生物化學(xué)的實(shí)習(xí)報(bào)告

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（實(shí)習(xí)報(bào)告）

院系:專業(yè)：應(yīng)用化學(xué)學(xué)號(hào)：姓名：指導(dǎo)教師：任梅蓉李靖趙宇賈璐日期：201x年06月21日

序言

生物化學(xué)是用化學(xué)的原理和方法，研究生命現(xiàn)象的學(xué)科。通過研究生物體的化學(xué)組成、代謝、養(yǎng)分、酶功能、遺傳信息傳遞、生物膜、細(xì)胞布局及分子病等表明生命現(xiàn)象。

生物體內(nèi)幾乎全體的化學(xué)回響都是酶催化的。酶的作用具有催化效率高、專一性強(qiáng)等特點(diǎn)。酶的布局與功能的關(guān)系、回響動(dòng)力學(xué)及作用機(jī)制、酶活性的調(diào)理操縱等是酶學(xué)研究的根本內(nèi)容。通過X射線晶體學(xué)分析、化學(xué)修飾和動(dòng)力學(xué)等多種途徑的研究，一些具有代表性的酶的作用原理已經(jīng)對(duì)比領(lǐng)會(huì)。70年頭進(jìn)展起來的親和標(biāo)記試劑和自殺底物等專一性的不成逆抑制劑已成為探討酶的活性部位的有效工具。多酶系統(tǒng)中各種酶的協(xié)同作用，酶與蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的相互作用以及應(yīng)用蛋白質(zhì)工程研究酶的布局與功能是酶學(xué)研究的幾個(gè)新的方向。酶與人類生活和生產(chǎn)活動(dòng)關(guān)系特別緊密，因此酶在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、國(guó)防和醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用一向受到廣泛的重視。

生物化學(xué)對(duì)其他各門生物學(xué)科具有深刻的影響，最精細(xì)的有細(xì)胞學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)、生理學(xué)等領(lǐng)域。通過對(duì)生物高分子布局與功能舉行深入的研究，透露了生物體物質(zhì)代謝、能量轉(zhuǎn)換遺傳信息傳遞、光合作用、神經(jīng)傳導(dǎo)、肌肉收縮、激素作用、免疫和細(xì)胞間通訊等大量奧秘，使人們對(duì)生命本質(zhì)熟悉躍進(jìn)到一個(gè)嶄新的階段。應(yīng)用一向受到廣泛的重視。

分開純化意義：（1）分開大分子，研究其布局與功能，對(duì)于了解生命活動(dòng)規(guī)律有重要意義（2）得志工業(yè)生產(chǎn)的需要（3）得志醫(yī)療的需要（4）得志基因工程的需要生物體內(nèi)幾乎全體的化學(xué)回響都是酶催化的。酶的作用具有催化效率高、專一性強(qiáng)等特點(diǎn)。酶的布局與功能的關(guān)系、回響動(dòng)力學(xué)及作用機(jī)制、酶活性的調(diào)理操縱等是酶學(xué)研究的根本內(nèi)容。通過X射線晶體學(xué)分析、化學(xué)修飾和動(dòng)力學(xué)等多種途徑的研究，一些具有代表性的酶的作用原理已經(jīng)對(duì)比領(lǐng)會(huì)。70年頭進(jìn)展起來的親和標(biāo)記試劑和自殺底物等專一性的不成逆抑制劑已成為探討酶的活性部位的有效工具。多酶系統(tǒng)中各種酶的協(xié)同作用，酶與蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的相互作用以及應(yīng)用蛋白質(zhì)工程研究酶的布局與功能是酶學(xué)研究的幾個(gè)新的方向。酶與人類生活和生產(chǎn)活動(dòng)關(guān)系特別緊密，因此酶在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、國(guó)防和醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用一向受到廣泛的重視。

生物大分子的分開純化一般可以分為以下幾個(gè)階段：○1材料的選擇和預(yù)處理；○2破碎細(xì)胞及提??；○3分開和純化：包括粗分級(jí)分開和細(xì)分級(jí)分開；其中前兩個(gè)階段為生物大分子分開純化的前處理。

離心的原理：將樣品放入離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的離心管內(nèi)，離心機(jī)驅(qū)動(dòng)時(shí)，樣品液就隨離心管做勻速圓周運(yùn)動(dòng)，于是就產(chǎn)生了一個(gè)向外的離心力。由于不同顆粒的質(zhì)量，密度，大小及外形等彼此各不一致，在同一固定大小的離心場(chǎng)中沉降速度也就不同，由此便可以得到相互間的分開。受到的力：離心力、介質(zhì)的摩擦阻力、浮力、重力及重力浮力(均可疏忽不計(jì))

本次試驗(yàn)包括“各谷物中養(yǎng)分成分的測(cè)定”和“苯丙氨酸解氫酶的純化及活性測(cè)定”兩個(gè)試驗(yàn)。

苯丙氨酸解氨酶（L-phenylalanine：ammonielyase，簡(jiǎn)稱PAL；EC4.3.1.5）是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等的合成緊密相關(guān)。在植物生長(zhǎng)發(fā)育和抗拒病菌侵害的過程中起重要作用。PAL催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸在290nm處有強(qiáng)大的吸收值。規(guī)定1h內(nèi)增加0.01為PAL的一個(gè)活力單位。酶的比活力是指樣品中每毫克蛋白所含的酶活力單位數(shù)。在測(cè)驗(yàn)中將會(huì)看到隨著PAL的逐步被純化，其比活力也在逐步增加。

在蛋白質(zhì)溶液中參與確定量的中性鹽（如硫酸銨、硫酸鈉等）使蛋白質(zhì)沉淀析出稱為鹽析。溶液的鹽濃度通常以鹽溶液的飽和度表示，飽和溶液稱100%飽和度。沉淀一種酶所需的概括濃度需要經(jīng)試驗(yàn)確定。

谷類含蛋白質(zhì)在8-12%之間，因谷粒外層蛋白質(zhì)較里層含量高，因此，精制的大米和面粉因過多的去除外皮，使蛋白質(zhì)含