光學(xué)顯微成像

本文格式為Word版，下載可任意編輯——光學(xué)顯微成像光學(xué)顯微攝影的用光方法與技巧攝影用光技巧攝影用光技巧大揭秘

光學(xué)顯微攝影即顯微攝影電子顯微攝影而用的術(shù)語(yǔ)。由物鏡(倍率2-100倍)和目鏡(5-15倍)的組合，若用35毫米照相機(jī)，可在膠片上拍成5-800倍。若為六寸片，能拍出20-3000倍的照片，但光學(xué)顯微鏡倍率限度約為1200倍。若超出此限度舉行擴(kuò)印，無(wú)法獲得明顯的像。光學(xué)顯微攝影務(wù)必要有亮堂、平勻、無(wú)反光的照明，同時(shí)要留神光源的調(diào)理和色溫的變化。另外，由于樣品的性能差異，還要選用不同的照明方法。下面是我為您整理的關(guān)于光學(xué)顯微攝影的用光方法與技巧，夢(mèng)想對(duì)您有所扶助!

光學(xué)顯微攝影的用光方法與技巧一、光學(xué)顯微攝影的用光

光學(xué)顯微攝影的照明，會(huì)對(duì)物鏡解像力產(chǎn)生明顯影響，一般要求光源的輸出能夠集中到很小面積上，光強(qiáng)高、熱量小，幾何尺寸不大。

在一般明視場(chǎng)照明顯微攝影時(shí)，通常采用6伏或者12伏螺口形白熾鎢絲燈泡做照明光源，色溫為2700～3200K，其亮度的調(diào)整由變壓器實(shí)現(xiàn)，這種照明盡管看上去很亮，色溫并不高，所以，應(yīng)盡量用最高電壓，使燈光亮度、色溫提高，并使用RAW格式拍攝，以便后期校正色溫。

但是，白熾鎢絲燈泡長(zhǎng)期使用，其鎢絲蒸發(fā)后所產(chǎn)生的沉物會(huì)積聚在玻璃罩內(nèi)壁，這樣會(huì)降低亮度與色溫。所以，12伏100瓦的鹵素鎢絲燈光便成了光學(xué)顯微攝影的優(yōu)質(zhì)光源。(這種鹵素鎢絲燈在燈管內(nèi)充鹵素氣體，在燈絲點(diǎn)燃后，蒸發(fā)出來(lái)的鎢會(huì)與鹵素氣體形成鹵化鎢，附著在燈管內(nèi)壁，而關(guān)閉電源冷卻時(shí)，鹵化鎢又會(huì)分解，屆時(shí)鎢又回到燈絲上去，這樣便延長(zhǎng)了燈泡的使用壽命，改善了光源照明，縮小了燈泡的幾何尺寸，提高了光源強(qiáng)度)。

用于光學(xué)顯微攝影的光源還有氙燈、鋯燈、電子閃光燈、汞蒸氣燈等，可以根據(jù)不同的目的，選用適當(dāng)?shù)墓庠?。如氙燈不僅可以發(fā)出連續(xù)的可見(jiàn)光，還包含長(zhǎng)波紫外線和紅外光譜片面;汞蒸氣是優(yōu)質(zhì)的單色光源，更加適于單色黑白顯微攝影。

拍攝顯微照片，要求有亮堂、平勻、無(wú)反光的照明條件，其照明方法可分為兩類，即透射照明和反射照明(落射光照明)

透射光照明是指從光源射出的光線從標(biāo)本的下面透過(guò)標(biāo)本進(jìn)入物鏡。而落射照明是指光線從正面投射到標(biāo)本的正面，物鏡采納的光是從標(biāo)本反射來(lái)的光。

落射光照明主要用于拍攝不通明的標(biāo)本，如皮膚、小生物、植物果實(shí)外觀等。拍出的像有立體感。落射光與物鏡之間的角度越小越好，現(xiàn)代顯微攝影裝置的落射光大多與物鏡合軸。在沒(méi)有專業(yè)設(shè)備的處境下可以用斜射照明，在對(duì)應(yīng)面加反光屏，或用另一只燈做輔佐光，也可以使用環(huán)形閃光燈。

光學(xué)顯微攝影的用光方法與技巧二、光學(xué)顯微攝影的曝光操縱

雖然現(xiàn)在的相機(jī)均有自動(dòng)測(cè)光或自動(dòng)曝光功能，但是假設(shè)一個(gè)視野中亮處面積超過(guò)二分之一，那么易展現(xiàn)曝光缺乏的現(xiàn)象，所以假設(shè)標(biāo)本主體小，又處在亮背景中，就要適當(dāng)增加曝光時(shí)間。

在操縱曝光時(shí)，要留神以下因素：

1.光源強(qiáng)度的影響：由于電壓的變化，光源亮度可能產(chǎn)生5-10倍的變化。

2.光源的距離及對(duì)標(biāo)本的照射面積。

3.光源的波長(zhǎng)及色溫。光源的波長(zhǎng)長(zhǎng)、色溫低，色光偏紅時(shí)，曝光時(shí)間要長(zhǎng)些。光波短，色溫高，色光偏青時(shí)，曝光時(shí)間要短些。

4.電壓的波動(dòng)會(huì)引起曝光量的變更，所以攝制過(guò)程中要保持電壓的相對(duì)穩(wěn)定。

5.聚光器的位置經(jīng)過(guò)測(cè)驗(yàn)固定后不宜改動(dòng)。

6.使用濾色鏡、乳白玻璃、偏振鏡等都要按其曝光指數(shù)增加曝光時(shí)間(手動(dòng)曝光)。

7.目鏡的放大倍率。以5倍的目鏡作曝光基準(zhǔn)1時(shí)，10倍目鏡要4倍的曝光量，15倍目鏡要增至9倍的曝光。

8.物鏡的倍率和NA值：假設(shè)把10倍的目鏡作為1時(shí)，40倍目鏡要2.5倍的曝光，100倍的物鏡要4倍的曝光。

9.從目鏡出射點(diǎn)到感光片的距離

10.標(biāo)本的染色也會(huì)對(duì)曝光產(chǎn)生影響

11.標(biāo)本與目鏡間的介質(zhì)折射率大、曝光時(shí)間短，反之，曝光時(shí)間長(zhǎng)。曝光時(shí)間與折射率成反比。

12.聚光鏡的光闌孔徑變化能使曝光產(chǎn)生2～20倍的變化。

光學(xué)顯微攝影的用光方法與技巧三、光學(xué)顯微攝影中濾色鏡的應(yīng)用

濾色片幾乎在拍攝什么樣的標(biāo)本都有用場(chǎng)。例如：

1.用濾色片校正反差突出重點(diǎn)光學(xué)顯微攝影往往要突出重點(diǎn)，這就要使用適當(dāng)?shù)臑V色鏡加強(qiáng)反差，強(qiáng)調(diào)需要突出的重點(diǎn)布局，而減弱其非重點(diǎn)片面。使用標(biāo)本染色補(bǔ)色的濾色鏡可以鞏固標(biāo)本反差，譬如蘇木精染出的色標(biāo)本中用綠濾色鏡，就可鞏固反差。

2.兩種顏色的布局表達(dá)：假設(shè)想使標(biāo)本中兩種以上的顏色都領(lǐng)會(huì)地呈現(xiàn)在畫面上，如紅、藍(lán)兩種顏色，可以采取兩次曝光的方法，先用紅濾色鏡，再用藍(lán)濾色鏡各曝一次光，就可以領(lǐng)會(huì)地表達(dá)兩種顏色的布局。

3.短波光濾色鏡可以提高對(duì)標(biāo)本的辨識(shí)率。短波光濾色鏡(如UV鏡)可以辨識(shí)出在可見(jiàn)光下肉眼看不見(jiàn)的組織布局。用紫外線濾色片合作