第四章食品檢驗(yàn)檢疫新技術(shù)

第四章

食品檢驗(yàn)檢疫新技術(shù)提綱概述一免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)二核酸提取方法與探針技術(shù)三PCR檢測(cè)方法四基因芯片技術(shù)五生物傳感器六第一節(jié)概述一.概述老方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，精確性不高新方法快速、可靠為什么要發(fā)展新方法？現(xiàn)代免疫技術(shù)核酸探針技術(shù)現(xiàn)代免疫技術(shù)生物傳感器基因芯片技術(shù)PCR技術(shù)自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)第二節(jié)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)一.免疫學(xué)檢測(cè)方法的原理抗原：能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反應(yīng)的物質(zhì)?？乖苑磻?yīng)原性免疫原性能與相應(yīng)抗體結(jié)合發(fā)生反應(yīng)的特性刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞的特性不完全抗原（半抗原）抗體：在抗原刺激下產(chǎn)生，并能與之特異性結(jié)合的免疫球蛋白。血清學(xué)試驗(yàn)：因?yàn)榭乖贵w反應(yīng)一般都要用血清，所以把抗原抗體在體外發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)稱血清學(xué)試驗(yàn)。免疫學(xué)檢測(cè)方法的原理：借助抗原和抗體在體外特異性結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象，對(duì)標(biāo)本中的抗原或抗體進(jìn)行定性或定量的檢測(cè)。定性有免疫復(fù)合物形成的現(xiàn)象發(fā)生定量反應(yīng)中加入抗原或抗體的濃度與形成免疫復(fù)合物的濃度成函數(shù)關(guān)系。根據(jù)免疫復(fù)合物產(chǎn)生的多少來(lái)推算樣品中抗原或抗體的含量。免疫單向擴(kuò)散當(dāng)抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應(yīng)而且比例合適(一般規(guī)定抗體過(guò)量)時(shí)，形成的可溶性免疫復(fù)合物在稀釋系統(tǒng)中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)抗體濃度固定時(shí)，形成的免疫復(fù)合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應(yīng)液的濁度也隨之增加。通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液的濁度與一系列標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，即可計(jì)算出檢樣中抗原的含量。免疫比濁法酶聯(lián)免疫檢測(cè)二.ELISA快速檢測(cè)方法（一）基本原理酶標(biāo)抗體酶標(biāo)抗原抗原吸附在固相載體上，加待測(cè)抗體，再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體，生成抗原一待測(cè)抗體一酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物，再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體的量。待測(cè)抗體的量與有色產(chǎn)物成正比。同理也可包被抗體，測(cè)定抗原含量。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（二）ELISA的種類直接法、間接法、夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法（三）用于標(biāo)記的酶常用的有辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酯酶常用的交聯(lián)方法有戊二醛法、過(guò)碘酸氧化法（四）酶與底物辣根過(guò)氧化物酶聯(lián)苯二胺（OPD）3,3′，5,5′-四甲基聯(lián)苯胺顯色（五）固相載體ELISA小試管聚苯乙烯材料ELISA小珠聚苯乙烯材料ELISA酶標(biāo)板聚苯乙烯材料硝酸纖維素膜磁性微粒（六）ELISA的測(cè)定方法（視頻）三.免疫層析條檢測(cè)方法免疫膠體金層析條脂質(zhì)體層析條脂質(zhì)體中含有染料等其他可見的化合物。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的外膜表面有抗體附著，若被檢食物中存在病原體，后者就結(jié)合在抗體上，使脂質(zhì)體的外膜破裂，從而釋放出染料或其他標(biāo)記物。四.試劑盒快速檢測(cè)方法試劑盒，裝試劑的盒子。將實(shí)驗(yàn)所需的眾多試劑組合到一起，并對(duì)每一步實(shí)驗(yàn)操作給予詳細(xì)的說(shuō)明，使用者只要按操作步驟添加試劑即可。第三節(jié)核酸提取方法與探針技術(shù)一.核酸的提取方法課本上有個(gè)地方有問(wèn)題二.探針?lè)N類及其制備方法（一）探針的標(biāo)記物分類