項目十一 抗生素效價測定技術

抗生素效價測定技術一、發(fā)酵技術1.定義原始定義發(fā)泡、產(chǎn)生二氧化碳的過程；生物化學中定義有機物進行分解代謝釋放能量的過程；工業(yè)微生物中發(fā)酵定義通過微生物或其他生物細胞或經(jīng)過生物工程改造的工程菌的培養(yǎng)來制備工業(yè)產(chǎn)品或轉(zhuǎn)化某些物質(zhì)的過程。2.發(fā)酵分類（1）按氧氣需要量（2）按工藝不同AMET01需氧發(fā)酵（大多數(shù)藥品）、厭氧發(fā)酵。AMET02淺層發(fā)酵（薄層培養(yǎng)基）、深層發(fā)酵（在液體深層中進行發(fā)酵）液體深層發(fā)酵分類分批發(fā)酵：營養(yǎng)物和菌種一次加入進行培養(yǎng)，直到結束放出。廣泛應用。01特點：營養(yǎng)物質(zhì)減少；微生物增多；環(huán)境非穩(wěn)態(tài)；微生物生長四個時期明顯。連續(xù)發(fā)酵02以一定的速度向發(fā)酵罐內(nèi)添加新鮮培養(yǎng)基，同時流出培養(yǎng)液，微生物在穩(wěn)定狀態(tài)下生長，可以有效延長微生物生長的對數(shù)期。特點：操作穩(wěn)定，利于設備機械化、自動化；減少滅菌次數(shù)、易于過程優(yōu)化；易染菌、微生物與易變異、設備要求高；微生物生長四個時期不明顯。常用于廢水處理、酒精、氨基酸等發(fā)酵工業(yè)。補料分批發(fā)酵或半連續(xù)發(fā)酵03介于分批發(fā)酵和連續(xù)發(fā)酵之間的一種方式?？梢越獬孜镆种疲a(chǎn)物抑制或客服微生物過度生長，提高有用產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化率。應用廣泛，如面包酵母、氨基酸、抗生素等。（3）按培養(yǎng)基狀態(tài)分類（4）按發(fā)酵產(chǎn)品類型分類（141頁4min）菌體發(fā)酵（蟲草頭孢菌）A轉(zhuǎn)化發(fā)酵D酶發(fā)酵B生物細胞發(fā)酵E代謝產(chǎn)物發(fā)酵C利用微生物細胞中的酶將一種化合物轉(zhuǎn)化為另一種，如乙醇到乙酸。（5）單一或混合菌種發(fā)酵（6）菌種狀態(tài)游離發(fā)酵、固定化發(fā)酵。固定化發(fā)酵是指固定在水不溶性載體上，在一定的空間范圍進行生命活動(生長、發(fā)育、繁殖、遺傳和新陳代謝等)的細胞。3.發(fā)酵工藝流程一般發(fā)酵工藝簡圖典型的分批微生物反應工藝流程圖二、抗生素效價測定1.抗生素定義生物在生命活動中產(chǎn)生的極微量能選擇性的抑制或影響其他生物機能的一類天然有機化合物?？梢杂晌⑸铮ㄖ饕?、動物。植物產(chǎn)生?？股氐纳餀z定是以抗生素對微生物的抗菌效力作為效價的衡量標準。差異毒力較大A抗菌活性強B有不同抗菌譜C2.醫(yī)用抗生素特點濫用抗生素的原因有哪些？3.抗生素單位和效價（１）質(zhì)量單位以抗生素的生物活性部分重量作單位

1微克（ｕｇ）＝１U，１毫克＝1000U。（２）類似質(zhì)量單位以特定的純粹抗生素類的重量作為１單位。如純粹金霉素鹽酸鹽及四環(huán)素鹽酸鹽（包括無生物活性的鹽酸根在內(nèi)）。（3）質(zhì)量折算單位以原始的活性單位相當?shù)脑噭┵|(zhì)量為1U進行折算。如青霉素的單位是以50ml肉湯培養(yǎng)基內(nèi)能完全抑制金黃色葡萄球菌生長的青霉素量為1U。（4）特定單位（5）抗生素效價效價是指抗生素有效成分的含量，即在同一條件下比較抗生素和標準品的抗菌活性，常用百分數(shù)表示。

效價=檢品的抗菌活性/標準品的抗菌活性4.抗生素效價的微生物測定方法稀釋法、比濁法、管碟法（1）管碟法：

是利用抗生素在含敏感試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基中的球面擴散滲透作用，從而形成一定的抑菌圈。通過瓊脂培養(yǎng)基，可觀察并測量出抑菌圈的大小。管碟法原理

在一定的抗生素濃度范圍內(nèi)，對數(shù)劑量(濃度)與抑菌圈的表面積或直徑成正比，可以得出一條曲線。

抗生素濃度換算成對數(shù)，則抑菌圈直徑與抗生素對數(shù)成直線關系1.實驗菌株的培養(yǎng)；2.pH6.0磷酸鹽緩沖液的配制；3.青霉素標準品溶液的配制；稀釋成2U/ml或0.5U/ml的兩種濃度；4.待檢樣品溶液的配制；5.平板制備；6.效價測定實驗步驟（143頁）在平板底部四邊，分別對角注明“SH”、“SL”和“UH”、“UL”標記將不銹鋼小管(俗稱為牛津杯)放置在含敏感試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基上。SLULSHUH以無菌滴管分別在每個牛津杯內(nèi)加入相應的抗生素溶液至滿但不溢出管外且四杯內(nèi)液面高度相同，蓋上平皿蓋，靜置30分鐘。培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。抑