鐵皮石斛組培

鐵皮石斛的組織培養(yǎng)班級：農(nóng)學(xué)121學(xué)號：1251506104姓名：陳旺有鐵皮石斛鐵皮石斛簡介鐵皮石斛的用途鐵皮石斛市場現(xiàn)狀及經(jīng)濟(jì)效益分析鐵皮石斛的組織培養(yǎng)部位培養(yǎng)基質(zhì)的選擇與配置材料的滅菌與接種組培苗的煉苗與移栽工廠化培養(yǎng)鐵皮石斛(Dendrobium

officinale)是蘭科(Orchidaceae)石斛屬(DendrobiumSw．)多年生草本植物。鐵皮石斛為石斛之極品，它因表皮呈鐵綠色而得名。鐵皮石斛是傳統(tǒng)名貴中藥材，有生津益胃、清熱養(yǎng)陰和清咽利嗓等功效，主要藥用成分石斛多糖是一種免疫調(diào)節(jié)劑。鐵皮石斛蒴果成熟時易開裂，且種子粒徑小，自然繁殖率低。為了保護(hù)和有效利用鐵皮石斛，通過組織培養(yǎng)技術(shù)大量快速繁殖鐵皮石斛組培苗顯得尤為重要。鐵皮石斛的用途：

鐵皮石斛（Dendrobium

officinaleKimuraetMigo），為蘭科石斛屬多年生草本植物，分布于氣候溫潤的南方山區(qū)，附生在半山腰陰濕巖縫、老樹表皮，生存溫度為–5℃～36℃，生長溫度為15～30℃。其莖枝富含石斛多糖、甘露糖、氨基酸、微量元素、菲類化合物等成分，具有提高免疫、增強(qiáng)記憶、延緩衰老、防治眼病、保護(hù)嗓子、降壓降糖、防癌抗癌、抑制血栓形成等作用。鐵皮石斛口感清香、淡甜、細(xì)滑，耐人尋味，人們往往直接嚼食、泡茶飲用、烹調(diào)美味滋補(bǔ)藥膳?，F(xiàn)階段被制成口服液、顆粒劑、軟膠囊等服食。鐵皮石斛枝葉奇特、花型秀美，極具觀賞價值。道家經(jīng)典《道藏》把鐵皮石斛、天山雪蓮、三兩重人參、百二十年首烏、花甲之茯苓、蓯蓉、深山靈芝、海底珍珠、冬蟲夏草列為中華九大仙草，而鐵皮石斛被冠以九大仙草之首，因而成為歷代宮廷貢品，為歷年版《中華人民共和國藥典》所收載。

市場現(xiàn)狀：

全國中藥資源普查顯示，鐵皮石斛鮮品的市場年需求量在萬噸左右，且每年遞增15%。鮮品收購價每公斤在1000元以上，加工成鐵皮楓斗后每公斤銷售價達(dá)18000元，是石斛屬植物中最名貴的物種。但鐵皮石斛自然繁殖能力極低，瘋狂的采挖導(dǎo)致野生資源日見稀少，被國家列為二級瀕危保護(hù)植物。目前，人工繁育種植技術(shù)趨于成熟，但主要集中在少數(shù)企業(yè)運作，投資成本高，種植面積少，其產(chǎn)量難以滿足市場需求，混淆品充斥市場。種植經(jīng)濟(jì)效益分析：

100平方米種植18個月經(jīng)濟(jì)效益分析種植數(shù)100米2×100株/米2=10000株

成活數(shù)10000株×成活率90%=9000株可采株9000株×2（分蘗株）/種株＝18000分蘗株總產(chǎn)量18000株×9克/株＝162000克÷1公斤/1000克＝162公斤總產(chǎn)值800元／公斤×162公斤＝129600元總成本種苗8000元、水電400元、人工2000元、基質(zhì)12000元、設(shè)施8000元總利潤總產(chǎn)值129600元-總成本30400元＝99200元組培材料及方法一是鐵皮石斛成熟種子，二是1年生鐵皮石斛植株莖段。取鐵皮石斛成熟蒴果，在超凈工作臺上用刀片將其剝開，將種子倒在無菌濾紙上并用無菌鑷將其包好，放在無菌瓶中用75%的酒精消毒30s，0.1%的HgCl2消毒3~4min后，用無菌水沖洗5~6次，用鑷子把濾紙夾出，打開，把種子播在無菌培養(yǎng)基表面。約20天后，發(fā)芽而又未被污染的小苗，即為建立的無菌系，用于進(jìn)一步進(jìn)行試驗。從1年生鐵皮石斛植株上選擇生長健壯的莖段，摘去葉片和膜質(zhì)葉鞘，剪成約2cm長帶節(jié)的小段，用洗潔劑清洗后置流水下沖洗20~30min。在超凈工作臺上用75%的酒精消毒30s，0.1%HgCl2滅菌5min后，用無菌水沖洗5~6次，放入墊有干無菌濾紙的培養(yǎng)皿中，以吸去多余水分，莖段兩端各切去0.2~0.3cm，插入備好的無菌誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶培養(yǎng)基插1個外植體。不同階段培養(yǎng)基備注愈傷組織（原球莖）的誘導(dǎo)MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%瓊脂pH=5.8原球莖的增殖MS+20%馬鈴薯+3%蔗糖+0.8%瓊脂pH=5.8原球莖的分化MS+20%馬鈴薯+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%瓊脂pH=5.8幼株的生根壯苗MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%瓊脂pH=5.4-5.6（1）外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基。培養(yǎng)基：MS+BA0.0~2.0mg/L（單位下同）+NAA0.1~2.0mg/L；培養(yǎng)基：MS+BA0.0~2.0mg/L+IBA0.1~2.0mg/L；培養(yǎng)基：MS+BA0.0~2.0mg/L+IAA0.1~2.0mg/L。（2）增殖培養(yǎng)基。培養(yǎng)基：MS+BA0.2~2.0+NAA0.1~2.5+土豆汁10%~50%。培養(yǎng)基：MS+BA0.2~2.0+NAA0.1~2.5+香蕉汁10%~50%。（3）生根培養(yǎng)基。培養(yǎng)基：1/2MS+NAA0.0~2.5+土豆汁10%~50%+活性碳0~10‰；培養(yǎng)基：1/2MS+NAA0.0~2.5mg/L+香蕉汁20%+活性碳0~10‰（4）其他培養(yǎng)條件。所有培養(yǎng)基中添加蔗糖3%，卡拉膠6.8g/L，pH值5.2~5.6。培養(yǎng)溫度23~25℃，光照強(qiáng)度2000lx，光照時間10h/d。滅菌1培養(yǎng)基滅菌1）檢查滅菌鍋的水位、電源、排氣閥、排氣管、安全閥以及壓力表，確保滅菌鍋各指標(biāo)和功能的正常，以防事故發(fā)生；2）把帶滅菌的培養(yǎng)基裝入鍋內(nèi)，蓋上鍋蓋，對稱而均勻地扭緊螺絲；3）打開電源和排氣閥，調(diào)節(jié)電壓至220V；4）待排氣閥排除水蒸氣30s—1min后，關(guān)閉排氣閥；5）當(dāng)溫度上升到121℃后，調(diào)節(jié)電壓至135V，保持20min；6）關(guān)閉電源，使之自動降溫至0℃。10min后，打開排氣閥和鍋蓋；7）5—10min后，取出培養(yǎng)基放于試驗臺上冷卻，待用。2外植體滅菌①原材料清洗選擇生長旺盛、無病害的鐵皮石斛健康植株，每2節(jié)為一段放入500ml的燒杯中，加入少量洗衣粉，用紗布單層棚扎杯口，然后用工程線扎緊，放在自來水龍頭下沖洗30min，沖水量調(diào)整到能使鐵皮石斛莖段在水中漂動為好。主要作用是洗去外表塵土和大顆粒菌落、菌絲等。②材料二次消毒滅菌將上述完成后的材料帶到無菌室超凈工作臺上，進(jìn)行二次消毒滅菌:將莖段腋芽的苞葉撥去。70%的酒精速浸25s，用0.1%的升汞溶液浸泡10min用無菌水沖洗5次，滅菌過程中不斷搖動燒杯使滅菌更加徹底，以去掉表面藥物殘留。轉(zhuǎn)接2.1轉(zhuǎn)接前準(zhǔn)備1）培養(yǎng)皿、鑷子、剪刀等轉(zhuǎn)接用具的滅菌（可以在培養(yǎng)基滅菌時附帶）；2）檢查超凈臺內(nèi)各種用具，及時補(bǔ)充酒精燈的酒精，確保用具齊全；3）放置待轉(zhuǎn)接材料和待接入培養(yǎng)基，以“方便操作為宜”而陳列；2.2轉(zhuǎn)接1）揭去防塵膜，打開電源、通風(fēng)和紫外燈，滅菌15—20min；2）關(guān)掉紫外，打開白熾燈，用75%酒精仔細(xì)擦拭手指、指甲、材料瓶瓶蓋及蓋邊緣、工作區(qū)等處，確保“消毒”徹底；3）點燃酒精燈，用無菌鑷子把材料夾取于無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，挑選生命力旺盛的植株用于轉(zhuǎn)接；4）用無菌剪刀修去多余的根系，“雙鑷子”法將材料轉(zhuǎn)接于新的培養(yǎng)基中；5）標(biāo)注相關(guān)日期和品系，轉(zhuǎn)至培養(yǎng)室培養(yǎng)。注意事項①操作時，所有用具均不能從“核心工作區(qū)”和開啟的培養(yǎng)瓶上面晃過，防止細(xì)菌落入而導(dǎo)致污染；②在打開材料瓶和培養(yǎng)瓶后，其蓋均在酒精燈外焰灼燒3-5s，瓶口灼燒5-10s；蓋瓶蓋時，亦如此操作；③轉(zhuǎn)接時，確保手一直在超凈臺內(nèi)，以免帶入外界細(xì)菌。培養(yǎng)石斛組培常用的溫度為(26±1)℃光強(qiáng)1600～2000lx日照光8~12h/d（1）組培苗在光照度為2000lx，溫度以22℃為宜。

(2)在20一22℃時叢生芽增殖較好，溫度超過25℃叢生芽就開始分化成苗。

待增殖芽數(shù)量較多時，將高1～2cm、帶有2～3片葉的小芽切下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)30天左右，基部開始出現(xiàn)2～3條約1cm長的白色根，隨后逐漸伸長，生根率達(dá)到90％以上。煉苗3.1煉苗目的煉苗的主要目的是使組培苗適應(yīng)外界的環(huán)境——溫差，濕度差以及微生物環(huán)境。3.2煉苗方法1）將待煉苗的材料放置于欲移栽的環(huán)境，不開蓋保持4-5天；2）半開蓋保持1-2天后，全開蓋再煉苗2-3天；方法（整個過程：適應(yīng)期，半開瓶期，開瓶期，出瓶，洗根，浸泡，移栽或框煉并移栽）。鐵皮石斛瓶苗移栽1基質(zhì)選擇栽培的基質(zhì)為火山巖1+椰衣2+木炭1的基質(zhì)配比石斛蘭長勢最好，椰衣1+水苔1和塊狀椰衣的基質(zhì)配比稍微次之。多數(shù)樹皮中含有較多的酚類物質(zhì)，這對于植物是有害的，而且樹皮的C/N比值都較高，直接使用會引起微生物對速效氮的競爭作用，造成N素缺乏，樹皮保水性能差。2移栽技術(shù)要求將已經(jīng)滅菌地石斛莖段，在無菌條件下切成至少帶有一個莖節(jié)地莖段，接種于事先準(zhǔn)備好的誘導(dǎo)芽培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出芽。從莖尖或莖段培養(yǎng)得到的小苗，大多數(shù)是無根小苗，需轉(zhuǎn)入1／2MS加馬鈴薯進(jìn)行生根和壯苗培養(yǎng)，才能出管移栽。鐵皮石斛不宜深植，種植時根系向四周均勻展開，將基質(zhì)填充根部、基部必須露出，否則易造成爛根。移栽后隔5天再澆水效果較好。30天內(nèi)每隔1天噴霧1次，水量不宜過多，期間勿施肥，待小苗恢復(fù)正常生長后才開始常規(guī)的水肥管理。3移栽后期管理

營養(yǎng)生長期施用氮肥較高的花多多復(fù)合肥（N:P:K=30:10:10），花芽分化期開始施偏重磷鉀肥（N:P:K=10:30:20），其余時期施