龍血竭中龍血素A在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究

龍血竭中龍血素A在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究【本文關(guān)鍵詞語(yǔ)】龍血竭;龍血素a;高效液相色譜法;大鼠;藥動(dòng)學(xué)【內(nèi)容摘要】目的考察龍血竭中龍血素a在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為。方法按100g大鼠給予龍血竭250mg灌胃給藥，測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度，并以3p97軟件計(jì)算其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果龍血素a的ka為(146±0.19)h-1，t1/2(ka)為(0.48±0.06)h，t1/2(k)為(2.59±0.67)h，tmax為(2.00±0.55)h，cmax為(1.13±0.24)μg·ml-1，auc為(2.84±0.68)μg·h·ml-1。結(jié)論龍血素a在大鼠體內(nèi)符合線性動(dòng)力學(xué)一室開(kāi)放模型，吸收較快?！颈疚年P(guān)鍵詞語(yǔ)】龍血竭;龍血素a;高效液相色譜法;大鼠;藥動(dòng)學(xué)abstract:objectivetostudyonpharmacokineticsofloureirinainsthebloodsampleswerecollectedataseriesoftimepointsafteranoraladministrationofdragon′sbloodtorats(2.5g·kg-1),andwereanalyzedbycokineticparameterswerevaluatedby3p97software.resultspharmacokineticparametersofloureirinawereasfollows:ka(1.46±0.19)h-1,t1/2(ka)(0.48±006)h,t1/2(k)(2.59±0.67)h,tmax(2.00±0.55)h,cmax(1.13±0.24)μg·ml-1,auc(2.84±0.68)μg·h·siontheresultsdemonstratedthatthepharmacokineticsofloureirinawasconsistentwithone-compartmentmodel,whichwasabsorbedanddistributedrapidlyinrats.keywords:dragon′sblood;loureirina;hplc;pharmacokinetics血竭(dragon′sblood)又名麒麟竭，是傳統(tǒng)珍貴中藥。國(guó)產(chǎn)血竭稱(chēng)龍血竭，具有祛瘀定痛、止血生肌的成效[1]，被譽(yù)為“活血圣藥〞，臨床應(yīng)用廣泛。龍血竭的重要成分為黃酮類(lèi)化合物,其在治療冠心病、腦梗死、心肌缺血、腦缺血損傷等方面有顯著療效[2-3]。龍血素a是龍血竭黃酮的重要成分之一，當(dāng)前未見(jiàn)關(guān)于龍血素a體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的文獻(xiàn)報(bào)道。本文采取hplc法[4]測(cè)定龍血素a在大鼠體內(nèi)的血藥濃度，研究龍血素a在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)，為臨床應(yīng)用提供理論根據(jù)。1儀器與材料1.1動(dòng)物sd大鼠66只，體質(zhì)量(250±20)g，雌雄兼?zhèn)洌芍猩酱髮W(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：(粵)2006a064。1.2儀器waters高效液相色譜儀：515hplc泵，2487雙波長(zhǎng)吸收監(jiān)測(cè)器，n-2000雙通道色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所);tdl80-2b臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);scq5201超聲儀(上海超聲波儀器廠);zh-2blender渦旋混合器(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠)。1.3材料廣西產(chǎn)龍血竭(廣西學(xué)院制藥廠提供);龍血素a對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：200402);乙腈、甲醇(色譜純)，乙酸乙酯、無(wú)水乙醇、冰醋酸(分析純)。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：diamonsilc18(5μm，250mm×4.6mm);保衛(wèi)柱：easyguardc18replacementcartridgescat#6101;流動(dòng)相：乙腈-體積分?jǐn)?shù)1%冰醋酸(體積比35∶65);檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm;流速：1.2ml·min-1，柱溫:25℃;進(jìn)樣量:20μl。2.2血樣的收集和處理大鼠禁食(自在飲水)12h后，按100g大鼠給予龍血竭250mg，灌胃給藥。分別在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10h于頸動(dòng)脈取血,置于用肝素預(yù)處理過(guò)的離心管中。取全血1ml置離心管中，參加乙腈2ml、乙酸乙酯1ml，渦旋混合均勻，3000r·min-1離心10min，取上清液，提取3次，合并上清液，50℃水浴揮干，于殘?jiān)袇⒓?00μl甲醇，超聲處理使之溶解，12000r·min-1離心10min，取上清液作為樣品，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖與峰面積，采取外標(biāo)法定量。2.3方法學(xué)考察[3]2.3.1龍血素a對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備取龍血素a對(duì)照品，用甲醇配制成每1ml約含100μg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。2.3.2方法專(zhuān)屬性取大鼠2只，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，自在飲水，1只做空白對(duì)照，1只按100g給予龍血竭250mg灌胃給藥，給藥2h后取血樣，按“2.2〞項(xiàng)下方法操作測(cè)定。由圖1可見(jiàn)，全血中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾龍血素a的測(cè)定，表示清楚本方法有較好的專(zhuān)屬性。[psd261;s*2〗a.空白血漿;b.空白血漿+對(duì)照品;c.樣品圖1hplc圖譜figure1hplcchromatograms2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線與最低檢測(cè)限取空白全血適量，精致細(xì)密參加龍血素a對(duì)照品貯備液，配制質(zhì)量濃度為0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836μg·ml-1的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.2〞項(xiàng)下的方法，自“加乙腈2ml、乙酸乙酯1ml〞起，依法操作，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)，峰面積(a)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，結(jié)果表示清楚龍血素a的質(zhì)量濃度在0.076～4.836μg·ml-1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程為：a=49679ρ+2784.3，r=0.9983(n=7)。取標(biāo)準(zhǔn)曲線用溶液，逐步稀釋至溶液中龍血素a的響應(yīng)值約為基線噪音的3倍(s/n=3)，記錄色譜圖，得出最低檢測(cè)限(lod)為0.025μg·ml-1。2.3.4相對(duì)回收率與精致細(xì)密度精致細(xì)密量取對(duì)照品貯備液，以空白全血分別配成高、中、低3種質(zhì)量濃度(4.836、1.209、0.076μg·ml-1)的樣品溶液，按“2.2〞項(xiàng)下的方法，自“加乙腈2ml、乙酸乙酯1ml〞起，依法操作。記錄峰面積并代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣品濃度，計(jì)算相對(duì)回收率。結(jié)果表示清楚，高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品的相對(duì)回收率均高于80%。見(jiàn)表1。取以上高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品溶液于同一天內(nèi)連續(xù)測(cè)定3次，計(jì)算日內(nèi)rsd;天天測(cè)定3種濃度樣品各1次，連續(xù)測(cè)定3d，計(jì)算日間精致細(xì)密度rsd。結(jié)果日內(nèi)和日間精致細(xì)密度rsd值均小于10%，表示清楚該法精致細(xì)密度較好。見(jiàn)表1。2.3.5樣品穩(wěn)定性精致細(xì)密量取對(duì)照品貯備液，以空白全血配制質(zhì)量濃度為0.076、0.605、1.209、2.418μg·ml-1的樣品，分別考察室溫25℃放置0、4、12、24h，-20℃冰箱放置24h，-20℃下反復(fù)凍融3次的穩(wěn)定性。結(jié)果各樣品的rsd值均在2.76%～11.42%(n=6)之間，符合〔中國(guó)藥典〕相關(guān)規(guī)定，表示清楚樣品穩(wěn)定性較好。表1龍血素的回收率與精致細(xì)密度2.4大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)取sd大鼠66只，禁食不禁水12h后，按時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為11組，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只，按100g體質(zhì)量給予龍血竭250mg灌胃給藥，收集不同時(shí)間點(diǎn)的血樣，按“2.2〞項(xiàng)下方法處理樣品并測(cè)定龍血素a的濃度。2.4.1血藥濃度曲線按不同時(shí)間點(diǎn)求算平均血藥質(zhì)量濃度，并繪制血藥質(zhì)量濃度—時(shí)間曲線，見(jiàn)圖2。由圖可見(jiàn)，血藥質(zhì)量濃度達(dá)峰時(shí)間為(2.0±055)h，峰質(zhì)量濃度為(1.13±0.24)μg·ml-1。[psd262;s*2〗圖2大鼠口服龍血竭(2.5g·kg-1)后龍血素a平均血藥質(zhì)量濃度—時(shí)間曲線figure2meanconcentration-timecurveofloureirinainrats(n=6)2.4.2藥動(dòng)學(xué)參數(shù)用藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件3p97對(duì)所測(cè)得數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，所得藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，龍血素a在大鼠體內(nèi)符合一室模型。3討論3.1本文選取龍血竭重要成分之一的龍血素a作為指標(biāo)成分，對(duì)龍血素a在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)情況進(jìn)行了研究，為臨床用藥提供了根據(jù)。3.2對(duì)sd大鼠一次性灌胃龍血竭(250mg/100g)后，取全血進(jìn)行處理后測(cè)定血藥濃度，根據(jù)aic(akaike′sinformationcriterion)值最小原則，確定其符合一室吸收動(dòng)力學(xué)模型，吸收半衰期為0.48h;消除半衰期為2.59h。從本文得到的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并結(jié)合文獻(xiàn)[6]數(shù)據(jù)推斷，龍血竭口服后吸收較快，且迅速向體內(nèi)各組織分布。表2大鼠口服龍血竭(2.5g·kg-1)后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)【以下為參考文獻(xiàn)】[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典：2010年版一部[m].北京：科技出版社，2010：96.[2]劉忠和.復(fù)方血竭膠囊對(duì)大鼠局灶性腦缺血-再灌注損傷的拮抗作用[j].武漢大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2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