NY/T 547-2002兔粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法

ICS.11.220NYB41中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T547-2002免粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法Agargelimmunodiffusionforrabbitmyxoma2002-08-27發(fā)布2002-12-01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T547-2002前免粘液瘤是免的病毒性致死性傳染病，世界動物衛(wèi)生組織World（rganizationforAnimalHealth（英）,OfficeintentionaldesEpizootic(法),OIE和我國分別將之列為B類或二類動物疫病。本標(biāo)準(zhǔn)是依據(jù)OIE《診斷試驗和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊》（2000版）（"ManualofStandardsforDiagnostieTestsandVaccines”,2000）第2.2.1章制定的。本標(biāo)準(zhǔn)與該章的差異是-本標(biāo)準(zhǔn)只采用了該章規(guī)定的最實用的抗體抗原兼測的瓊脂凝膠免疫擴散試驗(液體法)技術(shù)·此項技術(shù)已可滿尼我國對內(nèi)和對外診斷及檢疫的需要；-本標(biāo)準(zhǔn)基于該章的原則性規(guī)定，根據(jù)我國的研究與實踐經(jīng)驗規(guī)定了具體的操作程序本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部動物檢疫所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：杜元釗、朱萬光、劉佩蘭、吳延功。

NY/T547-2002免粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了免粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴散試驗的技術(shù)要求本標(biāo)準(zhǔn)適用于免粘液瘤病毒特異抗體和可溶性抗原的檢測.也可用于兔粘液瘤病的流行病學(xué)調(diào)查，拉驗方法2.1材料2.1.1器材與試劑：a）孔器：內(nèi)徑6mmib）家脂樓：三羥甲基氮基甲燒（Tris）10%故酸;乙二胺四乙酸(EDTA)。2.1.2瓊脂擴散抗原，按說明書使用2.1.3標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，按說明書使用。2.1.4被檢血消：按常規(guī)方法采血分離血清,4℃保存10d內(nèi)檢測有效；一20℃凍結(jié)保存，一年有效。2.1.5瓊脂糖平板制備方法見附錄A。2.2操作方法2.2.1在瓊脂糖平血上,按坐標(biāo)紙上畫好的梅花型(見圖1)打孔，其孔徑為6mm.孔距為4mm;孔內(nèi)瓊脂糖用針頭小心挑出，勿破壞周圍瓊脂。打孔后用酒精燈加熱封底。圖1梅花型打孔示意圖2.2.2加樣:滴加抗原和血清于梅花型孔中，中央孔(7孔）加抗原（Ag)，1、3.5孔加標(biāo)準(zhǔn)陽性血清,2、4、6孔加被檢血清，每孔均以加滿不溢出為度。2.2.3反應(yīng)：加樣完畢后.靜置10min.然后放入帶蓋的濕盒中置37C反應(yīng),24h觀察結(jié)果，48h判定結(jié)果。陰性或可疑的結(jié)果于72h再判定一次。2.3結(jié)果判定2.3.1判定標(biāo)準(zhǔn)檢測血清中可溶性抗原或抗體出現(xiàn)的沉淀線：a）加被檢血清中含有可溶性抗原，則被檢血消與陽性血清之間形成沉淀線，并與陽性血清和抗原形成的沉淀線