專題1《基因工程》

專題一基因工程１.基因工程的概念這種技術(shù)是在生物體外，通過對DNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”，對生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物。（DNA重組技術(shù)）一、基因工程的基本操作工具識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。主要是從原核生物中分離純化出來的一種酶化學(xué)本質(zhì)：蛋白質(zhì)。

1、來源：3、作用：4、結(jié)果：形成兩種末端“分子手術(shù)刀”——限制酶黏性末端平末端可用于目的基因和載體的切割2、特性：限制酶是一類酶，而不是一種酶。GAATTCGCTTAAAATTCG限制酶切割ＤＮＡ分子示意圖CTTAAG黏性末端黏性末端什么叫平末端？……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同來源的DNA片段混合將不同種來源的DNA片段連接起來生物A基因片段生物B基因片段……GAATTC…………CTTAAG……酶切……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……同一種用同一種限制性酶處理不同DNA片段，會形成同樣的黏性末端，可進(jìn)行重組。一G↓GATCC一一CCTAGG一一↓GATC一一CTAG一限制酶I限制酶Ⅱ……GAATTC…………CTTAAG……EcoRⅠ同一種DNA片段用不同限制性酶處理，形成的黏性末端一般不相同。黏性末端相同黏性末端不相同基因工程疑難問題的解讀：1、限制酶識別序列的方向性：限制酶識別序列是指5ˊ------3ˊ那條鏈上的堿基序列.2、限制酶特異性的理解：一般情況下，一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，這就是限制酶的特異性。但有些特例，不同的限制酶識別同一種堿基序列且切點相同。如：BamHⅠ、BstⅠ都可識別——GGATCC——序列。不同限制酶切割DNA分子后產(chǎn)生相同粘性末端。如：BamHⅠ識別——GGATCC——序列,切點在G與G之間；BglⅡ識別——AGATCT——，切點在A與G之間；粘性末端均為——ACTAG和GATC——。少數(shù)限制酶卻可識別不止一種堿基序列。同裂酶（Isoschizomers）有些來源不同的限制酶卻識別和切割相同的序列，這類限制酶稱為同裂酶。同裂酶產(chǎn)生同樣切割，形成同樣的末端，酶切后所得到的DNA片段經(jīng)連接后所形成重組序列，仍可能被原來的限制酶所切割。同裂酶之間的性質(zhì)有所不同（如對離子強度、反應(yīng)溫度以及對甲基化堿基的敏感性等方面可能有所差別）。同尾酶(Isocaudomers)有些來源不同的限制酶，識別及切割序列各不相同，但卻能產(chǎn)生出相同的粘性末端，這類限制酶稱為同尾酶。但兩種同尾酶切割形成的DNA片段經(jīng)連接后所形成的重組序列，不能被原來的限制酶所識別和切割。EcoRI

和MunI屬于同尾酶。“分子縫合針”—ＤＮＡ連接酶

１.作用：連接磷酸二酯鍵,而不是氫鍵。E·coliDNA連接酶：連接黏性末端T4DNA連接酶：連接黏性末端和平末端２.DNA連接酶的種類3.DNA連接酶的作用部位：脫氧核苷酸鏈上相鄰的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵DNA連接酶DNA連接酶無特異性，其催化DNA片段末端形成磷酸二脂鍵。連接情況有兩種：一是催化互補的粘性末端連接，二是催化平末端連接。只要是相同的粘性末端、平末端DNA連接酶就能催化連接，而與切割的限制酶無關(guān)。DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈連接部位相同點雙鏈單鏈在兩DNA片段之間形成磷酸二酯鍵將單個脫氧核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵都能形成磷酸二酯鍵DNA聚合酶和DNA連接酶有何相同點和不同點？種類項目限制酶DNA連接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA分子片段脫氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵堿基對間的氫鍵作用特點切割目的基因及載體，能專一性識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開了的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵只能將單個脫氧核苷酸添加到脫氧核苷酸鏈上將DNA兩條鏈之間的氫鍵打開作用結(jié)果形成黏性末端或平末端形成重組DNA分子形成新的DNA分子形成單鏈DNA分子

“分子運輸車”—載體1.載體的必要條件能自我復(fù)制，或能進(jìn)入受體生物細(xì)胞并在受體生物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并表達(dá)；有一個至多個限制酶切割位點，供外源DNA片段插入。具有某些標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。2.載體的種類：質(zhì)粒、噬菌體和動植物病毒。3.常用的載體：質(zhì)粒

提醒①一般來說，天然載體往往不能滿足人類的所有要求，因此人們根據(jù)不同的目的和需要，對某些天然的載體進(jìn)行人工改造。

②常見的標(biāo)記基因有抗生素抗性基因、產(chǎn)生特定顏色的表達(dá)產(chǎn)物基因、發(fā)光基因等。

③作為載體必須具有一個至多個限制酶切點，而且每種酶的切點最好只有一個。因為某種限制酶只能識別單一切點，若載體上有一個以上的酶切點，則切割重組后可能丟失某些片段，若丟失的片段含復(fù)制起點區(qū)，則進(jìn)入受體細(xì)胞后便不能自主復(fù)制。一個載體若只有某種限制酶的一個切點，則酶切后既能把環(huán)打開接納外源DNA片段，又不會丟失自己的片段。

④注意與細(xì)胞膜上載體的區(qū)別，兩者的化學(xué)本質(zhì)和作用都不相同。

⑤質(zhì)粒能自我復(fù)制，既可在自身細(xì)胞、受體細(xì)胞內(nèi)，也可在體外。1、下列關(guān)于限制酶的說法正確的是（）A、限制酶廣泛存在于各種生物中，但微生物中很少B、一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列C、不同的限制酶切割DNA后都會形成黏性末端D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氫鍵B2.不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是（）

A、能復(fù)制B、有多個限制酶切點

C、具有標(biāo)記基因D、它是環(huán)狀DNAD3.右圖為DNA分子結(jié)構(gòu)示意圖，對該圖的正確描述是A．④的名稱是胞嘧啶脫氧核苷酸B．解旋酶作用的部位是⑨C．某限制性核酸內(nèi)切酶可選擇⑨處作為切點D．DNA連接酶可連接⑩處斷裂的化學(xué)鍵BD4．下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制性核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是

(

)

A．①②③④

B．①②④③C．①④②③

D．①④③②C5．可以用于重組DNA技術(shù)的酶是(多選) A．DNA聚合酶B．限制性核酸C．DNA連接酶D．反轉(zhuǎn)錄酶解析：DNA重組技術(shù)會用DNA聚合酶(實現(xiàn)目的基因的擴(kuò)增，如PCR)、限制性核酸內(nèi)切酶(目的基因的切割和運載體的切割)、DNA連接酶(目的基因與運載體的連接)、反轉(zhuǎn)錄酶(目的基因的獲取)。ABCD6．下列有關(guān)限制性內(nèi)切酶識別的敘述，不正確的是: A．從反應(yīng)類型來看，限制性內(nèi)切酶催化的是一種水解反應(yīng)

B．限制性內(nèi)切酶的活性受溫度、pH的影響

C．一種限制性內(nèi)切酶只能識別雙鏈DNA中某種特定的脫氧核苷酸序列

D．限制性內(nèi)切酶識別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的幾率就越小D解析：染色體由DNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成；原核生物沒有染色體；質(zhì)?？梢宰鰹榛蚬こ痰妮d體，而染色體不行。7．(2010·南京三模)下列關(guān)于染色體和質(zhì)粒的敘述，正確的是 (

)A．染色體和質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)都是DNAB．染色體和質(zhì)粒都只存在于原核細(xì)胞中C．染色體和質(zhì)粒都與生物的遺傳有關(guān)D．染色體和質(zhì)粒都可作為基因工程的常用載體C9、限制酶是一種核酸切割酶，可辨識并切割DNA分子上特定的核苷酸堿基序列。下圖為四種限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨識序列。箭頭表示每一種限制酶的特定切割部位，其中哪兩種限制酶所切割出來的DNA片段末端可以互補黏合？其正確的末端互補序列為何？

A.BamHI和EcoRI；末端互補序列—AATT—B.BamHI和HindⅢ；末端互補序列—GATC—C.

EcoRI和HindⅢ；末端互補序列—AATT—D.BamHI和BglII；末端互補序列—GATC—D10、用DNA連接酶把被限制酶Ⅰ（識別序列和切點是---↓GATC---）切割后的質(zhì)粒和被限制酶Ⅱ（識別序列和切點是---G↓GATCC---）切割過的目的基因連接起來形成重組質(zhì)粒，該重組質(zhì)粒能夠被限制酶Ⅱ完全切割開的概率是（）

A.1/4B.1/16C.7/16D.3/4C11、用限制酶E將長度為5.0kbp（千堿基對）的質(zhì)粒的一處切斷；接著用限制酶E切割某一DNA分子得長度為1.5kbp的目的基因；再用DNA連接酶連接成重組質(zhì)粒，擴(kuò)增?，F(xiàn)用限制酶B、E、H對克隆的重組質(zhì)粒進(jìn)行切割，電泳分離的結(jié)果如圖。則用限制酶B和限制酶H共同完成切割一個重組質(zhì)粒，預(yù)計產(chǎn)生的片段長度（kbp）可能是（多選）A.2.0、3.0、1.0和0.5B.2.0、3.0、0.5、0.5和0.5C.3.0、和3.5D.2.5和4.0EB+EH+EDNA片段長度5.05.03.02.00.51.01.51.5CD二、基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四個步驟1、目的基因的獲取2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4、目的基因的檢測與鑒定一.目的基因的概念主要是指編碼蛋白質(zhì)基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。例如：與生物抗逆性相關(guān)的基因，與生物優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因，藥物和保健品相關(guān)的基因，與毒物降解相關(guān)的基因，以及與工業(yè)所需要酶相關(guān)的基因。

目前被廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、植物抗病基因（抗病毒、抗細(xì)菌)、人胰島素基因等。1.基因的結(jié)構(gòu)（1）原核生物基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游編碼蛋白質(zhì)調(diào)控遺傳信息的表達(dá)（調(diào)控程序）…A‥………ATGTGCACGTAGTTA………‥G……T‥………TACACGTGCATCAAT………‥C…啟動子終止子編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動子終止子ATGTGCACGTAGTTATACACGTGCATCAATRNA聚合酶AUGUGCACGUAGUUA

啟動子：位于基因首端一段能與RNA聚合酶結(jié)合并能起始mRNA合成的序列。沒有啟動子，基因就不能轉(zhuǎn)錄。

RNA聚合酶:能夠識別啟動子上的結(jié)合位點并與其結(jié)合的一種蛋白質(zhì).

終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，它能阻礙RNA聚合酶的移動，并使其從DNA模板鏈上脫離下來，使轉(zhuǎn)錄終止。編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)（能編碼蛋白質(zhì)）啟動子終止子（2）真核與原核生物基因結(jié)構(gòu)的比較外顯子內(nèi)含子編碼蛋白質(zhì)（不能編碼蛋白質(zhì)）①相同點：都是由能夠編碼蛋白質(zhì)的編碼區(qū)和具有調(diào)控作用的非編碼區(qū)。②不同點：原核細(xì)胞基因的編碼區(qū)是連續(xù)的；真核細(xì)胞的編碼區(qū)是間隔的，不連續(xù)的。真核生物基因結(jié)構(gòu)外顯子：真核細(xì)胞基因DNA中的編碼序列，這些序列被轉(zhuǎn)錄成RNA并進(jìn)而翻譯為蛋白質(zhì)。內(nèi)含子

：真核細(xì)胞基因DNA中的間插序列，這些序列被轉(zhuǎn)錄成RNA，但隨即被剪除而不翻譯。從基因文庫中尋找聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增化學(xué)合成法目的基因的核苷酸序列未知目的基因的核苷酸序列已知（一）、獲取目的基因的常用方法有哪些?初始目的基因的來源1.從生物中直接獲取2.人工合成注意：要保持基因的完整性1、從基因文庫中獲取目的基因

將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫.基因文庫

基因組文庫部分基因文庫（如:cDNA文庫）基因文庫如何從基因文庫中得到所需要的基因？依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息如：根據(jù)基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色體上的位置基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA

基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性。是否一定要構(gòu)建基因文庫？未知目的基因序列時①概念：PCR全稱為_______________，是一項在生物____復(fù)制___________的核酸合成技術(shù)③條件：___________、_______________、___________、

___________

.

②原理：__________聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外特定DNA片段DNA復(fù)制模板DNA四種脫氧核苷酸DNA引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶2.利用PCR擴(kuò)增目的基因已知目的基因序列時④方式：以_____方式擴(kuò)增，即____（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）⑤結(jié)果：使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴(kuò)增④過程a、變性（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成___________b、復(fù)性（復(fù)性55℃-60℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成與模板互補的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈3.人工合成——根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測推測目的基因化學(xué)合成已知核苷酸序列的較小基因可以化學(xué)合成，不需要模板。質(zhì)粒目的基因限制酶處理一個切口兩個黏性末端兩個切口獲得目的基因DNA連接酶表達(dá)載體同一種1.過程二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建——核心限制酶切割位點的選擇必須保證目的基因，標(biāo)記基因的完整性，以便于檢測和表達(dá)。a、使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給子代b、同時使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用思考：作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？2、基因表達(dá)載體的作用3.基因表達(dá)載體的組成：它們有什么作用？a、目的基因b、啟動子c、終止子d、標(biāo)記基因位于基因的首端,是mRNA結(jié)合位點位于基因的末端,終止轉(zhuǎn)錄檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞基因表達(dá)載體1、組成：目的基因+啟動子終止子標(biāo)記基因+++復(fù)制原點2、目的基因、啟動子、終止子不是質(zhì)粒上固有的，標(biāo)記基因、復(fù)制原點是質(zhì)粒上固有的。3、如果目的基因是從基因組文庫中獲取的，因為目的基因本身已含有啟動子、終止子，在構(gòu)建表達(dá)載體時，就不需要在加啟動子、終止子。如果目的基因是從部分基因文庫中獲取的，因為目的基因本身不含有啟動子、終止子，在構(gòu)建表達(dá)載體時，就需要在加啟動子、終止子。4、單切酶法與雙切酶法單切酶法就是用同一種限制酶切割含目的基因的DNA片段和載體，形成相同的黏性末端，可用DNA連接酶連接重組DNA。由于單切酶切割后目的基因的前后各有一個互補的黏性末端，這兩個互補的黏性末端會發(fā)生堿基互補配對使目的基因前后相連，形成自身連接，自我環(huán)化。同理質(zhì)粒在DNA連接酶的作用下也會出現(xiàn)前后相連，形成自身連接。雙切酶法就是用兩種不同的限制酶切割含目的基因的DNA片段和載體，使它產(chǎn)生兩個不同的黏性末端，此時目的基因、載體就不會發(fā)生自我環(huán)化。而且在DNA連接酶的作用下，載體只能與目的基因的相應(yīng)末端互補連接成重組質(zhì)粒。常用的受體細(xì)胞：

有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細(xì)胞等。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞—轉(zhuǎn)化1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法②基因槍法③花粉管通道法2、將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞顯微注射技術(shù)：將基因表達(dá)載體提純，用顯微儀注射到受精卵中3、導(dǎo)入微生物細(xì)胞①原核生物特點：繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少用Ca2+處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子②方法：受體細(xì)胞受體細(xì)胞的種類：動物，植物細(xì)胞，微生物。基因工程的目的不同，可選擇的受體細(xì)胞不同。若生產(chǎn)基因工程藥品，受體細(xì)胞一般選用微生物，利用微生物繁殖速度快的特點，可在短期內(nèi)獲得大量產(chǎn)品。若培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因動物，則選用受精卵。受體細(xì)胞的選擇：四、目的基因的檢測與鑒定檢測①導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞方法——DNA分子雜交②表達(dá)檢測轉(zhuǎn)錄檢測——分子雜交翻譯檢測——抗原抗體雜交分子檢測法鑒定抗蟲鑒定抗病鑒定活性鑒定等個體水平的鑒定1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)的正確敘述是（）A．重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和載體B．所有的限制酶都只能識別同一種特定的核苷酸序列C．選用細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因為細(xì)菌繁殖快D．只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實現(xiàn)表達(dá)C

2.科學(xué)家運用基因工程技術(shù)將人胰島素基因與大腸桿菌的質(zhì)粒DNA分子重組，并且在大腸桿菌體內(nèi)獲得成功表達(dá)。圖示a處為胰島素基因與大腸桿菌質(zhì)粒DNA結(jié)合的位置，它們彼此能結(jié)合的依據(jù)是（）A．基因自由組合定律B．半保留復(fù)制原則C．基因分離定律 D．堿基互補配對原則D

3.在基因工程中，把選出的目的基因（共1000個脫氧核苷酸對，其中腺嘌呤脫氧核苷酸460個），放入DNA擴(kuò)增儀中擴(kuò)增4代，那么，在擴(kuò)增儀中應(yīng)放入胞嘧啶脫氧核苷酸的個數(shù)是A．540個B．7560個C．8100個 D．17280個C540×（24－1）=81004．下圖表示一項重要的生物技術(shù)，對圖中物質(zhì)a、b、c、d的描述，正確的是

A．a(chǎn)的基本骨架是磷酸和核糖交替連接而成的結(jié)構(gòu)B．要獲得相同的黏性末端，可以用不同種b切割a和dC．c連接雙鏈間的A和T，使黏性末端處堿基互補配對D．若要獲得未知序列d，可到基因文庫中尋找解析：從圖示看，a中含有胸腺嘧啶，故其基本骨架是磷酸和脫氧核糖交替連接而成；DNA連接酶縫合目的基因和載體質(zhì)粒之間的縫隙，使兩者之間形成磷酸二酯鍵；若要獲得未知序列的目的基因，可從基因文庫中尋找；若要獲得相同的黏性末端，可以用不同種的限制性核酸內(nèi)切酶處理，如識別↓GATC的限制性核酸內(nèi)切酶和識別G↓GATCC的限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體質(zhì)粒就可以形成相同的黏性末端。B解析：質(zhì)粒在某些真核細(xì)胞中也有，如酵母菌；將目的基因連接到質(zhì)粒上，不但要用到DNA連接酶，在連接之前要用同一種限制酶處理以得到相同的黏性末端；植物的體細(xì)胞都具有全能性，因此都可以作為受體細(xì)胞；由于重組質(zhì)粒只結(jié)合在某條染色體上，因此有的配子就沒有目的基因。5．科學(xué)家在某種植物中找到了抗枯萎的基因，并以質(zhì)粒為載體，采用轉(zhuǎn)基因方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品種，下列有關(guān)說法正確的是(

)A．質(zhì)粒是最常用的載體之一，它僅存在于原核細(xì)胞中B．將抗枯萎基因連接到質(zhì)粒上，用到的工具酶僅是DNA連接酶C．用葉肉細(xì)胞作為受體細(xì)胞培育出的植株不能表現(xiàn)出抗枯萎性狀D．通過該方法獲得的抗枯萎病金茶花，產(chǎn)生的配子不一定含抗枯萎病基因D6.下列獲取目的基因的方法中，需要模板的是（）A.從基因文庫中獲取目的基因B.利用PCR擴(kuò)增目的基因C.構(gòu)建cDNA文庫D.通過DNA合成儀利用化學(xué)方法人工合成目的基因BC7．下圖是獲得抗蟲棉的技術(shù)流程示意圖?？敲顾乜剐曰?kanr)常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長。下列敘述正確的是

A．構(gòu)建重組質(zhì)粒過程中需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶B．愈傷組織的分化產(chǎn)生了不同基因型的植株C．卡那霉素抗性基因(kanr)中有該過程所利用的限制性核酸內(nèi)切酶的識別位點D．抗蟲棉有性生殖后代能保持抗蟲性狀的穩(wěn)定遺傳解析：質(zhì)粒與目的基因結(jié)合時需要用同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割，用DNA連接酶連接；愈傷組織由相同細(xì)胞分裂形成，分化后產(chǎn)生相同基因型的植株；卡那霉素抗性基因作為標(biāo)記基因不能有限制性核酸內(nèi)切酶的切割位點；抗蟲棉有性生殖后代可能會發(fā)生性狀分離，抗蟲性狀不一定能穩(wěn)定遺傳。A8.一對等位基因經(jīng)限制酶切割后形成的DNA片段長度存在差異，用凝膠電泳的方法分離酶切后的DNA片段，并與DNA探針雜交后可顯示出不同的帶譜（如圖一所示）?？蓪⑦@些DNA片段定位在基因組的某一位置上。現(xiàn)有一對夫婦生了四個孩子，其中1號性狀表現(xiàn)特殊（如圖二所示）。以下推論正確的是：A.1號為純合子，基因在性染色體上B.2號為雜合子，基因在性染色體上C.3號為純合子，基因在常染色體上D.4號為純合子或雜合子，基因在常染色體上純合子純合子雜合子圖一1234圖二C一般女性一般男性特殊女性基因工程的應(yīng)用抗病

抗逆

生長速度品質(zhì)藥物器官移植

將

基因與

等調(diào)控組件重組在一起，通過

等方法，導(dǎo)入哺乳動物的

中，將其送入母體，使其發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動物。轉(zhuǎn)基因動物進(jìn)入泌乳期后，可以通過分泌乳汁生產(chǎn)所需要的藥品，稱為乳腺生物反應(yīng)器或乳房生物反應(yīng)器。乳腺生物反應(yīng)器乳腺生物反應(yīng)器的優(yōu)點：①產(chǎn)量高；②質(zhì)量好；③成本低；④易提取。

藥物蛋白乳腺蛋白基因的啟動子顯微注射受精卵1、基因治療概念：基因治療把正常基因?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達(dá)到治療疾病的目的，是治療遺傳病的最有效的手段。（把特定的外源基因?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中，從而達(dá)到治療疾病的目的）2、實例：將腺苷酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入取自患者的淋巴細(xì)胞中，再將這種淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)入患者體內(nèi)。對嚴(yán)重復(fù)合型免疫缺陷癥的治療3、原理病人細(xì)胞中既含有缺陷基因，又含有通過基因工程導(dǎo)入的正?；颍诓∪梭w內(nèi)兩種基因都存在且都能表達(dá)，正常基因的表達(dá)產(chǎn)物掩蓋了缺陷基因的表達(dá)產(chǎn)物，從而治愈了有基因缺陷的疾病。4、基因治療的類型體外基因治療：先從病人體內(nèi)獲得某種細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)，然后在體外完成基因轉(zhuǎn)移，再篩選成功轉(zhuǎn)移的細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內(nèi)。體內(nèi)基因治療：直接向人體組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)移的治病方法。（如將治療囊性纖維病的正常基因轉(zhuǎn)入患者肺組織）5、基因治療的發(fā)展現(xiàn)狀：處于初期的臨床試驗階段基因診斷1、概念用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的DNA分子做探針，利用DNA分子雜交原理，鑒定被測標(biāo)本上的遺傳信息，達(dá)到檢測疾病的目的。1.切取某動物合成生長激素的基因，用某種方法將此基因轉(zhuǎn)移到鲇魚的受精卵中，從而鲇魚比同類個體大3～4倍，此項研究遵循的原理是（）A．基因突變，DNA→RNA→蛋白質(zhì)B．基因工程，DNA→tRNA→蛋白質(zhì)C．細(xì)胞工程，DNA→RNA→蛋白質(zhì)D．基因重組，DNA→RNA→蛋白質(zhì)D

2.下列關(guān)于基因工程應(yīng)用的敘述，正確的是（）A．基因治療就是把缺陷基因誘變成正?；駼．基因診斷的基本原理是DNA分子雜交C．一種基因探針能檢測水體中的各種病毒D．原核基因不能用來進(jìn)行真核生物的遺傳改良B蛋白質(zhì)工程的崛起

一、蛋白質(zhì)工程的崛起的緣由基因工程產(chǎn)物基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)。這