普通固體制劑2023版微生物限度方法適用性試驗報告

微生物限度方法適用性試驗報告文件編號：XXXXXXX制藥微生物限度方法適用性試驗報告起草人_____________部門____________日期___________審核人_____________部門____________日期___________批準(zhǔn)人_____________日期___________1、概述本公司主要產(chǎn)品之一，本產(chǎn)品已進(jìn)行批量生產(chǎn)并已進(jìn)行工藝驗證,微生物檢驗相對穩(wěn)定，由于《中華人民共和國藥典》2023年版對微生物限度檢查方法改變，其產(chǎn)品的微生物檢驗方法和培養(yǎng)基發(fā)生改變，可能影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。為確保檢測方法的準(zhǔn)確性及適應(yīng)性，測定方法的可靠性進(jìn)行驗證，根據(jù)樣品特性制定檢驗方法和檢驗條件，按制定的方法進(jìn)行試驗，根據(jù)驗證結(jié)果判斷是否符合驗證標(biāo)準(zhǔn)。2、驗證依據(jù)：《中華人民共和國藥典》2023版四部通則1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法、1106非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法、1107非無菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。3、驗證目的建立該產(chǎn)品的微生物限度檢查方法，并對其有效性進(jìn)行評價，確保試驗方法的完整性，保證檢驗結(jié)果的可靠性。4、驗證小組成員及職責(zé)人員姓名職位職責(zé)組長質(zhì)量部經(jīng)理質(zhì)量負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)驗證報告的審核、批準(zhǔn)。副組長質(zhì)量部QC主任1.負(fù)責(zé)對確認(rèn)記錄、數(shù)據(jù)進(jìn)行復(fù)核，確認(rèn)報告的總結(jié)。2.負(fù)責(zé)對驗證及檢驗記錄、數(shù)據(jù)、結(jié)果進(jìn)行分析和匯總。成員檢驗人員1、負(fù)責(zé)驗證報告的起草2、負(fù)責(zé)檢驗數(shù)據(jù)的收集、記錄的填寫5、主要驗證用儀器儀表的校驗儀器名稱規(guī)格型號檢定情況檢定部門立式壓力蒸汽滅菌器生化培養(yǎng)箱超凈工作臺結(jié)果：確認(rèn)人：日期：6、驗證用菌種及培養(yǎng)基菌種名稱編號（批號）來源購進(jìn)日期傳代日期傳代次數(shù)銅綠假單胞菌大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉培養(yǎng)基、緩沖液名稱批號配制批號有效期至胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基麥康凱液體培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液復(fù)核人日期7、試驗菌懸液制備7.1需氧菌總數(shù)計數(shù)方法適用性試驗、霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)方法適用性試驗菌株培養(yǎng)接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，于30-35℃培養(yǎng)3天；接種白色念珠菌、黑曲霉于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，于30-35℃培養(yǎng)5天，用于需氧菌總數(shù)計數(shù)方法適用性試驗。接種白色念珠菌、黑曲霉于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，于20-25℃培養(yǎng)5天，用于霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)方法適用性試驗。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液；取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加人3～5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在2?8℃，可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2?8℃,在驗證過的貯存期內(nèi)使用。7.2大腸埃希菌檢查方法適用性實驗菌株培養(yǎng)將大腸埃細(xì)菌接種于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，30-35℃培養(yǎng)18-24小時，取培養(yǎng)物適量，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在2?8℃，可在24小時內(nèi)使用。8、供試液的制備取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，制成1：10的供試液。8.1需氧菌總數(shù)、霉菌及酵母菌總數(shù)計數(shù)方法適用性試驗試驗組取上述1:10供試液1ml和不大于100cfu試驗菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉），分別注入無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數(shù)。取上述1:10供試液1ml和不大于100cfu試驗菌（白色念珠菌、黑曲霉），分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數(shù)。胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基用于需氧菌總數(shù)計數(shù)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)。供試品對照組取規(guī)定量供試液，按平皿法測定供試品本底菌數(shù)。菌液對照組：測定所加的菌液數(shù)。陰性對照組：取試驗用的稀釋液1ml，置無菌平皿中，注入培養(yǎng)基，凝固，倒置培養(yǎng)。每種計數(shù)用的培養(yǎng)基各制備2個平板，均不得有菌生長。培養(yǎng)：需氧菌總數(shù)計數(shù)平板倒置于30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，霉菌、酵母菌總數(shù)計數(shù)平板倒置于20～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天?；厥章视嬎悖航Y(jié)果判斷：試驗組的菌回收率（試驗組的平均菌落數(shù)減去供試品對照組的平均菌落數(shù)的值占菌液對照組的平均落數(shù)的百分率）應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)。8.2控制菌檢驗方法驗證8.28.2.1.1試驗組：取1：10的供試液10ml和不大于100cfu的大腸埃希菌菌液1ml，接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～358.2.1.2供試品對照組：取1：10的供試液10ml接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～358.2.1.3陽性對照組：取不大于100cfu的大腸埃希菌菌液1ml，接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～358.2.1.4陰性對照組：取試驗用的稀釋液10ml，接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35取上述培養(yǎng)物1ml接種100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，42～44℃培養(yǎng)24小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18小時。若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進(jìn)行分離、純化適宜的鑒定試驗，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。8.2.1.6結(jié)果判斷：在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，陰性對照組與供試品對照組應(yīng)無菌生長，其他各試驗組應(yīng)9、需氧菌總數(shù)計數(shù)方法適用性試驗記錄菌種產(chǎn)品批號試驗組（cfu）供試品對照組（cfu）菌液組（cfu）陰性對照組（cfu）回收率皿1皿2平均皿1皿2平均皿1皿2平均銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌黑曲霉結(jié)論檢驗人日期復(fù)核人日期10、霉菌及酵母菌總數(shù)計數(shù)方法適用性試驗記錄菌種產(chǎn)品批號試驗組（cfu）供試品對照組（cfu）菌液組（cfu）陰性對照組（cfu）回收率皿1皿2平均皿1皿2平均皿1皿2平均黑曲霉結(jié)論檢驗人日期復(fù)核人日期11、大腸埃希菌檢查方法適用性試驗記錄產(chǎn)品批號試驗組麥康凱瓊脂培養(yǎng)基供試品對照組供試品對照組供試品對照組結(jié)論日期復(fù)核人日期備注：“+”為有菌生長或呈陽性，“-”為無菌落生長或呈陰性。12、結(jié)論：本品按《中國藥