結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測技術(shù)選擇-分子線形探針方法

結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測技術(shù)選擇——分子線形探針方法

MDR-TB結(jié)核病患者感染的結(jié)核分枝桿菌體外被證實(shí)至少對異煙肼/利福平耐藥XDR-TB耐藥型TB的特殊形式，由于結(jié)核分枝桿菌對異煙肼、利福平、任何氟喹諾酮類，以及可注射的抗TB藥物卡那霉素、卷曲霉素、阿米卡星、鏈霉素中的至少1種有耐藥性耐藥結(jié)核分枝桿菌機(jī)制基因突變結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生耐藥性的主要原因藥物外排泵的影響結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的改變耐藥產(chǎn)生的主要原因微生物上，耐藥性是基因突變引起藥物對突變株的效力降低造成的。臨床及管理上，不足夠的或不恰當(dāng)?shù)闹委煂?dǎo)致結(jié)核病患者體內(nèi)的耐藥突變株變成優(yōu)勢株。2012年TB流行情況全球（Global

TuberculosisReport2013）TB約有860萬MDR-TB：45萬3.6%新發(fā)結(jié)核病，20%復(fù)治結(jié)核病患者XDR-TB：約有9.6%MDR-TB中國（Tuberculosisprofile

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China,2013）TB：90萬MDR-TB：6萬2012中國MDR-TB流行情況TuberculosisProfileinChina,2012/sree/Reports?op=Replet&name=%2FWHO_HQ_Reports%2FG2%2FPROD%2FEXT%2FTBCountryProfile&ISO2=CN&LAN=EN&outtype=pdf中國耐藥流行情況中國，異煙肼耐藥率位居第一。全國第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查資料匯編中國耐藥流行情況中國單耐藥中，單耐異煙肼的患者最多中國衛(wèi)生部2009年，中國衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局和梅里?；饡诰┞?lián)合舉辦了“耐多藥結(jié)核病診斷技術(shù)研討會”(主要邀請各地疾病預(yù)防控制中心)分別于2007年和2012年與衛(wèi)生部簽署了結(jié)核病防控項(xiàng)目中蓋項(xiàng)目耐多藥結(jié)核鑒定藥敏分子檢測系統(tǒng)的選擇利福平檢測不能替代MDR檢測中國是TB和MDR-TB高負(fù)擔(dān)國家；異煙肼耐藥率居首耐多藥快速診斷需要同時(shí)對異煙肼和利福平進(jìn)行耐藥檢測WHO政策聲明?…有充分的總括性證據(jù)證明關(guān)于在國家特定情況下快速篩查MDR-TB使用線性探針方法的建議的合理性。“耐多藥結(jié)核分枝桿菌快速藥敏檢測

HAIN

GenoTypeMTBDRplusGenoTypeMTBDRplus：一種基于DNASTRIP技術(shù)的線性探針方法。WHO推薦：參比級和地方級選擇線性探針方法應(yīng)用于較高級別的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室。2023/2/1LPA基本原理預(yù)先標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物被固定在硝化纖維試紙條上的DNA探針?biāo)东@，并使用比色法檢測后，結(jié)果以線性條帶形式顯現(xiàn)耐多藥結(jié)核分枝桿菌快速藥敏檢測GenoTypeMTBDRplus基于線形探針技術(shù)

（2008年WHO認(rèn)可）簡便快捷，6小時(shí)得到結(jié)果樣本要求:固體或液體培養(yǎng)物;臨床痰標(biāo)本與傳統(tǒng)藥敏檢測結(jié)果相比，符合率較高2023/2/1GenoTypeMTBDRplus

檢測結(jié)果快速檢測結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTBC）檢測利福平和/或異煙肼的耐藥性（單耐或MDR）檢測異質(zhì)性耐藥

HAIN試劑盒GenoType-DNASTRIP技術(shù)2023/2/121DNA提取PCR反向雜交結(jié)果分析

雜交儀（手工,12條）TwinCubator?（可做12個(gè)條）

雜交儀（全自動,48條）GenoType系列產(chǎn)品可在同一平臺（基于同一種技術(shù)——DNASTRIP技術(shù)）完成：6種MTBC和30種NTM鑒定，MDR-TB和XDR-TB藥敏檢測。GenoTypeMTBDRplus是Genotype系列產(chǎn)品之一，是一種可同時(shí)鑒定MTBC和檢測RFP和/或INH耐藥情況的分子遺傳學(xué)方法。2023/2/124世界衛(wèi)生組織在南非、印度及俄羅斯這些結(jié)核病高發(fā)區(qū)，對比評估分子線性探針與傳統(tǒng)方法結(jié)果顯示分子線性探針對涂陽標(biāo)本的靈敏度和特異性高于97%和98%，肯定了快速檢測對控制耐多藥結(jié)核傳播的價(jià)值。分子線性探針雖然未能完全取代傳統(tǒng)培養(yǎng)，特別涂陰標(biāo)本必須做培養(yǎng)，但這種新技術(shù)大縮短等候的時(shí)間、省略繁瑣的操作流程，并提高了檢測中的生物安全性?？焖贆z測方法與傳統(tǒng)方法對比

傳統(tǒng)法快速法實(shí)驗(yàn)方法PNB/TCH鑒別比例法/絕對濃度法藥敏實(shí)驗(yàn)GenoTypeMTBDRplus樣本要求固體培養(yǎng)物固體培養(yǎng)物涂陽標(biāo)本或培養(yǎng)物（固體/液體）功能鑒別MTB、M.bovis和NTM一二線藥物耐藥情況同時(shí)鑒定MTBC和利福平和/或異煙肼耐藥情況，可確定是否為單耐或MDR時(shí)間4-8周4-8周6小時(shí)工作強(qiáng)度較大大，一般8種藥物最多可以完成30個(gè)樣本/人/天小，Twincubator是12份樣本規(guī)格，全自動GTBlot48是48跟樣品規(guī)格結(jié)果判讀BSL3/2，肉眼讀