殺菌抑菌基本知識課件

殺菌抑菌基本知識課件第一頁，共二十六頁，2022年，8月28日一、名詞解釋1、抗菌劑——能夠在一定時間內(nèi)，使某些微生物（細菌、真菌、酵母菌、藻類及病毒等）的生長或繁殖保持在必要水平以下的化學物質(zhì)?？咕鷦┦且活惥哂幸志蜌⒕阅艿男滦椭鷦?、殺菌——指殺滅物體中的致病菌，物體中還含有芽孢、嗜熱菌等非致病菌。3、抑菌——采用化學或物理方法抑制或妨礙細菌生長繁殖及其活性的過程。第二頁，共二十六頁，2022年，8月28日一、名詞解釋4、中和劑——在微生物殺滅試驗中，用以消除試驗微生物與消毒劑的混懸液中和微生物表面上殘留的消毒劑，使其失去對微生物抑制和殺滅作用的試劑。5、PBS——磷酸鹽緩沖液，0.03mol/L,pH=7.2。6、MIC——最小抑菌濃度。第三頁，共二十六頁，2022年，8月28日一、名詞解釋7、cfu——在活菌營養(yǎng)計數(shù)時，由單個菌體或聚集成團的多個菌體在固體培養(yǎng)基上生長繁殖所形成的集落，稱為菌落形成單位，以其表達活菌的數(shù)量。第四頁，共二十六頁，2022年，8月28日一、名詞解釋8、試驗菌金黃色葡萄球菌（ATCC6538）細菌繁殖體中化膿性代表。第五頁，共二十六頁，2022年，8月28日一、名詞解釋大腸桿菌（8099或ATCC259922）細菌繁殖體中腸道菌的代表。第六頁，共二十六頁，2022年，8月28日一、名詞解釋白色念珠菌（ATCC10231）空氣中細菌的代表。第七頁，共二十六頁，2022年，8月28日一、名詞解釋銅綠假單胞菌（ATCC15442）醫(yī)院感染中最常分離的細菌繁殖體的代表。第八頁，共二十六頁，2022年，8月28日二、殺菌率試驗1、制備試驗菌懸液濃度為：用100μl滴于對照片上，回收菌落數(shù)為1×104～1×109cfu/片。2、制備染菌樣片取上述菌懸液，分別在每個被試樣片和對照樣片上滴加100μl，作用2min。第九頁，共二十六頁，2022年，8月28日二、殺菌率試驗3、操作步驟分別將樣片投入含5ml相應中和劑的試管內(nèi)，充分混勻，，作適當稀釋，取其中2-3個稀釋度，，分別吸取0.5ml，只要兩個平皿中，用40-50℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(細菌)或沙氏瓊脂培養(yǎng)基(酵母菌)15ml作傾注，轉(zhuǎn)動平皿，使其充分混勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，倒置培養(yǎng)。4、培養(yǎng)時間、溫度細菌：35℃±2℃，48小時酵母菌：37℃±2℃，72小時第十頁，共二十六頁，2022年，8月28日二、殺菌率試驗5、計算公式

式中：X——殺菌率，%A——對照樣片平均菌落數(shù)

B——被試樣片平均菌落數(shù)6、評價標準殺菌率≥90%，產(chǎn)品有殺菌作用。。第十一頁，共二十六頁，2022年，8月28日三、抑菌率試驗1、制備試驗菌懸液濃度為：用100μl滴于對照片上，回收菌落數(shù)為1×104～1×109cfu/片。2、制備染菌樣片取上述菌懸液，分別在每個被試樣片和對照樣片上滴加100μl，作用20min。第十二頁，共二十六頁，2022年，8月28日三、抑菌率試驗3、操作步驟分別將樣片投入含5mlPBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當稀釋，取其中2-3個稀釋度，，分別吸取0.5ml，只要兩個平皿中，用40-50℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(細菌)或沙氏瓊脂培養(yǎng)基(酵母菌)15ml作傾注，轉(zhuǎn)動平皿，使其充分混勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，倒置培養(yǎng)。4、培養(yǎng)時間、溫度細菌：35℃±2℃，48小時酵母菌：37℃±2℃，72小時第十三頁，共二十六頁，2022年，8月28日三、抑菌率試驗5、計算公式

式中：X——抑菌率，%A——對照樣片平均菌落數(shù)

B——被試樣片平均菌落數(shù)6、評價標準抑菌率≥50%-90%，產(chǎn)品有抑菌作用。抑菌率≥90%，產(chǎn)品有較強抑菌作用。第十四頁，共二十六頁，2022年，8月28日四、殺菌性能與抑菌性能的不同點1、含義不同

殺菌抑菌消毒劑對微生物的殺滅能力。

消毒劑抑制或妨礙細菌生長繁殖及活性的能力。

第十五頁，共二十六頁，2022年，8月28日四、殺菌性能與抑菌性能的不同點2、作用時間不同殺菌抑菌2min20min殺菌的作用時間可為2min、5min、10min、20min，相同條件下，作用時間越短，殺菌率越低，所以選擇最短的作用時間來檢測殺菌性能更具有代表性。

抑菌的作用時間可為2min、5min、10min、20min，相同條件下，作用時間越長，抑菌率越低，所以選擇最長的作用時間來檢測抑菌性能更具有代表性。

第十六頁，共二十六頁，2022年，8月28日四、殺菌性能與抑菌性能的不同點3、殘留消毒劑的去除方法不同殺菌抑菌中和劑法（化學中合法）稀釋法指在消毒劑與微生物作用到達規(guī)定時間的終點時，取樣加于適宜種類和濃度的中和劑中，將殘留消毒劑迅速中和，使其不再持續(xù)抑制或殺滅微生物的方法。

將經(jīng)消毒劑作用過的微生物樣本，用稀釋液（PBS）稀釋，降低殘留消毒劑濃度，以消除對微生物的抑制作用。第十七頁，共二十六頁，2022年，8月28日四、殺菌性能與抑菌性能的不同點4、評價標準殺菌抑菌殺菌率≥90％，產(chǎn)品有殺菌作用。抑菌率≥50％～90％，產(chǎn)品有抑菌作用，抑菌率≥90％，產(chǎn)品有較強的抑菌作用。第十八頁，共二十六頁，2022年，8月28日五、抗（抑）菌試驗1、目的測定抗（抑）菌產(chǎn)品對細菌和真菌的抗（抑）菌作用。常使用的方法有抑菌環(huán)試驗、最小抑制濃度測定試驗等等。第十九頁，共二十六頁，2022年，8月28日五、抗（抑）菌試驗2、抑菌環(huán)試驗

1）原理利用抑菌劑不斷溶解經(jīng)瓊脂擴散形成不同濃度梯度，以顯示其抑菌作用。

第二十頁，共二十六頁，2022年，8月28日五、抗（抑）菌試驗2）操作程序（1）制備抑菌片滴加實際使用濃度抑菌劑溶液的直徑為5mm,厚不超過4mm圓片。（2）制備陰性對照片不含抑菌成分的與實驗組大小相同的樣片。（3）接種試驗菌蘸取濃度為5×105～5×10-9cfu/ml試驗菌懸液，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板均勻涂抹。（4）抑菌樣片和對照片貼放（5）培養(yǎng)溫度：37℃±2℃，培養(yǎng)時間：16～18小時第二十一頁，共二十六頁，2022年，8月28日五、抗（抑）菌試驗3）評價（1）抑菌作用的判斷

抑菌環(huán)直徑大于7mm者，判為有抑菌作用。抑菌環(huán)直徑小于或等于7mm者，判為無抑菌作用。（2）3次重復試驗均有抑菌作用結(jié)果者，判為合格。（3）陰性對照組應無抑菌環(huán)產(chǎn)生。否則試驗無效。第二十二頁，共二十六頁，2022年，8月28日五、抗（抑）菌試驗3、最小抑菌濃度（MIC）

1)原理采用瓊脂稀釋法將不同濃度的抑菌劑混合溶解在瓊脂培養(yǎng)基中，然后點種細菌，通過細菌的生長與否，確定抗（抑）菌物質(zhì)抑制受試菌生長的最低濃度，即最小抑菌濃度（MIC）第二十三頁，共二十六頁，2022年，8月28日五、抗（抑）菌試驗2）操作程序（1）配制抗（抑）菌溶液（2）配制雙倍濃度培養(yǎng)基（3）配制含抗（抑）菌液培養(yǎng)基（4）取1μl～2μl（含菌量約為107cfu/ml）菌懸液點種于含抗（抑）菌液培養(yǎng)基的平皿（5）以同樣方法接種不含抗（抑）菌成分的瓊脂平板，作為陽性對照。（6）培養(yǎng)溫度：35℃±