GB/T 28646-2012化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)方法

ICS1330011100

;

A80..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T28646—2012

化學(xué)品

體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)方法

Chemicals—Testmethodofmammaliancellmicronucleusinvitro

2012-07-31發(fā)布2012-12-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T28646—2012

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)同經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織化學(xué)品測(cè)試導(dǎo)則體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試

(OECD)No.487(2010)《

驗(yàn)英文版技術(shù)性內(nèi)容一致

》()。

本標(biāo)準(zhǔn)做了下列結(jié)構(gòu)和編輯性修改

:

將原文中的簡(jiǎn)介和初步考慮部分內(nèi)容作為本標(biāo)準(zhǔn)的引言

———OECD487“”“”“”;

將原文中附錄定義中的部分內(nèi)容作為本標(biāo)準(zhǔn)中的術(shù)語(yǔ)和定義

———OECD487“:”“2”;

增加了范圍一章

———。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)危險(xiǎn)化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC251)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所遼寧省職業(yè)病防治院中國(guó)化工

:、、

經(jīng)濟(jì)技術(shù)發(fā)展中心中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人孫金秀曲波林錚李雪飛白羽王曉兵李晞

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T28646—2012

引言

本試驗(yàn)的目的是通過(guò)檢測(cè)處于間期細(xì)胞的胞質(zhì)中微核形成的頻率評(píng)價(jià)受試物

(micronuclei,MN),

的遺傳毒性微核可來(lái)源于無(wú)著絲粒的染色體斷片或在細(xì)胞有絲分裂后期不能遷往細(xì)胞兩極的整條染

。

色體該試驗(yàn)用于檢測(cè)在細(xì)胞暴露受試物期間或暴露后受試物對(duì)經(jīng)歷過(guò)分裂的細(xì)胞誘發(fā)斷裂和非整倍

。

體作用的活性[1-2]本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定在制定的操作規(guī)范中允許使用和不使用細(xì)胞胞漿移動(dòng)阻斷劑松胞

?！?/p>

素兩種方式進(jìn)行試驗(yàn)在細(xì)胞有絲分裂期前加入可阻斷細(xì)胞質(zhì)分裂

B(cytochalasinB,cytoB)。cytoB,,

使細(xì)胞為雙核細(xì)胞[3-4]從而可在完成了一次細(xì)胞分裂的細(xì)胞中進(jìn)行微核的識(shí)別以及微核發(fā)生率的選

,

擇性分析如能提供所分析的細(xì)胞群發(fā)生了有絲分裂的證據(jù)時(shí)可按不使用進(jìn)行試驗(yàn)操作

。,cytoB。

另外使用本方法除了可以鑒定化學(xué)物誘發(fā)微核外還可應(yīng)用胞漿移動(dòng)阻斷劑著絲點(diǎn)免疫標(biāo)記和

,,、、

著絲粒末端著絲粒探針雜交技術(shù)原位免疫熒光雜交技術(shù)

/(,fluorescenceinsituhybridisation,FISH),

提供染色體損傷和微核形成機(jī)制的信息[5-16]在觀察到微核形成增加并希望確定這種增加是斷裂作

。,

用還是誘發(fā)非整倍體作用可應(yīng)用標(biāo)記和雜交的技術(shù)進(jìn)行操作

,。

微核損傷是可以傳遞到子細(xì)胞的而分裂中期細(xì)胞出現(xiàn)的染色體畸變是不能傳遞到下一代細(xì)胞

,;

由于所檢測(cè)到的間期細(xì)胞微核是比較客觀的因此試驗(yàn)人員只需要測(cè)定細(xì)胞是否經(jīng)過(guò)了分裂以及含微

,,

核的細(xì)胞有多少所以標(biāo)本的制備分析記錄相對(duì)比較迅速而且也能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析這使原來(lái)只能

。,、,;

對(duì)每個(gè)處理組計(jì)數(shù)分析數(shù)百個(gè)細(xì)胞增加到數(shù)千個(gè)細(xì)胞從而增加了試驗(yàn)方法的檢測(cè)效力最后如果微

,。,

核來(lái)源于滯后的整條染色體本方法可對(duì)使用傳統(tǒng)的染色體畸變分析存在困難的誘發(fā)非

,(OECD473)

整倍體作用的化學(xué)物進(jìn)行檢測(cè)分析[17]但是如果不使用等特異性技術(shù)體外微核試驗(yàn)是不能

。,FISH,

鑒別化學(xué)物是誘發(fā)多倍體劑還是斷裂劑

。

體外微核試驗(yàn)是在試管內(nèi)體外條件下使用培養(yǎng)的人體或嚙齒類(lèi)細(xì)胞進(jìn)行的試驗(yàn)由于本試驗(yàn)同時(shí)

。

能檢測(cè)到非整倍體劑作用和斷裂劑作用因此可為探討體外條件下染色體的潛在損傷作用提供綜合

,

基礎(chǔ)

。

體外試驗(yàn)通常需要使用外源性代謝活化系統(tǒng)外源性代謝活化系統(tǒng)不能完全模擬體內(nèi)代謝條件

。。

應(yīng)注意避免存在影響化學(xué)物固有的致突變活性的因素如值或滲透壓的明顯改變或者是在高濃

,pH、、

度下引起嚴(yán)重細(xì)胞毒性的條件進(jìn)行試驗(yàn)以免發(fā)生假陽(yáng)性結(jié)果

,。

為了分析誘發(fā)微核作用最關(guān)鍵的是處理組和對(duì)照組培養(yǎng)物的細(xì)胞核必需已經(jīng)經(jīng)歷過(guò)或完成了核

,

分裂計(jì)數(shù)微核最有利的時(shí)期是受試物處理期間或處理后細(xì)胞已經(jīng)完成一個(gè)有絲分裂的階段

。。

體外微核試驗(yàn)應(yīng)用多種細(xì)胞類(lèi)型進(jìn)行試驗(yàn)都是非常有效的無(wú)論是在用或不用處理的情況

,cytoB

下如已經(jīng)有大量的研究資料表明體外微核試驗(yàn)應(yīng)用各種嚙齒類(lèi)細(xì)胞株和

;(CHO、V79、CHL/IU

和人體淋巴細(xì)胞都被確認(rèn)是非常有效的[8,19-31]其中包括特別是由遺傳毒性技術(shù)科學(xué)委員會(huì)

L5178Y)。,

主持的國(guó)際有效性合作研究[8,19-22]和國(guó)際遺傳毒

(SociétéFran?aisedeToxicologieGénétique,SFTG)

性試驗(yàn)工作組的報(bào)告

。

已有歐盟替代方法有效性[4,16]的歐洲中心

(EuropeanCentrefortheValidationofAlternative

一項(xiàng)權(quán)重證據(jù)回顧性的有效性研究所作的再評(píng)價(jià)的資料[2,33-34]并且該組織的專(zhuān)家

Methods,ECVAM),

顧問(wèn)委員會(huì)認(rèn)為體外微核試驗(yàn)是科學(xué)有效的已經(jīng)

(ECVAMScientificAdvisoryCommittee,ESAC)。

有使用類(lèi)成淋巴細(xì)胞系[5]細(xì)胞株[36-37]和敘利亞地鼠胚胎細(xì)胞的報(bào)告[38]盡管這些細(xì)胞

TK6、HepG2,

尚未進(jìn)行有效性研究

。

Ⅱ

GB/T28646—2012

化學(xué)品

體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)方法的術(shù)語(yǔ)和定義試驗(yàn)原理試驗(yàn)方法試驗(yàn)數(shù)

、、、

據(jù)和報(bào)告

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于化學(xué)品體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)

。

2術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

21

.

非整倍體誘導(dǎo)劑aneugen

()

通過(guò)與細(xì)胞有絲分裂和減數(shù)分裂周期相關(guān)的成分相互作用引起細(xì)胞或生物體非整倍染色體形成

,

的任何物質(zhì)非整倍體誘導(dǎo)劑或過(guò)程

()。

22

.

非整倍體aneuploidy

染色體數(shù)與正常二倍體或單倍體染色體數(shù)不同其數(shù)目或是單條或多條的染色體的增多或減少

(),,

而不是整套染色體的偏移整套染色體的改變?yōu)槎啾扼w

,。

23

.

細(xì)胞凋亡apoptosis

是細(xì)胞的程序化死亡其特點(diǎn)是細(xì)胞經(jīng)一系列連續(xù)的崩解步驟變成被膜包圍的微粒然后被吞噬細(xì)

,,

胞吞噬或蛻落排除

。

24

.

細(xì)胞增殖cellproliferation

作為細(xì)胞有絲分裂的結(jié)果細(xì)胞的