DNA的粗提取與鑒定(修改版)

DNA的粗提取與鑒定目的要求知道DNA提取原理據(jù)原理設(shè)計DNA提取方法能對DNA進(jìn)行鑒定掌握本實驗的基本操作方法一、實驗原理

1.血細(xì)胞在蒸餾水中會滲透吸水過度而導(dǎo)致細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。2.DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。DNA在物質(zhì)的量濃度為0.14mol／L的氯化鈉溶液中的溶解度最低，利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。

3.DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。

4.DNA遇二苯胺（沸水?。兂伤{(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

5.注意事項：最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細(xì)胞液實驗材料和用具實驗材料：1、新鮮雞血細(xì)胞液（5~10ml）；2、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液（實驗前置于冰箱內(nèi)冷卻24h）；3、蒸餾水；4、質(zhì)量濃度為0．１g/ml的檸檬酸鈉溶液（抗凝劑）

；5、物質(zhì)的量濃度分別為2mol/L和0．015mol/L的NaCl溶液；6、二苯胺試劑。實驗用具：鐵架臺；鐵環(huán)；鑷子；三角架；酒精燈；石棉網(wǎng)；載玻片；玻璃棒；濾紙；滴管；量筒（100ml，一個）；燒杯；（100ml，一個，50ml、500ml各二個）；試管（20ml，二個）；漏斗；試管夾；紗布。二、方法與過程

1.制雞血細(xì)胞液（活雞鮮血經(jīng)分離或沉淀獲得）0.1g/mL檸檬酸鈉100mL活雞鮮血180mL500mL燒杯中，玻棒攪拌，離心、分離或靜置沉淀。2.提取DNA。①取血細(xì)胞5-10mL＋20mL蒸餾水，用玻棒沿一個方向快速攪拌。②兩層紗布過濾：濾液中含DNA和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì)。③原理：血細(xì)胞的細(xì)胞膜、核膜吸水漲破，玻璃棒快速攪拌，機(jī)械加速血細(xì)胞破裂。⑴.提取血細(xì)胞核物質(zhì)：⑵.溶解核內(nèi)的DNA：濾液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一個方向輕緩攪拌。不要碰底！用吸管吸走上清液抗凝劑DNA含量高防止DNA破碎防止DNA破碎溶解DNA效果好取濾液漲破⑶.析出含DNA的粘稠物：⑷.濾取含DNA的粘稠物：⑸.DNA粘稠物的再溶解：在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向輕輕攪拌，出現(xiàn)白色絲狀物；當(dāng)絲狀物不再增加時，停止加水（此時NaCl溶液的濃度相當(dāng)于0.14mol/L）。用多層紗布過濾，含DNA的粘稠物留在紗布上。20mL2mol/L的NaCl溶液步驟⑷含DNA的粘稠物在20mL燒杯中一個方向輕緩攪拌3min，使盡可能多的DNA溶解在NaCl溶液。⑹.過濾含有DNA的NaCl溶液：用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟⑸所得的溶液，濾液中含有DNA。取濾渣（析出物）取濾液含雜質(zhì)的DNA⑺.提取含有雜質(zhì)較少的DNA：步驟⑹所得的濾液＋體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精50mL，用玻棒沿一個方向輕緩攪拌，溶液中析出乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。3.DNA的鑒定：加入0.015mol/L的NaCl溶液5mL和二苯胺試劑4mL，用玻棒攪拌使DNA溶解，沸水浴5min，待冷卻后觀察溶液是否出現(xiàn)藍(lán)色。1.共有“三次過濾，兩次析出，七次攪拌”2.加入“兩次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精”三、實驗小結(jié)析出DNA效果好DNA細(xì)小易碎反應(yīng)條件溶解DNA方法步驟

加入物質(zhì)

目的

1.制備雞血細(xì)胞液

檸檬酸鈉溶液

①

2.提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì)

20m1蒸餾水

②

3.溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA

2mo1／L的NaCI溶液40mL

③

4.析出含DNA的黏稠物

蒸餾水

④

5.濾取含DNA的黏稠物

多層紗布⑤

6.將DNA的黏稠物再溶解

2mol／L的NaCl溶液20mL

⑥

7.過濾含DNA的NaCl溶液

兩層紗布⑦

8.提取含有雜質(zhì)較少的DNA

冷卻的95％的酒精50mL

⑧

A:(1)向試管中加入0.015mol／L的NaCl溶液5mL

(2)加入DNA

(3)4mL二苯胺試劑

9.DNA的鑒定

B:(1)向試管中加入0.015mol／L

的NaCl溶液5mL

(2)4mL二苯胺試劑

⑨

①防止血凝固②使血細(xì)胞漲破③溶解DNA④使2mol/L的NaCl溶液稀釋至0.14mol/L使得DNA最大限度地析出⑤使含DNA的黏稠物被留在紗布上⑥使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中⑦除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)⑧析出DNA⑨A出現(xiàn)藍(lán)色B無變化2.實驗中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2mol／L和0.14mol／L對DNA有何影響?1.在DNA的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是()。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出反饋練習(xí)3.DNA遇二苯胺(沸水浴)會染成()A.磚紅色B.橘黃色C.紫色D.藍(lán)色4.提取雞血中的DNA時，為什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取，關(guān)鍵是對雜質(zhì)的去除，由于上清液是血液中的血漿部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白質(zhì))。答：D1、在制備雞血細(xì)胞液的過程中，加入檸檬酸鈉的目的是（）A.防止凝血B.加快DNA析出C.加快DNA溶解D.加速凝血練一練A2、DNA的溶解度最低時，NaCl的物質(zhì)的量濃度為（）A2mol/lB0.1mol/lC0.14mol/lD0.015mol/l3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不斷加入蒸餾水的目的是（）A加快DNA溶解的速度B加快溶解雜質(zhì)的速度C減小DNA的溶解度，加快DNA析出D減小雜質(zhì)的溶解度，加快雜質(zhì)的析出CC4、向溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中不斷加入蒸餾水,在這個過程中DNA的溶解度變化情況分別是A減小;減小B增大;增大C先減小后增大D增大;減小5、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的辦法是A加蒸餾水B加礦泉水C加清水D加生理鹽水6、與析出DNA粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是A操作時緩慢滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度B操作時用玻棒輕緩攪拌以保證DNA分子的完整C加蒸餾水可以同時降低DNA和蛋白質(zhì)的溶解度D當(dāng)絲狀粘稠物不再增加時，NaCl溶液的濃度可以認(rèn)為是0.14mol/L7、你能采用其他方法對DNA進(jìn)行鑒定嗎？用甲基綠染液。結(jié)果絲狀呈現(xiàn)綠色。8、DNA遇二苯胺會染成（沸水?。〢硅紅色B紅色C紫色D藍(lán)色D四、實驗原理拓展介紹。1.DNA的釋放。

DNA主要在雞血細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，正常情況下不會釋放出來，蒸餾水對于雞血細(xì)胞是一種低滲液，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞，使之漲破，同時加上玻璃棒快速攪拌的機(jī)械作用，加速血細(xì)胞的細(xì)胞膜和核膜的破裂。但釋放出來的大量DNA與RNA、蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，即釋放的不是純凈的DNA，常稱為DNA核蛋白。2.DNA與蛋白質(zhì)分離。在高濃度（2mol/L）的氯化鈉溶液中，核蛋白易溶解，釋放出的DNA也溶解在高濃度的氯化鈉溶液中3.DNA的析出與獲取。

因為DNA在低濃度（0.14mol/L

）的氯化鈉溶液中溶解度小，而蛋白質(zhì)的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高濃度的氯化鈉溶液中加入大量蒸餾水稀釋氯化鈉溶液，從而使DNA溶解度下降，蛋白質(zhì)溶解度增高。4.DNA的再溶解。用高濃度（2mol/L）的氯化鈉溶液再溶解DNA粘稠物。5.DNA的沉淀和濃縮。對于除去了蛋白質(zhì)的DNA的氯化鈉溶液，必須再進(jìn)一步沉淀和濃縮，常用酒精沉淀法。即