)，第一相展開(kāi)采用醇性溶劑，如BAW系統(tǒng)（正丁醇：醋酸：水4：1：5上層）；第二相展開(kāi)用水性溶劑，如氯仿：醋酸：水（3：6：1）苷元?jiǎng)t多采用醇性溶劑?；ㄉ占捌滠赵捎煤}酸或醋酸的溶劑。第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*81第一次第二次紙色譜第一相展開(kāi)劑：醇性溶劑BAW（4:1:5），分配作用Rf：苷元﹥單糖苷﹥雙糖苷第二相展開(kāi)劑：水性溶劑，2%HAc，吸附作用Rf：（1）苷元原點(diǎn)附近，苷﹥0.5，糖鏈越長(zhǎng)，Rf越大（2）苷，黃酮（醇）查耳酮﹤二羥黃酮（醇）第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*82二、紫外光譜在黃酮類鑒定中的應(yīng)用

可用于確定黃酮母核類型及確定某些位置是否含有羥基。一般程序：

①測(cè)定樣品在甲醇中的UV譜以了解母核類型；

②在甲醇溶液中分別加入各種診斷試劑后測(cè)UV譜和可見(jiàn)光譜以了解3，5，7，’，4’有無(wú)羥基及鄰二酚羥基；

③苷類可水解后（或先甲基化再水解），再用上法測(cè)苷元的UV譜以了解糖的連接位置。第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*83（一）黃酮類化合物在甲醇溶液中的紫外光譜

多數(shù)黃酮類化合物由兩個(gè)主要吸收帶組成：帶I在300-400nm區(qū)間，由B環(huán)桂皮酰系統(tǒng)的電子躍遷所引起；第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*84

帶II在240-285nm區(qū)間，由A環(huán)苯甲酰系統(tǒng)的電子躍遷所引起。

第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*85

帶II(240-285nm)（苯甲酰系統(tǒng)）帶I(300-400nm)桂皮酰系統(tǒng)類

型說(shuō)

明

250-285304-350黃酮類

-OH越多，帶I帶II越紅移

B環(huán)3’,4’有-OH基，帶II為雙峰（主峰伴肩峰）328-357黃酮醇類(3-OR)

352-385黃酮醇類(3-OH)

245-270270-295300-400異黃酮類二氫黃酮（醇）B環(huán)上有-OH,OCH3對(duì)帶I影響不大

220-270340-390或340-390(Ia)300-320(Ib)查耳酮類查耳酮2’-OH使帶I向紅移影響大370-430(3-4個(gè)小峰)橙酮類

第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*862．加入診斷試劑后引起的位移及結(jié)構(gòu)測(cè)定

第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*87加入試劑帶II帶I說(shuō)明樣品+MeOH250-285304-385兩峰強(qiáng)度基本相同，具體位置與母核上電負(fù)性取代基(-OH,-OCH3)有關(guān)，-OH,-OCH3越多，越長(zhǎng)移

+NaOMe或+NaOHA環(huán)有-OH，紅移小，無(wú)意義40-60nm（不變或增強(qiáng)）50-60nm（下降）有4’-OH，無(wú)3-OH

有3-OH，無(wú)4’-OH有3,4’-OH或3,3’,4’-OH（衰減更快）

7-OH帶I，II隨加NaOMe時(shí)間延長(zhǎng)，逐漸衰減

320-330nm有小峰+NaOAc(未熔溶)5-20有3-OH,4’OH也發(fā)生紅移，但意義不大7-OH第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*88加入試劑帶II帶I說(shuō)明+NaOAc/H3BO35-10

12-30有6,7-OH或7,8-OH(5,6-OH無(wú))B環(huán)有鄰二酚羥基

AlCl3/HCl

6050-6035-5517-200有3-OH有3,5-二OH有5-OH，無(wú)3-OH有6-OR無(wú)3-OH,5-OH或6-OR存在AlCl3光譜-AlCl3/HCl光譜

30-4050-650B環(huán)有鄰二酚羥基A,B環(huán)皆有鄰二酚羥基A,B環(huán)皆無(wú)鄰二酚羥基第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*89說(shuō)明：1）+NaOMe,OHOMe，紅移另有有3,4’-OH或3,3’,4’-OH時(shí)，在NaOMe作用下易氧化破壞，故峰有衰減。

2）NaOAc為弱堿，僅使酸性較強(qiáng)者，如7,4’-OH解離。第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*903）形成絡(luò)合物的能力：黃酮醇3-OH>黃酮5-OH（二氫黃酮5-OH）>鄰二酚羥基>二氫黃酮醇3-OH鄰二酚羥基和二氫黃酮醇3-OH在酸性條件下不與AlCl3絡(luò)合；但不在酸性條件下，五者皆與Al3+絡(luò)合；形成絡(luò)合物越穩(wěn)定，紅移越多。4）二者相減可檢測(cè)鄰二酚羥基。

第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*91蘆丁帶II帶IMeOH259359NaOMe272410AlCl3275433AlCl3/HCl271402NaOAc271393NaOAc/H3BO3262387第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定黃酮醇或3-0-苷△Ⅰ=410-359=51，

4’-OH△Ⅰ=402-433=-31，B環(huán)有鄰二OH△Ⅰ=402-359=43，有5-OH，無(wú)3-OH△Ⅱ=271-259=12，7-OH△Ⅰ=387-359=28，B環(huán)有鄰二OH*92三、1H-NMR

常用溶劑：氘代氯仿（CDDl3），氘代二甲基亞砜（DMSO-d6），氘代吡啶（C5D5N）。也可將黃酮類化合物作成三甲基硅醚衍生物溶于四氯化碳中進(jìn)行測(cè)定。第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*93（一）A環(huán)質(zhì)子

1．5，7-二OH黃酮第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*942．7-OH黃酮

H-5較H-6、H-8低場(chǎng)，是由于羰基的負(fù)屏蔽效應(yīng)的影響。H-6、H-8較5,7-二OH黃酮低場(chǎng)，且相互位置可能顛倒。第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*95（二）

B環(huán)質(zhì)子δ6.5-8

1．4’-氧取代黃酮類化合物H-3’,5’6.5-7.1,d,J=8.5HzH-2’,6’7.1-8.1,d,J=8.5Hz由于C環(huán)對(duì)H-2’,6’的負(fù)屏蔽作用大于對(duì)H-3’,5’，且H-3’,5’受4’-OR的屏蔽作用，故前者較低場(chǎng)；C環(huán)氧化程度越高，H-2’,6’處于越低場(chǎng)的位置。第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*962．3’,4’-二氧取代黃酮類化合物

H-2’受C環(huán)負(fù)屏蔽和3’-OR屏蔽作用，H-6’也受C環(huán)負(fù)屏蔽作用，而H-5’則僅4’-OR屏蔽作用。故由低場(chǎng)到高場(chǎng)的順序?yàn)椋篐-6’H-2’H-5’。但有時(shí)也會(huì)發(fā)生H-2’和H-6’重疊的現(xiàn)象。（1）3’,4’-二氧取代黃酮及黃酮醇

H-5’6.7-7.1d,J=8.5HzH-2’7.2d,J=2.5HzH-6’7.9dd,J=2.5,8.5Hz第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*97

（2）3’,4’-二氧取代異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇

H-2’,5’,6’常作為一個(gè)復(fù)雜多重峰（通常為兩組峰）

6.7-7.1第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*983．3’,4’,5’-三氧取代黃酮類化合物

若R1=R2=R3=H，則H-2’,6’為單峰，

6.7-7.5若上述條件不成立，則H-2’,6’分別為二重峰（J=2Hz）第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*99（三）

C環(huán)質(zhì)子

1.黃酮類第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*1003.二氫黃酮和二氫黃酮醇

1)二氫黃酮兩個(gè)H-3,分別為dd峰，中心位于δ2.8，J=17Hz（偕偶），5Hz（順偶）及J=17Hz（偕偶），11Hz（反偶）H-2,dd,δ5.2,Jtrans=11Hz（反偶）,Jcis=5Hz（順偶）第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*101（2）二氫黃酮醇

3-OR苷化，供電子能力下降，兩個(gè)氫的δ值升高（向低場(chǎng)位移），可用于判斷二氫黃酮醇苷中糖的位置。

H-2與H-3為反式雙直立鍵，J=11HzH-2δ4.9H-3δ4.3第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*1024.查耳酮

第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*1035.橙酮

第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*104四、13C-NMR

方法：

1）對(duì)比法：與簡(jiǎn)單的模型化合物如苯乙酮、桂皮酸及它們的衍生物光譜的比較；

2）計(jì)算法：用經(jīng)驗(yàn)的簡(jiǎn)單芳香化合物的取代位移加和規(guī)律進(jìn)行計(jì)算；

3）選用各種一維和二維NMR技術(shù)。第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*105（一）骨架類型的判斷

根據(jù)中央三碳鏈的碳信號(hào)，即先根據(jù)羰基碳的δ值，再結(jié)合C2、C3的裂分和δ值判斷。第四節(jié)

黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定*106C=OC-2（或C-β）C-3（或C-α）歸屬168.6~169.8(s)137.8~140.7(d)122.1~122.3(s)異橙酮類

174.5~184.0(s)160.5~163.2(s)104.7~111.8(d)黃酮類149.8~155.4(d)122.3~125.9(s)異黃酮類147.9(s)136.0(d)黃酮醇類182.5~182.7(s)146.1~147.7(s)111.6~111.9(d)(=CH-)橙酮類

188.0~197.0(s)

136.9~145.4(d)116.6~128.1(d)查耳酮類75.0~80.3(d)42.8~44.6(t)二氫黃酮類82.7(d)71.2(