課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

腸黏膜上分布的細(xì)菌專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱．定義：種類：病毒非細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡單、代謝速度快酵母菌、霉菌、蘑菇草履蟲、變形蟲原核生物-“衣藍(lán)支細(xì)線”真核生物真菌原生生物微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物。葡萄球菌大腸桿菌放線菌酵母菌霉菌螺旋菌變形蟲課題1

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)培養(yǎng)基可以分為哪幾類？培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要滿足哪些要求？一、培養(yǎng)基自主學(xué)習(xí)什么是培養(yǎng)基？一、培養(yǎng)基基礎(chǔ)知識(shí)定義：是人們按照微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配置出供其生長繁殖的營養(yǎng)物質(zhì)。分類：①液體培養(yǎng)基：②固體培養(yǎng)基：凝固劑瓊脂菌

落基本成分：①碳源、氮源、無機(jī)鹽、水牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨

10.0gNaCl5.0g瓊脂

20.0g蒸餾水

定容至1000ml。碳源、氮源、維生素氮源、維生素碳源無機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-葡萄糖、脂肪酸等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源無機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、尿素等1.關(guān)于微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是()A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽D.無機(jī)氮源也能提供能量練一練②還需要滿足微生物生長對(duì)pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)（生長因子）以及氧氣的要求．二、無菌技術(shù)避免雜菌污染的方法包括哪四個(gè)方面？什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？防止外來雜菌的入侵對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。避免周圍環(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸主要內(nèi)容：消毒：使用較溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。①定義：②常用方法：煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min?；瘜W(xué)藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒；氯氣消毒水源。紫外線消毒滅菌：指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，（包括芽胞和孢子）。①定義：②常用方法：灼燒滅菌：干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.（最常用的）實(shí)驗(yàn)操作制備培養(yǎng)基接種培養(yǎng)觀察、記錄結(jié)果用什么方法滅菌？滅菌過程中為什么要包牛皮紙？制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基有哪些步驟？倒平板有哪些步驟？一、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：

2.稱量：牛肉膏3.溶化：整個(gè)過程不斷用玻棒攪拌--防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。4.滅菌:(先調(diào)pH)高壓蒸汽滅菌，干熱滅菌5.倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)--在酒精燈附近倒平板--平板倒置--（培養(yǎng)基為液體，不燙手）（防止污染）（培養(yǎng)基表面水分更好揮發(fā)，防止皿蓋水珠落入培養(yǎng)基）練習(xí)1.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是（）A

將用于微生物培養(yǎng)的器皿，接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌B接種純種細(xì)菌C適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D防止外來雜菌的入侵2.下列操作與無菌技術(shù)無關(guān)的是（）A接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B接種前用火焰燒灼接種針C培養(yǎng)在50℃左右時(shí)擱置斜面D在酒精燈的火焰旁完成二、純化大腸桿菌最常用的接種方法：平板劃線法稀釋涂布平板法平板劃線法：（殺死接種環(huán)上原有的微生物）通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面---分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體稱菌落（避免高溫殺死菌種）一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無法形成規(guī)則的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。（接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目減少，最后得到菌落。）（為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種）劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)：殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。注意：微量移液器稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。①系列稀釋操作②涂布平板操作稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍三、培養(yǎng)37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1、培養(yǎng)基的制作是否合格？2、接種操作是否符合無菌要求？3、是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致地觀察與記錄？如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。觀察培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同1、臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存2、長期保存：甘油冷凍管藏法菌種的保存課題延伸目的：保持菌種的純凈方法：微生物的培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)實(shí)驗(yàn)操作結(jié)果分