乳腺癌her2檢測的學習資料

乳腺癌her2檢測的學習資料第1頁/共51頁信號傳導至細胞核細胞核接合部酪氨酸激酶活性部分細胞漿細胞膜生長因子（配體）癌基因活化細胞分裂

HER2受體跨膜二聚體的信號傳導途徑第2頁/共51頁1=-

基因拷貝數2=-

mRNA

轉錄3=-

細胞表面受體蛋白表達4=-

細胞外受體功能域釋放A=HER2DNAB=HER2mRNAC=HER2receptorprotein正常擴增/過度表達細胞核細胞質細胞膜1234CBAHER2過度表達：正常狀態(tài)的10-100倍第3頁/共51頁

HER2癌基因的致瘤機制：抑制凋亡，促進增殖；增加腫瘤細胞的侵襲力；促進腫瘤血管新生和淋巴管新生。研究表明：

30％以上的人類腫瘤中存在HER2基因的擴增/

過度表達（如乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、輸卵管癌、胃癌和前列腺癌等;

20％－30％的原發(fā)性浸潤性乳腺癌有HER2基因的擴增/過度表達。第4頁/共51頁HER2陽性患者的生存期比陰性者縮短一半以上轉移性乳腺癌患者的中位生存期HER2陽性 8-10個月HER2陰性 17-22個月SlamonDJetal.Science1987;235:177–82第5頁/共51頁2004年發(fā)現淋巴結陰性患者預后與HER2狀態(tài)密切相關p=0.0001CumulativediseaserecurrencecurvesSunJM.Cancer2004;101:2516–220.30.20.10

0 20 40 60 80 100月HER2陽性患者平均風險曲線HER2陰性患者平均風險曲線基礎風險曲線第6頁/共51頁HER2表達在原發(fā)腫瘤和轉移灶呈高度一致*Mainlydistantmetastases.**Liverandlungmetastases.Lymphnodemetastaseswereanalysedinallcases,exceptinthestudiesbyVincent-Salomonetal(2002)andGancbergetal(2002),wheredistantmetastaseswereanalysed.Study

Masood&Bui(2000)Shimizuetal(2000)Simonetal(2001)

Tanneretal(2001)Gancbergetal(2002)Vincent-Salomonetal(2002)Tsutsuietal(2002)

Carlssonetal(2004)Primarytumours32%38%25%

28%29%25%25%

55%Metastases32%38%22%

28%27%*20%**25%

55%PercentageIHCoverexpression第7頁/共51頁2005年St.Gallen國際治療指南

乳腺癌危險度分級低度中度高度淋巴結－－1+(1～3)2+(1～3)1+(﹥3)2pT（cm）≤2伴﹥21病理分級1或2～31瘤周脈管－或+1HER2－或+1

－

2+1年齡≥35或＜351第8頁/共51頁2005StGallen

指南乳腺癌初診時需明確HER2

HER2陽性即做為高風險因子加以考慮Goldhirschetal2005CMF,cyclophosphamide,methotrexate,5-fluorouracil預后評估預后差療效預測從赫賽汀?的治療中最大獲益芳香化酶抑制劑的療效優(yōu)于三苯氧胺蒽環(huán)類和紫杉類的療效優(yōu)于CMF第9頁/共51頁隨著腫瘤的靶向性治療的發(fā)展，以單抗為主的分子靶點藥物的不斷研制應用，已成為腫瘤靶向治療的新武器

Herceptin即為一種針對HER2受體的高純度重組DNA衍生物的人源化單克隆抗體，是乳腺癌治療領域的第一個分子靶向性藥物第10頁/共51頁刺激刺激HER2タンパクがん細胞増殖刺激刺激HER2タンパク癌細胞増殖抑制Heceptin的作用HeceptinHeceptin：一種針對Her-2/neu受體的高純度重組DNA衍生物的人源化單克隆抗體，是乳腺癌治療領域的第一個分子靶向性藥物，具有高效、低毒、選擇性強的特點●癌細胞表面存在著CerbB-2蛋白，受刺激后促進癌細胞的增殖●20～30％的癌細胞Her-2/neu基因的蛋白CerbB-2●與CerbB-2結合阻斷和抑制細胞的增殖●轉移性乳腺癌病人的治療效果●檢測癌細胞表面cerbB-2存在程度決定使用第11頁/共51頁意義靶向藥物Heceptin僅對HER2擴增的乳腺癌有效→準確的檢測HER2有無擴增是臨床應用Heceptin的絕對必要條件，也是成功進行靶向治療的前題和關鍵HER-2擴增的乳腺癌往往提示其惡性程度高，進展迅速，化療緩解期短，對CMF方案化療反應降低→乳腺癌化療藥物環(huán)磷酰胺、阿酶素、5－氟尿嘧啶等的主要參考指標第12頁/共51頁

HER-2擴增的乳腺癌對蒽環(huán)類藥物和紫杉醇類藥物化療敏感性高→HER2和拓撲異構酶II-a基因同時擴增的乳腺癌患者，可以從蒽環(huán)類藥物為基礎的方案中受益，故同時檢測HER2和拓撲異構酶II-a可以篩選出以蒽環(huán)類化療藥為基礎的化療方案候選患者HER-2擴增的乳腺癌對三苯氧胺易產生耐藥性→制定內分泌治療方案的有力依據

HER-2擴增的乳腺癌無病生存率和總生存率低，并且與淋巴結陽性、癌的高級別、陰性受體狀態(tài)及高增殖活性有關→預后判斷的參考指標意義第13頁/共51頁ST.GALLEN2007HER2：乳腺癌危險因素的新定義低中高G1T≤2ER/PR+年齡<35歲G2-3T>2淋巴結1-3和HER2+,ER/PR-或淋巴結≥4淋巴結-,HER2+,ER/PR-或LVI侵潤淋巴結1-3且HER2-,

ER/PR+淋巴結-HER2-

LVI無RISKRISK第14頁/共51頁2007NCCN治療指南

－HER2檢測的原則

第15頁/共51頁ASCO/CAP:HER2檢測指南HER2陽性：

IHCHER23+(完整的，強的膜陽性>30%)或FISHHER2基因擴增(HER2/CEP17>2.2

或HER2

基因拷貝數>6

信號/核，無內對照的探針)HER2陰性：

IHCHER20-1+或

FISHHER2基因擴增(HER2/CEP17<1.8

或HER2基因拷貝數<4信號/核，無內對照的探針)不能確定：IHCHER22+或

FISHHER2基因擴增(HER2/CEP171.8-2.2

或HER2基因拷貝數4-6信號/核，無內對照的探針)第16頁/共51頁HER2測定流程圖第17頁/共51頁HER2的檢測方法免疫組織化學（IHC）：HER2蛋白的表達熒光原位雜交（FISH）：HER2基因的擴增顯色原位雜交（CISH）：HER2基因的擴增酶聯免疫分析（EIA）酶聯免疫吸附分析（ELISA）聚合酶鏈反應（PCR）第18頁/共51頁HER2陽性定義IHC3+CISH+FISH+或或蛋白過度表達基因擴增==第19頁/共51頁一抗結合于Her-2受體二抗結合并激活底物反應顯色免疫組織化學法原理Immunohistochemistry(IHC)第20頁/共51頁IHC檢測HER2表達初篩最常使用的方法。判斷HER2蛋白過表達最重要的是染色方法的標準化和結果的判斷。建議使用美國食品和藥品管理局(FDA)批準的試劑盒。應使用EnVision法和高質量的DAB顯色液以避免內源性生物素的影響。應有嚴格的、包括內部和外部的質量控制，須設陽性對照、陰性對照和空白對照。第21頁/共51頁IHC結果判斷先在10×物鏡下進行判讀注意細胞膜完全著色的癌細胞比例及著色強度胞質著色應忽略不計導管內癌(DCIS)的著色應忽略不計，只評定浸潤癌的著色情況正常乳腺上皮不應著色應使用美國FDA批準的HercepTest評分系統(tǒng)第22頁/共51頁第23頁/共51頁第24頁/共51頁ASCO/CAP

：C-erbB2IHC的評分0(陰性):無染色,或<10%的膜染色1+(陰性):>10%的細胞膜微弱的或不完整的膜染色2+(弱陽性):>10%細胞弱到中等膜染色3+(強陽性):>10%中等到強的完整的膜染色>30%第25頁/共51頁01+第26頁/共51頁2+3+第27頁/共51頁C-erbB2第28頁/共51頁2008/12/12第29頁/共51頁HER-2檢測:IHC抗原修復有/無組織固定方法抗體選擇評分標準變異性第30頁/共51頁福爾馬林固定/石蠟包埋組織

HER基因擴增2－5倍（SouthernHybridization）Slamonetal,Science244:712,1989HER2“陰性”是由于組織固定后抗原被遮蔽需要行抗原修復來糾正CourtesyMichaelPress第31頁/共51頁第32頁/共51頁FISH是一種分子細胞遺傳學技術，通過熒光標記的DNA探針與細胞核內的DNA靶序列雜交。在熒光顯微鏡下，于細胞和(或)組織原位觀察并分析細胞核內雜交于DNA靶序列的多種彩色探針信號，以獲得細胞內多條染色體(或染色體片段)或多種基因狀態(tài)的信息?！敖饦藴省钡?3頁/共51頁HER2geneHER2geneHER2gene雙鏈靶基因變性的單鏈DNA與熒光標記探針復性\產生熒光信號熒光原位雜交法原理

FluorescenceinsituHybridisation(FISH)第34頁/共51頁HER2探針絕大部分是同時含有HER2基因(標記為橘紅色熒光)和該基因所在的17號染色體著絲粒(標記為綠色熒光)序列的混合探針經美國FDA批準的進口探針

VS國產探針第35頁/共51頁第36頁/共51頁評價17號染色體數目和意義HER2基因位于17號染色體上，大約有47%的乳腺癌存在17號染色體非整體性，即17號染色體不是正常的二體，而是單體或多體。綠色探針可以將17號染色體的非整體性和單純的HER2基因擴增，尤其是低水平的擴增區(qū)分開。當HER2基因與17號染色體數目比值大于2時，即為HER2基因擴增。加入了這個內對照，就排除了單色探針(探針中僅有HER2基因)可能造成的假陰性(17號染色體單體)或假陽性(17號染色體多體)。臨床研究顯示，具有這類遺傳學特征的患者對治療的反應和預后與單純的基因擴增明顯不同。第37頁/共51頁質量控制內對照：雜交的組織、細胞中有75%的細胞核顯示出雙色信號時，視為實驗成功，并且紅、綠信號互為對照，癌與非癌細胞互為對照。外對照：應選擇FISH陽性和陰性的標本片。第38頁/共51頁結果判讀雜交信號計數應選擇細胞核大小一致、核的邊界完整、二脒基苯基吲哚(DAPI)染色均一、細胞核孤立無重疊、綠色著絲粒信號清晰的細胞。隨機計數20～30個癌細胞核中的雙色信號。判讀標準紅色信號的總數與綠色信號的總數比值>2.2時，即為HER2基因擴增若紅、綠兩信號的比值>20或眾多信號連接成簇時可不計算，即視為基因擴增；若比值介于1.8～2.2之間，則需要再計數20個細胞核中的信號或由另外一個分析者重新計數。如仍為臨界值，則應在FISH檢測報告中注明。若HER2基因擴增在不同癌細胞中存在異質性時，應在另一癌區(qū)域再計算20～30個癌細胞核中的紅、綠信號值，報告其最大值，并加以注釋。注意避免G2期細胞內的基因拷貝數目特征(4個拷貝)可能導致的計數誤差。第39頁/共51頁HER2probeCEP17probeHER2/CEP17ratio=1HER2/CEP17ratio=1HER2/CEP17ratio=7NoamplificationNoamplification;tetraploidyHER2geneamplification(ratio>2.2)第40頁/共51頁HE