第一次實(shí)驗(yàn)課微生物實(shí)驗(yàn)課介紹與要求及環(huán)境、人體表面微生物的檢測(張理珉)

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課介紹與要求

及環(huán)境、人體表面微生物的檢測任課教師程立忠王紹輝張理珉余澤芬教材用書

1．沈萍，范秀容，李廣武主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第三版）．北京：高等教育出版社，1999第四版已于2007年11月出版主要參考書1．杜連祥，路福平主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M]．北京：中國輕工業(yè)出版社，2005．2．周德慶．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程（第2版）[M]．北京：高等教育出版社，2006．3．楊文博主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004．4．趙斌，何紹江主編．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]．北京：科學(xué)出版社，2002．5．東秀珠，蔡妙英主編．常見細(xì)菌系統(tǒng)分類和鑒定方法[M]．北京：科學(xué)出版社，2001．

本次實(shí)驗(yàn)的主要內(nèi)容1、明確實(shí)驗(yàn)課的目的；2、實(shí)驗(yàn)課的內(nèi)容介紹；3、實(shí)驗(yàn)課的具體安排和要求；4、實(shí)驗(yàn)安全知識介紹5、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及人體表面微生物檢測實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課介紹

與安全教育1、實(shí)驗(yàn)課的目的掌握微生物實(shí)驗(yàn)的最基本操作技術(shù)相關(guān)技術(shù)得到充分訓(xùn)練（熟練掌握最好）讀\想\學(xué)\會\用2、實(shí)驗(yàn)課的內(nèi)容介紹意義：微生物學(xué)是生命科學(xué)中最基礎(chǔ)的學(xué)科之一，實(shí)驗(yàn)技術(shù)的獨(dú)特性和重要性。促進(jìn)了多個學(xué)科的建立和發(fā)展——生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、免疫學(xué)、病毒學(xué)等等廣泛的應(yīng)用——基礎(chǔ)理論研究、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)境、醫(yī)學(xué)、食品等，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容無菌操作技術(shù)；培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌技術(shù)；微生物的分離培養(yǎng)純化技術(shù)；菌種的保藏技術(shù)微生物制片染色技術(shù)；微生物數(shù)量和大小測定技術(shù)；噬菌體的分離純化及效價的測定；微生物生理生化反應(yīng)；微生物DNA提取技術(shù)介紹；免疫學(xué)技術(shù)介紹；3、實(shí)驗(yàn)課的具體安排和要求實(shí)驗(yàn)課學(xué)習(xí)要求實(shí)驗(yàn)過程的要求實(shí)驗(yàn)課安排良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣實(shí)驗(yàn)報告的形式成績的評定及組成實(shí)驗(yàn)課學(xué)習(xí)要求認(rèn)真對待，做好預(yù)習(xí)，加強(qiáng)自主拋磚引玉，增強(qiáng)學(xué)科聯(lián)系注重原理，努力創(chuàng)新培養(yǎng)興趣，掌握技能多發(fā)現(xiàn)問題，多和教師交流做到“讀\想\學(xué)\會\用”實(shí)驗(yàn)過程的要求實(shí)驗(yàn)過程注意安全（具體介紹）操作時要預(yù)防空氣對流接種時不要走動和講話認(rèn)真做好環(huán)境衛(wèi)生，做到“干干凈凈進(jìn)來，干干凈凈出去”進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室要洗手實(shí)驗(yàn)課安排根據(jù)教學(xué)計劃，本門實(shí)驗(yàn)課程2學(xué)分，4學(xué)時/周，14周共56學(xué)時，每學(xué)時45分鐘；實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察是實(shí)驗(yàn)過程的重要內(nèi)容,也將計算學(xué)時數(shù)。分組——兩人一組，登記聯(lián)系電話；穿白色實(shí)驗(yàn)服進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室；每組準(zhǔn)備記號筆和打火機(jī)各一個；值日生由班委每次實(shí)驗(yàn)前委派；下午實(shí)驗(yàn)課改在13：30上，上午的不變。良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣不遲到，不缺席，有事提前請假；遲到5分鐘以上以缺席計入實(shí)驗(yàn)習(xí)慣成績；愛護(hù)實(shí)驗(yàn)用具；實(shí)驗(yàn)完成后認(rèn)真清洗實(shí)驗(yàn)用具，并擺放整齊；離開實(shí)驗(yàn)室要經(jīng)教師檢查同意方可離開；認(rèn)真做好值日生工作，有人具體負(fù)責(zé)安排檢查。實(shí)驗(yàn)報告的格式實(shí)驗(yàn)題目（完成實(shí)驗(yàn)報告表頭）目的要求實(shí)驗(yàn)原理（需要濃縮總結(jié)）實(shí)驗(yàn)材料和器材實(shí)驗(yàn)方法和步驟（簡潔）實(shí)驗(yàn)結(jié)果、數(shù)據(jù)（有一定說明）分析討論及思考題實(shí)驗(yàn)報告要求

1.每位學(xué)生準(zhǔn)備規(guī)定式樣的實(shí)驗(yàn)報告紙。

2.上課時每給出一次作業(yè)，就在下一次上課前上交這一次的實(shí)驗(yàn)報告，不得拖延時間，否則后果自負(fù)。

3.報告要求寫清楚實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、步驟、結(jié)果及思考題。希望簡潔、工整。

4.本門課結(jié)束前，要求使用統(tǒng)一的封面，把自己的所有實(shí)驗(yàn)報告按實(shí)驗(yàn)先后順序裝訂成一冊，交給實(shí)驗(yàn)任課教師。實(shí)驗(yàn)成績平時成績（20%，安排于實(shí)驗(yàn)過程中或期末進(jìn)行操作考核）實(shí)驗(yàn)習(xí)慣（10%）期末考試（20%，筆試考試）實(shí)驗(yàn)報告（50%）可能組織就實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行答辯，替代期末考試

實(shí)驗(yàn)用到儀器設(shè)備顯微鏡（光學(xué)——普通、相差、微分干涉差、暗視野；電子——掃描、透射）；高壓蒸汽滅菌鍋（立式和臥式）；超凈工作臺、隔水式恒溫培養(yǎng)箱；鼓風(fēng)恒溫干燥箱；恒溫振蕩培養(yǎng)箱（旋轉(zhuǎn)式和往復(fù)式）；旋渦振蕩器；恒溫水浴鍋；pH計；分光光度計（紫外、可見光、紅外、原子吸收等）；離心機(jī)；電泳儀、PCR儀、發(fā)酵罐、酶標(biāo)儀、冰箱；微波爐等。實(shí)驗(yàn)用到器械試管（testtube）德漢氏小管（Durhamtube）小塑料離心管，又稱Eppendorf管玻璃吸管（glass

pipette）微量吸管（micropipette）[微量加樣槍]培養(yǎng)皿（petridish）三角燒瓶（erlenmeyerflask）實(shí)驗(yàn)用到器械載玻片（slide）和蓋玻片（coverslip）滴瓶(dropperbottle)接種工具——接種環(huán)、接種針、接種鉤、接種鏟、接種刀、涂布器（玻璃或不銹鋼制作）等。常見的接種工具

（可根據(jù)要求自已定做）常用玻璃儀器實(shí)驗(yàn)室安全實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中出現(xiàn)的各類突發(fā)事故和事件主要有：1、火災(zāi)；2、觸電；3、跑（漏）水；4、化學(xué)品傷害及中毒；5、灼傷；6、割（劃）傷。實(shí)驗(yàn)室安全??？事故以預(yù)防為主，具體的要求實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行；對使用的化學(xué)藥品試劑、儀器設(shè)備、實(shí)驗(yàn)器材等清楚其性質(zhì)和使用注意事項(xiàng)；不在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)餐、飲水；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁明火取暖，實(shí)驗(yàn)用到的加熱設(shè)備在人離開時，關(guān)閉加熱；清楚實(shí)驗(yàn)室或?qū)嶒?yàn)樓內(nèi)配備的防護(hù)用具的使用方法和擺放位置（消防設(shè)施——滅火器、消防用水、防毒面具，沖淋設(shè)施——桌面沖眼器、緊急沖淋設(shè)備，通風(fēng)柜，醫(yī)藥箱等）。事故處理要求首先保護(hù)好自身的安全，再施救（觀察好退路）；遇事不要慌張，冷靜按預(yù)案處理；認(rèn)真負(fù)責(zé)，不推缷責(zé)任；逐級上報，不隱瞞事故。（一）化學(xué)藥品及溶劑的處理方法1、在使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿時必需戴上安全手套，并戴上安全眼鏡。2、有機(jī)溶劑，固體化學(xué)藥品，酸、堿化合物均需分類存放，揮發(fā)性之化學(xué)藥品更必需放置于具有抽氣裝置的藥品柜內(nèi)。3、高揮發(fā)性或易于氧化之化學(xué)藥品必需存放于冰箱或冰柜之中。4、強(qiáng)酸或強(qiáng)堿（包括廢酸堿）不得存放于金屬架之上。（二）安全用電，防止事故1、了解實(shí)驗(yàn)室總電源開關(guān)的安裝位置。2、不可用濕手操作電器，使用電工工具前確認(rèn)其完好無損。3、嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)私自接用電源。4、確保漏電保護(hù)器起作用，用電器外殼接好地線，實(shí)驗(yàn)室無人時要切斷電源。5、遇有電器失火，先要切斷電源，再行滅火。6、人身觸電，立即人工呼吸，再送醫(yī)院，切忌打強(qiáng)心針。（三）節(jié)約用水，防止跑漏1、不用水時，隨手關(guān)閉閥門。2、廢物廢液不準(zhǔn)倒在水槽內(nèi)，實(shí)驗(yàn)完了放水沖洗水槽和下水管，勿使廢液殘留其中。（四）安全用藥，防中毒1、使用化學(xué)藥品前，要充分了解其化學(xué)性質(zhì)、物理性質(zhì)和使用注意事項(xiàng)。2、不能嘗化學(xué)藥品，也不能直接去聞化學(xué)藥品，避免用手直接去接觸藥品；使用藥品和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即用肥皂水洗手。3、盡量不可在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)餐。4、有毒或帶剌激味的實(shí)驗(yàn)要在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)期間要開排風(fēng)扇，或開窗通風(fēng)。5、做好廢液處理，防止環(huán)境污染；發(fā)現(xiàn)中毒現(xiàn)象，及時對癥治療，必要時送醫(yī)院。實(shí)驗(yàn)時需特別注意：人身安全防止割傷、灼傷，如有發(fā)生，應(yīng)用急救藥品施治。意外對策學(xué)生衣服著火的對策以滅火「氈」包裹該同學(xué)，并把其在地上滾動；并由其他同學(xué)輔助使用滅火器進(jìn)行滅火。不要亂跑，以免擴(kuò)大事故傷害；其他同學(xué)立刻通知老師，并撥打120、119。實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)易燃物品著火的對策利用配備的滅火器材進(jìn)行滅火。滅火器的使用過程①取出滅火器，拔出安全針。②把噴咀對準(zhǔn)火源。③按掣使滅火器噴出二氧化碳。其他同學(xué)立刻通知老師。并根據(jù)火情撥打119、120。酒精濺在長桌上并著火的對策！人先離開著火的位置，防止酒精流到身上著火。利用沙桶或濕抹布把燃燒的液體用沙蓋著。其他同學(xué)立刻通知老師。根據(jù)火情撥打119、120。打破了燒杯等玻璃器皿，被碎片割傷流血的對策以清水沖洗傷口，并確定有無碎片殘留。貼上干凈的消毒膠布。其他同學(xué)立刻通知老師，注意止血！有必要請撥打120?；瘜W(xué)藥品濺進(jìn)學(xué)生的臉、眼睛內(nèi)及其它皮膚的對策用桌面上沖眼器以大量清水沖洗眼睛等相關(guān)部位。其他同學(xué)立刻通知老師。并即時送往專科醫(yī)院治療。學(xué)生在實(shí)驗(yàn)過程皮膚等部位意外接觸到酸等的對策立刻以大量清水沖洗患處最少五分鐘。其他同學(xué)立刻通知老師。如有需要可以送往?？漆t(yī)院治療。實(shí)驗(yàn)物品常見警告標(biāo)識符號滅火器及其使用方法實(shí)驗(yàn)內(nèi)容二

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及人體表面微生物的檢測

一、目的要求

檢查實(shí)驗(yàn)室空氣中及各人手上的微生物（細(xì)菌為主），并加以統(tǒng)計、比較和描述（數(shù)量、菌落形態(tài)等）。使學(xué)生認(rèn)識到微生物無處不在，以便在以后的實(shí)驗(yàn)中重視無菌操作。二、實(shí)驗(yàn)原理微生物廣泛分布于室內(nèi)外、水、空氣和土壤中；通過對環(huán)境和人體表面微生物的檢測及觀察，建立起微生物“無處不在、無孔不入”的概念。形成自身良好的衛(wèi)生習(xí)慣，認(rèn)識到在微生物實(shí)驗(yàn)中無菌操作的重要性。平板培養(yǎng)基含有微生物生長所需的營養(yǎng)成分，當(dāng)不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)，1~2天內(nèi)每一菌體細(xì)胞即能通過很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖，形成一個肉眼可見的細(xì)胞群體（菌落）；每種微生物都有其特有的菌落形態(tài)，一般情況下一個菌落對應(yīng)一個微生物活細(xì)胞，這樣就可以統(tǒng)計不同微生物在某樣品中的數(shù)量。三、實(shí)驗(yàn)材料及器材牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板3個/組；洗手液、酒精燈、記號筆、恒溫培養(yǎng)箱等。四、實(shí)驗(yàn)方法及步驟（一）實(shí)驗(yàn)室空氣中微生物檢查（二）手上微生物檢測

1、取一無菌牛肉膏蛋白胨瓊脂平板，打開上皿蓋（扣放，開始計時），使培養(yǎng)基暴露于空氣中30分鐘，蓋上皿蓋。

2、在37℃下倒置培養(yǎng)24~48小時，觀察結(jié)果，統(tǒng)計微生物數(shù)量。（一）實(shí)驗(yàn)室空氣中微生物檢查

（沉降法）3、利用沉降法測定計算空氣中微生物的數(shù)量，結(jié)果的表示的方法有兩種：①一種是每一平皿上菌落形成單位;②另一種是每一平皿實(shí)測得的菌落形成單位再按奧梅梁斯基公式換算成為每立方米多少個細(xì)菌。

根據(jù)前蘇聯(lián)奧梅梁斯基提出的建議：面積為100cm2的平板培養(yǎng)基，暴露在空氣中5分鐘相當(dāng)于10升空氣中的菌落數(shù)。具體計算公式如下：除沉降法外，常用還有撞擊式（有專門儀器設(shè)備）。多級撞擊式空氣微生物采樣器1、取一個牛肉膏蛋白胨瓊脂平板，用記號筆在平板底部（外面）劃線等分成2半，用手指在其中一半上印（或摩擦）幾下（不能把培養(yǎng)基劃破）；然后用肥皀洗手，用同一手指在另一半上?。ɑ蚰Σ粒紫?。2、在37℃下倒置培養(yǎng)24~48小時，觀察結(jié)果，統(tǒng)計比較洗手前后的微生物數(shù)量及菌落種類。（二）手上微生物檢測

（三）菌落特征描寫方法①大小大、中、小、針尖狀?？上葘⒄麄€平板上的菌落粗略觀察一下，再決定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn)，或由教師指出一個大小范圍。②顏色黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。③干濕情況干燥、濕潤、粘稠④形態(tài)圓形、不規(guī)則等⑤高度扁平、隆起、凹下⑥透明程度透明、半透明、不透明⑦邊緣整齊、不整齊本次實(shí)驗(yàn)的思考題1、將你在平板上觀察到的結(jié)果填入下表樣品來源菌落數(shù)(近似值)菌落類型特征描寫大小形態(tài)干濕高度透明度顏色邊緣洗手前12