ch03硅膠粘合薄層的活度測(cè)定

實(shí)驗(yàn)三硅膠粘合薄層的活度測(cè)定

指導(dǎo)老師：黃紅霞色譜法用途與分類(lèi)薄層色譜法薄層色譜基本原理薄層色譜基本特點(diǎn)薄層色譜法的主要類(lèi)型和吸附色譜原理吸附薄層色譜的吸附劑和展開(kāi)劑展開(kāi)劑的選擇比移值(Rf值)的求取實(shí)驗(yàn)二硅膠粘合薄層的活度測(cè)定

色譜法是分離純化和鑒定有機(jī)物的重要方法之一。色譜法可分為柱色譜、紙色譜、薄層色譜、氣相色譜及高效液相色譜等類(lèi)型。

薄層色譜法

(thinlayerchromatography；TLC)固定相（吸附劑或載體）涂布成一均勻薄層，點(diǎn)樣，（密閉的容器中）展開(kāi)，斑點(diǎn)顯色，（與對(duì)照物質(zhì)）比較進(jìn)行定性定量。依靠毛細(xì)作用力或重力，使流動(dòng)相通過(guò)固定相的一種色譜。

特點(diǎn)：快，需十至幾十分鐘，同時(shí)展開(kāi)多個(gè)試樣。試樣預(yù)處理簡(jiǎn)單，對(duì)試樣限制少。載樣量比較大，適用于制備。儀器簡(jiǎn)單，操作方便。分離能力較強(qiáng)。靈敏度較高。薄層色譜法的主要類(lèi)型和吸附色譜原理

吸附薄層色譜法原理：組分在薄層板上吸附、解吸附、 再吸附、再解吸附的過(guò)程。 吸附系數(shù)不等實(shí)現(xiàn)分離。一般極性強(qiáng)的組分K大，Rf值??；極性弱的組分K小，Rf值大。分配薄層色譜法

吸附薄層色譜的吸附劑吸附劑硅膠：多孔性微粒，表面帶有硅醇基，呈弱酸性。

原理：硅醇基(吸附中心)與極性基團(tuán)形成氫鍵（吸附性）。 組分與硅醇基形成氫鍵（被吸附）的能力不同而分離。

應(yīng)用：酸性和中性物質(zhì)的分離，如有機(jī)酸酚類(lèi)、醛類(lèi)等

硅膠活度與含水量的關(guān)系：含水量高，活性級(jí)高，活度低?；罨杭訜嶂?05℃左右，除去吸附水提高活度。（注意溫度不可過(guò)高）吸附薄層色譜的展開(kāi)劑

先用單一溶劑展開(kāi)，若Rf值太小，則加入一定量極性強(qiáng)的溶劑，（如乙醇、丙酮等），如果Rf值太大，則加入適量極性弱的溶劑(如環(huán)己烷、石油醚等)，以降低極性。展開(kāi)劑選擇原則：根據(jù)被分離物質(zhì)的極性Stahl簡(jiǎn)圖：極性物質(zhì)—活度低（活性級(jí)大）的吸附劑--極性展開(kāi)劑

定性參數(shù)1比移值(Rf值)溶質(zhì)移動(dòng)距離與流動(dòng)相移動(dòng)距離之比。

Rf=L/L0L為原點(diǎn)（origin）至斑點(diǎn)中心的距離，L0為原點(diǎn)至溶劑前沿的距離與組分及色譜條件有關(guān)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．掌握粘合薄層的制備方法。

2．了解粘合薄層活度測(cè)定方法。二、實(shí)驗(yàn)原理

硅膠粘合薄層活度的測(cè)定方法，目前一般都采用Stahl活度測(cè)定法，以二甲黃、蘇丹紅G、靛酚藍(lán)各40mg，溶于100ml揮發(fā)性溶劑中，滴加于薄層上，用石油醚展開(kāi)10cm，應(yīng)不移動(dòng)，如改用苯展開(kāi)則應(yīng)分成三個(gè)斑點(diǎn)，其Rf值分別為：二甲黃0.58，蘇丹紅0.19（？），靛酚藍(lán)0.08，展開(kāi)時(shí)間約為30—40分鐘，經(jīng)本法測(cè)定合格的硅膠薄層其活度與柱色譜法所定活度的Ⅱ一Ⅲ級(jí)相當(dāng)。

三、儀器及試劑1．色譜缸2．二甲黃、蘇丹紅、靛酚藍(lán)3．硅膠(色譜用)、羧甲基纖維素鈉。

四、操作步驟

1．粘合薄層板的鋪制：

稱(chēng)取羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)0.75g，加入100ml水中加熱使溶解，放冷，放置后取13ml,再分次加入硅膠5g，調(diào)成糊狀后倒在清潔的玻璃板上，可幌動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)玻板，使其均勻流布于整塊玻板上，而獲得均勻的液層。將玻璃平放晾干，然后于110℃活化40分鐘，置干燥器中貯存?zhèn)溆谩?．點(diǎn)樣：

取羧甲基維纖素硅膠板一塊(7.5×15cm)在距板一端lcm處，用鉛筆輕輕劃一直線(xiàn)作為起始線(xiàn)，在起始線(xiàn)中點(diǎn)用鉛筆作一標(biāo)記(o)，用內(nèi)徑約lmm的平口毛細(xì)管點(diǎn)加混合溶液，其直徑應(yīng)為2-3mm。點(diǎn)樣間隔為1～1.5CM

3.展開(kāi)

將點(diǎn)好的樣晾干或吹干后將板置于盛有展開(kāi)劑石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)的色譜缸中，（展開(kāi)劑高度0.55cm）浸入深度為0.5cm，待展開(kāi)劑前沿離起始線(xiàn)約10cm處，混合物應(yīng)不移動(dòng)，取出硅膠板，待石油醚揮發(fā)后，再按同法以苯為展開(kāi)劑，展開(kāi)時(shí)間約為30-40分鐘，取出薄層板立即劃出前沿線(xiàn)，待苯揮散，觀察斑點(diǎn)的位置

4計(jì)算比移值（Rf）：

干燥后記錄原點(diǎn)至主斑點(diǎn)中心，和原點(diǎn)至展開(kāi)劑前沿的距離。測(cè)量Rf值，判斷其活度。

斑點(diǎn)中心至原點(diǎn)的距離Rf＝溶劑前沿至原點(diǎn)的距離注意：因?yàn)橥晃镔|(zhì)在相同的實(shí)驗(yàn)條件下才具有相同的Rf值，所以在測(cè)定時(shí)，采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行對(duì)照。

五、注意事項(xiàng)1．活化后薄層板應(yīng)貯于干燥器中，以免吸收濕氣而降低活性;2．點(diǎn)樣量不宜太多，否則會(huì)拖尾分離不;3．展開(kāi)劑苯中含水量的多少會(huì)影響Rf值，故須用于燥的苯和器皿;4．展開(kāi)劑